PD-1/PD-L1抑制剂的盐及结晶形式的制作方法

pd-1/pd-l1抑制剂的盐及结晶形式
1.本技术要求2019年11月11日提交的美国临时申请号62/933,689和2020年5月8日提交的美国临时申请号63/022,131的权益，所述临时申请各自以全文引用的方式并入本文中。
发明领域
2.本技术涉及pd-1/pd-l1抑制剂4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)的固体形式和盐形式，包括其制备过程，其中所述化合物可用于治疗包括感染性疾病和癌症在内的各种疾病。
[0003]
发明背景
[0004]
免疫系统在控制和根除诸如癌症的疾病中起重要作用。然而，癌细胞常常发展策略来逃避或遏制免疫系统以有利于它们的生长。一种此类机制是改变在免疫细胞上表达的共刺激和共抑制分子的表达(postow等,j.clinical oncology 2015,1-9)。已经证实，阻断诸如pd-1的抑制性免疫检查点的信号传导是有前景并有效的治疗模态。
[0005]
程序性细胞死亡-1(pd-1)，也称为cd279，是在活化t细胞、自然杀伤t细胞、b细胞和巨噬细胞上表达的细胞表面受体(greenwald等,annu.rev.immunol.2005,23:515-548；okazaki和honjo,trends immunol 2006,(4):195-201)。pd-1发挥固有负反馈系统的功能以防止t细胞活化，继而减少自体免疫性并且促进自身耐受性。另外，还已知pd-1在如癌症和病毒感染等疾病的抗原特异性t细胞反应的遏制中起关键作用(sharpe等,nat immunol 2007 8,239-245；postow等,j.clinical oncol.2015,1-9)。
[0006]
pd-1的结构由细胞外免疫球蛋白可变样结构域继之以跨膜区和细胞内结构域组成(parry等,mol cell biol 2005,9543-9553)。细胞内结构域含有位于基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序和基于免疫受体酪氨酸的转换基序中的两个磷酸化位点，表明pd-1负向调控t细胞受体介导的信号。pd-1具有两个配体pd-l1和pd-l2(parry等,mol cell biol 2005,9543-9553；latchman等,nat immunol 2001,2,261-268)，并且它们的表达模式不同。pd-l1蛋白质在巨噬细胞和树突状细胞上对脂多糖和gm-csf处理作出反应而上调，并且在t细胞和b细胞上在t细胞受体和b细胞受体信号传导后上调。pd-l1也在几乎所有的肿瘤细胞上高度表达，并且在ifn-γ处理后表达进一步增加(iwai等,pnas2002,99(19):12293-7；blank等,cancer res 2004,64(3):1140-5)。实际上，已经显示肿瘤pd-l1表达状况在多种肿瘤类型中具有预后性(wang等,eur j surg oncol 2015；huang等,oncol rep 2015；sabatier等,oncotarget 2015,6(7):5449-5464)。相比之下，pd-l2表达更为局限并且主要由树突状细胞表达(nakae等,j immunol 2006,177:566-73)。pd-1与其配体pd-l1和pd-l2在t细胞上的接合传递信号，这种信号抑制il-2和ifn-γ产生，以及在t细胞受体活化后诱导的细胞增殖(carter等,eur j immunol 2002,32(3):634-43；freeman等,j exp med 2000,192(7):1027-34)。机制涉及募集shp-2或shp-1磷酸酶以抑制t细胞受体信号传导，诸如syk和lck磷酸化(sharpe等,nat immunol 2007,8,239-245)。pd-1信号传导轴的活化也
减弱pkc-θ活化环磷酸化，这种磷酸化是nf-κb和ap1路径的活化以及诸如il-2、ifn-γ和tnf的细胞因子产生所必需的(sharpe等,nat immunol 2007,8,239-245；carter等,eur j immunol 2002,32(3):634-43；freeman等,j exp med 2000,192(7):1027-34)。
[0007]
来自临床前动物研究的若干条证据指示pd-1和其配体负向调控免疫反应。已经显示pd-1缺陷小鼠发展狼疮样肾小球性肾炎和扩张性心肌病变(nishimura等,immunity 1999,11:141-151；nishimura等,science 2001,291:319-322)。使用lcmv慢性感染模型，已经显示pd-1/pd-l1相互作用抑制病毒特异性cd8 t细胞的活化、扩展和效应功能获取(barber等,nature 2006,439,682-7)。总之，这些数据支持开发治疗方法来阻断pd-1介导的抑制剂性信号传导级联以加强或“挽救”t细胞反应。因此，需要阻断pd-1/pd-l1蛋白质/蛋白质相互作用的新化合物和盐。


技术实现要素：

[0008]
本公开涉及4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(化合物1，抑制pd-1/pd-l1相互作用的抑制剂)的固体形式和盐形式。
[0009][0010]
本公开进一步涉及化合物1的结晶游离碱、二钠盐、单盐酸盐和二盐酸盐。
[0011]
本公开进一步涉及化合物1的盐的结晶形式。
[0012]
本公开进一步涉及药物组合物，所述药物组合物包含本文所描述的固体形式或盐形式以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。本公开进一步涉及固体剂型，所述固体剂型包含本文所描述的药物组合物。
[0013]
本公开进一步涉及一种抑制pd-1/pd-l1相互作用的方法，所述方法包括向患者施用本文所描述的固体形式或盐形式。
[0014]
本公开进一步涉及治疗与抑制pd-1/pd-l1相互作用相关的疾病或病症，其包括向
患者施用本文所描述的固体形式和盐形式。本公开进一步涉及增强、刺激和/或增加患者中的免疫反应，其包括向患者施用本文所描述的固体形式和盐形式。
[0015]
本公开还提供了本文所描述的固体形式和盐形式的用途，其用于制造供本文所描述的方法中的任一者使用的药物。
[0016]
本公开还提供了本文所描述的固体形式和盐形式的用途，其供本文所描述的方法中的任一者使用。
[0017]
本公开进一步提供了制备化合物1或其药学上可接受的盐的过程，所述过程包括下文详述的步骤。
[0018]
本发明进一步涉及制备本文所描述的固体形式和盐形式的过程。
附图说明
[0019]
图1示出了化合物1结晶游离碱的xrpd图样。
[0020]
图2示出了化合物1结晶游离碱的dsc温谱图。
[0021]
图3示出了化合物1结晶游离碱的tga温谱图。
[0022]
图4示出了化合物1二钠盐的xrpd图样。
[0023]
图5示出了化合物1二钠盐的dsc温谱图。
[0024]
图6示出了化合物1二钠盐的tga温谱图。
[0025]
图7示出了化合物1二盐酸盐形式i的xrpd图样。
[0026]
图8示出了化合物1二盐酸盐形式i的dsc温谱图。
[0027]
图9示出了化合物1二盐酸盐形式i的tga温谱图。
[0028]
图10示出了dmso-d6中的化合物1二盐酸盐形式i的1h nmr。
[0029]
图11示出了化合物1二盐酸盐形式ii的xrpd图样。
[0030]
图12示出了化合物1二盐酸盐形式ii的dsc温谱图。
[0031]
图13示出了化合物1二盐酸盐形式ii的tga温谱图。
[0032]
图14示出了化合物1二盐酸盐形式iii的xrpd图样。
[0033]
图15示出了化合物1二盐酸盐形式iii的dsc温谱图。
[0034]
图16示出了化合物1二盐酸盐形式iii的tga温谱图。
[0035]
图17示出了化合物1二盐酸盐形式iv的xrpd图样。
[0036]
图18示出了化合物1二盐酸盐形式iv的dsc温谱图。
[0037]
图19示出了化合物1二盐酸盐形式iv的tga温谱图。
[0038]
图20示出了dmso-d6中的化合物1二盐酸盐形式iv的1h nmr。
[0039]
图21示出了化合物1二盐酸盐形式v的xrpd图样。
[0040]
图22示出了化合物1二盐酸盐形式v的dsc温谱图。
[0041]
图23示出了化合物1二盐酸盐形式v的tga温谱图。
[0042]
图24示出了dmso-d6中的化合物1二盐酸盐形式v的1h nmr。
[0043]
图25示出了化合物1单盐酸盐形式vi的xrpd图样。
[0044]
图26示出了化合物1单盐酸盐形式vi的dsc温谱图。
[0045]
图27示出了化合物1单盐酸盐形式vi的tga温谱图。
[0046]
图28示出了dmso-d6中的化合物1单盐酸盐形式vi的1h nmr。
[0047]
图29示出了化合物1二盐酸盐形式vii的xrpd图样。
[0048]
图30示出了化合物1二盐酸盐形式vii的dsc温谱图。
[0049]
图31示出了化合物1二盐酸盐形式vii的tga温谱图。
[0050]
图32示出了dmso-d6中的化合物1二盐酸盐形式vii的1h nmr。
[0051]
图33示出了化合物1二盐酸盐形式viii的xrpd图样。
[0052]
图34示出了化合物1二盐酸盐形式viii的dsc温谱图。
[0053]
图35示出了化合物1二盐酸盐形式viii的tga温谱图。
[0054]
图36示出了dmso-d6中的化合物1二盐酸盐形式viii的1h nmr。
[0055]
图37示出了化合物1二盐酸盐形式ix的xrpd图样。
[0056]
图38示出了化合物1二盐酸盐形式ix的dsc温谱图。
[0057]
图39示出了化合物1二盐酸盐形式ix的tga温谱图。
[0058]
图40示出了10％水/丙酮中的化合物1二盐酸盐混合物的x射线粉末衍射叠加图：
[0059]
1)形式i、iii-ix的混合物(顶部谱图，紫色，在25
±
1℃下搅拌20小时)；
[0060]
2)形式i、iii-ix的混合物(第二谱图，红色，在25
±
1℃下搅拌2小时)；
[0061]
3)形式i、iii-ix的混合物(第三谱图，蓝色，在25
±
1℃下搅拌6小时)；以及
[0062]
4)形式i(底部谱图，黑色)。
[0063]
图41示出了在60℃下制备的于10％水/丙酮中的化合物1二盐酸盐混合物的x射线粉末衍射叠加图：
[0064]
1)形式i、iii-ix的混合物(顶部谱图，蓝色，在60
±
1℃下搅拌2小时)；
[0065]
2)形式i、iii-ix的混合物(中间谱图，红色，在60
±
1℃下搅拌20小时)；以及
[0066]
3)形式i(底部，黑色)。
具体实施方式
[0067]
本公开尤其涉及4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(化合物1)的固体形式或盐形式。
[0068]
在一些实施方案中，固体形式是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)的结晶游离碱(化合物1结晶游离碱)。
[0069]
在一些实施方案中，本公开提供了化合物1的盐。
[0070]
在一些实施方案中，盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二盐酸盐(化合物1二盐酸盐)。
[0071]
在一些实施方案中，盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)单盐酸盐(化合物1单盐酸盐)。
[0072]
在一些实施方案中，盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二钠盐(化合物1二钠盐)。
[0073]
相同物质的不同形式关于例如吸湿性、溶解度、稳定性等具有不同总体性质。具有高熔点的形式常常具有良好的热力学稳定性，其有利之处在于延长包含固体形式的药物配方的贮存期。具有较低熔点的形式常常在热力学上不太稳定，但有利之处在于其具有增加的水溶性，转换为增加的药物生物利用度。具有弱吸湿性的形式可取之处在于其对热和湿度的稳定性并且在长期储存期间抗降解。
[0074]
在一些实施方案中，化合物1的固体形式是结晶。在一些实施方案中，本文所提供的化合物1盐是结晶。如本文所用，“结晶”或“结晶形式”意欲指代结晶物质的某种晶格构型。相同物质的不同结晶形式通常具有不同晶格(例如单位晶胞)，这归因于作为结晶形式中每一者的特征的不同物理性质。在一些情况下，不同晶格构型具有不同水或溶剂含量。
[0075]
不同固体形式及其盐形式可以通过固态表征方法，诸如通过x射线粉末衍射(xrpd)来鉴定。其它表征方法，诸如差示扫描量热法(dsc)、热重分析(tga)、动态蒸气吸附(dvs)、固态nmr等，进一步帮助鉴定形式以及帮助确定稳定性和溶剂/水含量。
[0076]
反射(峰)的xrpd图样通常视为特定结晶形式的指纹。众所周知，xrpd峰的相对强度可以广泛变化，尤其取决于样品制备技术、晶体粒度分布、所使用的各种过滤器、样品安放程序和所采用的特定仪器。在一些情况下，取决于仪器类型或设置，可能观测到新的峰或现有的峰可能消失。如本文所用，术语“峰”是指具有最大峰高度/强度的至少约4％的相对高度/强度的反射。此外，仪器差异和其它因素可能影响2θ值。因此，峰赋值，诸如本文所报告的那些赋值，可以加上或减去约0.2
°
(2θ)而变化，并且如本文在xrpd的情形中所用的术语“基本上”和“约”意欲涵盖上文所提及的变化。
[0077]
同样地，取决于仪器、特定设置、样品制备等，与dsc、tga或其它热实验有关的温度读数可以变化约
±
3℃。因此，本文所报告的结晶形式具有“基本上”如图中任一者所示的dsc温谱图，或术语“约”应理解为容纳此种变化。
[0078]
在一些实施方案中，术语“约”意指
±
10％。在一些实施方案中，术语“约”意指
±
5％。
[0079]
在一些实施方案中，固体形式和盐形式是基本上分离的。“基本上分离”意指固体形式、盐形式或其结晶形式至少一部分或基本上从形成或检测到其的环境中分离。部分分离可以包括例如富含固体形式和盐形式的组合物。基本上分离可以包括含有以重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％或至少约99％的固体形式和盐形式的组合物。用于分离固体形式及其盐形式的方法在本领域中是常规的。
[0080]
在一些实施方案中，本文所描述的固体形式和盐形式可以与诸如水和溶剂的其它物质一起发现(例如水合物和溶剂合物)或可以是分离的。
[0081]
短语“药学上可接受”在本文中用于指代那些盐、物质、组合物和/或剂型，其在合理医学判断的范围内，适合用于与人类和动物的组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相匹配。
[0082]
本文所描述的成盐反应可以在熟练技术人员可容易确定的适当温度下进行。反应温度将取决于例如试剂和溶剂(如果存在)的熔点和沸点；反应的热力学(例如，剧烈放热反应可能需要在低温下进行)；以及反应的动力学(例如，高活化能垒可能需要高温)。
[0083]
如本文所用，表述“周围温度”和“室温”或“rt”在本领域中应理解为并且一般是指
约为进行成盐反应的室内温度的温度，例如反应温度，例如约20℃至约30℃的温度。
[0084]
本文所描述的成盐反应可以在空气中或在惰性气氛下进行。通常，含有基本上与空气起反应的试剂或产物的反应可以使用熟练技术人员所熟知的空气敏感性合成技术来进行。
[0085]
钠盐
[0086]
在一些实施方案中，化合物1的盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二钠盐(化合物1二钠盐)。
[0087]
化合物1二钠盐可以通过用于制备二钠加成盐的任何适合方法来制备。举例来说，可以使化合物1与氢氧化钠(例如约2.0摩尔当量或更大)于溶剂中反应并且可以通过从溶液中滤出盐来分离所得盐。在某些实施方案中，化合物1与约2至约3摩尔当量的氢氧化钠反应。在某些实施方案中，化合物1与约2至约2.5摩尔当量的氢氧化钠反应。在某些实施方案中，化合物1与约2.2摩尔当量的氢氧化钠反应。
[0088]
溶剂可以包含能够至少部分溶解化合物1的任何溶剂或溶剂混合物。在一些实施方案中，溶剂包含醇。适合的醇包括甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、异丙醇(异丙基醇、2-丙醇)、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二乙二醇、1-戊醇、2-戊醇或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二乙二醇单甲醚、二乙二醇单乙醚、环己醇、苯甲醇、苯酚或甘油。在一些实施方案中，溶剂包含丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、1-丙醇或异丙醇。在一些实施方案中，溶剂包含丙酮。在一些实施方案中，溶剂包含水。
[0089]
在一些实施方案中，溶剂是丙酮与水的混合物。
[0090]
在一些实施方案中，溶剂处于约室温。在一些实施方案中，将溶剂加热至约50℃的温度。在一些实施方案中，温度为约50℃至约80℃。在一些实施方案中，温度为约40℃至约60℃。在一些实施方案中，温度为约45℃至约55℃。在一些实施方案中，温度为约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃或约80℃。
[0091]
在一些实施方案中，将溶剂加热至可以诱导以实用速率沉淀和/或结晶的温度。在一些实施方案中，沉淀和/或结晶在约1至约12小时内完成，但取决于沉淀/结晶溶剂的选择和温度，有可能存在更长和更短的时段。在一些实施方案中，沉淀和/或结晶在约1小时内完成。
[0092]
在一些实施方案中，通过从溶液中滤出盐来进行二钠盐的沉淀和/或结晶。
[0093]
在一些实施方案中，化合物1二钠盐是非晶形。在一些实施方案中，化合物1二钠盐是结晶。在一些实施方案中，化合物1二钠盐是包含结晶和非晶形式的混合物。
[0094]
在一些实施方案中，化合物1二钠盐可以通过基本上如图4中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0095]
在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.3、7.1、10.6、13.9、14.3、16.1和17.4度。在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.3、7.1、10.6、13.9、14.3、16.1和17.4度。在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.3、7.1、10.6、13.9、14.3、16.1和17.4度。在一些实
施方案中，化合物1二钠盐具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.3、7.1、10.6、13.9、14.3、16.1和17.4度。在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在5.3、7.1、10.6、13.9、14.3、16.1和17.4度处。
[0096]
在一些实施方案中，化合物1二钠盐展现具有起始温度为47
±
3℃并且最大值为108
±
3℃的第一吸热峰以及起始温度为258
±
3℃并且最大值为280
±
3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有基本上如图5中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二钠盐具有基本上如图6中所描绘的tga温谱图。
[0097]
盐酸盐
[0098]
在一些实施方案中，化合物1的盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二盐酸盐(化合物1二盐酸盐)。
[0099]
在一些实施方案中，盐是4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)单盐酸盐(化合物1单盐酸盐)。
[0100]
化合物1单盐酸盐可以通过用于制备单盐酸加成盐的任何适合方法来制备。举例来说，可以使化合物1与盐酸(例如约1.0摩尔当量或更大)于溶剂中反应并且可以通过从溶液中滤出盐来分离所得盐。在某些实施方案中，化合物1与约1至约2摩尔当量的盐酸反应。在某些实施方案中，化合物1与约1至约1.5摩尔当量的盐酸反应。在某些实施方案中，化合物1与约1.05摩尔当量的盐酸反应。
[0101]
溶剂可以包含能够至少部分溶解化合物1的任何溶剂或溶剂混合物。在一些实施方案中，溶剂包含醇。适合的醇包括甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、异丙醇(异丙基醇、2-丙醇)、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二乙二醇、1-戊醇、2-戊醇或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二乙二醇单甲醚、二乙二醇单乙醚、环己醇、苯甲醇、苯酚或甘油。在一些实施方案中，溶剂包含丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、1-丙醇或异丙醇。在一些实施方案中，溶剂包含二氯甲烷。在一些实施方案中，溶剂包含甲醇。
[0102]
在一些实施方案中，溶剂是异丙醇、水、甲醇和二氯甲烷的混合物。在一些实施方案中，溶剂是异丙醇、水和甲醇的混合物。
[0103]
在一些实施方案中，在约室温下使溶剂与化合物i和盐酸组合。在一些实施方案中，将溶剂加热至约50℃的温度。在一些实施方案中，温度为约50℃至约80℃。在一些实施方案中，温度为约40℃至约60℃。在一些实施方案中，温度为约45℃至约55℃。在一些实施方案中，温度为约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃或约80℃。
[0104]
在一些实施方案中，将溶剂加热至可以诱导以实用速率沉淀和/或结晶的温度。在一些实施方案中，沉淀和/或结晶在约1至约12小时内完成，但取决于沉淀/结晶溶剂的选择和温度，有可能存在更长和更短的时段。在一些实施方案中，沉淀和/或结晶在约1小时内完成。
[0105]
在一些实施方案中，通过从溶液中滤出盐来进行单盐酸盐的沉淀和/或结晶。
[0106]
在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐是非晶形。在一些实施方案中，化合物1单盐
酸盐是结晶。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐是包含结晶和非晶形式的混合物。
[0107]
在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐具有形式vi。
[0108]
在一些实施方案中，经由在50
±
1℃下将化合物1二盐酸盐形式i添加至化合物1二盐酸盐形式i于水中的饱和溶液中，在50
±
1℃下搅拌2天，并且过滤所得固体来产生化合物1单盐酸盐形式vi。
[0109]
在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi可以通过基本上如图25中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0110]
在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.4、11.1、12.6、13.8、14.6、15.7、16.9、17.6、19.0和19.5度。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.4、11.1、12.6、13.8、14.6、15.7、16.9、17.6、19.0和19.5度。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.4、11.1、12.6、13.8、14.6、15.7、16.9、17.6、19.0和19.5度。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.4、11.1、12.6、13.8、14.6、15.7、16.9、17.6、19.0和19.5度。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在6.4、11.1、12.6、13.8、14.6、15.7、16.9、17.6、19.0和19.5度处。
[0111]
在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi展现具有起始温度为44
±
3℃并且最大值为77
±
3℃的第一吸热峰以及起始温度为244
±
3℃并且最大值为251
±
3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有基本上如图26中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有基本上如图27中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vi具有基本上如图28中所描绘的1h nmr光谱。
[0112]
化合物1二盐酸盐可以通过用于制备二盐酸加成盐的任何适合方法来制备。举例来说，可以使化合物1与盐酸(例如约2.0摩尔当量或更大)于溶剂中反应并且可以通过从溶液中滤出盐来分离所得盐。在某些实施方案中，化合物1与约2至约3摩尔当量的盐酸反应。在某些实施方案中，化合物1与约2至约2.5摩尔当量的盐酸反应。在某些实施方案中，化合物1与约2.2摩尔当量的盐酸反应。
[0113]
溶剂可以包含能够至少部分溶解化合物1的任何溶剂或溶剂混合物。在一些实施方案中，溶剂包含醇。适合的醇包括甲醇、乙醇、2-硝基乙醇、2-氟乙醇、2,2,2-三氟乙醇、乙二醇、1-丙醇、异丙醇(异丙基醇、2-丙醇)、2-甲氧基乙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、2-乙氧基乙醇、二乙二醇、1-戊醇、2-戊醇或3-戊醇、新戊醇、叔戊醇、二乙二醇单甲醚、二乙二醇单乙醚、环己醇、苯甲醇、苯酚或甘油。在一些实施方案中，溶剂包含二噁烷、二甲亚砜、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇、乙醇、1-丙醇或异丙醇。在一些实施方案中，溶剂包含丙酮。在一些实施方案中，溶剂包含水。在一些实施方案中，溶剂包含丙酮和水。
[0114]
在一些实施方案中，溶剂是丙酮与水的混合物。
[0115]
在一些实施方案中，溶剂处于约室温。在一些实施方案中，将溶剂加热至约55℃的温度。在一些实施方案中，温度为约50℃至约80℃。在一些实施方案中，温度为约40℃至约60℃。在一些实施方案中，温度为约55℃至约60℃。在一些实施方案中，温度为约45℃、约50
℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃或约80℃。
[0116]
在一些实施方案中，将溶剂加热至可以诱导以实用速率沉淀的温度。在一些实施方案中，沉淀在约4至约24小时内完成，但取决于沉淀溶剂的选择和温度，有可能存在更长和更短的时段。在一些实施方案中，沉淀在约5小时内完成。
[0117]
在一些实施方案中，通过从溶液中滤出盐来进行二盐酸盐的沉淀。
[0118]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐是非晶形。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐是结晶。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐是包含结晶和非晶形式的混合物。
[0119]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式i。
[0120]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i可以通过包括以下的过程产生：在化合物1与盐酸(例如约2.0摩尔当量或更大)于溶剂中反应之后，使化合物i二盐酸形式i从溶剂中沉淀。在一些实施方案中，溶剂是丙酮、水或它们的混合物。
[0121]
举例来说，化合物1二盐酸盐形式i可以通过包括以下的过程制备：
[0122]
a)制备化合物1和至少2当量的盐酸于包含丙酮的溶剂中的悬浮液；
[0123]
b)将a)的悬浮液加热至高于室温以形成澄清溶液；
[0124]
c)将b)的澄清溶液冷却至约室温；
[0125]
d)将包含丙酮的溶剂添加至c)的混合物中以形成混浊溶液；以及
[0126]
e)过滤d)的混浊溶液以得到呈固体状的所述形式i。
[0127]
举例来说，化合物1二盐酸盐形式i可以通过包括以下的过程制备：
[0128]
a)制备化合物1和至少2当量(例如约2.2当量)的盐酸于包含丙酮的溶剂中的悬浮液；
[0129]
b)将a)的悬浮液加热至约55℃以形成澄清溶液；
[0130]
c)将b)的澄清溶液冷却至约室温，继之以精滤以得到混合物；
[0131]
d)将包含丙酮的溶剂添加至c)的混合物中以形成混浊溶液；
[0132]
e)过滤d)的混浊溶液以得到呈固体状的所述形式i；
[0133]
f)将包含丙酮和水的溶剂添加至e)的固体中以得到混合物；
[0134]
g)将f)的混合物加热至约55至约60℃的温度；
[0135]
h)将g)的混合物冷却至约室温；
[0136]
i)过滤h)的混合物以得到固体；以及
[0137]
j)在约50℃下于真空下干燥固体i)。
[0138]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i可以通过基本上如图7中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0139]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、8.5、9.6、9.9、11.8、12.3、13.1、13.4、13.8、14.2、14.5、15.4、15.8、16.8、17.3和17.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、8.5、9.6、9.9、11.8、12.3、13.1、13.4、13.8、14.2、14.5、15.4、15.8、16.8、17.3和17.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、8.5、9.6、9.9、11.8、12.3、13.1、13.4、13.8、14.2、14.5、15.4、15.8、16.8、17.3和17.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表
示，选自5.7、8.5、9.6、9.9、11.8、12.3、13.1、13.4、13.8、14.2、14.5、15.4、15.8、16.8、17.3和17.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在5.7、8.5、9.6、9.9、11.8、12.3、13.1、13.4、13.8、14.2、14.5、15.4、15.8、16.8、17.3和17.6度处。
[0140]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i展现具有起始温度为31.1℃并且最大值为91.4℃的第一吸热峰以及起始温度为231.0℃并且最大值为236.4℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有基本上如图8中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式i具有基本上如图9中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式i具有基本上如图10中所描绘的1h nmr光谱。
[0141]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式ii。
[0142]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii经由以下方式产生：将非晶形化合物1二盐酸盐溶解于包含约10:3乙腈/水的溶剂中，通过在约70℃下蒸发缩减混合物的体积，添加乙腈并加热至约70℃，在约室温下搅拌所得悬浮液，分离所得固体，并且在约50℃下干燥固体。
[0143]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii可以通过基本上如图11中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0144]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自4.6、6.9、8.9、11.2、11.7、13.2、13.9、14.3、14.8、16.0、16.7、17.2、17.9、25.3和25.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自4.6、6.9、8.9、11.2、11.7、13.2、13.9、14.3、14.8、16.0、16.7、17.2、17.9、25.3和25.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自4.6、6.9、8.9、11.2、11.7、13.2、13.9、14.3、14.8、16.0、16.7、17.2、17.9、25.3和25.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自4.6、6.9、8.9、11.2、11.7、13.2、13.9、14.3、14.8、16.0、16.7、17.2、17.9、25.3和25.6度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在4.6、6.9、8.9、11.2、11.7、13.2、13.9、14.3、14.8、16.0、16.7、17.2、17.9、25.3和25.6度处。
[0145]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii展现具有起始温度为22.2℃并且最大值为89.7℃的第一吸热峰以及起始温度为251.7℃并且最大值为258.3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有基本上如图12中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ii具有基本上如图13中所描绘的tga温谱图。
[0146]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式iii。
[0147]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii经由以下方式产生：将化合物1二盐酸盐形式i添加至化合物1二盐酸盐形式i于包含甲醇的溶剂中的饱和或混浊溶液中，搅拌(例如至少24小时或约3天)，并且分离所得固体。
[0148]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii可以通过基本上如图14中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0149]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自9.2、11.2、14.9、17.0、17.8、19.7、24.4和25.9度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自9.2、11.2、14.9、17.0、17.8、19.7、24.4和25.9度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自9.2、11.2、14.9、17.0、17.8、19.7、24.4和25.9度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自9.2、11.2、14.9、17.0、17.8、19.7、24.4和25.9度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在9.2、11.2、14.9、17.0、17.8、19.7、24.4和25.9度处。
[0150]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii展现具有起始温度为247
±
3℃并且最大值为258
±
3℃的吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有基本上如图15中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iii具有基本上如图16中所描绘的tga温谱图。
[0151]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式iv。
[0152]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv经由以下方式产生：将化合物1二盐酸盐形式i添加至化合物1二盐酸盐形式i于包含正丁醇的溶剂中的饱和或混浊溶液中，在约25℃下搅拌(例如至少24小时或约3天)，并且分离所得固体。
[0153]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv可以通过基本上如图17中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0154]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.4、8.8、10.9、13.0、15.1、16.2、17.5、21.9和26.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.4、8.8、10.9、13.0、15.1、16.2、17.5、21.9和26.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.4、8.8、10.9、13.0、15.1、16.2、17.5、21.9和26.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.4、8.8、10.9、13.0、15.1、16.2、17.5、21.9和26.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在5.4、8.8、10.9、13.0、15.1、16.2、17.5、21.9和26.3度处。
[0155]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv展现具有起始温度为268
±
3℃并且最大值为273
±
3℃的吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有基本上如图18中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式iv具有基本上如图19中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式iv具有基本上如图20中所描绘的1h nmr光谱。
[0156]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式v。
[0157]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v经由以下方式产生：将化合物1二盐酸盐形式i添加至化合物1二盐酸盐形式i于包含正丙醇的溶剂中的饱和或混浊溶液中，在约25℃下搅拌至少24小时(例如约3天)，并且分离所得固体。
[0158]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v可以通过基本上如图21中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0159]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.8、9.1、13.4、14.8、16.6、17.1、18.1和19.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.8、9.1、13.4、14.8、16.6、17.1、18.1和19.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.8、9.1、13.4、14.8、16.6、17.1、18.1和19.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.8、9.1、13.4、14.8、16.6、17.1、18.1和19.3度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在5.8、9.1、13.4、14.8、16.6、17.1、18.1和19.3度处。
[0160]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v展现具有起始温度为241
±
3℃并且最大值为249
±
3℃的吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有基本上如图22中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式v具有基本上如图23中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式v具有基本上如图24中所描绘的1h nmr光谱。
[0161]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式vii。
[0162]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii经由以下方式产生：在约50℃下制备化合物1二盐酸盐形式i于包含约10％水/乙腈的溶剂中的饱和溶液，冷却至约5℃，再加热至约50℃，冷却至约5℃，重复所述先前过程步骤，并且分离所得固体。
[0163]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii可以通过基本上如图29中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0164]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、9.9、11.5、14.1、14.9、17.0和24.4度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、9.9、11.5、14.1、14.9、17.0和24.4度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、9.9、11.5、14.1、14.9、17.0和24.4度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自5.7、9.9、11.5、14.1、14.9、17.0和24.4度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在5.7、9.9、11.5、14.1、14.9、17.0和24.4度处。
[0165]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii展现具有起始温度为44
±
3℃并且最大值为85
±
3℃的第一吸热峰以及起始温度为260
±
3℃并且最大值为274
±
3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有基本上如图30中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式vii具有基本上如图31中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式vii具有基本上如图32中所描绘的1h nmr光谱。
[0166]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式viii。
[0167]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii经由以下方式产生：制备化合物1
二盐酸盐形式i于包含甲醇的溶剂中的饱和或近饱和溶液，将溶液添加至包含甲苯的溶剂中，并且分离所得固体。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii经由以下方式产生：制备化合物1二盐酸盐形式i于包含甲醇的溶剂中的饱和或近饱和溶液，将溶液添加至包含乙酸异丙酯的溶剂中，并且分离所得固体。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii经由以下方式产生：制备化合物1二盐酸盐形式i于包含甲醇的溶剂中的饱和或近饱和溶液，将溶液添加至包含乙酸乙酯的溶剂中，并且分离所得固体。
[0168]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii可以通过基本上如图33中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0169]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.6、11.2、13.1、14.7、16.7、19.0和24.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.6、11.2、13.1、14.7、16.7、19.0和24.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.6、11.2、13.1、14.7、16.7、19.0和24.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.6、11.2、13.1、14.7、16.7、19.0和24.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在6.6、11.2、13.1、14.7、16.7、19.0和24.1度处。
[0170]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii展现具有起始温度为44
±
3℃并且最大值为78
±
3℃的第一吸热峰以及起始温度为246
±
3℃并且最大值为253
±
3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有基本上如图34中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式viii具有基本上如图35中所描绘的tga温谱图。在一些实施方案中，化合物1单盐酸盐形式viii具有基本上如图36中所描绘的1h nmr光谱。
[0171]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐具有形式ix。
[0172]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix经由以下方式产生：在约50℃下制备化合物1二盐酸盐形式i于包含甲醇的溶剂中的饱和溶液，冷却至约25℃，将混合物再加热至约50℃，冷却至约5℃，重复先前过程步骤，并且分离所得固体。
[0173]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix可以通过基本上如图37中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0174]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自3.8、6.6、10.7、13.1、15.3、16.3、17.5和19.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自3.8、6.6、10.7、13.1、15.3、16.3、17.5和19.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自3.8、6.6、10.7、13.1、15.3、16.3、17.5和19.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自3.8、6.6、10.7、13.1、15.3、16.3、17.5和19.1度。在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在3.8、6.6、10.7、13.1、15.3、16.3、17.5和19.1度处。
[0175]
在一些实施方案中，化合物1二盐酸盐形式ix展现具有起始温度为43
±
3℃并且最
2,1-二基(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸酯)基团引入所得胺中以产生式1-7的化合物。然后可以在碱性条件下使酯1-7水解以得到所需化合物1。
[0184]
可以使用流程2中所示的过程来合成式1-1的化合物。可以用boc保护化合物2-1中的游离胺。可以由强碱，诸如但不限于正丁基锂，使所得化合物去质子化以产生相应杂芳基锂中间体，所述中间体可以与氯甲酸烷酯进一步反应以得到式2-2的酯。在适合的碱，诸如但不限于叔丁醇钾存在下酯2-2与卤基取代的苯胺2-3反应可以得到所需式1-1的化合物。
[0185]
流程1
[0186][0187]
可以根据流程3制备式1-3的化合物。可以在标准条件下[例如，在双(频哪醇合)二
硼和钯催化剂，诸如四(三苯基膦)钯(0)和乙酸钯(ii)存在下]使卤基取代的化合物1-1转化成硼酸酯1-3。
[0188]
流程3
[0189][0190]
可以根据流程4制备化合物1-5。可以在氧化剂，诸如但不限于戴斯-马丁过碘烷(dess-martin periodinane)或氯铬酸吡啶鎓盐存在下使醇4-1转化成醛4-2。可以在维蒂希反应(wittig reaction)中用氯化(甲氧基甲基)三苯基鏻4-3使醛4-2延长一个碳原子以形成烯醇醚，所述烯醇醚可以在酸性条件(例如盐酸)下进一步水解以得到所需化合物1-5。
[0191]
流程4
[0192][0193]
可以使用流程5中所示的过程来合成化合物1。在适合的碱，诸如但不限于叔丁醇钾存在下化合物5-2与化合物5-1反应可以得到所需化合物5-3。在酸性条件(例如盐酸或三氟乙酸)下去除化合物5-3的boc基团以得到化合物5-5之后，用碱中和得到化合物5-6。可以通过用化合物5-4进行还原胺化将乙烷-2,1-二基(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸基引入所得二胺中以产生化合物1。
[0194]
流程5
[0195][0196]
可以根据流程6制备式5-1的化合物。可以在标准条件下[例如，在双(频哪醇合)二硼和钯催化剂，诸如四(三苯基膦)钯(0)和乙酸钯(ii)存在下]使化合物2-3转化成硼酸酯6-1。在标准条件下化合物2-3与式6-1的硼酸酯的钯催化的交叉偶合反应(诸如铃木偶合反应，例如在钯催化剂和适合碱存在下)可以产生式5-1的化合物。
[0197]
流程6
[0198][0199]
流程7
[0200][0201]
在一些实施方案中，通过包括以下的过程制备化合物5-4：
[0202]
使化合物1-5转化成化合物7-1；
[0203]
使化合物7-1转化成化合物7-2；以及
[0204]
使化合物7-2转化成化合物5-4。
[0205]
在一些实施方案中，通过包括使化合物1-5转化成化合物7-1的过程制备化合物7-1。在一些实施方案中，化合物1-5转化成化合物7-1在原甲酸三甲酯和酸，诸如对甲苯磺酸存在下进行。
[0206]
在一些实施方案中，通过包括使化合物7-1转化成化合物7-2的过程制备化合物7-2。在一些实施方案中，转化包括化合物7-1的水解。
[0207]
在一些实施方案中，通过包括使化合物7-2转化成化合物5-4的过程制备化合物5-4。在一些实施方案中，转化包括使化合物7-2去保护。
[0208]
可以使用流程8中所示的过程来合成化合物1和化合物1二盐酸盐。在酸性条件(例如盐酸或三氟乙酸)下去除化合物5-3的boc基团，继之以用碱中和得到化合物5-6。可以通过用化合物5-4进行还原胺化将乙烷-2,1-二基(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸基引入所得二胺中以产生化合物1。可以经由使化合物1暴露于hcl水溶液来形成粗化合物1二盐酸盐。粗化合物1二盐酸盐于例如水和丙酮中再结晶可以用于形成化合物1二盐酸。
[0209]
流程8
[0210][0211]
因此，本公开进一步提供了制备化合物1或其盐的过程，所述过程包括：
[0212]
使化合物5-6：
[0213][0214]
与4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(化合物5-4)：
[0215][0216]
在还原剂存在下反应以形成所述化合物1或其盐。
[0217]
在一些实施方案中，所述还原剂是硼氢化物还原剂(例如nab(oac)3h、nabh4或其它含硼的氢化物还原剂)。在一些实施方案中，还原剂是三乙酰氧基硼氢化钠。在一些实施方案中，在质子酸存在下反应。在一些实施方案中，质子酸是三氟乙酸、盐酸或氢溴酸。在一些实施方案中，质子酸是三氟乙酸。
[0218]
在一些实施方案中，在溶剂中反应。在一些实施方案中，溶剂包含极性非质子性溶剂。在一些实施方案中，溶剂包含二氯甲烷。在一些实施方案中，溶剂不包含二氯甲烷。在一些实施方案中，溶剂包含乙腈。在一些实施方案中，溶剂包含水。在一些实施方案中，化合物5-6与化合物5-4的反应包括使用相对于化合物5-6约2至约4摩尔当量的化合物5-4或相对于化合物5-6约3摩尔当量的化合物5-4。在一些实施方案中，化合物5-6与化合物5-4的反应包括使用相对于化合物5-6约2至约4摩尔当量的三乙酰氧基硼氢化钠或相对于化合物5-6约3摩尔当量的三乙酰氧基硼氢化钠。
[0219]
在一些实施方案中，通过包括以下的过程制备化合物5-6：
[0220]
使化合物5-3a去保护：
[0221][0222]
以形成化合物5-6，其中p1是胺保护基。
[0223]
适当p1保护基包括但不限于wuts和greene,protective groups in organic synthesis,第4版,john wiley&sons:new jersey,第696-887页(以及尤其第872-887页)(2007)中叙述的用于胺的保护基，所述文献以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，p1是苯甲氧基羰基(cbz)、2,2,2-三氯乙氧基羰基(troc)、2-(三甲基硅基)乙氧基羰基(teoc)、2-(4-三氟甲基苯基磺酰基)乙氧基羰基(tsc)、叔丁氧基羰基(boc)、1-金刚烷氧基羰基(adoc)、2-金刚烷基羰基(2-adoc)、2,4-二甲基戊-3-基氧基羰基(doc)、环己氧基羰
基(hoc)、1,1-二甲基-2,2,2-三氯乙氧基羰基(tcboc)、乙烯基、2-氯乙基、2-苯基磺酰基乙基、烯丙基、苯甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲基、二苯基-4-吡啶基甲基、n',n'-二甲基肼基、甲氧基甲基、叔丁氧基甲基(bum)、苯甲氧基甲基(bom)或2-四氢吡喃基(thp)。在一些实施方案中，p1是boc。
[0224]
在一些实施方案中，去保护包括与盐酸于溶剂中反应，继之以与碱反应以形成所述化合物5-6。在一些实施方案中，盐酸是盐酸水溶液。在一些实施方案中，溶剂是醇。在一些实施方案中，醇可以是c
1-6
烷基-oh，诸如甲醇。在一些实施方案中，在约20℃至约70℃、约25℃至约60℃、约30℃至约60℃或约50℃至约55℃的温度下进行反应。
[0225]
在一些实施方案中，去保护包括使所述化合物5-3a与盐酸于溶剂中反应，继之以与碱金属碳酸盐于包含水和thf的溶剂中反应以形成所述化合物5-6。
[0226]
在一些实施方案中，去保护包括使所述化合物5-3a与盐酸于包含甲醇的溶剂中反应，继之以与碳酸氢钠于包含水和thf的溶剂中反应以形成所述化合物5-6。
[0227]
在一些实施方案中，去保护包括：
[0228]
使所述化合物5-3a与盐酸于溶剂中反应以形成化合物5-5：
[0229]
以及
[0230]
用碱中和所述化合物5-5以形成所述化合物5-6。
[0231]
在一些实施方案中，化合物5-3a是化合物5-3：
[0232][0233]
在一些实施方案中，通过包括以下的过程制备所述化合物5-3a：
[0234]
使化合物5-2a：
[0235][0236]
与化合物5-1：
[0237]
[0238]
在碱存在下于溶剂中反应以形成所述化合物5-3a，其中p1是胺保护基。
[0239]
在一些实施方案中，碱是碱金属碱。在一些实施方案中，碱是碱金属醇盐。在一些实施方案中，碱是2-甲基丙-2-醇钾。在一些实施方案中，化合物5-2a与化合物5-1的反应在溶剂存在下进行。在某个实施方案中，溶剂包含极性非质子性溶剂，诸如四氢呋喃。在一些实施方案中，化合物5-2a与化合物5-1的反应包括使用相对于化合物5-1约2至约4摩尔当量的化合物5-2a、相对于化合物5-1约2至约3摩尔当量的化合物5-2a或相对于化合物5-1约2.5摩尔当量的化合物5-2a。
[0240]
在一些实施方案中，化合物5-2a与化合物5-1的反应在2-甲基丙-2-醇钾存在下于包含thf的溶剂中进行。
[0241]
在一些实施方案中，化合物5-2a是化合物5-2：
[0242][0243]
在一些实施方案中，通过包括以下的过程制备化合物5-1：
[0244]
使化合物6-1a：
[0245][0246]
与化合物2-3：
[0247][0248]
在铃木催化剂(suzuki catalyst)和碱存在下于溶剂中反应以形成所述化合物5-1，其中：
[0249]
每个ra独立地选自h和c
1-6
烷基；或
[0250]
每个ra与其所连接的氧原子和氧原子所连接的硼原子一起形成式的环，所述环任选地经1、2、3或4个c
1-4
烷基取代。
[0251]
如本文所用，术语“烷基”是指可以是直链或支链的饱和烃基。在一些实施方案中，烷基含有1至6个碳原子。烷基部分的实例包括但不限于化学基团，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基。在一些实施方案中，烷基部分是甲基。
[0252]
铃木偶合反应可以使用许多钯(0)和钯(ii)催化剂引发并且在本领域中已知的条件下进行(参见例如miyaura和suzuki,chem.rev.1995,95,2457-2483，特此以全文引用的方式并入)。在一些实施方案中，钯催化剂是pd(pph3)4或pd(dppf)2cl2。在一些实施方案中，催化剂是二氯双[二叔丁基(对二甲基氨基苯基)膦基]钯。
[0253]
在一些实施方案中，化合物6-1a与化合物2-3的反应在二氯双[二叔丁基(对二甲
基氨基苯基)膦基]钯和乙酸钾存在下于包含二噁烷和水的溶剂中进行。
[0254]
在一些实施方案中，所述化合物6-1a是化合物6-1：
[0255][0256]
可以根据流程7制备式5-4的化合物。可以在标准条件下[例如，在原甲酸三甲酯和酸，诸如对甲苯磺酸存在下]使化合物1-5转化成缩醛7-1。可以在碱性条件下使酯7-1水解以得到酸7-2。然后，可以在酸性条件下使7-2的缩醛去保护以产生醛5-4。
[0257]
在一些实施方案中，本公开提供了一种化合物，所述化合物选自化合物5-3a、化合物5-3、化合物5-4和化合物5-1：
[0258][0259]
或其盐。
[0260]
结晶游离碱
[0261]
在一些实施方案中，通过流程5中所描绘的过程制备4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(化合物1)的结
晶游离碱。
[0262]
在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱可以通过基本上如图1中所示的x射线粉末衍射(xrpd)图样表征。
[0263]
在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有至少一个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.2、10.9、11.3、12.4、13.7、14.5、15.5、17.5和18.8度。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有至少两个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.2、10.9、11.3、12.4、13.7、14.5、15.5、17.5和18.8度。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有至少三个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.2、10.9、11.3、12.4、13.7、14.5、15.5、17.5和18.8度。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有至少四个x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，选自6.2、10.9、11.3、12.4、13.7、14.5、15.5、17.5和18.8度。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有特征性x射线粉末衍射(xrpd)峰，以2θ(
±
0.2度)表示，在6.2、10.9、11.3、12.4、13.7、14.5、15.5、17.5和18.8度处。
[0264]
在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱展现具有起始温度为33
±
3℃并且最大值为70
±
3℃的第一吸热峰以及起始温度为244
±
3℃并且最大值为250
±
3℃的第二吸热峰的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有基本上如图2中所描绘的dsc温谱图。在一些实施方案中，化合物1结晶游离碱具有基本上如图3中所描绘的tga温谱图。
[0265]
使用方法
[0266]
本公开所描述的固体形式和盐形式可以抑制pd-1/pd-l1蛋白质/蛋白质相互作用的活性，并且因此可用于治疗与pd-1活性相关的疾病和病症以及与pd-l1，包括其与诸如pd-1和b7-1(cd80)的其它蛋白质的相互作用相关的疾病和病症。在某些实施方案中，本公开所描述的固体形式和盐形式可用于治疗性施用以增强、刺激和/或增加癌症、慢性感染或败血症中的免疫性，包括增强对疫苗接种的反应。在一些实施方案中，本公开提供了一种用于抑制pd-1/pd-l1蛋白质/蛋白质相互作用的方法。所述方法包括向个体或患者施用化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。本公开所描述的固体形式和盐形式可以单独，与其它剂或疗法组合，或作为佐剂或新佐剂使用，用于治疗疾病或病症，包括癌症或感染性疾病。对于本文所描述的用途，可以使用本公开所描述的固体形式和盐形式中的任一者，包括本公开的实施方案或权利要求书中的任一项。
[0267]
本公开所描述的固体形式和盐形式抑制pd-1/pd-l1蛋白质/蛋白质相互作用，使得pd-1路径阻断。pd-1的阻断可以增强哺乳动物，包括人类对癌细胞和感染性疾病的免疫反应。在一些实施方案中，本公开提供了使用化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式在体内治疗个体或患者以使得癌性肿瘤的生长受抑制。化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式可以用于抑制癌性肿瘤的生长。或者，如下文所描述，化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式可以与其它剂或标准癌症治疗联合使用。在一个实施方案中，本公开提供了一种用于体外抑制肿瘤细胞生长的方法。所述方法包括使肿瘤细胞在体外与化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式接触。在另一个实施方案中，本公开提供了一种用于抑制个体或患者中的肿瘤细胞生长的方法。所述方法包括向有需要的个体或患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。
[0268]
在一些实施方案中，本文提供了一种用于治疗癌症的方法。所述方法包括向有需
要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。癌症的实例包括可以使用本公开的盐抑制生长的那些癌症以及通常对免疫疗法起反应的癌症。
[0269]
在一些实施方案中，本公开提供了一种增强、刺激和/或增加患者中的免疫反应的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。
[0270]
使用本公开所描述的固体形式和盐形式可治疗的癌症的实例包括但不限于骨癌；胰脏癌；皮肤癌；头颈癌；皮肤或眼内恶性黑色素瘤；子宫癌；卵巢癌；直肠癌；肛门区癌；胃癌；睾丸癌；子宫癌；输卵管癌；子宫内膜癌瘤；子宫内膜癌；子宫颈癌；阴道癌；外阴癌；霍奇金氏病(hodgkin's disease)；非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin'slymphoma)；食道癌；小肠癌；内分泌系统癌；甲状腺癌；甲状旁腺癌；肾上腺癌；软组织肉瘤；尿道癌；阴茎癌；慢性或急性白血病，包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病；儿童期实体肿瘤；淋巴细胞性淋巴瘤；膀胱癌；肾脏或尿道癌；肾盂癌；中枢神经系统(cns)赘瘤；原发性cns淋巴瘤；肿瘤血管生成；脊髓轴肿瘤；脑干神经胶质瘤；垂体腺瘤；卡波西氏肉瘤(kaposi's sarcoma)；表皮样癌；鳞状细胞癌；t细胞淋巴瘤；环境诱发的癌症，包括石棉诱发的那些癌症；以及所述癌症的组合。本公开所描述的固体形式和盐形式还可用于治疗转移癌，尤其表达pd-l1的转移癌。
[0271]
在一些实施方案中，用本公开所描述的固体形式和盐形式可治疗的癌症包括黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤、皮肤黑色素瘤)、肾癌(例如透明细胞癌)、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、乳癌(例如侵袭性乳癌)、结肠癌、肺癌(例如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、鳞状细胞头颈癌(例如头颈部鳞状细胞癌)、泌尿道上皮癌(例如膀胱癌、非肌肉侵袭性膀胱癌(nmibc))和高微卫星不稳定性(msi
高
)癌症。另外，本公开包括可以使用本公开的盐抑制生长的难治性或复发性恶性病。
[0272]
在一些实施方案中，使用本公开所描述的固体形式和盐形式可治疗的癌症包括但不限于实体肿瘤(例如前列腺癌、结肠癌、食道癌、子宫内膜癌、卵巢癌、子宫癌、肾癌、肝癌、胰脏癌、胃癌、乳癌、肺癌、头颈癌、甲状腺癌、成胶质细胞瘤、肉瘤、膀胱癌等)、血液学癌症(例如淋巴瘤；白血病，诸如急性成淋巴细胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)；dlbcl；套细胞淋巴瘤；非霍奇金氏淋巴瘤(包括复发性或难治性nhl和复发性滤泡性)；霍奇金氏淋巴瘤；或多发性骨髓瘤)，以及所述癌症的组合。
[0273]
在一些实施方案中，使用本公开所描述的固体形式和盐形式可治疗的癌症包括但不限于胆管细胞癌、胆管癌、胆道癌、三阴性乳癌、横纹肌肉瘤、小细胞肺癌、平滑肌肉瘤、肝细胞癌、尤文氏肉瘤(ewing'ssarcoma)、脑癌、脑肿瘤、星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经纤维瘤、基底细胞癌、软骨肉瘤、上皮样肉瘤、眼癌、输卵管癌、胃肠癌、胃肠道间质瘤、毛细胞白血病、肠癌、胰岛细胞癌、口腔癌、口癌、咽喉癌、喉头癌、唇癌、间皮瘤、颈癌、鼻腔癌、眼部癌症、眼部黑色素瘤、骨盆癌、直肠癌、肾细胞癌、唾液腺癌、窦癌、脊髓癌、舌癌、小管癌、尿道癌和输尿管癌。
[0274]
在一些实施方案中，本公开所描述的固体形式和盐形式可以用于治疗镰状细胞疾病和镰状细胞贫血。
[0275]
在一些实施方案中，使用本公开所描述的固体形式和盐形式可治疗的疾病和适应
症包括但不限于血液学癌症、肉瘤、肺癌、胃肠癌、生殖泌尿道癌、肝癌、骨癌、神经系统癌、妇科癌症和皮肤癌。
[0276]
示例性血液学癌症包括淋巴瘤和白血病，诸如急性成淋巴细胞性白血病(all)、急性骨髓性白血病(aml)、急性前髓细胞性白血病(apl)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)、慢性骨髓性白血病(cml)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、套细胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(包括复发性或难治性nhl和复发性滤泡性)、霍奇金氏淋巴瘤、骨髓增生性疾病(例如原发性骨髓纤维化(pmf)、真性红血球增多症(pv)和自发性血小板增多症(et))、骨髓化生不良综合征(mds)、t细胞急性成淋巴细胞性淋巴瘤(t-all)和多发性骨髓瘤(mm)。
[0277]
示例性肉瘤包括软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、血管肉瘤、纤维肉瘤、脂肉瘤、粘液瘤、横纹肌瘤、横纹肌肉瘤、纤维瘤、脂瘤、错构瘤和畸胎瘤。
[0278]
示例性肺癌包括非小细胞肺癌(nsclc)(例如鳞状细胞nsclc)、小细胞肺癌、支气管癌(鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌)、肺泡(小支气管)癌、支气管腺瘤、软骨瘤性错构瘤和间皮瘤。
[0279]
示例性胃肠癌包括食道癌(癌瘤、鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃癌(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤、腺癌)、胰脏癌(管状腺癌、胰岛素瘤、升糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、vip瘤)、小肠癌(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠癌(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)和结肠直肠癌(例如结肠直肠腺癌)。
[0280]
示例性生殖泌尿道癌包括肾癌(腺癌、威尔姆氏瘤(wilm's tumor)[肾母细胞瘤])、膀胱和尿道癌(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺癌(腺癌、肉瘤)和睾丸癌(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸形癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂瘤)。在一些实施方案中，癌症是泌尿系统癌(例如乳头状肾癌、睾丸生殖细胞癌、嫌色性肾细胞癌、透明细胞肾癌或前列腺腺癌)。
[0281]
示例性肝癌包括肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管细胞癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤和血管瘤。
[0282]
示例性骨癌包括例如骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤文氏肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨性外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤。
[0283]
示例性神经系统癌包括颅癌(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、变形性骨炎)、脑膜癌(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)、脑癌(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤、胚细胞瘤(松果体瘤)、成胶质细胞瘤、多形性成胶质细胞瘤、寡树突神经胶质瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天瘤)和脊髓癌(神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)，以及成神经细胞瘤和莱-杜二氏病(lhermitte-duclos disease)。
[0284]
示例性妇科癌症包括子宫癌(子宫内膜癌)、子宫颈癌(子宫颈癌瘤、肿瘤前子宫颈发育不良)、卵巢癌(卵巢癌瘤(浆液性囊腺癌、浆液性腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌)、颗粒-卵泡膜细胞肿瘤、塞-莱二氏细胞肿瘤(sertoli-leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、外阴癌(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道癌(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄形肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)和输卵管癌(癌瘤)。
[0285]
示例性皮肤癌包括黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌(例如皮肤鳞状细胞癌)、卡波西氏肉瘤、发育不良痣(moles dysplastic nevi)、脂瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤和瘢痕瘤。在一些实施方案中，使用本公开的盐可治疗的疾病和适应症包括但不限于镰状细胞疾病(例如镰状细胞贫血)、三阴性乳癌(tnbc)、骨髓化生不良综合征、睾丸癌、胆管癌、食道癌和泌尿道上皮癌。
[0286]
本公开所描述的固体形式和盐形式对pd-1路径的阻断还可以用于治疗感染，诸如病毒、细菌、真菌和寄生虫感染。本公开提供了一种用于治疗诸如病毒感染的感染的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。引起通过本公开的方法可治疗的感染的病毒的实例包括但不限于人类免疫缺陷病毒、人类乳头瘤病毒、流感、甲型、乙型、丙型或丁型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒、人类巨细胞病毒、严重急性呼吸道综合征病毒、埃博拉病毒(ebola virus)和麻疹病毒。在一些实施方案中，引起通过本公开的方法可治疗的感染的病毒包括但不限于肝炎(甲型、乙型或丙型)、疱疹病毒(例如vzv、hsv-1、hav-6、hsv-ii和cmv、爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein barr virus))、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒(echovirus)、鼻病毒、柯萨奇病毒(coxsackie virus)、冠状病毒、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、小病毒、痘疮病毒、htlv病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰白质炎病毒、狂犬病病毒、jc病毒、结核病和虫媒病毒性脑炎病毒。
[0287]
本公开提供了一种用于治疗细菌感染的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原细菌的非限制性实例包括衣原体、立克次体菌(rickettsial bacteria)、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌、克留氏菌(klebsiella)、变形杆菌、沙雷氏菌(serratia)、假单胞菌、军团菌(legionella)、白喉、沙氏杆菌(salmonella)、芽孢杆菌、霍乱、破伤风、肉毒杆菌、炭疽、瘟疫、钩端螺旋体病和莱姆病(lyme's disease)细菌。
[0288]
本公开提供了一种用于治疗真菌感染的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原真菌的非限制性实例包括念珠菌(candida)(白色念珠菌(albicans)、克鲁斯念珠菌(krusei)、光滑念珠菌(glabrata)、热带念珠菌(tropicalis)等)、新型隐球菌(cryptococcus neoformans)、曲菌(aspergillus)(熏烟色曲菌(fumigatus)、黑曲菌(niger)等)、毛霉菌属(genus mucorales)(毛霉(mucor)、犁头霉(absidia)、根霉(rhizophus))、申克氏孢子丝菌(sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(blastomyces dermatitidis)、巴西副球孢子菌(paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(coccidioides immitis)和荚膜组织浆菌(histoplasma capsulatum)。
[0289]
本公开提供了一种用于治疗寄生虫感染的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原寄生虫的非限制性实例包括溶组织阿米巴(entamoeba histolytica)、大肠纤毛虫(balantidium coli)、变形纤毛虫(naegleriafowleri)、棘阿米巴属(acanthamoeba sp.)、梨形鞭毛虫(giardia lambia)、隐孢子虫属(cryptosporidium sp.)、肺胞囊虫(pneumocystis carinii)、间日疟原虫(plasmodium vivax)、焦虫(babesia microti)、布
鲁氏锥虫(trypanosoma brucei)、克鲁氏锥虫(trypanosoma cruzi)、黑热病利什曼原虫(leishmania donovani)、弓虫(toxoplasma gondi)和巴西鼠钩虫(nippostrongylus brasiliensis)。
[0290]
本公开提供了一种用于治疗神经退化性疾病或病症的方法。所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。神经退化性疾病或病症的非限制性实例包括阿兹海默氏病(alzheimer's disease)、帕金森氏病(parkinson's disease)、亨廷顿氏病(huntington's disease)、朊病毒病(prion disease)、运动神经元疾病、脊髓小脑性失调症和脊髓性肌肉萎缩症。
[0291]
据信固体形式和盐形式可以具有令人满意的药理学型态和有前景的生物医药学性质，诸如毒理学型态、代谢和药物动力学性质、溶解度和渗透性。应了解，适当生物医药学性质的确定在本领域技术人员的知识范围内，例如，确定细胞中的细胞毒性或抑制某些标靶或通道以确定潜在毒性。
[0292]
可互换使用的术语“个体”或“患者”是指任何动物，包括哺乳动物，优选为小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、犬、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最优选为人类。
[0293]
短语“治疗有效量”是指活性固体形式、盐形式或其结晶形式在组织、系统、动物、个体或人类中引起由研究者、兽医、医学博士或其它临床医师所寻求的生物或医学反应的量。
[0294]
如本文所用，术语“治疗”或“治疗法”是指以下一项或多项：(1)抑制疾病，例如，抑制正在经历或显示出疾病、疾患或病症的病态或症状的个体的疾病、疾患或病症(即，遏止病态和/或症状进一步发展)；以及(2)改善疾病，例如，改善正在经历或显示出疾病、疾患或病症的病态或症状的个体的疾病、疾患或病症(即，逆转病态和/或症状)，诸如降低疾病的严重性。
[0295]
在一些实施方案中，固体形式和盐形式可用于预防或降低发展本文所提及的疾病中的任一者的风险；例如，预防或降低发展可能易患疾病、疾患或病症，但尚未经历或显示出疾病的病态或症状的个体的疾病、疾患或病症的风险。
[0296]
组合疗法
[0297]
免疫检查点疗法
[0298]
本公开所描述的固体形式和盐形式可以与一种或多种免疫检查点抑制剂组合用于治疗疾病，诸如癌症或感染。示例性免疫检查点抑制剂包括针对以下免疫检查点分子的抑制剂：诸如cbl-b、cd20、cd122、cd96、cd73、cd47、csf1r、jak、pi3kδ、pi3kγ、tam、精氨酸酶、hpk1、a2ar、b7-h3、b7-h4、btla、ctla-4、lag3、tim3、tigit、cd112r、vista、pd-1、pd-l1和pd-l2。在一些实施方案中，免疫检查点分子是选自cd27、cd28、cd40、icos、ox40、gitr和cd137(4-1bb)的刺激性检查点分子。在一些实施方案中，免疫检查点分子是选自a2ar、b7-h3、b7-h4、btla、ctla-4、ido、kir、lag3、pd-1、tim3、tigit和vista的抑制性检查点分子。在一些实施方案中，本文提供的本文所描述的固体形式和盐形式可以与选自kir抑制剂、tigit抑制剂、lair1抑制剂、cd160抑制剂、2b4抑制剂和tgfβ抑制剂的一种或多种剂组合使用。
[0299]
在一些实施方案中，本文所提供的固体形式和盐形式可以与例如ox40、cd27、gitr和cd137(也称为4-1bb)的免疫检查点分子的一种或多种激动剂组合使用。
[0300]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是ox40、cd27、cd28、gitr、icos、cd40、tlr7/8和cd137(也称为4-1bb)的激动剂。
[0301]
在一些实施方案中，cd137的激动剂是乌瑞鲁单抗(urelumab)。在一些实施方案中，cd137的激动剂是乌托米单抗(utomilumab)。
[0302]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是cd40的激动剂。在一些实施方案中，cd40的激动剂是cp-870893、adc-1013、cdx-1140、sea-cd40、ro7009789、jnj-64457107、apx-005m或chi lob 7/4。
[0303]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是icos的激动剂。在一些实施方案中，icos的激动剂是gsk-3359609、jtx-2011或medi-570。
[0304]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是cd28的激动剂。在一些实施方案中，cd28的激动剂是舍利珠单抗(theralizumab)。
[0305]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是cd27的激动剂。在一些实施方案中，cd27的激动剂是伐立鲁单抗(varlilumab)。
[0306]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是tlr7/8的激动剂。在一些实施方案中，tlr7/8的激动剂是medi9197。
[0307]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是抗pd1抗体、抗pd-l1抗体或抗ctla-4抗体。
[0308]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是pd-1的抑制剂，例如，抗pd-1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗pd-1单克隆抗体是纳武单抗(nivolumab)、派姆单抗(pembrolizumab)(也称为mk-3475)、匹利珠单抗(pidilizumab)、西米普利单抗(cemiplimab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)、西利单抗(cetrelimab)、特瑞普利单抗(toripalimab)、信迪利单抗(sintilimab)、shr-1210、pdr001、mga012、pdr001、ab122、amp-224、jtx-4014、bgb-108、bcd-100、bat1306、lzm009、ak105、hlx10或tsr-042。在一些实施方案中，抗pd-1单克隆抗体是纳武单抗或派姆单抗。在一些实施方案中，抗pd1抗体是派姆单抗。在一些实施方案中，抗pd-1单克隆抗体是mga012。在一些实施方案中，抗pd1抗体是shr-1210。其它抗癌剂包括抗体治疗剂，诸如4-1bb(例如乌瑞鲁单抗、乌托米单抗)。
[0309]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是pd-l1的抑制剂，例如，抗pd-l1单克隆抗体。在一些实施方案中，抗pd-l1单克隆抗体是bms-935559、medi4736、mpdl3280a(也称为rg7446)、德瓦鲁单抗(durvalumab)阿替珠单抗(atezolizumab)阿维鲁单抗(avelumab)msb0010718c、替雷利珠单抗(tislelizumab)、faz053、kn035、cs1001、shr-1316、cbt-502、a167、sti-a101、ck-301、bgb-a333、msb-2311、hlx20或ly3300054。在一些实施方案中，抗pd-l1单克隆抗体是mpdl3280a或medi4736。
[0310]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是pd-1和pd-l1的抑制剂，例如，抗pd-1/pd-l1双特异性抗体。在一些实施方案中，抗pd-1/pd-l1双特异性抗体是mcla-136。
[0311]
在一些实施方案中，抑制剂是mcla-145。
[0312]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是ctla-4的抑制剂，例如，抗ctla-4抗体。在一些实施方案中，抗ctla-4抗体是伊匹单抗(ipilimumab)、曲美木单抗
(tremelimumab)、agen1884或cp-675,206。
[0313]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是pd-1和ctla-4的抑制剂，例如，抗pd-1/ctla-4双特异性抗体。在一些实施方案中，抗pd-1/ctla-4抗体是ak104。
[0314]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是lag3的抑制剂，例如，抗lag3抗体。在一些实施方案中，抗lag3抗体是bms-986016、lag525、incagn2385或依拉基德α(eftilagimod alpha)(imp321)。
[0315]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是cd73的抑制剂。在一些实施方案中，cd73的抑制剂是奥雷鲁单抗(oleclumab)。在一些实施方案中，cd73的抑制剂是medi9447。
[0316]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是tigit的抑制剂。在一些实施方案中，tigit的抑制剂是omp-31m32。
[0317]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是vista的抑制剂。在一些实施方案中，vista的抑制剂是jnj-61610588或ca-170。
[0318]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是b7-h3的抑制剂。在一些实施方案中，b7-h3的抑制剂是恩必利珠单抗(enoblituzumab)、mgd009或8h9。
[0319]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是kir的抑制剂。在一些实施方案中，kir的抑制剂是利瑞鲁单抗(lirilumab)或iph4102。
[0320]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是a2ar的抑制剂。在一些实施方案中，a2ar的抑制剂是cpi-444。
[0321]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是tgf-β的抑制剂。在一些实施方案中，tgf-β的抑制剂是曲贝德生(trabedersen)、加鲁舒替尼(galusertinib)或m7824。
[0322]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是pi3k-γ的抑制剂。在一些实施方案中，pi3k-γ的抑制剂是ipi-549。
[0323]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是cd47的抑制剂。在一些实施方案中，cd47的抑制剂是hu5f9-g4或tti-621。
[0324]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是cd70的抑制剂。在一些实施方案中，cd70的抑制剂是库萨图珠单抗(cusatuzumab)或bms-936561。
[0325]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是tim3的抑制剂，例如，抗tim3抗体。在一些实施方案中，抗tim3抗体是incagn2390、mbg453或tsr-022。
[0326]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是gitr的激动剂，例如，抗gitr抗体。在一些实施方案中，激动剂是trx518、mk-4166、incagn1876、mk-1248、amg228、bms-986156、gwn323、medi1873或medi6469。
[0327]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的激动剂是ox40的激动剂，例如，ox40激动剂抗体或ox40l融合蛋白。在一些实施方案中，抗ox40抗体是medi0562、moxr-0916、pf-04518600、gsk3174998、bms-986178或9b12。在一些实施方案中，ox40l融合蛋白是medi6383。
[0328]
在一些实施方案中，免疫检查点分子的抑制剂是cd20的抑制剂，例如，抗cd20抗体。在一些实施方案中，抗cd20抗体是奥比妥珠单抗(obinutuzumab)或利妥昔单抗(rituximab)。
[0329]
本公开的固体形式和盐形式可以与双特异性抗体组合使用。在一些实施方案中，双特异性抗体的结构域之一靶向pd-1、pd-l1、ctla-4、gitr、ox40、tim3、lag3、cd137、icos、cd3或tgfβ受体。在一些实施方案中，双特异性抗体结合至pd-1和pd-l1。在一些实施方案中，结合至pd-1和pd-l1的双特异性抗体是mcla-136。在一些实施方案中，双特异性抗体结合至pd-l1和ctla-4。在一些实施方案中，结合至pd-l1和ctla-4的双特异性抗体是ak104。
[0330]
在一些实施方案中，本公开的固体形式和盐形式可以与一种或多种代谢酶抑制剂组合使用。在一些实施方案中，代谢酶抑制剂是ido1、tdo或精氨酸酶的抑制剂。ido1抑制剂的实例包括艾卡哚司他(epacadostat)、nlg919、bms-986205、pf-06840003、iom2983、rg-70099和ly338196。
[0331]
如通篇所提供，额外化合物、抑制剂、剂等可以与本发明固体形式、盐形式或其结晶形式组合成单个或连续剂型，或可以作为独立剂型同时或依序施用。
[0332]
癌症疗法
[0333]
癌细胞生长和存活可能受多个生物路径的功能障碍所影响。因此，将不同机制的抑制剂，诸如酶抑制剂、信号转导抑制剂、染色质动力学抑制剂或免疫反应调节剂组合以治疗此类疾患可能是有用的。靶向多于一个信号传导路径(或给定信号传导路径中所涉及的多于一个生物分子)可以降低细胞群体中产生抗药性的可能性，或降低治疗的毒性。
[0334]
本公开的固体形式和盐形式可以与一种或多种其它疗法组合用于治疗疾病，诸如癌症或感染。用组合疗法可治疗的疾病和适应症的实例包括如本文所描述的那些。癌症的实例包括实体肿瘤和非实体肿瘤，诸如液体肿瘤、血液癌症。感染的实例包括病毒感染、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。举例来说，本公开的固体形式和盐形式可以与以下激酶的一种或多种抑制剂组合用于治疗癌症：akt1、akt2、akt3、bcl2、cdk、tgf-βr、pka、pkg、pkc、cam激酶、磷酸化酶激酶、mekk、erk、mapk、mtor、egfr、her2、her3、her4、ins-r、idh2、igf-1r、ir-r、pdgfαr、pdgfβr、pi3k(α、β、γ、δ及多重或选择性)、csf1r、kit、flk-ii、kdr/flk-1、flk-4、flt-1、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、c-met、parp、ron、sea、trka、trkb、trkc、tam激酶(axl、mer、tyro3)、flt3、vegfr/flt2、flt4、epha1、epha2、epha3、ephb2、ephb4、tie2、src、fyn、lck、fgr、btk、fak、syk、frk、jak、abl、alk和b-raf。在一些实施方案中，本公开的固体形式和盐形式可以与以下抑制剂中的一者或多者组合用于治疗癌症或感染。可以与本公开的固体形式和盐形式组合用于治疗癌症和感染的抑制剂的非限制性实例包括fgfr抑制剂(fgfr1、fgfr2、fgfr3或fgfr4，例如培美替尼(pemigatinib)(incy54828)、incb62079)、egfr(也称为erb-1或her-1)抑制剂(例如埃罗替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、凡德他尼(vandetanib)、奥司美替尼(orsimertinib)、西妥昔单抗(cetuximab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)或帕尼单抗(panitumumab))、vegfr抑制剂或路径阻断剂(例如贝伐单抗(bevacizumab)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿昔替尼(axitinib)、瑞格非尼(regorafenib)、帕纳替尼(ponatinib)、卡博替尼(cabozantinib)、凡德他尼、雷莫芦单抗(ramucirumab)、乐伐替尼(lenvatinib)、阿柏西普(ziv-aflibercept))、parp抑制剂(例如奥拉帕尼(olaparib)、卢卡帕尼(rucaparib)、维利帕尼(veliparib)或尼拉帕尼(niraparib))、jak抑制剂(jak1和/或jak2，例如鲁索替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)或伊他替尼(itacitinib)(incb39110))、ido抑制剂(例如艾卡哚司他、nlg919或bms-986205、mk7162)、lsd1抑制剂
(例如incb59872和incb60003)、tdo抑制剂、pi3k-δ抑制剂(例如帕萨司贝(parsaclisib)(incb50465)和incb50797)、pi3k-γ抑制剂(诸如pi3k-γ选择性抑制剂)、pim抑制剂(例如incb53914)、egfr抑制剂(也称为erb-1或her-1；例如埃罗替尼、吉非替尼、凡德他尼、奥司美替尼、西妥昔单抗、耐昔妥珠单抗或帕尼单抗)、vegfr抑制剂或路径阻断剂(例如贝伐单抗、帕唑帕尼、舒尼替尼、索拉非尼、阿昔替尼、瑞格非尼、帕纳替尼、卡博替尼、凡德他尼、雷莫芦单抗、乐伐替尼、阿柏西普)、parp抑制剂(例如奥拉帕尼、卢卡帕尼、维利帕尼、他拉唑帕尼(talazoparib)或尼拉帕尼)、csf1r抑制剂、tam受体酪氨酸激酶(tyro-3、axl和mer)、腺苷受体拮抗剂(例如a2a/a2b受体拮抗剂)、hpk1抑制剂、趋化激素受体抑制剂(例如ccr2或ccr5抑制剂)、shp1/2磷酸酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂(hdac)(诸如hdac8抑制剂)、血管生成抑制剂、白介素受体抑制剂、溴和额外末端家族成员抑制剂(例如溴结构域抑制剂或bet抑制剂，诸如incb54329和incb57643)、精氨酸酶抑制剂(incb001158)、parp抑制剂(诸如卢卡帕尼或奥拉帕尼)、司曲替尼(sitravatinib)、b-raf抑制剂-mek抑制剂组合(诸如康奈非尼(encorafenib) 比美替尼(binimetinib)、达拉非尼(dabrafenib) 曲美替尼(trametinib)，或考比替尼(cobimetinib) 威罗菲尼(vemurafenib))和腺苷受体拮抗剂或它们的组合。
[0335]
在一些实施方案中，本公开的固体形式和盐形式可以与tlr7激动剂(例如咪喹莫特(imiquimod))组合。
[0336]
本公开的固体形式和盐形式可以进一步与治疗癌症的其它方法，例如化学疗法、辐照疗法、肿瘤靶向疗法、辅助疗法、免疫疗法或手术组合使用。免疫疗法的实例包括细胞因子治疗(例如干扰素、gm-csf、g-csf、il-2)、crs-207免疫疗法、癌症疫苗、单克隆抗体、双特异性或多特异性抗体、抗体药物缀合物、授受性t细胞转移、toll受体激动剂、sting激动剂、rig-i激动剂、溶瘤病毒疗法，以及免疫调节性小分子，包括沙利多迈(thalidomide)或jak1/2抑制剂、pi3kδ抑制剂等。固体形式和盐形式可以与一种或多种抗癌药物，诸如化学治疗剂组合施用。化学治疗剂的实例包括以下任一者：阿巴瑞克(abarelix)、阿地白介素(aldesleukin)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿利维甲酸(alitretinoin)、别嘌呤醇(allopurinol)、六甲蜜胺(altretamine)、阿那曲唑(anastrozole)、三氧化二砷、天冬酰胺酶、阿扎胞苷(azacitidine)、贝伐单抗、贝沙罗汀(bexarotene)、巴瑞替尼、博莱霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、静脉内白消安(busulfan intravenous)、口服白消安(busulfan oral)、卡鲁睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡铂(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、氯法拉滨(clofarabine)、环磷酰胺、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、放线菌素d(dactinomycin)、达肝素钠(dalteparin sodium)、达沙替尼(dasatinib)、道诺霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地尼白介素(denileukin)、地尼白介素-白喉毒素连接物(denileukin diftitox)、右雷佐生(dexrazoxane)、多烯紫杉醇(docetaxel)、阿霉素(doxorubicin)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、依库珠单抗(eculizumab)、表柔比星(epirubicin)、埃罗替尼、雌莫司汀(estramustine)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、依托泊苷(etoposide)、依西美坦(exemestane)、柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)、非格司亭(filgrastim)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿
嘧啶(fluorouracil)、氟维司群(fulvestrant)、吉非替尼、吉西他滨(gemcitabine)、吉妥珠单抗-奥唑米星(gemtuzumab ozogamicin)、醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)、醋酸组胺瑞林(histrelin acetate)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)、干扰素α-2a、伊立替康(irinotecan)、二甲苯磺酸拉帕替尼(lapatinib ditosylate)、来那度胺(lenalidomide)、来曲唑(letrozole)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)、左旋咪唑(levamisole)、洛莫司汀(lomustine)、氮芥(meclorethamine)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、美法仑(melphalan)、巯嘌呤(mercaptopurine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、丝裂霉素c(mitomycin c)、米托坦(mitotane)、米托蒽醌(mitoxantrone)、苯丙酸诺龙(nandrolone phenpropionate)、奈拉滨(nelarabine)、诺菲莫单抗(nofetumomab)、奥沙利铂(oxaliplatin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕尼单抗、培门冬酶(pegaspargase)、培非格司亭(pegfilgrastim)、培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)、喷司他丁(pentostatin)、哌泊溴烷(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、奎纳克林(quinacrine)、拉布立酶(rasburicase)、利妥昔单抗、鲁索替尼、索拉非尼、链脲菌素(streptozocin)、舒尼替尼、苹果酸舒尼替尼(sunitinib maleate)、他莫昔芬(tamoxifen)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、睾内酯(testolactone)、沙利多迈、硫鸟嘌呤(thioguanine)、噻替哌(thiotepa)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、维甲酸(tretinoin)、乌拉莫司汀(uracil mustard)、戊柔比星(valrubicin)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春瑞滨(vinorelbine)、伏立诺他(vorinostat)和唑来膦酸(zoledronate)。
[0337]
其它抗癌剂包括抗体治疗剂，诸如曲妥珠单抗(贺癌平(herceptin)、针对共刺激分子(诸如ctla-4)的抗体(例如伊匹单抗)、4-1bb(例如乌瑞鲁单抗、乌托米单抗)、针对pd-1和pd-l1的抗体，或针对细胞因子(il-10、tgf-β等)的抗体。可以与本公开的盐组合用于治疗癌症或感染，诸如病毒、细菌、真菌和寄生虫感染的针对pd-1和/或pd-l1的抗体的实例包括但不限于纳武单抗、派姆单抗、阿替珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维鲁单抗和shr-1210。
[0338]
本公开的固体形式和盐形式可以进一步与一种或多种消炎剂、类固醇、免疫抑制剂或治疗性抗体组合使用。
[0339]
固体形式和盐形式可以与另一种免疫原性剂，诸如癌细胞、纯化的肿瘤抗原(包括重组蛋白、肽和碳水化合物分子)、细胞和经编码免疫刺激性细胞因子的基因转染的细胞组合。可以使用的肿瘤疫苗的非限制性实例包括黑色素瘤抗原的肽，诸如gp100、mage抗原、trp-2、marti和/或酪氨酸酶的肽，或经转染以表达细胞因子gm-csf的肿瘤细胞。
[0340]
固体形式和盐形式可以与疫苗接种方案组合用于治疗癌症。在一些实施方案中，肿瘤细胞经转导以表达gm-csf。在一些实施方案中，肿瘤疫苗包括来自人类癌症中所牵涉的病毒的蛋白质，所述病毒诸如人类乳头瘤病毒(hpv)、肝炎病毒(hbv和hcv)和卡波西氏疱疹肉瘤病毒(kaposi's herpes sarcoma virus)(khsv)。在一些实施方案中，本公开的固体形式和盐形式可以与从肿瘤组织本身分离的肿瘤特异性抗原，诸如热休克蛋白组合使用。在一些实施方案中，固体形式和盐形式可以与树突状细胞免疫组合以达成强效抗肿瘤反
应。
[0341]
本公开的固体形式和盐形式可以与将表达feα或feγ受体的效应细胞靶向肿瘤细胞的双特异性大环肽组合使用。本公开的固体形式和盐形式还可以与活化宿主免疫反应性的大环肽组合。
[0342]
本公开的固体形式和盐形式可以与骨髓移植组合用于治疗多种造血源性肿瘤。
[0343]
固体形式和盐形式可以与疫苗组合使用，以刺激对病原体、毒素和自体抗原的免疫反应。这种治疗方法可能特别适用的病原体的实例包括当前不存在有效疫苗的病原体，或常规疫苗不完全有效的病原体。这些病原体包括但不限于hiv、肝炎(甲型、乙型和丙型)、流感、疱疹、梨形鞭毛虫、疟疾、利什曼原虫、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、绿脓假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)。
[0344]
引起通过本公开的方法可治疗的感染的病毒包括但不限于人类乳头瘤病毒、流感、甲型、乙型、丙型或丁型肝炎病毒、腺病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒、人类巨细胞病毒、严重急性呼吸道综合征病毒、埃博拉病毒、麻疹病毒、疱疹病毒(例如vzv、hsv-1、hav-6、hsv-ii和cmv、爱泼斯坦-巴尔病毒)、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道融合病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、小病毒、痘疮病毒、htlv病毒、登革热病毒、乳头瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰白质炎病毒、狂犬病病毒、jc病毒和虫媒病毒性脑炎病毒。
[0345]
引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原细菌包括但不限于衣原体、立克次体菌、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌和淋球菌、克留氏菌、变形杆菌、沙雷氏菌、假单胞菌、军团菌、白喉、沙氏杆菌、芽孢杆菌、霍乱、破伤风、肉毒杆菌、炭疽、瘟疫、钩端螺旋体病和莱姆病细菌。
[0346]
引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原真菌包括但不限于念珠菌(白色念珠菌、克鲁斯念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌等)、新型隐球菌、曲菌(熏烟色曲菌、黑曲菌等)、毛霉菌属(毛霉、犁头霉、根霉)、申克氏孢子丝菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌和荚膜组织浆菌。
[0347]
引起通过本公开的方法可治疗的感染的病原寄生虫包括但不限于溶组织阿米巴、大肠纤毛虫、变形纤毛虫、棘阿米巴属、梨形鞭毛虫、隐孢子虫属、肺胞囊虫、间日疟原虫、焦虫、布鲁氏锥虫、克鲁氏锥虫、黑热病利什曼原虫、弓虫和巴西鼠钩虫。
[0348]
当向患者施用多于一种医药剂时，所述医药剂可以同时、独立、依序或组合施用(例如对于多于两种药剂来说)。
[0349]
配方、剂型和施用
[0350]
当作为药品采用时，本公开的固体形式和盐形式可以呈药物组合物的形式施用。因此，本公开提供了一种组合物，所述组合物包含化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。这些组合物可以按制药技术中所熟知的方式制备，并且可以通过多种途径施用，这取决于指示局部还是全身治疗以及待治疗的区域。施用可以是局部(包括经皮、表皮、眼部以及至粘膜，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部(例如通过吸入或吹入粉末或气雾剂，包括由喷雾器；气管内或鼻内)、经口或肠道外。肠道外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌肉内或注射或输注；或颅内，例如鞘内或脑室内施用。肠道外施用可以呈单次速注剂量的形式，或可以例如由连续灌注泵。用于局部施用的药
物组合物和配方可以包括经皮贴片、软膏、洗剂、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾、液体和粉末。常规药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必需或可取的。
[0351]
本发明还包括药物组合物，所述药物组合物包含本公开的固体形式、盐形式或其结晶形式作为活性成分，与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂组合。在一些实施方案中，组合物适合于局部施用。在制造本发明的组合物中，将活性成分通常与赋形剂混合，由赋形剂稀释，或以例如胶囊、药囊、纸包或其它容器的形式封装于此种载体内。当赋形剂用作稀释剂时，所述赋形剂可以是固体、半固体或液体物质，其充当活性成分的媒剂、载体或介质。因此，组合物可以呈以下形式：片剂、丸剂、粉末、口含锭、药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(呈固体或于液体介质中)、含有例如至多10重量％活性盐的软膏、软质和硬质明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉末。
[0352]
在制备配方中，在与其它成分组合之前可以研磨活性固体形式、盐形式或其结晶形式以提供适当粒度。如果活性盐基本上不溶，那么可以将其研磨至小于200目的粒度。如果活性固体形式、盐形式或其结晶形式基本上可溶于水，那么可以通过研磨来调节粒度以提供配方中基本上均匀的分布，例如约40目。
[0353]
可以使用已知研磨程序(诸如湿磨)来研磨本公开的固体形式和盐形式以获得适于片剂形成和适于其它配方类型的粒度。可以通过本领域中已知的过程来制备本公开的固体形式和盐形式的细粉状(纳米颗粒)制剂，参见例如wo 2002/000196。
[0354]
适合赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。配方另外可以包括：润滑剂，诸如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂和悬浮剂；防腐剂，诸如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；以及调味剂。可以配制本发明的组合物以通过采用本领域中已知的程序向患者施用后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
[0355]
在一些实施方案中，药物组合物包含硅化微晶纤维素(smcc)和至少一种化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式。在一些实施方案中，硅化微晶纤维素包含约98％微晶纤维素和约2％二氧化硅(w/w)。
[0356]
在一些实施方案中，组合物是持续释放组合物，所述持续释放组合物包含至少一种化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，组合物包含至少一种化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式，以及至少一种选自微晶纤维素、乳糖单水合物、羟丙基甲基纤维素和聚氧化乙烯的组分。在一些实施方案中，组合物包含至少一种化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式，以及微晶纤维素、乳糖单水合物和羟丙基甲基纤维素。在一些实施方案中，组合物包含至少一种化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式，以及微晶纤维素、乳糖单水合物和聚氧化乙烯。在一些实施方案中，组合物还包含硬脂酸镁或二氧化硅。在一些实施方案中，微晶纤维素是avicel ph102
tm
。在一些实施方案中，乳糖单水合物是fast-flo 316
tm
。在一些实施方案中，羟丙基甲基纤维素是羟丙基甲基纤维素2208k4m(例如methocel k4 m premier
tm
)和/或羟丙基甲基纤维素2208k100lv(例如methocel k00lv
tm
)。在一些实施方案中，聚氧化乙烯是聚氧化乙烯wsr 1105(例如polyox wsr 1105
tm
)。
[0357]
在一些实施方案中，湿式造粒过程用于生产组合物。在一些实施方案中，干式造粒
过程用于生产组合物。
[0358]
可以将组合物配制成单位剂型，每个剂量含有约5至约1,000mg(1g)、更通常约100mg至约500mg的活性成分。在一些实施方案中，每个剂量含有约10mg的活性成分。在一些实施方案中，每个剂量含有约50mg的活性成分。在一些实施方案中，每个剂量含有约25mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合作为单位剂量用于人类受试者和其它哺乳动物的物理离散单位，每个单位含有与适合药物赋形剂缔合的活性物质的预定量，所述预定量经计算以产生所需治疗作用。
[0359]
用于配制药物组合物的组分具有高质量并且基本上不含潜在有害的污染物(例如，至少国家食品级，一般至少分析级，并且更通常至少药物级)。尤其对于人类消耗来说，组合物优选在如美国食品与药物管理局(u.s.food and drug administration)的适用规定中所定义的优良制造规范(good manufacturing practice)标准下制造或配制。举例来说，适合的配方可以是无菌的和/或基本上等渗的和/或完全符合美国食品与药物管理局的优良制造规范的所有规定。
[0360]
活性固体形式、盐形式或其结晶形式可以在大剂量范围内有效并且一般以治疗有效量施用。然而，应了解，实际施用的固体形式、盐形式或其结晶形式的量通常将由医师根据相关情况来确定，包括待治疗的疾患，所选施用途径，所施用的实际固体形式、盐形式或其结晶形式，个体患者的年龄、体重和反应，患者症状的严重性等。
[0361]
本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式的治疗剂量可以根据以下而变化：例如，治疗欲达成的特定用途，固体形式、盐形式或其结晶形式的施用方式，患者的健康和状况，以及处方医师的判断。药物组合物中本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式的比例或浓度可以取决于许多因素而变化，包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径。举例来说，本公开的固体形式和盐形式可以于含有约0.1至约10％w/v盐的生理缓冲水溶液中提供用于肠道外施用。一些典型剂量范围为约1微克/公斤体重/天至约1克/公斤体重/天。在一些实施方案中，剂量范围为约0.01毫克/公斤体重/天至约100毫克/公斤体重/天。剂量可能取决于诸如以下的变量：疾病或病症的类型和进展程度，特定患者的总体健康状态，所选固体形式、盐形式或其结晶形式的相对生物功效，赋形剂的配制，以及其施用途径。可以从来源于体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线外推出有效剂量。
[0362]
为了制备诸如片剂的固体组合物，将主要活性成分与药物赋形剂混合以形成含有本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式的均质混合物的固体预配方组合物。当将这些预配方组合物称为均质时，活性成分通常均匀分散于整个组合物中以使得组合物可以容易细分成同等有效的单位剂型，诸如片剂、丸剂和胶囊。然后将此固体预配方细分成上文所描述的类型的单位剂型，所述单位剂型含有例如约0.1至约1000mg本发明的活性成分。
[0363]
本发明的片剂或丸剂可以包覆包衣或以其它方式混配以提供具有长期作用的优点的剂型。举例来说，片剂或丸剂可以包含内部剂量和外部剂量组分，后者呈前者的包膜形式。两种组分可以由肠溶层隔开，所述肠溶层用以抵抗在胃中崩解并且允许内部组分完整进入十二指肠中或延迟释放。多种物质可以用于此类肠溶层或包衣，此类物质包括许多聚合酸以及聚合酸与诸如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的物质的混合物。
[0364]
可以掺有本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式和组合物以供经口或通过注射施用的液体形式包括水溶液，适当调味的糖浆，水性或油性悬浮液，以及用诸如棉籽油、芝
麻油、椰子油或花生油的可食用油调味的乳液，以及酏剂和类似药物媒剂。
[0365]
用于吸入或吹入的组合物包括于药学上可接受的水性或有机溶剂或它们的混合物中的溶液和悬浮液，以及粉末。液体或固体组合物可以含有如上文所描述的适合药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，通过经口或经鼻呼吸道途径施用组合物用于达成局部或全身作用。可以通过使用惰性气体使组合物雾化。可以从喷雾装置直接呼吸雾化溶液，或喷雾装置可以附接至面罩、帷罩或间歇正压呼吸机。可以从以适当方式递送配方的装置经口或经鼻施用溶液、悬浮液或粉末组合物。
[0366]
局部配方可以含有一种或多种常规载体。在一些实施方案中，软膏可以含有水和一种或多种选自以下的疏水性载体：例如液体石蜡、聚氧乙烯烷基醚、丙二醇、白凡士林(white vaseline)等。乳膏的载体组合物可以基于水与甘油和一种或多种其它组分，例如单硬脂酸甘油酯、peg-单硬脂酸甘油酯和鲸蜡硬脂醇的组合。可以使用与其它组分，诸如甘油、羟乙基纤维素等适当组合的异丙基醇和水来配制凝胶。在一些实施方案中，局部配方含有至少约0.1、至少约0.25、至少约0.5、至少约1、至少约2或至少约5wt％的本发明盐。局部配方可以适当包装于例如100g的管中，所述管任选地与用于治疗所选适应症，例如牛皮癣或其它皮肤疾患的说明书相关联。
[0367]
向患者施用的固体形式、盐形式或其结晶形式或组合物的量将取决于以下而变化：施用何种物质；施用目的，诸如预防或治疗；患者状态；施用方式等。在治疗性应用中，可以向已罹患疾病的患者以足以治愈或至少部分遏止疾病和其并发症的症状的量施用组合物。有效剂量将取决于所治疗的疾病状况以及主治临床医师的判断，这取决于诸如以下的因素：疾病的严重性，患者的年龄、体重和一般状况等。
[0368]
向患者施用的组合物可以呈上文所描述的药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规灭菌技术进行灭菌，或可以经无菌过滤。可以将水溶液包装以按原样使用，或冻干，冻干制剂在施用之前与无菌水性载体组合。制剂的ph值通常将介于3与11之间，更佳为5至9，并且最优选为7至8。
[0369]
本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式的治疗剂量可以根据以下而变化：例如，治疗欲达成的特定用途，固体形式、盐形式或其结晶形式的施用方式，患者的健康和状况，以及处方医师的判断。药物组合物中本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式的比例或浓度可以取决于许多因素而变化，包括剂量、化学特征(例如疏水性)和施用途径。举例来说，本公开的固体形式和盐形式可以于含有约0.1至约10％w/v盐的生理缓冲水溶液中提供用于肠道外施用。一些典型剂量范围为约1微克/公斤体重/天至约1克/公斤体重/天。在一些实施方案中，剂量范围为约0.01毫克/公斤体重/天至约100毫克/公斤体重/天。剂量可能取决于诸如以下的变量：疾病或病症的类型和进展程度，特定患者的总体健康状态，所选盐的相对生物功效，赋形剂的配制，以及其施用途径。可以从来源于体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线外推出有效剂量。
[0370]
经标记化合物和测定方法
[0371]
本公开的固体形式和盐形式可以进一步适用于正常和异常组织中的生物过程的研究。因此，本发明的另一个方面涉及本公开的经标记固体形式和盐形式(放射性标记、荧光标记等)，其将不仅可用于成像技术，而且可用于体外和体内测定，用于定位和定量包括人类的组织样品中的pd-1或pd-l1蛋白质，以及用于通过经标记化合物的抑制结合而鉴定
pd-l1配体。因此，本发明包括含有此类经标记盐的pd-1/pd-l1结合测定。
[0372]
本发明还包括本公开的同位素取代的固体形式和盐形式。“同位素取代的”固体形式、盐形式或其结晶形式是本发明的固体形式、盐形式或其结晶形式，其中一个或多个原子经具有相同原子序数但不同原子质量或质量数，例如与自然界中通常发现(即，天然存在)的原子质量或质量数不同的原子质量或质量数的原子置换或取代。应了解，“放射性标记的”固体形式、盐形式或其结晶形式是已掺有至少一个具有放射性的同位素(例如放射性核素)的固体形式、盐形式或其结晶形式。可以掺入本发明的盐中的适合放射性核素包括但不限于3h(对于氚，也写成t)、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
n、
15
o、
17
o、
18
o、
18
f、
35
s、
36
cl、
82
br、
75
br、
76
br、
77
br、
123
i、
124
i、
125
i和
131
i。掺入本发明放射性标记的盐中的放射性核素将取决于放射性标记的固体形式、盐形式或其结晶形式的特定应用。举例来说，对于体外pd-l1蛋白质标记和竞争测定，掺有3h、
14
c、
82
br、
125
i、
131
i、
35
s的固体形式、盐形式或其结晶形式一般将最有用。对于放射性成像应用，
11
c、
18
f、
125
i、
123
i、
124
i、
131
i、
75
br、
76
br或
77
br一般将最有用。
[0373]
在一些实施方案中，放射性核素选自由3h、
14
c、
125
i、
35
s和
82
br组成的组。用于将放射性同位素掺入有机化合物和盐中的合成方法在本领域中是已知的。
[0374]
具体来说，本发明的经标记固体形式、盐形式或其结晶形式可以用于筛选测定中以鉴定和/或评估化合物。举例来说，通过追踪标记来监测新合成或鉴定的经标记固体形式、盐形式或其结晶形式(即，测试固体形式、盐形式或其结晶形式)当与pd-l1蛋白质接触时的浓度变化，可以评估其结合pd-l1蛋白质的能力。举例来说，可以评估测试固体形式、盐形式或其结晶形式(经标记)减少已知结合至pd-l1蛋白质的另一种化合物(即，标准化合物)的结合的能力。因此，测试固体形式、盐形式或其结晶形式与标准化合物竞争结合至pd-l1蛋白质的能力与其结合亲和力直接相关。反之，在一些其它筛选测定中，标准化合物经标记并且测试固体形式、盐形式或其结晶形式未标记。因此，监测经标记标准化合物的浓度以评估标准化合物与测试固体形式、盐形式或其结晶形式之间的竞争，并且因此确认测试固体形式、盐形式或其结晶形式的相对结合亲和力。
[0375]
试剂盒
[0376]
本公开还包括药物试剂盒，其可用于例如治疗或预防与pd-l1活性，包括pd-l1与诸如pd-1和b7-1(cd80)的其它蛋白质的相互作用相关的疾病或病症，诸如癌症或感染，所述药物试剂盒包括一个或多个含有药物组合物的容器，所述药物组合物包含治疗有效量的化合物1的固体形式、盐形式或其结晶形式，或其实施方案中的任一者。如本领域技术人员将显而易见，此类试剂盒还可以包括各种常规药物试剂盒组分中的一者或多者，诸如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、额外容器等。试剂盒中还可以包括作为插页或作为标签的说明书，其指示待施用的组分的量、施用指南和/或将组分混合的指南。
[0377]
本文中可以使用以下缩写：aq.(水性)；br(宽)；d(二重峰)；dd(双二重峰)；dcm(二氯甲烷)；dmf(n,n-二甲基甲酰胺)；dmso(二甲亚砜)；et(乙基)；etoac(乙酸乙酯)；etoh(乙醇)；g(克)；h(小时)；hplc(高效液相色谱法)；hz(赫兹)；ipac(乙酸异丙酯)；j(偶合常数)；lcms(液相色谱法-质谱法)；m(多重峰)；m(摩尔浓度)；ms(质谱法)；me(甲基)；mecn(乙腈)；meoh(甲醇)；mg(毫克)；mibk(甲基异丁基酮)；min.(分钟)；ml(毫升)；mmol(毫摩尔)；mtbe(叔丁基甲基醚)；nm(纳摩尔浓度)；nmr(核磁共振光谱法)；ph(苯基)；r.t.(室温)；s(单峰)；t(三重峰或叔)；tbs(叔丁基二甲基硅基)；tert(叔)；tt(三组三重峰)；tfa(三氟乙
酸)；thf(四氢呋喃)；μg(微克)；μl(微升)；μm(微摩尔浓度)；wt％(重量百分比)。
[0378]
本发明将经由具体实施例更详细地描述。提供以下实施例用于说明性目的，并且不意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将易于认识到可以改变或修改多种非关键参数以得到大体上相同的结果。根据本文所描述的至少一种测定，已发现实施例中的本公开的固体形式和盐形式抑制pd-1/pd-l1蛋白质/蛋白质相互作用的活性。
[0379]
实施例
[0380]
实验方法
[0381]
在以下一些实施例中，在rigaku miniflex x射线粉末衍射仪(xrpd)仪器上进行x射线粉末衍射分析。xrpd的一般实验程序如下：(1)从铜进行x射线辐射，在下，使用k
β
滤波片；(2)x射线功率，在30kv、15ma下；以及(3)样品粉末分散于零背景样品架上。xrpd的一般测量条件如下：开始角度3度；终止角度45度；采样0.02度；以及扫描速度2度/分钟。
[0382]
在以下一些实施例中，在rigaku miniflex 300/600 x射线粉末衍射仪(xrpd)仪器上进行x射线粉末衍射分析。xrpd的一般实验程序如下：(1)从铜进行x射线辐射，在下，使用k
α
滤波片；(2)x射线功率，在40kv、15ma下；以及(3)样品粉末分散于零背景样品架上。xrpd的一般测量条件如下：开始角度3度；终止角度30度；采样0.015度；以及扫描速度2度/分钟。
[0383]
在以下一些实施例中，在bruker d8 advance eco x射线粉末衍射仪(xrpd)仪器上进行x射线粉末衍射分析。xrpd的一般实验程序如下：(1)从铜进行x射线辐射，在和lynxeye
tm
检测器下；(2)x射线功率，在40kv、25ma下；以及(3)样品粉末分散于零背景样品架上。xrpd的一般测量条件如下：开始角度3度；终止角度30度；采样0.015度；以及扫描速度2度/分钟。
[0384]
在具有自动进样器的ta instruments差示扫描量热法型号q200上进行差示扫描量热法(dsc)。dsc仪器条件如下：20-300℃，在10℃/min下；t0铝样品盘和盖；以及氮气流，在50ml/min下。在具有自动进样器的ta instruments差示扫描量热法型号dsc2500上运行一些实验。dsc仪器条件如下：20-300℃，在10℃/min下；t0铝样品盘和盖；以及氮气流，在50ml/min下。
[0385]
在具有自动进样器的ta instruments热重分析仪discovery tga5500上进行热重分析(tga)。tga的一般实验条件如下：从25℃匀变至300℃，在10℃/min下；氮气吹扫，气流，在25ml/min下；铂样品架。在具有自动进样器的ta instruments热重分析仪tga q500上运行一些实验。tga的一般实验条件如下：从25℃匀变至600℃，在20℃/min下；氮气吹扫，气流，在25ml/min下；铂样品盘。
[0386]
通过hplc使用以下所示的条件来确定纯度。
[0387]
仪器agilent 1100柱zorbax sb-c18，3.5μm，4.6x150mm柱温度40℃流动相a0.05％tfa，于水中流动相b0.05％tfa，于乙腈中
流动速率1ml/min注射体积5μl总运行时间24minuv检测器波长254nm
[0388]
梯度表：
[0389][0390][0391]
在bruker biospin gmbh 400nmr光谱仪上进行定性nmr分析(1h)。通过将约6-7mg化合物1二盐酸盐溶解于0.6-0.7dmso-d6中并且转移至nmr管中来制备nmr样品。在华氏300度下，使用30度质子脉冲序列以1.0秒的延迟时间、15的脉冲宽度收集定量1h nmr数据。对于每个实验进行16次扫描。
[0392]
实施例a1.制备4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸
[0393][0394]
步骤1：4-(2,2-二甲氧基乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯
[0395][0396]
在2l圆底烧瓶中合并4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(296.49g，1511mmol)和原甲酸三甲酯(334ml，3022mmol)。将对甲苯磺酸单水合物(1.150g，6.04mmol)添加至反应混合物中(放热)。在50℃下加热反应混合物2小时，届时通过质子nmr判断反应完成。将反应混合物冷却至室温并且在减压下去除溶剂。作为所需粗产物的所得粘性液体按原样用于下一步酯皂化反应。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ4.45(t,8hz,1h),3.67(s,3h),3.30(s,6h),1.97(m,2h),1.83(d,4hz,2h),1.63(m,6h),1.45(m,2h)ppm。
[0397]
步骤2：4-(2,2-二甲氧基乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸
[0398][0399]
将4-(2,2-二甲氧基乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(实施例a1，步骤1，366g，
1510mmol)溶解于5体积thf(1830l)中。添加氢氧化钾(246g，4385mmol)于水(1830l)中的溶液并且在40℃下搅拌所得混合物3.5小时，届时通过质子nmr判断反应完成。将反应混合物冷却至室温。添加二氯甲烷(dcm)(0.5l)。分离有机相和水相。用另一份dcm(1l)洗涤水相。将水相转移至5l圆底烧瓶中并且与dcm(2l)合并。使用冰/水浴冷却两相混合物。使用盐酸(0.320l，3840mmol)将ph值调节至3与4之间。分离各相并且用dcm(2l)洗涤水相。经硫酸钠干燥合并的有机层并过滤。在减压下去除溶剂，得到呈白色固体状的所需产物4-(2,2-二甲氧基乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(1459mmol，345g理论值，经2个步骤97％产率)。1h nmr(400mhz,cdcl3):δ4.48(t,8hz,4hz,1h),3.31(s,6h),2.02(m,2h),1.85(d,4hz,2h),1.64(m,6h),1.47(m,2h)ppm。
[0400]
步骤3：4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸
[0401][0402]
将4-(2,2-二甲氧基乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(实施例a1，步骤2，194g，850mmol)装入5l圆底烧瓶中并且溶解于四体积thf(800ml)中。添加2.0n盐酸(2500ml，5000mmol)并且在室温下搅拌混合物1.5小时，届时通过质子nmr判断反应完成。在冰-水浴中冷却反应混合物。添加碳酸氢钠(527g，6272mmol)(逐份以避免溢流)将ph值调节至7-8之间。添加另一份水(500ml)。萃取有机相和水相。用额外dcm(800ml)洗涤水相。将水相转移至5l圆底烧瓶中并且使用盐酸(123ml，1476mmol)将ph值调节至3与4之间。然后用dcm(1l)萃取水相三次。用硫酸钠干燥合并的有机层并过滤。在减压下去除溶剂，得到呈白色固体状的所需产物4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(145.8g，800mmol，155g理论值，94％产率)。c
10h14
o3的ms计算值m

:m/z＝182.0；实验值(m-h2o)

:m/z＝164.1；1h nmr(400mhz,cdcl3):δ9.78(s,1h),2.61(d,4hz,2h),2.04(m,2h),1.63(m,8h)。
[0403]
实施例1a.制备化合物1结晶游离碱(方法1)
[0404]
[0405]
步骤1：2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二胺
[0406][0407]
将3-溴-2-氯苯胺(1020g，4841mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(676g，2663mmol)、乙酸钾(1901g，1.94e 04mmol)和pd-132(双(二叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(ii))(10.28g，14.52mmol)装入22l反应器中。添加二噁烷(4500ml)和水(1500ml)并且用氮气吹扫反应混合物以从反应混合物中去除氧气。搅拌反应混合物并且加热至86-88℃。搅拌反应混合物3.5小时，届时hplc显示反应未完成。装入额外4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(62g，244mmol)。再过1.5小时后，通过hplc判断反应完成。将反应混合物冷却至《50℃并且添加水(7500ml)。在周围温度下搅动混合物过夜。过滤所得固体并且用水(4份，2000ml)洗涤。在漏斗上干燥固体。将所获得的粗固体溶解于meoh(600ml)与二氯甲烷(dcm，12l)的混合物中。然后将其与活性木炭(100g)和硅胶(630g)一起搅动1小时。经硅藻土垫过滤混合物并且用甲醇(meoh)于dcm(5％体积比，总共6l)中的混合物洗涤。浓缩滤液以去除大部分dcm和meoh(约90％的溶剂)并且装入mtbe(4000ml)。进一步浓缩混合物以去除额外溶剂。装入另一份甲基叔丁基醚(mtbe)(2000ml)并且浓缩溶液以将mtbe的体积调节至约1000-1500ml(以重量计)。装入正庚烷(1600ml)并且在50℃(水浴温度)下于旋转蒸发器上搅动溶液1小时。在搅动下冷却混合物过夜。过滤固体并且用mtbe与正庚烷(300ml mtbe 700ml正庚烷)的混合物洗涤。在过滤器上干燥固体，得到呈黄色固体状的所需产物(1079g，88％产率)。c
12h11
cl2n2的lcms计算值(m h)

:m/z＝253.02；实验值253.1；1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ7.04(dd,2h),6.80(dd,2h),6.40(dd,2h),5.37(s,4h)ppm。
[0408]
步骤2：2,2'-(((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸)二叔丁酯
[0409][0410]
将2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二胺(490g，1587mmol)和1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二甲酸5-(叔丁酯)2-甲酯(1125g，3810mmol)装入22l反应器中并且溶解于四氢呋喃(thf)(2000ml)中。剧烈搅拌混合物并且装入2-甲基丙-2-醇钾(3810ml，3810mmol)(于thf中的1.0m溶液)。在周围温度下搅动混合物1.5小时，届时hplc显示反应完成。装入水(12.00l)以淬灭反应并且使产物沉淀。观测到少量放热，同时反应混合物温度从25℃增至30℃。将溶液冷却至25℃，然后通过过滤分离所得固体。用水和正庚烷洗涤固体，得到呈白色固体状的所需产物(1185g，96％产率，由hplc面积(220nm，ph 2)测得99.3％纯度)。c
38h44
cl2n8o6的lcms计算值m

:m/z＝778.28；实验值[(m 2h)/2]

:m/z＝390.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.89(s,2h),8.52(m,2h),7.39(t,2h),7.06(dd,2h),4.52(s,4h),4.0(s,6h),3.81(s,4h),2.71(t,4h),1.29(s,18h)ppm。
[0411]
步骤3：n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)二盐酸盐
[0412][0413]
向22l反应器中添加2,2'-(((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸)二叔丁酯(1165g，1494mmol)和meoh(11000ml)。剧烈搅动混合物并且装入氯化氢(1245ml，1.49e 04mmol)(浓缩水溶液，12n)。反应温度从21℃增至33℃。在50-52℃下搅拌反应混合物1.5小时，届时通过hplc判断反应完成。将混合物冷却至低于25℃。过滤固体并且依序用meoh、乙腈、mtbe洗涤并干燥，得到呈二盐酸盐形式的所需产物(986g，1494mmol，101％产率)。产物按原样用于下一步骤中。
[0414]
步骤4：n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)
[0415][0416]
将n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)二盐酸盐(326g，500mmol)装入三颈5l圆底烧瓶中。装入thf(1000ml)并且搅动混合物。在周围温度下一次性装入碳酸氢钠(92g，1099mmol)于水(1200ml)中的溶液。在周围温度下搅拌混合物3小时，届时测量ph值为约8。过滤固体并且用水(3份，500ml)和正庚烷(3份，600ml)洗涤。在漏斗上干燥固体，然后在45℃下于氮气吹扫下转移至真空烘箱中。此得到n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)(296.7g，由hplc面积(220nm，ph 2)测得99.4％纯度，96％产率)。c
28h29
cl2n8o2的lcms计算值(m h)

:m/z＝579.17；实验值579.2；1h nmr(400mhz,dmso-d6):δ9.93(s,2h),9.32(m,2h),8.30(ddd,2h),7.52(t,2h),7.19(dd,2h),4.22(s,4h),3.96(s,6h),3.50(m,4h),2.96(m,4h)ppm。
[0417]
步骤5：4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(化合物1)
[0418]
在1l圆底烧瓶中，将n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)(实施例1a，步骤4，7.4g，12.77mmol)于dcm(150ml)中制浆。然后添加4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(实施例a1，步骤3，7.45g，40.9mmol)。在室温下搅拌混合物3小时。此后，添加三乙酰氧基硼氢化钠(8.12g，
38.3mmol)并且在室温下搅拌反应混合物1小时，直至hplc显示起始物质已消耗。用含碳酸氢钠(3.22g，38.3mmol)的100ml水淬灭反应。形成浓稠固体。添加乙腈(100ml)以帮助搅拌并且得到用于过滤的优选固体形式。将混合物制浆30分钟，过滤并且用dcm/乙腈(acn)/水混合物洗涤。在过滤器上干燥固体，得到化合物1结晶游离碱。
[0419]
通过xrpd(图1，表1)确认结晶游离碱的结晶度并且通过dsc(图2)进一步支持，指示结晶化合物具有起始温度为33.7℃并且最大值为70.1℃的第一吸热峰以及起始温度为244.1℃并且最大值为250.6℃的第二吸热峰。结晶游离碱的tga提供于图3中，并且在低于100℃下展现约4.5％的重量损失。
[0420]
表1.化合物1结晶游离碱的xrpd峰数据
[0421][0422][0423]
实施例1b.制备化合物1结晶游离碱(方法2)
[0424][0425]
将三氟乙酸(tfa)(10.21ml，133mmol)添加至n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)(实施例1a，步骤4，20.0g，33.1mmol)和4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(实施例a1，步骤3，18.30g，99mmol)于乙腈(268ml)和水(53.6ml)(总共16v)中的悬浮液中。固体在10分钟内溶解。然后在1分钟内分两份添加三乙酰氧基硼氢化钠(21.07g，99mmol)。在室温下搅拌反应物1小时。hplc面积百分比(220nm，ph 2)：99.05％。用240ml ch3cn(12v)稀释混合物，并且用含碳酸钠(12.99g，123mmol)的240ml水(12v)淬灭(淬灭后，ph值为约6)。过滤固体并干燥，得到所需产物。hplc面积百分比(220nm，ph 2)：99.01％。通过
19
f nmr确定，此固体含有tfa。用含0.20当量碳酸钠(0.702g，6.63mmol)的h2o(240ml)/ch3cn(240ml)将固体再制浆过夜，然后过滤。在真空烘箱中干燥固体，得到呈白色至灰白色固体状的所需产物4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(29.3g)。hplc面积百分比(220nm，ph2)：99.12％；c
48h57
cl2n8o6的lcms计算值(m h)

:m/z＝911.4；实验值911.3；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.94(s,2h),9.90(s,2h),8.38(dd,2h),7.49(t,2h),7.15(dd,2h),3.91(s,6h),3.42(s,4h),2.76(t,4h),2.67(t,4h),2.57-2.53(m,4h),1.92-1.82(m,4h),1.73(t,4h),1.57-1.47(m,8h),1.44(s,4h),1.42-1.34(m,4h)ppm。
[0426]
实施例1c.制备化合物1结晶游离碱(方法3)
[0427][0428]
在2l圆底烧瓶中，将n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)(实施例1a，步骤4，20g，32.4mmol)和4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸(实施例a1，步骤3，17.91g，97mmol)于无水dcm(400ml)和无水异丙醇(100ml)中制浆1.5小时，届时所有固体均溶解。逐份添加三乙酰氧基硼氢化钠(22.0g，104mmol)(观测到温度增至30-35℃)。在室温下搅拌反应混合物2.5小时，直至hplc显示起始物质已消耗。用含碳酸氢钠(10.22g，122mmol)的水(250ml)淬灭反应。形成浓稠固体。添加乙腈(250ml)以帮助搅拌并且得到用于过滤的较佳固体。将混合物制浆30分钟，过滤，并且依序用1:1丙酮/水混合物、丙酮洗涤。在氮气吹扫下干燥固体，得到呈白色固体状的所需产物4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双
(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(30.3g，100％产率，含有溶剂；hplc面积百分比(220nm，ph 2)：98.7％)，并且未经进一步纯化即使用。
[0429]
实施例1d.制备化合物1结晶游离碱(方法4)
[0430][0431]
步骤1：4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二叔丁酯
[0432][0433]
在室温下将n,n'-(2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(1-甲基-4,5,6,7-四
氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺)(实施例1a，步骤4，20.0g，34.5mmol)和4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸叔丁酯(18.10g，76mmol)于dcm(160ml)中的混合物搅拌10分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(16.09g，76mmol)。在室温下搅拌反应物4小时。用dcm(160ml)稀释混合物，用含碳酸钠(5.12g，48.3mmol)的水(160ml)淬灭，并且用dcm(100ml)萃取三次。干燥合并的有机相，过滤并浓缩。将残余物于mtbe(353ml)中搅拌过夜。过滤固体并干燥，得到呈白色固体状的所需产物4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二叔丁酯(32.8g，93％产率；hplc面积百分比(220nm，ph 2)：98.47％)，其未经进一步纯化即用于后续反应中。c
56h72
cl2n8o6的ms计算值m

:m/z＝1022.5；实验值[(m 2h)/2]

:m/z＝512.5。
[0434]
步骤2：4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)
[0435]
将盐酸(hcl)(12m，于水中，39.3ml，472mmol)添加至4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)二叔丁酯(32.2g，31.4mmol)于乙腈(210ml)中的溶液中。在50℃下搅拌混合物2小时，然后冷却至周围温度。然后添加含碳酸钠(19.99g，189mmol)的h2o(258ml)以将酸淬灭至ph 6，继而添加ch3cn(258ml)。在室温下搅拌浆液3小时，然后过滤。在真空下进一步干燥固体，得到呈白色固体状的所需产物4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(28.08g，98％产率，含有溶剂；hplc面积百分比(220nm，ph 2)：98.49％)，并且未经进一步纯化即使用。c
48h57
cl2n8o6的lcms计算值(m h)

:m/z＝911.4；实验值911.3；1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.94(s,2h),9.90(s,2h),8.38(dd,2h),7.49(t,2h),7.15(dd,2h),3.91(s,6h),3.42(s,4h),2.76(t,4h),2.67(t,4h),2.57-2.53(m,4h),1.92-1.82(m,4h),1.73(t,4h),1.57-1.47(m,8h),1.44(s,4h),1.42-1.34(m,4h)ppm。
[0436]
实施例2.制备化合物1二钠盐
[0437]
在周围温度下在4ml透明玻璃小瓶中于搅拌下，将化合物1(129.3mg)添加至1.5ml 2:1丙酮/水混合物中。然后将312μl 1n naoh(2.2当量)添加至悬浮液中并且在周围温度下搅拌1小时。通过过滤收集固体，用丙酮洗涤，并且空气干燥过夜。通过离子色谱法确定化合物1与钠之间的盐比率为1.7。
[0438]
通过xrpd(图4，表2)确认二钠盐的结晶度并且通过dsc(图5)进一步支持，指示盐具有起始温度为47.6℃并且最大值为108.3℃的第一吸热峰以及起始温度为258.4℃并且最大值为280.7℃的第二吸热峰。二钠盐的tga提供于图6中，并且在低于100℃下展现约11.5％的重量损失。
[0439]
表2.化合物1二钠盐的xrpd峰数据
[0440][0441][0442]
实施例3.制备化合物1二盐酸盐形式i
[0443]
将化合物1(29.6g，32.5mmol)悬浮于丙酮(120ml)和2.0n hcl(36ml，72.0mmol)中。将混合物加热至55℃持续15分钟以形成澄清溶液。获得澄清溶液后，搅拌反应混合物30分钟并且缓慢冷却至室温。对溶液进行精滤。逐份添加丙酮(360ml)(总共16v)。添加后，在室温下搅拌所形成的混浊溶液4小时。过滤混合物以分离化合物1二盐酸盐。
[0444]
然后将粗化合物1二盐酸盐转移至1l烧瓶中。添加丙酮(450ml，16v)和水(30ml，1v)并且将混合物加热至55-60℃。在此温度下搅拌混合物5小时，然后缓慢冷却至室温并过滤以分离化合物1二盐酸盐。在真空烘箱中在氮气吹扫下于50℃下干燥固体过夜，得到化合物1二盐酸盐形式i(28g，87％产率，hplc面积百分比(220nm，ph 2)：99.1％)。
[0445]
通过xrpd(图7，表3)确认二盐酸盐形式i的结晶度并且通过dsc(图8)进一步支持，指示盐具有起始温度为31.1℃并且最大值为91.4℃的第一吸热峰以及起始温度为231.0℃并且最大值为236.4℃的第二吸热峰。二盐酸盐形式i的tga提供于图9中，并且在低于125℃下展现约8.2％的重量损失并且在125℃与250℃之间展现约2.9％的重量损失。二盐酸盐形式i通过1h nmr(图10)进一步表征。通过hplc确定二盐酸盐形式i的纯度为100.0％。通过离
子色谱法确定游离碱与盐酸之间的盐比率为2.0。c
48h57
cl2n8o6的lcms计算值(m h)

:m/z＝911.4；实验值911.3；1h nmr(400mhz,dmso-d6):12.08(s,2h),11.37(s,2h),9.95(s,2h),8.29(dd,2h),7.51(t,2h),7.19(d,2h),4.42(d,2h),4.20(m,2h),3.95(s,6h),3.80(m,2h),3.40(m,4h),3.25(m,4h),3.05(m,4h),2.06(m,4h),1.89(m,4h),1.54(m,8h),1.46(m,4h),1.38(m,4h)ppm。
[0446]
表3.化合物1二盐酸盐形式i的xrpd峰数据
[0447][0448]
[0449]
实施例4.制备化合物1二盐酸盐形式ii
[0450]
在周围温度下在4ml透明玻璃小瓶中于搅拌下，将90mg非晶形化合物1二盐酸盐溶解于2.6ml 10:3乙腈/水混合物中。在70℃下将溶液无盖蒸发至约0.3ml。然后添加3ml乙腈并且在70℃下于封闭盖下加热至固体析出。在周围温度下搅拌所得悬浮液1小时。通过过滤收集固体并且在50℃下于真空下干燥过夜。
[0451]
通过xrpd(图11，表4)确认二盐酸盐形式ii的结晶度并且通过dsc(图12)进一步支持，指示盐具有起始温度为22.2℃并且最大值为89.7℃的第一吸热峰以及起始温度为251.7℃并且最大值为258.3℃的第二吸热峰。二盐酸盐形式ii的tga提供于图13中，并且在低于150℃下展现约5.4％的重量损失并且在150℃与250℃之间展现约4.1％的重量损失。
[0452]
表4.化合物1二盐酸盐形式ii的xrpd峰数据
[0453]
[0454][0455]
实施例5.测量化合物1二盐酸盐形式i的溶解度
[0456]
根据用于25℃下的溶解度的程序1(表5)和用于50℃的程序2(表6)测量化合物1二盐酸盐形式i的溶解度并且结果汇总于表7中。
[0457]
表5.用于测量25℃下化合物1二盐酸盐形式i于各种溶剂中的溶解度的程序1
[0458]
[0459][0460]
表6.用于测量50℃下化合物1二盐酸盐形式i于各种溶剂中的溶解度的程序2
[0461][0462]
表7.化合物1二盐酸盐形式i于各种溶剂中的溶解度
[0463]
[0464][0465]
n/a：不可得，由于溶剂的低沸点或与溶剂的hplc峰叠加而不进行研究，
[0466]
*基于表8和表9中的结果。
[0467]
实施例6.在25℃和50℃下的相平衡
[0468]
设计相平衡研究以提供关于相鉴定的主要晶体形式的信息。基于其在各种溶剂系统中的溶解度(表7)，在25
±
1℃下使化合物1二盐酸盐形式i于一组代表性溶剂中平衡(表8)。向表8和表9中所列的溶剂中添加化合物1二盐酸盐形式i直至获得混浊溶液，然后将约30mg化合物1二盐酸盐形式i添加至混浊溶液中。分别在25
±
1℃和50
±
1℃下搅拌混合物2天。过滤固体并且通过xrpd分析以得到表8和表9中的结果。
[0469]
在25
±
1℃下的平衡(表8)得到新多晶形式iii(meoh)、形式iv(n-buoh)、形式v(1-丙醇)和形式vi(水)。在50
±
1℃下的平衡(表9)得到新多晶形式iv(n-buoh)和形式vi(水)。
[0470]
表8：在25
±
1℃下相平衡的晶体形式
[0471]
溶剂固态形式n/a(化合物1二盐酸盐形式i)in/a(化合物1二盐酸盐形式ii)iimecni氯仿n/a二氯甲烷非晶形 形式idmfn/a1,4-二噁烷i
甲醇iii2-甲氧基乙醇imibki甲苯i己烷ithfi丙酮非晶形 形式in-buohivmtbeidmson/aetoh非晶形 形式ietoaci甲酸乙酯i庚烷i乙酸异丁酯iipaci1-丙醇vipa非晶形 形式i水vimeki含2％水的丙酮i含5％水的丙酮i含10％水的丙酮i含2％水的乙腈i含5％水的乙腈i含10％水的乙腈非晶形 i
[0472]
表9：在50℃下相平衡的晶体形式
[0473]
溶剂固态形式n/a(化合物1二盐酸盐形式i)imecni氯仿n/admfi1,4-二噁烷形式iv 非晶形甲醇i2-甲氧基乙醇imibki甲苯i己烷ithfi
丙酮in-buohivmtbeidmson/aetoh非晶形 形式ietoaci甲酸乙酯i庚烷i乙酸异丁酯iipaci1-丙醇iipai水vimeki含2％水的丙酮i含5％水的丙酮i含10％水的丙酮i含2％水的乙腈i含5％水的乙腈i含10％水的乙腈非晶形 形式i
[0474]
实施例7.在25
±
1℃和50
±
1℃下的蒸发
[0475]
进行蒸发研究以鉴定在不受控沉淀期间的主要晶体形式。未得到任何特定固体(即，透明薄膜和油)的实验不进行进一步研究。xrpd用于研究在25
±
1℃和50
±
1℃下蒸发样品的结晶形式的固态形态。结果呈现于表10(25
±
1℃)和表11(50
±
1℃)中。
[0476]
表10：从25
±
1℃下的蒸发进行晶体形式鉴定
[0477]
溶剂固态形式n/a(化合物1二盐酸盐形式i)i氯仿非晶形二氯甲烷非晶形 形式idmfn/a甲醇非晶形2-甲氧基乙醇形式i 非晶形etohi1-丙醇n/a水n/a含5％水的丙酮非晶形 形式i含10％水的丙酮非晶形含5％水的乙腈非晶形含10％水的乙腈非晶形 形式i
[0478]
n/a：不可得。澄清溶液或沉淀物量过少而无法通过xrpd分析。
[0479]
表11：从50
±
1℃下的蒸发进行晶体形式鉴定
[0480]
溶剂固态形式n/a(化合物1二盐酸盐形式i)i二氯甲烷非晶形dmf非晶形 形式i1,4-二噁烷n/a甲醇非晶形2-甲氧基乙醇非晶形 形式idmso非晶形etohn/a1-丙醇非晶形 形式iipan/a水非晶形含5％水的丙酮n/a含10％水的丙酮非晶形含5％水的乙腈非晶形含10％水的乙腈非晶形
[0481]
n/a：不可得。澄清溶液或沉淀物量过少而无法通过xrpd分析。
[0482]
实施例8.添加反溶剂
[0483]
通过将化合物1二盐酸盐形式i分别添加至表12中的溶剂中来制备化合物1二盐酸盐的饱和溶液或近饱和溶液。添加反溶剂以诱导沉淀。选择mtbe、甲苯、乙酸乙酯、ipac、乙腈和1,4-二噁烷作为反溶剂。在添加反溶剂时未产生任何特定固体的实验不进行进一步研究，并且过滤所有固体并通过xrpd分析。结果呈现于表12中。添加甲醇/甲苯的反溶剂得到新多晶形式vii。
[0484]
表12.化合物1二盐酸盐形式i于各种溶剂中的反溶剂添加
[0485][0486][0487]
n/a：不可得。澄清溶液或沉淀物量过少而无法通过xrpd分析。
[0488]
实施例9.反向添加
[0489]
在表13中所列的溶剂中制备化合物1二盐酸盐形式i的饱和溶液和近饱和溶液并且添加至较大体积的可混溶性反溶剂中。选择mtbe、1,4二噁烷、乙酸乙酯、甲苯和ipac作为反溶剂。在添加反溶剂后未产生任何特定固体的实验不进行进一步研究，并且过滤所有固体并通过xrpd分析。
[0490]
甲醇/ipac、甲醇/乙酸乙酯和甲醇/甲苯的反向添加得到化合物1二盐酸盐形式viii。
[0491]
表13.化合物1二盐酸盐形式i于各种溶剂中的反向添加
[0492][0493][0494]
n/a：不可得。澄清溶液或沉淀物量过少而无法通过xrpd分析。
[0495]
实施例10.淬灭饱和溶液
[0496]
将在约25℃下制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和及近饱和溶液淬灭至约-20℃以诱导较高能量形式沉淀。基于在25℃下测量的溶解度数据来选择表14中的代表性溶剂。淬灭饱和甲醇溶液得到形式iii。
[0497]
表8.淬灭所得的化合物1二盐酸盐形式i的结果
[0498]
溶剂形式
n/a(化合物1二盐酸盐形式i)idmfn/a甲醇iii2-甲氧基乙醇n/a水n/a10％水/丙酮n/a10％水/乙腈n/a
[0499]
实施例11.用加热与冷却循环使饱和溶液结晶
[0500]
设计本实验以进一步研究比形式i更稳定的形式。在50℃下制备化合物1二盐酸盐形式i的饱和及近饱和溶液并且通过使用程序化循环浴在浴中缓慢冷却。向澄清溶液(8-10ml)中添加约20-30mg化合物1二盐酸盐形式i，得到浆液。然后经2小时将所形成的浆液加热至50℃，然后经2小时冷却至5℃。重复此过程3天并且过滤固体用于进一步分析。结果呈现于表15中。盐于甲醇中的加热与冷却得到新形式ix。
[0501]
表15：用加热与冷却再循环使化合物1二盐酸盐形式i的饱和溶液结晶
[0502]
溶剂形式n/a(化合物1二盐酸盐形式i)idmf胶粘固体甲醇ix2-甲氧基乙醇i正丁醇ivetoh非晶形 形式i1-丙醇vipa非晶形 形式i水vi10％水/丙酮i5％水/乙腈vii10％水/乙腈vii
[0503]
实施例12.制备化合物1二盐酸盐形式iii
[0504]
向约2.5ml于甲醇中制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和或混浊溶液中添加约20mg化合物1二盐酸盐形式i，继而在25
±
1℃下搅拌3天，将其过滤并且通过xrpd分析得出化合物1二盐酸盐形式iii。
[0505]
通过xrpd(图14，表16)确认二盐酸盐形式iii的结晶度并且通过dsc(图15)进一步支持，指示盐具有起始温度为246.7℃并且最大值为258.3℃的吸热峰。二盐酸盐形式iii的tga提供于图16中，并且在至多约100℃下展现约1.3％的重量损失。
[0506]
表16.化合物1二盐酸盐形式iii的xrpd峰数据
[0507]
2θ相对强度％9.223.411.228.914.9100
17.092.517.968.719.761.222.623.424.447.825.937.326.825.429.830.836.418.9
[0508]
实施例13.制备化合物1二盐酸盐形式iv
[0509]
向约3ml于正丁醇中制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和或混浊溶液中添加约25mg化合物1二盐酸盐形式i，继而在25
±
1℃下搅拌3天，将其过滤并且通过xrpd分析得出化合物1二盐酸盐形式iv。
[0510]
通过xrpd(图17，表17)确认二盐酸盐形式iv的结晶度并且通过dsc(图18)进一步支持，指示盐具有起始温度为268.1℃并且最大值为273.0℃的吸热峰。二盐酸盐形式iv的tga提供于图19中，并且在至多约100℃下展现约1.2％的重量损失。二盐酸盐形式iv通过1h nmr进一步表征为正丁醇通道溶剂合物(channel solvate)(图20)。
[0511]
表17.化合物1二盐酸盐形式iv的xrpd峰数据
[0512][0513][0514]
实施例14.制备化合物1二盐酸盐形式v
[0515]
向约3ml于正丙醇中制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和或混浊溶液中添加约30mg化合物1二盐酸盐形式i，继而在25
±
1℃下搅拌3天，将其过滤并且通过xrpd分析得出形式v。
[0516]
通过xrpd(图21，表18)确认二盐酸盐形式v的结晶度并且通过dsc(图22)进一步支持，指示盐具有起始温度为240.6℃并且最大值为249.1℃的吸热峰。二盐酸盐形式v的tga提供于图23中，并且在至多约100℃下展现约0.9％的重量损失。二盐酸盐形式v通过1h nmr进一步表征为正丙醇通道溶剂合物(图24)。
[0517]
表18.化合物1二盐酸盐形式v的xrpd峰数据
[0518]
2θ相对强度％5.854.4
9.1100.011.08.711.68.413.469.714.896.116.641.817.144.818.152.319.325.421.428.921.822.723.171.824.027.925.352.626.234.627.280.529.56.4
[0519]
实施例15.制备化合物1单盐酸盐形式vi
[0520]
向约3ml在50℃下于水中制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和溶液中添加约30mg化合物1二盐酸盐形式i，继而在50
±
1℃下搅拌2天，将其过滤并且通过xrpd分析得出单盐酸盐形式vi。
[0521]
通过xrpd(图25，表19)确认单盐酸盐形式vi的结晶度并且通过dsc(图26)进一步支持，指示盐具有起始温度为43.7℃并且最大值为76.8℃的第一吸热峰以及起始温度为244.2℃并且最大值为250.7℃的第二吸热峰。单盐酸盐形式vi的tga提供于图27中，并且在至多约130℃下展现约1.2％的重量损失。单盐酸盐形式vi通过1h nmr(图28)进一步表征。元素分析指示形式vi可以是单氯化物水合物：c
48h57
cl3n8o6·
3h2o的计算值：c,57.51；h,6.33；n,11.18；cl,10.61。实验值：c,55.41；h,6.18；n,10.62；cl,9.53。卡尔-费雪滴定(karl-fisher titration)指示形式vi含有约9.43％水。
[0522]
表19.化合物1单盐酸盐形式vi的xrpd峰数据
[0523]
2θ相对强度％6.410011.153.912.621.613.89814.639.615.764.516.924.317.646.119.050.2
19.524.121.114.922.827.124.324.124.864.527.068.828.99.430.425.333.618.640.67.6
[0524]
实施例16.制备化合物1二盐酸盐形式vii
[0525]
在50℃下制备约5ml化合物1二盐酸盐形式i于10％水/乙腈中的饱和溶液并且通过使用程序化循环浴在浴中缓慢冷却至25℃。经2小时将所形成的溶液加热至50℃，然后经2小时冷却至5℃。重复此过程72小时并且通过离心分离固体并通过xrpd分析得出形式vii。
[0526]
通过xrpd(图29，表20)确认二盐酸盐形式vii的结晶度并且通过dsc(图30)进一步支持，指示盐具有起始温度为43.5℃并且最大值为84.6℃的第一吸热峰以及起始温度为260.0℃并且最大值为274.2℃的第二吸热峰。二盐酸盐形式vii的tga提供于图31中，并且在至多约130℃下展现约2.8％的重量损失。二盐酸盐形式vii通过1h nmr进一步表征为乙腈通道溶剂合物(图32)。
[0527]
表20.化合物1二盐酸盐形式vii的xrpd峰数据
[0528]
2θ相对强度％5.628.19.946.411.530.014.144.814.940.517.0100.018.48.319.317.324.493.226.120.529.68.0
[0529]
实施例17.制备化合物1二盐酸盐形式viii
[0530]
向6ml甲苯中添加1ml于甲醇中制备的化合物1二盐酸盐形式i的饱和溶液，继而搅拌得到固体，将其过滤并且通过xrpd分析得出形式viii。
[0531]
通过xrpd(图33，表21)确认二盐酸盐形式viii的结晶度并且通过dsc(图34)进一步支持，指示盐具有起始温度为43.8℃并且最大值为77.8℃的第一吸热峰以及起始温度为246.1℃并且最大值为252.9℃的第二吸热峰。二盐酸盐形式viii的tga提供于图35中，并且在至多约100℃下展现约2.0％的重量损失。二盐酸盐形式viii通过1h nmr(图36)进一步表
征。
[0532]
表21.化合物1二盐酸盐形式viii的xrpd峰数据
[0533]
2θ相对强度％6.647.68.51.411.227.613.116.714.716.816.7100.018.46.519.015.624.171.026.014.229.25.8
[0534]
实施例18.制备化合物1二盐酸盐形式ix
[0535]
在50℃下制备约5ml化合物1二盐酸盐形式i于甲醇中的饱和溶液并且通过使用程序化循环浴在浴中缓慢冷却至25℃。经2小时将所形成的溶液加热至50℃，然后经2小时冷却至5℃。重复此过程72小时并且通过离心分离固体并通过xrpd分析得出形式ix。
[0536]
通过xrpd(图37，表22)确认二盐酸盐形式ix的结晶度并且通过dsc(图38)进一步支持，指示盐具有起始温度为43.4℃并且最大值为63.9℃的第一吸热峰以及起始温度为115.7℃并且最大值为131.7℃的第二吸热峰以及起始温度为266.0℃并且最大值为276.1℃的第三吸热峰。二盐酸盐形式ix的tga提供于图39中，并且在至多约130℃下展现约2.5％的重量损失。
[0537]
表22.化合物1二盐酸盐形式ix的xrpd峰数据
[0538][0539][0540]
实施例19.化合物1二盐酸盐多晶型物的稳定性关系
[0541]
为了评估化合物1二盐酸盐固体形式的转变，如表23和表24中所描述用八种多晶型物(形式i和形式iii至形式ix)的混合物在25
±
1℃和60
±
1℃下于10％水/丙酮的溶剂中进行竞争性浆液实验。
[0542]
表23.用于在25
±
1℃下于10％水/丙酮中进行竞争性实验的程序
[0543][0544]
表24.用于在60
±
1℃下于10％水/丙酮中进行竞争性实验的程序
[0545][0546][0547]
在25
±
℃下于10％水/丙酮中搅拌20小时并且在60
±
℃下搅拌2小时后，七种多晶型物(形式i、iii、iv、v、vii、viii和形式ix)的混合物转化成形式i。这些结果指示形式i是在这些温度下于10％水/丙酮中的七种多晶型物的最稳定多晶形式。
[0548]
实施例20.制备化合物1三氟乙酸盐
[0549]
步骤1：1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
[0550][0551]
在室温下将1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶(accela，目录号sy032476：2.0g，14.58mmol)和(boc)2o(3.38ml，14.58mmol)于二氯甲烷(60ml)中的溶液搅拌1小时。用饱和nahco3水溶液淬灭反应，并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。c
12h20
n3o2的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝238.2；实验值238.2。
[0552]
步骤2：1-甲基-6,7-二氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5(4h)-二甲酸5-叔丁酯2-甲酯
[0553][0554]
将含正丁基锂的己烷(2.5m，7.00ml，17.49mmol)添加至1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(步骤1：3.46g，14.58mmol)于四氢呋喃(60.0ml)中的冷(-78℃)溶液中。在-78℃下搅拌反应混合物10分钟，随后添加氯甲酸甲酯(1.69ml，21.87mmol)。在-78℃下搅拌30分钟后，然后用饱和nahco3水溶液淬灭反应，并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶柱上用含0-80％乙酸乙酯的己烷洗脱来纯化残余物，得到所需产物。c
14h22
n3o4的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝296.2；实验值296.3。
[0555]
步骤3：2-((3-溴-2-氯苯基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
[0556][0557]
将含叔丁醇钾的thf(1.0m，3.39ml，3.39mmol)添加至1-甲基-6,7-二氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5(4h)-二甲酸5-叔丁酯2-甲酯(步骤2：500mg，1.69mmol)和3-溴-2-氯苯胺(350mg，1.69mmol)于四氢呋喃(12.0ml)中的溶液中。在室温下搅拌30分钟后，用水淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶柱上用含0-50％乙酸乙酯的己烷洗脱来纯化残余物，得到所需产物。c
19h23
brcln4o3的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝469.1/471.1；实验值469.1/471.1。
[0558]
步骤4：2-((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
[0559]
[0560]
用氮气吹扫2-((3-溴-2-氯苯基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(步骤3：1.0g，2.129mmol)、4,4,5,5,4',4',5',5'-八甲基-[2,2']联[[1,3,2]二氧杂硼烷](0.649g，2.55mmol)、与二氯甲烷络合的[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)(1:1)(0.174g，0.213mmol)和乙酸钾(0.522g，5.32mmol)于1,4-二噁烷(24.0ml)中的混合物，然后在110℃下搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温，用二氯甲烷稀释，然后经硅藻土过滤。在减压下浓缩滤液，并且通过快速色谱法在硅胶柱上用含0-30％乙酸乙酯的己烷洗脱来纯化残余物，得到所需产物。c
25h35
bcln4o5的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝517.2；实验值517.2。
[0561]
步骤5：2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯
[0562][0563]
在室温下将2-((3-溴-2-氯苯基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(步骤3：900mg，1.92mmol)于三氟乙酸(4.0ml)和二氯甲烷(8.0ml)中的混合物搅拌1小时。在减压下浓缩反应混合物。用氮气吹扫上述残余物、2-((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(步骤4：1188mg，2.30mmol)、碳酸钠(1015mg，9.58mmol)和[1,1-双(二环己基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)(145mg，0.19mmol)于1,4-二噁烷(12.0ml)和水(6.0ml)中的混合物，然后在110℃下搅拌2小时。冷却至室温后，用水稀释反应混合物并且用二氯甲烷萃取。经na2so4干燥合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶柱上用含0-10％甲醇的二氯甲烷洗脱来纯化残余物，得到所需产物。c
33h37
cl2n8o4的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝679.2；实验值679.2。
[0564]
步骤6：4-甲酰基双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯
[0565][0566]
在室温下将4-(羟甲基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(pharmablock，目录号pbz3820：400mg，2.17mmol)和戴斯-马丁过碘烷(1381mg，3.26mmol)于二氯甲烷(12.0ml)中的混合物搅拌2小时。用20％na2s2o3水溶液和饱和nahco3水溶液淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
[0567]
步骤7：4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯
[0568][0569]
将含叔丁醇钾的thf(1.0m，4.39ml，4.39mmol)添加至氯(甲氧基甲基)三苯基磷烷(1505mg，4.39mmol)于四氢呋喃(12.0ml)中的悬浮液中。在室温下搅拌反应混合物1小时，随后添加4-甲酰基双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(步骤6：400mg，2.195mmol)。在室温下搅拌5小时后，用水淬灭反应混合物，并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物溶解于四氢呋喃(12.0ml)中，然后在室温下用含hcl的水(4.0m，11ml，43.9mmol)处理1小时。用水稀释反应混合物并且用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤，并且在减压下浓缩。粗产物未经进一步纯化即直接用于下一步骤中。
[0570]
步骤8：4-(2-(2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯
[0571][0572]
将4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(步骤7：43.3mg，0.221mmol)添加至2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-甲酸叔丁酯(步骤5：100mg，0.147mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(94mg，0.441mmol)于二氯甲烷(1.5ml)中的混合物中。在室温下搅拌2小时后，用饱和nahco3水溶液淬灭反应混合物，并且用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。在室温下用二氯甲烷(1.0ml)和三氟乙酸(0.5ml)处理残余物1小时。在减压下浓缩反应混合物。用饱和nahco3水溶液处理残余物，并且用二氯甲烷萃取。经na2so4干燥合并的有机层，过滤，并且在减压下浓缩。通过快速色谱法在硅胶柱上用含0-10％甲醇的二氯甲烷洗脱来纯化残余物，得到所需产物。c
39h45
cl2n8o4的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝759.3；实验值759.3。
[0573]
步骤9：4,4'-(((((2,2'-二氯-[1,1'-联苯]-3,3'-二基)双(氮烷二基))双(羰基))双(1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2,5-二基))双(乙烷-2,1-二基))双(双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸)(呈三氟乙酸盐形式分离的化合物1)
[0574][0575]
将4-(2-氧代乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(步骤7：5.2mg，0.026mmol)添加至4-(2-(2-((2,2'-二氯-3'-(1-甲基-4,5,6,7-四氢-1h-咪唑并[4,5-c]吡啶-2-甲酰胺基)-[1,1'-联苯]-3-基)胺甲酰基)-1-甲基-1,4,6,7-四氢-5h-咪唑并[4,5-c]吡啶-5-基)乙基)双环[2.2.1]庚烷-1-甲酸甲酯(步骤8：10mg，0.013mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(8.37mg，0.039mmol)于二氯甲烷(0.20ml)中的混合物中。在室温下搅拌2小时后，用饱和nahco3水溶液淬灭反应混合物，并且用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物溶解于thf/meoh/水(0.1ml/0.1ml/0.05ml)中，并且用氢氧化锂单水合物(5.5mg，0.132mmol)处理。在30℃下搅拌3小时后，用甲醇稀释反应混合物，并且通过制备型hplc(ph＝2，乙腈/水 tfa)纯化，得到呈三氟乙酸盐形式的所需产物。c
48h57
cl2n8o6的lc-ms计算值(m h)

:m/z＝911.4；实验值911.4。1h nmr(600mhz,dmso-d6)δ12.08(s,2h),9.93(s,2h),8.29(d,j＝8.1hz,2h),7.51(t,j＝7.9hz,2h),7.18(d,j＝7.7hz,2h),4.56-4.44(m,2h),4.30-4.18(m,2h),3.95(s,6h),3.87-3.78(m,2h),3.52-3.20(m,6h),3.14-2.94(m,4h),2.04-1.82(m,8h),1.58-1.48(m,8h),1.46(s,4h),1.42-1.32(m,4h)。
[0576]
除本文所描述的那些以外，本发明的各种修改将为本领域技术人员从前述描述显而易见。此类修改也意图处于随附权利要求书的范围内。本技术中所引用的每个参考文献，包括所有专利、专利申请和公布，以全文引用的方式并入本文中。