作为EP4拮抗剂的稠环化合物及其制备方法和用途与流程

作为ep4拮抗剂的稠环化合物及其制备方法和用途
1.优先权信息
2.本技术请求2021年01月25日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号为202110098734.8的专利申请的优先权和权益，并且通过参照将其全文并入此处。
技术领域
3.本发明属于医药领域，具体地，本发明涉及到一种作为ep4拮抗剂的稠环化合物及其制备方法和用途。


背景技术：

4.前列腺素e2(prostaglandin e2，pge2)是一种内源性生物活性脂质，pge2通过激活前列腺素受体引起广泛的上下游依赖性生物应答(legler,d.f.et al,hit.j biochem.cell biol.2010,42,p.198-201)，参与调控包括炎症、疼痛、肾功能、心血管系统、肺功能以及癌症等诸多生理和病理过程。据报道，pge2在各种癌症的癌变组织中高度表达，并且已证实pge2与患者的癌症和疾病状况的发生、成长和发展相关。普遍认为，pge2与细胞增殖和细胞死亡(凋亡)的激活相关，并且在癌细胞增殖、疾病进展和癌症转移的过程中起重要作用。
5.pge2的受体中，存在ep1、ep2、ep3和ep4这4个种类的亚型，它们广泛分布于各种组织中。这些亚型之中，pge2介由ep4受体干预炎症反应(包括免疫炎症反应)、平滑肌的松弛、发痛、淋巴细胞分化、血管系膜细胞的肥大或增殖、肠胃粘液的分泌等。因而，可以认为ep4受体拮抗剂有希望作为消炎和/或镇痛药治疗与pge
2-ep4通路相关的疾病，例如炎症性疾病、伴有各种疼痛的疾病等。
6.ep4是类风湿性关节炎和骨关节炎啮齿动物模型中关节炎性疼痛中涉及的主要受体(参见例如j.pharmacol.exp.ther.,325,425(2008))，其在活化后导致细胞内信号分子camp累积。已有研究在痛觉感受器的外周神经末梢、巨噬细胞及嗜中性球上检测到ep4受体的表达，经证实这些细胞类型对于子宫内膜异位症极其重要。有研究报道口服ep4拮抗剂可减轻2型糖尿病小鼠的蛋白尿，抑制糖尿病肾病的进展。另有研究报道膀胱粘膜中ep4的激活和pge2的产生增加可能是前列腺炎引起膀胱过度活动的重要原因，膀胱内注射ep4拮抗剂可有效改善前列腺炎后的膀胱过度活动。因此，选择性ep4拮抗剂可用于治疗关节炎、包括关节炎疼痛以及子宫内膜异位症、糖尿病肾病、膀胱过度活动症。现有关节炎的治疗药以传统nsaid(非甾体抗炎药)或选择性cox-2抑制剂为主，它们可产生心血管和/或胃肠副作用。而选择性ep4拮抗剂产生心血管副作用的可能较小。
7.pge2在肿瘤微环境中持续地激活肿瘤微环境中的ep受体(由肿瘤细胞大量产生)(ochs et al,j neurochem.2016,136,p.1142-1154；zelenay,s.et al,cell 2015,162,p.1257-1270)，会促进多种免疫抑制细胞的积累并增强其活性，包括2型肿瘤相关巨噬细胞(tams)、treg细胞和髓系来源的抑制细胞(mdscs)。免疫抑制肿瘤微环境的主要特征之一是存在大量的mdscs和tam，它们反过来又与胃癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肝细胞癌(hcc)、头
颈癌和其他类型的癌症患者的总体生存率低密切相关。此外，据报道pge2通过抑制抗原提呈树突状细胞(dc)在肿瘤中的积聚以及抑制肿瘤浸润性dc的激活来诱导免疫耐受(wang et al,trends in molecular medicine 2016,22,p.1-3)。所有这些pge2介导的作用将共同帮助肿瘤细胞逃避免疫监视。pge2在促进肿瘤发生发展中发挥十分重要的作用。在包括结肠癌、肺癌、乳腺癌、和头颈癌等各类恶性肿瘤中都发现pge2及其相关受体ep2、ep4的表达水平升高，并往往和不良预后密切相关(bhooshan,n.et al.lung cancer 101,88-91)。因此，选择性阻断ep2和ep4信号通路可以通过改变肿瘤微环境、调控肿瘤免疫细胞抑制肿瘤发生发展。
8.现有的临床前研究数据显示，ep2和ep4特异性拮抗剂在结肠癌、食道癌、肺癌和乳腺癌等动物模型中可以不同程度的预防或抑制肿瘤的生长。在进入临床的pge2受体药物中，辉瑞公司研发的ep4拮抗剂grapiprant已被fda批准用于狗的关节炎的治疗，同时于2015年进入抗肿瘤的临床ii期研究，用于治疗前列腺癌、非小细胞肺癌和乳腺癌等多种类型的实体肿瘤(de vito,v.et al.j pharm biomed anal 118,251-258)。卫材公司研发的ep4拮抗剂e7046也于2015年展开临床i期的相关研究，2017年开展联合放疗或放化疗治疗直肠癌的ib期临床试验。ono pharmaceutical研发的ono-4578于2017年开展晚期或转移性实体瘤的临床i期研究，2018年开展单药或联合nivolumab治疗晚期实体瘤的i/ii期临床试验。
9.目前ep4拮抗剂在炎性疾病、疼痛、癌症等领域的治疗取得了一定的进展，但仍有待进一步开发新型的药物，以作为目前药物的改进或者替换。


技术实现要素：

10.本发明的目的是提供一种用于ep4拮抗剂的稠环化合物及其制备方法和用途。
11.本发明的第一方面，提供了式i所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0012][0013]
其中，环a为不存在或7-10元桥环烷基、6元含氧杂环烷基；
[0014]
且当环a为6元含氧杂环烷基时，基团片段为
[0015]
r1选自c
1-c6烷基、-conh-r
11
、-nhco-r
12
；r
11
、r
12
各自独立地为氢或c
1-c6烷基；r1、r
11
、r
12
中所述的c
1-c6烷基任选地被一个或多个rf取代；当取代基为多个时，所述rf相同或不同；
[0016]
r2选自卤素、氰基、c
2-c6烯基、c
2-c6炔基、-co-r
21
；r
21
为氨基、羟基、c
1-c6烷基；其中
所述氨基或羟基的任选地独立地被c
1-c6烷基取代；所述c
2-c6烯基、所述c
2-c6炔基和所述c
1-c6烷基任选地分别独立地被一个或多个rf取代；当取代基为多个时，所述rf相同或不同；
[0017]
r3为c
1-c6羧基或c
1-c6酰胺基；
[0018]
r4选自氢、羟基、卤素、氰基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基；
[0019]
以上所述的rf选自羟基、卤素或氰基。
[0020]
在本发明一优选实施方式中，化合物具有式ii所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0021][0022]
在本发明一优选实施方式中，环a为不存在或7元桥环烷基、6元含氧杂环烷基，且当环a为6元含氧杂环烷基时，基团片段为较佳地，基团为
[0023]
环a为不存在时，基团片段为较佳地，环a为不存在时，基团片段为
[0024]
较佳地，当环a为7元桥环烷基时，基团片段为更佳地，当环a为7元桥环烷基时，基团片段为
[0025]
在本发明一优选实施方式中，，r1为-conh-r
11
或-nhco-r
12
；其中，r
11
、r
12
各自独立地为c
1-c6烷基；较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为c
1-c6烷基；较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为甲基、乙基、丙基、异丙基；更佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为丙基、异丙基；较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为异丙基。
[0026]
在本发明一优选实施方式中，r2为卤素、氰基；较佳地，r2为氰基。
[0027]
在本发明一优选实施方式中，r3为c
1-c6羧基；较佳地，r3为丁酸。
[0028]
在本发明一优选实施方式中，r4选自氢、羟基、卤素、氰基、甲基或卤代甲基；较佳地，r4为氢。
[0029]
在本发明一优选实施方式中，所述化合物具有下列任一所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0030][0031]
本发明第二方面，提供了一种中间体b-1、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0032][0033]
其中，环a为不存在或7-10元桥环烷基、6元含氧杂环烷基；
[0034]
r1选自c
1-c6烷基、-conh-r
11
、-nhco-r
12
；r
11
、r
12
各自独立地为氢或c
1-c6烷基；r1、r
11
、r
12
中所述的c
1-c6烷基任选地被一个或多个rf取代；当取代基为多个时，所述rf相同或不同；
[0035]
r4选自氢、羟基、卤素、氰基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基；较佳地r4为氢；
[0036]
以上所述的rf选自羟基、卤素或氰基。
[0037]
在本发明一优选实施方式中，环a为6元含氧杂环烷基时，为
[0038]
在本发明一优选实施方式中，环a为不存在或7元桥环烷基、6元含氧杂环烷基，基团片段为r1为-conh-r
11
或-nhco-r
12
，其中，r
11
、r
12
各自独立地为c
1-c6烷基，r4为氢；
[0039]
较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为c
1-c6烷基，r4为氢；
[0040]
较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为甲基、乙基、丙基，r4为氢；
[0041]
更佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为丙基，r4为氢；
[0042]
较佳地，为较佳地，基团为较佳地，所述丙基为异丙基；较佳地，基团片段为
[0043]
在本发明一优选实施方式中，所述的中间体b-1，具有下列任一所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0044][0045]
在本发明第三方面，提供了一种中间体b-2、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0046][0047]
其中，环a为7-10元桥环烷基、6元含氧杂环烷基；
[0048]
r1选自c
1-c6烷基、-conh-r
11
、-nhco-r
12
；r
11
、r
12
各自独立地为氢或c
1-c6烷基；r1、r
11
、r
12
中所述的c
1-c6烷基任选地被一个或多个rf取代；当取代基为多个时，所述rf相同或不同；
[0049]
r4选自氢、羟基、卤素、氰基、c
1-c4烷基或c
1-c4卤代烷基；较佳地，r4为氢；
[0050]
以上所述的rf选自羟基、卤素、氰基。
[0051]
在本发明一优选实施方式中，环a为6元含氧杂环烷基，为
[0052]
在本发明一优选实施方式中，r1为-conh-r
11
或-nhco-r
12
；其中，r
11
、r
12
各自独立地为c
1-c6烷基，r4为氢；
[0053]
较佳地，基团片段为r1为-conh-r
11
，r
11
为c
1-c6烷基，r4为氢；
[0054]
较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为甲基、乙基、丙基、异丙基；
[0055]
更佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为丙基、异丙基；
[0056]
较佳地，基团片段为较佳地，基团片段为较佳地，r1为-conh-r
11
，r
11
为异丙基。
[0057]
在本发明一优选实施方式中，具有下列任一所示结构、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药：
[0058][0059]
本发明第四方面，提供了一种制备如第一方面所述的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的方法，所述方法包括步骤：
[0060]
i)中间体b-1与化合物b-3反应，得到所述如式i所示化合物
[0061]
和/或，
[0062]
ii)中间体b-2与化合物b-4反应，脱去b-4中的羧基的保护基pg1，得到中间体b-1
[0063][0064]
其中，环a、r1、r2、r4的定义如本发明第一方面中所述；
[0065]
r3为c
1-c6羧基或c
1-c6酰胺基。
[0066]
在本发明一优选实施方式中，所述步骤i)在氮气保护下反应；和/或，在催化剂存在下反应；较佳地，所述催化剂为铑催化剂和铜催化剂；更佳地，所述催化剂为醋酸铑。
[0067]
在本发明一优选实施方式中，r3为c
1-c6羧基；较佳地，r3为丁酸。
[0068]
在本发明一优选实施方式中，所述步骤i)进一步包括步骤：i-1)将化合物b-3中的取代基r3经羧基保护基保护后，再与中间体b-1反应，得到经羧基保护基保护的式i所示化合物；i-2)脱去经羧基保护基保护的式i所示化合物中的羧基保护基，得到式i所示化合物。
[0069]
在本发明一优选实施方式中，所述步骤i)进一步包括步骤：i-3)手性拆分所述式i所示化合物。
[0070]
在本发明一优选实施方式中，所述pg1包括c
1-c6烷基、苯基取代的c
1-c6烷基；较佳地为c
1-c6烷基，更佳地为甲基、乙基、丙基、叔丁基。
[0071]
本发明第五方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包括：如本发明第一方面所述的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和药学上可接受的载体；或者如本发明第一方面所述的化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药；和至少一种其他药理学活性抑制剂；优选地，所述其他药理学活性抑制剂包括ctla4抗体、pdl1和pd1。
[0072]
本发明第六方面提供如本发明第一方面所述的式i所示化合物、其互变异构体、立体异构体、水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐或前药的在预防和/或治疗炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿系统疾病中的用途；和/或如本发明第五方面所述的药物组合物的用途，所述用途包括：预防和/或治疗炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿系统疾病在制备用于预防和/或治疗炎性疾病、疼痛、癌症、代谢疾病、泌尿系统疾病的药物、药物组合物或制剂中的用途。
[0073]
在本发明一优选实施方式中，其中所述炎性疾病选自关节炎、类风湿关节炎；所述疼痛选自骨关节炎疼痛、子宫内膜异位导致的疼痛；所述癌症选自实体癌，优选地，选自乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胶质母细胞瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、髓母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌和尿道癌；所述代谢疾病为糖尿病，所述泌尿系统疾病选自膀胱过动症。
[0074]
在本发明一优选实施方式中，其中所述药物与放射疗法和/或抗体疗法联合施用，其中所述抗体疗法选自ctla4抗体疗法、pdl1抗体疗法和pd1抗体疗法之一或其组合。
[0075]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
[0076]
术语和定义
[0077]
除非另有说明，本技术说明书和权利要求书中记载的基团和术语定义，包括其作
为实例的定义、示例性的定义、优选的定义、表格中记载的定义、实施例中具体化合物的定义等，可以彼此之间任意组合和结合。这样的组合和结合后的基团定义及化合物结构，应当属于本技术说明书记载的范围内。
[0078]
除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。如果本文对术语有多个定义，以本章的定义为准。
[0079]
应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本技术中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。
[0080]
可在参考文献(包括carey and sundberg"advanced organic chemistry4thed."vols.a(2000)and b(2001),plenum press,new york)中找到对标准化学术语的定义。除非另有说明，否则采用本领域技术范围内的常规方法，如质谱、nmr、ir和uv/vis光谱法和药理学方法。除非提出具体定义，否则本文在分析化学、有机合成化学以及药物和药物化学的有关描述中采用的术语是本领域已知的。可在化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送，以及对患者的治疗中使用标准技术。例如，可利用厂商对试剂盒的使用说明，或者按照本领域公知的方式或本发明的说明来实施反应和进行纯化。通常可根据本说明书中引用和讨论的多个概要性和较具体的文献中的描述，按照本领域熟知的常规方法实施上述技术和方法。在本说明书中，可由本领域技术人员选择基团及其取代基以提供稳定的结构部分和化合物。
[0081]
当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，ch2o等同于och2。如本文所用，。如本文所用，表示基团的连接位点。
[0082]
本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本技术中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。
[0083]
除前述以外，当用于本技术的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。
[0084]
本技术说明书和权利要求书记载的数值范围，当该数值范围被理解为“整数”时，应当理解为记载了该范围的两个端点以及该范围内的每一个整数。例如，“1～6的整数”应当理解为记载了0、1、2、3、4、5和6的每一个整数。
[0085]
在本技术中，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。
[0086]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语"氨基"表示-nh2。
[0087]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语"硝基"表示-no2。
[0088]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语"氰基"表示-cn。
[0089]
如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和键、具有例如1至6个碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的
2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2,2-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-3-炔基、1,1-二甲基丁-2-炔基或3,3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。
[0094]
在单独或作为其他取代基一部分时，“卤代烷基”指包括具有特定数目的碳原子、被一或多个卤素取代的支链和直链的饱和脂族烃基(如-cvfw，其中v＝1至3，w＝1至(2v 1))。卤代烷基的实例包括，但不限于三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。
[0095]
术语“7-10元桥环”是指化合物中的含有7-10个碳原子，任意两个环共用两不直接相连的碳原子的环烃，根据组成环的数目分为二环烃、三环烃、四环烃等。非限制性实例包括：
[0096][0097]
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“酯基”指具r-co-o-基团或-co-o-r基团，其中r为烷基，烷基为如上本文所定义，例如“c
2-c6酯基”是指c
1-c5烷基-co-o-结构的基团或者-co-o-c
1-c5烷基结构的基团，酯基的代表性示例包括(但不限于)：ch3coo-、c2h5coo-、c3h8coo-、(ch3)2chcoo-、-cooch3、-cooc2h5、-cooc3h8，或类似基团。
[0098]
在单独或作为其他取代基一部分时，术语“酰胺基”指具-co-nh-基团或-co-nh-r基团，其中r为烷基，烷基为如上本文所定义，例如“c
1-c4酰胺基”是c
1-c3烷基-co-nh-结构的基团或者-co-nh-c
1-c3烷基结构的基团或者-co-nh2，酯基的代表性示例包括(但不限于)：ch3co-nh-、c2h
5-co-nh-、c3h
8-co-nh-、(ch3)
2-co-nh-、-co-nh-ch3、-co-nhc2h5、-co-nh-c3h8，或类似基团。
[0099]
术语“惰性溶剂”包括但不限于：甲苯、苯、水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、n-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、四氢呋喃二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二氧六环，或其组合物。
[0100]
本文提供的化合物，包括可用于制备本文提供的化合物的中间体，其含有反应性官能团(例如但不限于羧基，羟基和氨基部分)，还包括其保护的衍生物。“受保护的衍生物”是其中一个或多个反应性位点被一个或多个保护基团(也称为保护基团)封闭的那些化合物。合适的羧基部分保护基包括苄基，叔丁基等，以及同位素等。合适的氨基和酰氨基保护基包括乙酰基，三氟乙酰基，叔丁氧基羰基，苄氧基羰基等。合适的羟基保护基包括苄基等。其他合适的保护基团是本领域普通技术人员所熟知的。
[0101]
在本技术中，“任选的”、“任选地”、“较佳地”或“更佳地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。
[0102]
在本技术中，术语“盐”或“药学上可接受的盐”，包括药学上可接受的酸加成盐和药学上可接受的碱加成盐。术语“药学上可接受的”，是针对那些化合物、材料、组合物和/或剂型而言，它们在可靠的医学判断的范围之内，适用于与人类和动物的组织接触使用，而没有过多的毒性、刺激性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
[0103]“药学上可接受的酸加成盐”是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。除了药学可接受的盐外，本发明还考虑其他盐。它们可以在化合物纯化中或在制备其它药学上课接受的盐中充当中间体或可用于本发明化合物的鉴别、表征或纯化。
[0104]
术语“胺盐”是指用酸中和烷基伯胺、仲胺或叔胺得到的产物。所述酸包括本技术中所述的无机酸或有机酸。
[0105]
术语“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体、非对应异构体和构象异构体。
[0106]
依据原料和方法的选择，本发明化合物可以以可能的异构体中的一个或它们的混合物的形式存在，例如作为纯旋光异构体，或作为异构体混合物，如作为外消旋和非对映异构体混合物，这取决于不对称碳原子的数量。当描述具有光学活性的化合物时，使用前缀d和l或r和s来表示就分子中的手性中心(或多个手性中心)而言分子的绝对构型。前缀d和l或( )和(
–
)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(
–
)或l表示化合物是左旋的。前缀为( )或d的化合物是右旋的。
[0107]
当将本发明式中与手性碳的键描写直成线时，应当理解为，手性碳的(r)和(s)两种构型和由此产生的其对映体纯的化合物和混合物两者包括在该通式范围内。本文中消旋体或者对映体纯的化合物的图示法来自maehr，j.chem.ed.1985，62:114-120。用楔形键和虚线键表示一个立体中心的绝对构型。
[0108]
术语“互变异构体”是指因分子中某一原子在两个位置迅速移动而产生的官能团异构体。本发明化合物可表现出互变异构现象。互变异构的化合物可以存在两种或多种可相互转化的种类。质子移变互变异构体来自两个原子之间共价键合的氢原子的迁移。互变异构体一般以平衡形式存在，尝试分离单一互变异构体时通常产生一种混合物，其理化性质与化合物的混合物是一致的。平衡的位置取决于分子内的化学特性。例如，在很多脂族醛和酮如乙醛中，酮型占优势；而在酚中，烯醇型占优势。本发明包含化合物的所有互变异构形式。
[0109]
在本技术中，“药物组合物”是指本发明化合物与本领域通常接受的用于将生物活性化合物输送至哺乳动物(例如人)的介质的制剂。该介质包括药学上可接受的载体。药物组合物的目的是促进生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0110]
在本技术中，“药学上可接受的载体”包括但不限于任何被相关的政府管理部门许可为可接受供人类或家畜使用的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、增甜剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、矫味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂。
[0111]
术语“溶剂化物”指本发明化合物或其盐包括以分子间非共价力结合的化学计量或非化学计量的溶剂，当溶剂为水时，则为水合物。
[0112]
术语“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发
明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基或者氨基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基。
[0113]
本发明的化合物可以在一个或多个构成该化合物的原子上包含非天然比例的原子同位素。例如，可用放射性同位素标记化合物，比如氘(2h)，氚(3h)，碘-125(
125
i)或c-14(
14
c)。本发明的化合物的所有同位素组成的变换，无论放射性与否，都包括在本发明的范围之内。
[0114]
术语“辅料”是指可药用惰性成分。术语“赋形剂”的种类实例非限制性地包括粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、稳定剂、填充剂和稀释剂等。赋形剂能增强药物制剂的操作特性，即通过增加流动性和/或粘着性使制剂更适于直接压缩。
[0115]
本文所用的术语“治疗”和其它类似的同义词包括以下含义：
[0116]
(i)预防疾病或病症在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病或病症，但尚未被诊断为已患有该疾病或病症时；
[0117]
(ii)抑制疾病或病症，即遏制其发展；
[0118]
(iii)缓解疾病或病症，即，使该疾病或病症的状态消退；或者
[0119]
(iv)减轻该疾病或病症所造成的症状。
[0120]
各步骤的反应，反应温度可因溶剂、起始原料、试剂等适宜选择，反应时间也可因反应温度、溶剂、起始原料、试剂等适宜选择。各步骤反应结束后，目标化合物可按常用方法自反应体系中进行分离、提纯等步骤，如过滤、萃取、重结晶、洗涤、硅胶柱层析等方法。在不影响下一步反应的情况下，目标化合物也可不经过分离、纯化直接进入下一步反应。
[0121]
有益效果
[0122]
本发明人经过广泛而深入的研究，意外地开发了一种作为ep4拮抗剂的稠环化合物，所述化合物对ep4具有有效的拮抗作用，与ep4受体具有良好的亲和力。另外，本发明提供了一种作为ep4拮抗剂的稠环化合物及用于制备该化合物的中间体及制备方法，所述方法操作简单、收率高、纯度高，可用于医药工业化生产。
具体实施方式
[0123]
以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。
[0124]
本发明所述的式i化合物可以通过下文所述的合成方法制备，其中通式的取代基具有上文给出的含义。这些方法旨在说明本发明而不是限制其主题和对于这些实施例所要求保护的化合物的范围。本发明所述一种作为ep4拮抗剂的稠环化合物及其制备方法和用途，所述方法包括以下合成路线中的任一步骤：
[0125][0126]
当环a不存在时，中间体b-1具有结构其通过如下路线制备得到：
[0127][0128]
将中间体b-6与三甲基氧化锍碘化物、钠氢混合反应后得到中间体b-5，再脱去羧基的保护基pg2，得到中间体b-1。所述羧基的保护基pg2包括c
1-c6烷基、苯基取代的c
1-c6烷基；较佳地为c
1-c6烷基，更佳地为甲基、乙基、丙基、叔丁基。
[0129]
上述各式中，r3为c
1-c6羧基或c
1-c6酰胺基；较佳地，r3为c
1-c6羧基；更佳地，r3为丁酸。所述方法还包括将所述r3经羧基保护基保护后，再与中间体b-1反应，得到经羧基保护基保护的式i所示化合物，脱去经羧基保护基保护的式i所示化合物中的羧基保护基，得到式i所示化合物。所述羧基保护基包括c
1-c6烷基、苯基取代的c
1-c6烷基；较佳地为c
1-c6烷基，更佳地为甲基、乙基、丙基、叔丁基。
[0130]
所述步骤i)任选地在氮气保护下反应；和/或在催化剂存在下反应；其中，优选的催化剂为铑催化剂和铜催化剂，更优选的催化剂为醋酸铑。
[0131]
根据式i化合物中各个基团的不同，可以选择不同的合成路线和中间体，当取代基中存在活性基团(例如羧基、氨基、羟基等)时，可以根据需要将活性基团通过保护基进行保护后再参与反应，在反应完成后，再除所述保护基。其中一个或多个反应性位点被一个或多个保护基团(也称为保护基团)封闭的那些化合物为本发明所述式i化合物的“受保护的衍生物”。例如，合适的羧基部分保护基包括苄基、叔丁基、甲基、乙基等。合适的氨基和酰氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。合适的羟基保护基包括苄基等。其他合适的保护基团是本领域普通技术人员所熟知的。
[0132]
优选地，所述反应需要惰性气体保护，所述惰性气体包括但不限于：氮气、氦气、氖气、氩气。
[0133]
本发明各步反应优选地在惰性溶剂中进行，所述惰性溶剂包括但不限于：甲苯、苯、水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、n-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、四氢呋喃二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺、n,n-二甲基乙酰胺、二氧六环，或其组合物。
[0134]
缩写定义如下：
[0135]
符号或单位：
[0136]
ic
50
：半数抑制浓度，指达到最大抑制效果一半时的浓度
[0137]
m：mol/l，例如正丁基锂(14.56ml，29.1mmol，2.5m的正己烷溶液)表示摩尔浓度为2.5mol/l的正丁基锂的正己烷溶液
[0138]
n：当量浓度，例如2n盐酸表示2mol/l盐酸溶液
[0139]
试剂：
[0140]
dcm：二氯甲烷
[0141]
dipea：也可写为diea，二异丙基乙胺，亦即n,n-二异丙基乙胺
[0142]
dmf：n,n-二甲基甲酰胺
[0143]
dmso：二甲基亚砜
[0144]
ea：乙酸乙酯
[0145]
et3n：三乙胺
[0146]
meoh：甲醇
[0147]
pe：石油醚
[0148]
thf：四氢呋喃
[0149]
试验或检测方法：
[0150]
hplc：高效液相色谱
[0151]
sfc：超临界流体色谱
[0152]
实施例1：化合物i-1的合成
[0153]
合成路线如下：
[0154][0155]
第一步：3-溴-4-(羟甲基)苯甲酸(b1-2)的合成
[0156][0157]
室温下将化合物3-溴-4-(羟甲基)苯甲酸甲酯(b1-1)(1.0g,4.08mmol)加入到四氢呋喃(20ml)和水(20ml)中，加入氢氧化钠(0.5g,12.5mmol)，搅拌12h。用1n盐酸调节ph＝3，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物3-溴-4-(羟甲基)苯甲酸(白色固体粗品，1.0g,产率100％)。
[0158]
第二步：3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(b1-3)的合成
[0159][0160]
室温下将化合物3-溴-4-(羟甲基)苯甲酸(1.0g,4.08mmol)加入到二氯甲烷(30ml)中，加入异丙胺(300mg,5.08mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.6g,4.9mmol)，n,n-二异丙基乙胺(1.05g,8.1mmol)，室温搅拌16h。加入水(50ml)稀释，用二氯甲烷(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝4:1)得到化合物3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(无色液体粗品，0.8g,产率72％)。lc-ms,m/z(esi):272.2[m h]

。
[0161]
第三步：4-((烯丙基氧)甲基)-3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(b1-4)的合成
[0162][0163]
室温下将化合物3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(800mg,2.94mmol)加入到四氢呋喃(20ml)中，加入60％钠氢(488mg,12.2mmol)，室温搅拌0.5h，加入烯丙基溴(532mg,4.4mmol)，室温搅拌3h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物4-((烯丙基氧)甲基)-3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(白色固体粗品，1.0g,产率100％)。lc-ms,m/z(esi):312.2[m h]

。
[0164]
第四步：n-异丙基-4-亚甲基异色烷-6-甲酰胺(b1-5)的合成
[0165][0166]
室温下将化合物4-((烯丙基氧)甲基)-3-溴-4-(羟甲基)-n-异丙基苯甲酰胺(1.0g,3.2mmol)加入到n,n-二甲基乙酰胺(10ml)中，加入碳酸铯(2.0g,6.4mmol)，四三苯基膦钯(7.39mg,0.64mmol)，四丁基碘化铵(1.18g,3.2mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到化合物n-异丙基-4-亚甲基异色烷-6-甲酰胺(白色固体粗品，350mg,产率47％)。lc-ms,m/z(esi):232.3[m h]

。
[0167]
第五步：6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸乙酯(b1-6)的合成
[0168][0169]
室温下将原料n-异丙基-4-亚甲基异色烷-6-甲酰胺(300mg,1.3mmol)加入到二氯甲烷(20ml)中，氮气保护下，加入醋酸铑(265mg,0.6mmol)，加热至50℃，加入重氮乙酸乙酯(0.5ml,6.0mmol)，搅拌0.5h。冷却至室温，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝5:1)得到化合物6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸乙酯(白色固体粗品，80mg,产率20％)。lc-ms,m/z(esi):318.2[m h]

。
[0170]
第六步：6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸(b1-7)的合成
[0171][0172]
室温下将化合物6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸乙酯
(38mg,0.12mmol)加入到四氢呋喃(5ml)和水(5ml)中，加入氢氧化锂(15mg,0.36mmol)，室温搅拌16h。用1n盐酸调节ph＝3，加入水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸(白色固体粗品，40mg,产率100％)。lc-ms,m/z(esi):290.3[m h]

。
[0173]
第七步：4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b1-8)的合成
[0174][0175]
室温下将化合物6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酸(28mg,0.096mmol)加入到5ml二氯甲烷中，加入吡啶(0.25ml)，加入4-(2-氨基-4-氰基苯基)丁酸乙酯(23mg,0.10mmol)，冷却至0℃，加入1滴三氯氧磷，室温搅拌16h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(白色固体，22mg,产率45％)。lc-ms,m/z(esi):504.3[m h]

。
[0176]
第八步：4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(i-1)的合成
[0177][0178]
室温下将化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(22mg,0.43mmol)加入到四氢呋喃(5ml)和水(5ml)中，加入氢氧化锂(8.9mg,0.21mmol)，室温搅拌4h。用1n盐酸调节ph＝3，浓缩，残留物经酸性制备方法a(酸性制备方法a：welch，ultimate c18柱，10μm，21.2mm
×
250mm。流动相a为1
‰
的三氟醋酸纯水溶液，流动相b为乙腈溶液。梯度条件：0～3分钟，流动相a保持90％，3～18分钟梯度洗脱，由90％变为5％，18～22分钟保持5％)制备得到化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)螺环[环丙烷-1,4'-异色烷]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(白色固体，4.5mg,产率22％)。
[0179]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.33(s,1h),8.40(t,1h),8.96(s,1h),7.67(q,1h),7.56(q,1h),7.45(t,2h),7.15(d,1h),4.83(d,2h),4.12-4.04(m,2h),3.92(d,1h),2.70-2.64(m,3h),2.54(s,1h),2.16(t,2h),1.71(t,3h),1.56(t,1h),1.19(d,6h)。
[0180]
lc-ms,m/z(esi):476.3[m h]

。
[0181]
实施例2：化合物i-2的合成
[0182]
合成路线如下：
[0183][0184]
第一步：6-溴-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘(b2-2)的合成
[0185][0186]
室温下将化合物6-溴-2,3-二氢-1,3-甲萘-4(1h)-酮(1.48g,6.25mmol)加入到四氢呋喃(30ml)中，加入μ-氯-μ-亚甲基[二(环戊二烯基)钛]-二甲基铝(3.56g,12.5mmol)，搅拌12h。加入水(50ml)稀释，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到化合物6-溴-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘(b2-2)(白色固体粗品，850mg,产率58％)。
[0187]
第二步：4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸乙酯(b2-3)的合成
[0188][0189]
室温下将化合物6-溴-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘(910mg,3.89mmol)加入到乙醇(50ml)中，加入三乙胺(1.18g,11.7mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(477mg,0.58mmol)，通入一氧化碳，加热至80℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到化合物4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸乙酯(b2-3)(白色固体粗品，870mg,产率98％)。lc-ms,m/z(esi):
229.2[m h]

。
[0190]
第三步：4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸(b2-4)的合成
[0191][0192]
室温下将化合物4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸乙酯(705mg,3.1mmol)加入到四氢呋喃(8ml)和水(8ml)中，加入氢氧化锂(650mg,15.5mmol)，室温搅拌16h。用1n盐酸调节ph＝3，加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸(b2-4)(白色固体粗品，620mg,产率100％)。lc-ms,m/z(esi):201.2[m h]

。
[0193]
第四步：n-异丙基-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酰胺(b2-5)的合成
[0194][0195]
室温下将化合物4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酸(620mg,3.1mmol)加入到dmf(20ml)中，加入异丙胺(201mg,3.4mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.53g,4.0mmol)，n,n-二异丙基乙胺(1.2g,9.3mmol)，室温搅拌16h。加入水(50ml)稀释，用ea(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得化合物n-异丙基-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酰胺(b2-5)(白色固体粗品，750mg,产率100％)。lc-ms,m/z(esi):242.2[m h]

。
[0196]
第五步：6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸乙酯(b2-6)的合成
[0197][0198]
室温下将原料n-异丙基-4-亚甲基-1,2,3,4-四氢-1,3-甲萘-6-甲酰胺(700mg,2.9mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，加入重氮乙酸乙酯(1.65g,14.5mmol)，醋酸铑(257mg,0.58mmol)，加热至40℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(50ml)稀释，用dcm(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到化合物6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸乙酯(b2-6)(白色固体粗品，560mg,产率59％)。lc-ms,m/z(esi):328.2[m h]

。
[0199]
第六步：6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸(b2-7)的合成
[0200][0201]
室温下将化合物6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸乙酯(560mg,1.71mmol)加入到四氢呋喃(6ml)和水(6ml)中，加入氢氧化锂(360mg,8.56mmol)，室温搅拌16h。用1n盐酸调节ph＝3，加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到化合物6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸(b2-7)(白色固体粗品，405mg,产率79％)。lc-ms,m/z(esi):300.2[m h]

。
[0202]
第七步：4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b2-8)的合成
[0203][0204]
室温下将化合物6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸(322mg,1.1mmol)加入到吡啶(10ml)中，加入4-(2-氨基-4-氰基苯基)丁酸乙酯(255mg,1.1mmol)，冷却至0℃，加入三氯氧磷(843mg,5.5mmol)，室温搅拌16h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b2-8)(白色固体，300mg,产率54％)。lc-ms,m/z(esi):514.3[m h]

。
[0205]
第八步：4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(i-2)的合成
[0206][0207]
室温下将化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(300mg,0.58mmol)加入到四氢
呋喃(6ml)和水(6ml)中，加入氢氧化锂(50mg,1.2mmol)，室温搅拌16h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得化合物4-(4-氰基-2-((1s,2r)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(i-2)(白色固体，120mg,产率42％)。
[0208]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.09(s,1h),9.59(s,1h),7.73(t,3h),7.52-7.48(m,2h),7.32(d,1h),7.08(d,1h),4.08-3.99(m,1h),3.27(t,1h),2.46(t,4h),2.24(t,1h),2.07(t,1h),1.99-1.86(m,4h),1.48-1.39(m,4h),1.12-1.06(m,6h)。lc-ms,m/z(esi):486.3[m h]

。
[0209]
实施例3：化合物i-3的合成
[0210]
合成路线如下：
[0211][0212]
第一步：(e)-3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸甲酯(b3-2)的合成
[0213][0214]
室温下将化合物3-溴-苯甲酸甲酯(2.5g,23.4mmol)加入到甲苯(30ml)中，加入丙烯酸叔丁酯(4.5g,35.1mmol)，二三苯基膦二氯化钯(0.4g,0.58mmol)，三乙胺(4.8ml,35mmol)，氮气保护下加热至100℃，搅拌16h。冷却至室温，加入水(30ml)，用乙酸乙酯(30ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(纯石油醚)得到化合物(e)-3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸甲酯(b3-2)(白色固体粗品，1.3g,产率43％)。
[0215]
第二步：3-(2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸甲酯(b3-3)的合成
[0216][0217]
室温下将化合物(e)-3-(3-(叔丁氧基)-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸甲酯(2.3g,8.8mmol)加入到二甲亚砜(50ml)和四氢呋喃(50ml)中，加入三甲基氧化锍碘化物(3.9g,17.6mmol)，60％钠氢(352mg,8.8mmol)，室温搅拌16h。加入水(100ml)稀释，用乙酸乙酯(200ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝20:1)得到化合物3-(-2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸甲酯(b3-3)(无色液体粗品，643mg,产率27％)。lc-ms,m/z(esi):277.2[m h]

。
[0218]
第三步：3-(2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸(b3-4)的合成
[0219][0220]
室温下将化合物3-(2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸甲酯(640mg,2.3mmol)加入到四氢呋喃(10ml)和水(3ml)中，加入氢氧化锂(290mg,6.9mmol)，室温搅拌3h。用1n盐酸调节ph＝7，加入水(10ml)稀释，用乙酸乙酯(20ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到化合物白色固体粗品得到化合物3-(2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸(b3-4)(白色固体粗品，565mg,产率93％)。lc-ms,m/z(esi):263.2[m h]

。
[0221]
第四步：2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸叔丁酯(b3-5)的合成
[0222][0223]
室温下将化合物3-(2-(叔丁氧羰基)环丙基)苯甲酸(565mg,2.16mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，加入n,n-二异丙基乙胺(413mg,3.2mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.2g,3.2mmol)，异丙胺(153mg,2.6mmol)，室温搅拌2h。加入水(10ml)稀释，用二氯甲烷(10ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，
过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝3:1)得到化合物2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸叔丁酯(b3-5)(白色固体，535mg,产率82％)。lc-ms，m/z(esi):304.3[m h]

。
[0224]
第五步：2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸(b3-6)的合成
[0225][0226]
室温下将原料2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸叔丁酯(535mg,1.7mmol)加入到二氯甲烷(20ml)中，加入三氟乙酸(4ml)，搅拌2h。浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到化合物2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸(b3-6)(白色固体粗品，400mg,产率92％)。lc-ms,m/z(esi):248.2[m h]

。
[0227]
第六步：4-(4-氰基-2-((1r,2r)-2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b3-7)的合成
[0228][0229]
室温下将化合物2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酸(100mg,0.4mmol)加入吡啶(3ml)，加入4-(2-氨基-4-氰基苯基)丁酸乙酯(93mg,0.4mmol)，冷却至0℃，加入三氯氧磷(367mg,2.40mmol)，低温搅拌2h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(50ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝3:2)得到化合物4-(4-氰基-2-((1r,2r)-2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b3-7)(白色固体，130mg,产率70％)。lc-ms,m/z(esi):462.6[m h]

。
[0230]
第七步：4-(4-氰基-2-((1r,2r)-2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)丁酸(i-3)的合成
[0231][0232]
室温下将化合物4-(4-氰基-2-((1r,2r)-2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(130mg,0.28mmol)加入到四氢呋喃(5ml)和水(3ml)中，加入氢氧化锂(35mg,0.84mmol)，室温搅拌16h。用1n盐酸调节ph＝7，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，分液，
合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(二氯甲烷:甲醇(v/v)＝20:1)得到化合物4-(4-氰基-2-((1r,2r)-2-(3-(异丙基甲酰胺)苯基)环丙烷-1-甲酰胺)苯基)丁酸(i-3)(白色固体，6.7mg,产率5.4％)。
[0233]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.14(s,1h),9.83(s,1h),8.21(d,1h),8.04(s,1h),7.68(d,1h),7.67(s,1h),7.57(t,1h),7.43(dd,2h),4.14-4.06(m,2h),2.78-2.62(m,2h),2.49-2.38(m,1h),2.34(s,1h),2.24-2.20(m,2h),1.76(t,2h),1.52-1.46(m,2h),1.18(d,6h)。
[0234]
lc-ms,m/z(esi):434.6[m h]

。
[0235]
实施例4：化合物i-4的合成
[0236]
合成路线如下：
[0237][0238]
第一步：4-(4-氰基-2-((1s,2s)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(b4-1)的合成
[0239][0240]
室温下将化合物6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酸(b2-7)(322mg,1.1mmol)加入到吡啶(10ml)中，加入4-(2-氨基-4-氰基苯基)丁酸乙酯(255mg,1.1mmol)，冷却至0℃，加入三氯氧磷(843mg,5.5mmol)，室温搅拌16h。加入水(30ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到化合物4-(4-氰基-2-((1s,2s)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(4-1)(白色固体，240mg，产率43％)。lc-ms,m/z(esi):514.3[m h]

。
[0241]
第二步：4-(4-氰基-2-((1s,2s)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(i-4)的合成
[0242]
[0243]
室温下将化合物4-(4-氰基-2-((1s,2s)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸乙酯(200mg,0.39mmol)加入到四氢呋喃(4ml)和水(4ml)中，加入氢氧化锂(33mg,0.78mmol)，室温搅拌16h。加入水(20ml)稀释，用乙酸乙酯(10ml
×
3)萃取，分液，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝2:1)得到化合物4-(4-氰基-2-((1s,2s)-6'-(异丙基甲酰胺)-2',3'-二氢-1'h-螺环[环丙烷-1,4'-[1,3]甲萘]-2-甲酰胺)苯基)丁酸(i-4)(白色固体，150mg,产率79％)。
[0244]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.07(s,1h),9.87(s,1h),8.13(d,1h),7.77(d,1h),7.60-7.55(m,2h),7.42(d,2h),7.13(d,1h),4.14-4.09(m,1h),3.29-3.24(m,2h),2.63-2.57(m,4h),2.42(t,1h),2.18(t,2h),1.72(t,2h),1.68-1.58(m,2h),1.52(t,2h),1.18-1.10(m,6h)。
[0245]
lc-ms,m/z(esi):486.3[m h]

。
[0246]
测试例1：ep4拮抗作用测定实验
[0247]
化合物对ep4拮抗作用的测定在高表达人源ep4受体的cho稳转细胞株中进行。细胞经胰蛋白酶消化后，重悬于缓冲液中(1
×
hbss,0.1％bsa,20mm hepes和500μm ibmx)，每孔接种8000个细胞于384孔板，接种体积15μl。用实验缓冲液制备8x浓度的化合物工作液，随后加入2.5μl 8x化合物工作液至上述384孔板中，于37℃孵育30min。用实验缓冲液制备8x浓度的激动剂pge2工作液(4nm)，每孔加入2.5μl至上述384孔板中(pge2终浓度为0.5nm)，于37℃孵育30min。反应完成后，根据camp测试试剂盒(perkin elmer,cat#trf0263)说明书中的方法对细胞中的camp的含量进行定量。计算测试化合物的拮抗作用(ic
50
值)。
[0248]
表1测试化合物对ep4的拮抗作用
[0249]
测试化合物ic
50
(nm)i-142i-238i-327i-4》100
[0250]
实验结果表明，本发明化合物对ep4具有很好的拮抗作用。
[0251]
测试例2：放射性配体ep4受体结合测定
[0252]
使用重组人ep4受体膜蛋白(从过表达人ep4受体的293细胞制备)进行放射性配体ep4结合测定。将待测化合物和pge2在dmso溶剂中配制成10mm的储备液，然后使用缓冲液(50mm hbss,0.1％bsa,500mm nacl)梯度稀释8个浓度点的4
×
工作液。将1μl化合物工作液、dmso、pge2工作液分别加到测定板中，加入100μl的ep4受体膜蛋白(20μg/孔)和100μl放射性配体[3h]-pge2(perkinelmer,cat:net428250uc,lot:2469552)(终浓度1.5nm)，密封室温下孵育1小时。在室温下，用0.5％bsa，50μl/每孔浸泡unifilter-96gf/c滤板(perkin elmer)至少30min。结合完成后，使用perkin elmer filtermate harvester通过gf/c板过滤反应混合物，然后清洗滤板，在50℃下将滤板干燥1小时。干燥后，使用perkin elmer unifilter-96密封胶带密封滤板孔的底部，加入50μl的microscint
tm-20 cocktail(perkin elmer)，密封滤板顶部。使用perkin elmer microbeta2 reader读取过滤器上捕获的3h计数。
[0253]
使用graphpad prism 5分析数据，按以下公式计算抑制率：
[0254]
抑制率(％)＝100-(测试组-pge2组)/(dmso组-pge2组)*100
[0255]
根据化合物不同浓度的抑制率，计算化合物通过放射性配体ep4结合测定的和ep4结合ki值。
[0256]
表2通过放射性配体ep4结合测定的化合物ki值
[0257]
测试化合物ki(nm)i-122i-294i-377i-4＞100
[0258]
实验结果表明，本发明化合物与ep4受体具有良好的亲和力。
[0259]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。