CD73抑制剂及其在医药上的应用的制作方法

cd73抑制剂及其在医药上的应用
技术领域
1.本发明涉及一种cd73抑制剂，其具有癌症治疗活性。本发明还涉及这些化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。


背景技术：

2.胞外5'-核苷酸酶(ecto-5'-nucleotidase,cd73)是一种细胞膜上的糖蛋白，在多种细胞类型的细胞膜表面存在，包括内皮细胞、淋巴细胞、基质细胞和肿瘤细胞等。cd73能够催化细胞外5'-磷酸腺苷(5'-amp)生成腺苷，而腺苷可诱导免疫抑制效应，促进肿瘤增殖和/或转移。此外，cd73还能够以非免疫相关机制促进肿瘤生成，如促进肿瘤血管生成、促进肿瘤细胞对细胞外基质蛋白的粘附等。临床上，cd73高水平表达与多种癌症类型的淋巴结转移和不良预后相关，已发现cd73是前列腺癌和三阴性乳腺癌患者的独立预后因素。
3.靶向cd73的药物成为当前药物研发热点领域之一，已有品种进入临床阶段。在研品种既包括大分子抗体，也包括小分子药物。本发明将提供一种新型结构的小分子cd73抑制剂，具有良好的抗肿瘤活性。


技术实现要素：

4.本发明提供一种通式(i)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐：
[0005][0006]
其中，
[0007]
r1选自h、卤素、氰基、取代或未取代的c
1-3
烷基、取代或未取代的c
1-3
烷氧基、取代或未取代的c
3-6
环烷基、取代或未取代的c
2-4
烯基、取代或未取代的c
2-4
炔基；
[0008]
r2独立地选自h、＝ch2、＝o、＝s、酰基、氰基、卤素、硝基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、-c
0-3
亚烷基-orb、-c
0-3
亚烷基-n(rb)2、-c
0-3
亚烷基-s(＝o)rb、-c
0-3
亚烷基-s(＝o)2rb、-c
0-3
亚烷基-srb、-c
0-3
亚烷基-s(rb)5、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)rb、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)orb、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)n(rb)2、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-c
3-14
环烷基、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-(3-14元杂环烷基)、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-c
6-14
芳基或取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-(5-14元杂芳基)，每个rb独立地为h、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基或c
1-6
卤代烷基。
[0009]
一些实施方式中，式(i)中的r1选自卤素、氰基、c
1-3
烷基或c
1-3
烷氧基，优选为氯、氰基、甲基或甲氧基。
[0010]
一些实施方式中，式(i)中的r2选自h、卤素、c
1-3
烷基、＝o或＝ch2，优选为h。
[0011]
一些实施方式中，式(i)选自如下化合物：
[0012][0013]
一些实施方式中，一种制备通式(i)化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐的方法包括：
[0014][0015]
通式(ii)化合物在酸性条件下反应，得到通式(i)化合物，
[0016]
其中r1和r2的定义如式(i)所述。
[0017]
本发明还提供了一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含治疗有效量的至少一种式(i)所示的化合物和至少一种药学上可接受的辅料。
[0018]
本发明进一步提供了一种药物组合物，其特征在于，所述的治疗有效量的至少一种式(i)所示的化合物和药学上可接受的辅料的质量百分比为0.0001:1-10。
[0019]
本发明提供了结构式(i)所示化合物或药物组合物在制备药物中的应用。
[0020]
本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：
[0021]
作为优选，所述应用为制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。
[0022]
作为优选，所述应用为制备用于治疗由cd73介导的疾病的药物的应用。作为优选，所述疾病是癌症。
[0023]
作为优选，所述癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。
[0024]
本发明还提供了一种治疗和/或预防的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(i)所示化合物或含其的药物组合物。
[0025]
本发明还提供了一种治疗和/或预防由cd73介导的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(i)所示化合物或含其的药物组合物。
[0026]
本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(i)所示化合物或含其的药物组合物。
[0027]
作为优选，在上述方法中，所述cd73介导的疾病是癌症。
[0028]
除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。
[0029]
例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
[0030]
在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“基
1-8烷基”中的“1-8”是指包含有1、2、3、4、5、6、7或8个碳原子的直链或支链形式排列的基团。
[0031]
在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的赋形剂的组合物可以被解释为表示该组合物包括“一种或多种”药学上可接受的赋形剂。
[0032]
术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括碳环的原子的单环或稠环芳香基团，具有完全共轭的π电子体系。优选芳基为6到14元的单环或多环的芳香环基团。优选为苯基、萘基。最优选为苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环。
[0033]
术语“杂环基”，在本发明中，除非另有说明，是指由碳原子和1-3个选自n、o或s的杂原子组成的未取代或取代的3-14元稳定环系统，其为饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3-14个碳原子，其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。该杂环基可以被连接到任何的杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。这些杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。所述杂环基可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。
[0034]
术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的稳定的5元或6元单环芳族环系统或未取代或取代的9-14元苯并稠合杂芳族环系统或多环杂芳族环系统，其由碳原子和1-4个选自n、o或s的杂原子组成，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。杂芳基可以连接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。
[0035]
术语“环烷基”是指具有3-14个碳原子的环状饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所述环烷基可以稠合于芳基、杂环基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。
[0036]
术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于h、＝ch2、＝o、＝s、酰基、氰基、卤素、硝基、c
1-6
烷基、c
1-6
卤代烷基、-c
0-3
亚烷基-orb、-c
0-3
亚烷基-n(rb)2、-c
0-3
亚烷基-s(＝o)rb、-c
0-3
亚烷基-s
(＝o)2rb、-c
0-3
亚烷基-srb、-c
0-3
亚烷基-s(rb)5、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)rb、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)orb、-c
0-3
亚烷基-c(＝o)n(rb)2、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-c
3-14
环烷基、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-(3-14元杂环烷基)、取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-c
6-14
芳基或取代或未取代的-c
0-3
亚烷基-(5-14元杂芳基)，每个rb独立地为h、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基或c
1-6
卤代烷基。在一些实施例中，取代基独立地选自包含-f、-cl、-br、-i、-oh、三氟甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、-sch3、-sc2h5、甲醛基、-c(och3)、氰基、硝基、-cf3、-ocf3、氨基、二甲基氨基、甲硫基、磺酰基和乙酰基的基团。
[0037]
取代烷基的实例包括但不限于2,3-二羟基丙基、2-氨基乙基、2-羟乙基、五氯乙基、三氟甲基、甲氧基甲基、五氟乙基、苯基甲基、二恶茂基甲基和哌嗪基甲基。
[0038]
取代烷氧基的实例包括但不限于2-羟基乙氧基、2-氟乙氧基、2,2-二氟乙氧基、2-甲氧基乙氧基、2-氨基乙氧基、2,3-二羟基丙氧基、环丙基甲氧基、氨基甲氧基、三氟甲氧基、2-二乙基氨基乙氧基、2-乙氧基羰基乙氧基、3-羟基丙氧基。
[0039]
术语“药学上可接受的盐”是指从药学上可接受的无毒的碱或酸制备的盐。
[0040]
由于式(i)所示化合物将作为药物应用，较优地，使用一定纯度，例如，至少为60％纯度，比较合适的纯度为至少75％，特别合适地纯度为至少98％(％是重量比)。
[0041]
本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是指很容易在体内转化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本技术化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本技术的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。特别优选的衍生物或前药是在施用于患者时可以提高本技术化合物生物利用度的那些化合物(例如，可以使口服的化合物更易于被吸收到血液中)，或者促进母体化合物向生物器官或作用位点(例如脑部或淋巴系统)递送的那些化合物。因此，本发明提供的治疗方法中的术语“给药”是指施用能治疗不同疾病的本发明公开的化合物，或虽未明确公开但对受试者给药后能够在体内转化为本发明公开的化合物的化合物。
[0042]
本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分对映异构体、所有可能的几何异构体及其药学上可接受的盐。
[0043]
当式(i)所示化合物用较重的同位素(例如氘)替代可能提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。
[0044]
当式(i)所示化合物及其药学上可接受的盐存在溶剂化物或多晶型时，本发明包括任何可能的溶剂化物和多晶型。形成溶剂化物的溶剂类型没有特别的限定，只要该溶剂是药学上可以接受的。例如，水、乙醇、丙醇、丙酮等类似的溶剂都可以采用。
[0045]
术语“组合物”，在本发明中，是指包括包含指定量的各指定成分的产品，以及直接或间接地由指定量的各指定成分的组合生产的任何产品。因此，含有本发明的化合物作为活性成分的药物组合物以及制备本发明化合物的方法也是本发明的一部分。
[0046]
本发明提供的药物组合物包括作为活性组分的式(i)所示化合物(或其药学上可接受的盐)、一种药学上可接受的赋形剂及其他可选的治疗组分或辅料。尽管任何给定的情况下，最适合的活性组分给药方式取决于接受给药的特定的主体、主体性质和病情严重程度。本发明的药物组合物可以方便地以本领域公知的单位剂型存在和药学领域公知的任何
制备方法制备。
具体实施方式
[0047]
为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。
[0048]
除非另有说明，本发明所有的一部分和百分比均按重量计算，所有温度均指摄氏度。
[0049]
实施例中使用了下列缩略语：
[0050]
pe:ea：石油醚和乙酸乙酯的比值；
[0051]
pd(dppf)cl2：[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯；
[0052]
pre-tlc:薄层层析硅胶板；
[0053]
dmso：n,n-二甲基甲酰胺；
[0054]
实施例1：(5-(5-((1s，2r，4r)-双环[2.2.1]庚-2-基)-6-氯哒嗪-3-基)嘧啶-2,4(1h，3h)-二酮)的合成
[0055][0056]
步骤1：化合物1-1的合成
[0057]
向250ml的三口瓶中加入双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸(5.6g)和2,5-二氯哒嗪(3.0g)，溶于水(70ml)，加入浓h2so4(3ml)混合均匀。在n2保护下，升温至70℃，然后加入硝酸银(0.34mg)和过硫酸铵(9.12g)，70℃反应1小时。冷却至室温，冰浴下向反应液中滴加氨水,调节ph至9。反应液用乙酸乙酯萃取，然后有机相用无水硫酸钠干燥，过滤得到液体。液体旋干并柱层析分离产物(pe：ea＝20：1),得3.98g白色固体，即化合物1-1。
[0058]
步骤2：化合物1-2的合成
[0059]
50ml的单口瓶中加入化合物1-1(729mg)和2,4-二甲氧基嘧啶-5-硼酸频哪醇酯(552mg)，溶于1,4-二氧六环(10ml)和水(5ml)，加入k2co3(828mg)和pd(dppf)cl2(219mg)，在n2保护下70℃反应1小时。反应完成后，冷却至室温，向反应液中加入水(10ml),并用乙酸乙酯萃取，得到的有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干柱层析分离(pe：ea＝7:1),得602mg白色固体，即化合物1-2。
[0060]
步骤3：化合物1的合成
[0061]
25ml的单口瓶中加入化合物1-2(602mg)，溶于1mol/l盐酸(20ml)中，70℃下反应
3h。待反应完成后，冷却至室温，旋干，加入乙醇(5ml)并搅拌10min,然后过滤得白色固体203mg，即化合物1(纯度99％)。
[0062]
lc-ms：[m h]

＝319.2
[0063]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.58(s,1h),11.54(s,1h),8.33(s,1h),8.29(s,1h),2.89(dd,j＝9.1,5.5hz,1h),2.37
–
2.39(m,2h),1.86(ddd,j＝11.8,9.1,2.3hz,1h),1.64(tt,j＝11.4,4.2hz,1h),1.57(tq,j＝12.1,3.9,3.5hz,1h),1.52
–
1.45(m,1h),1.44
–
1.37(m,2h),1.35
–
1.28(m,1h),1.27
–
1.20(m,1h).
[0064]
实施例2：(5-(5-(((1s，2r，4r)-双环[2.2.1]庚-2-基)-6-甲氧基哒嗪-3-基)嘧啶-2,4(1h，3h)-二酮)的合成
[0065][0066]
步骤1：化合物2-1的合成
[0067]
向50ml的反应瓶中加入化合物1-2(100mg)和甲醇钠(23mg)。在n2保护下，加入甲醇(2ml)并升温至80℃反应12小时。反应完成后，加入水淬灭，并用乙酸乙酯萃取得到有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干并柱层析分离产物(pe：ea＝7：1),得91mg白色固体，即化合物2-1。
[0068]
步骤2：化合物2的合成
[0069]
25ml的单口瓶中加入化合物2-1(91mg)，溶于1mol/l盐酸(10ml)中，70℃下反应3h。待反应完成后，冷却至室温，旋干，加入二氯甲烷(20ml)并搅拌10min,然后过滤得白色固体52mg，即化合物2(纯度96.50％)。
[0070]
lc-ms：[m h]

＝315.2
[0071]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.67(s,1h),11.57(s,1h),8.25(s,1h),8.07(s,1h),4.06(s,3h),2.83(t,j＝7.5hz,1h),2.38
–
2.32(m,2h),1.74(ddd,j＝11.8,9.0,2.3hz,1h),1.67
–
1.53(m,2h),1.53
–
1.46(m,1h),1.45
–
1.33(m,2h),1.33
–
1.23(m,1h),1.20(d,j＝10.0hz,1h).
[0072]
实施例3：(4-((1s，2r，4r)-双环[2.2.1]庚-2-基)-6-(2,4-二氧-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-基)哒嗪-3-腈)的合成
[0073][0074]
步骤1：化合物3-1的合成
[0075]
向50ml的反应瓶中加入化合物1-2(100mg),氰化锌(67mg)，三(二亚苄基丙酮)二钯(27mg)和双(二苯基膦)二茂铁(33mg)。在n2保护下，加入n,n-二甲基甲酰胺(5ml)并升温至100℃反应12小时。反应完成后，加入饱和食盐水淬灭，并用乙酸乙酯萃取得到有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干并柱层析分离产物(pe：ea＝7：1),得
(239mg)和pd(dppf)cl2(71mg)，在n2保护下加入1,4-二氧六环(10ml)和水(5ml)，70℃反应2小时。反应完成后，冷却至室温，向反应液中加入水(10ml),并用乙酸乙酯萃取，得到的有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干柱层析分离(pe：ea＝7:1),得210mg白色固体，即化合物5-1。
[0092]
步骤2：化合物5的合成
[0093]
向25ml的单口瓶中加入化合物5-1(210mg)，加入2ml浓hcl和10ml乙醇，室温反应24h。待反应完成后，冷却至室温，旋干，反相色谱柱层析分离产物(ch3cn/h2o＝30％-55％),得白色固体4.8mg，即化合物5(纯度95.18％)。
[0094]
lc-ms：[m h]

＝311.2.
[0095]
实施例6：(5-(5-((1s，2r，4r)-双环[2.2.1]庚-2-基)-6-(1-乙氧基乙基)哒嗪-3-基)嘧啶-2,4(1h，3h)-二酮)的合成
[0096][0097]
步骤1：化合物6的合成
[0098]
向25ml的单口瓶中加入化合物5-1(210mg)，加入2ml浓盐酸和10ml乙醇，室温反应24h。待反应完成后，冷却至室温，旋干，反相色谱柱层析分离产物(ch3cn/h2o＝30％-55％),得白色固体5.3mg，即化合物6(纯度98.10％)。
[0099]
lc-ms：[m h]

＝357.3
[0100]
对比实施例：化合物d1：(5-(5-(8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基)-6-氯吡啶-3-基)嘧啶-2,4(1h，3h)-二酮盐酸盐)的合成
[0101][0102]
步骤1：化合物7-1的合成
[0103]
100ml的单口瓶中加入4-溴-3,6-二氯哒嗪(500mg)，3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环-2-基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-8-羧酸叔丁酯(810mg)，k2co3(659.6mg)和pd
(dppf)cl2(194.9mg)，在n2保护下加入1,4-二氧六环(10ml)和水(5ml)，70℃反应1小时。反应完成后，冷却至室温，向反应液中加入水(10ml),并用乙酸乙酯萃取，得到的有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干柱层析分离(pe：ea＝3:1),得610mg淡黄色油状物，即化合物7-1。
[0104]
步骤2：化合物7-2的合成
[0105]
100ml的单口瓶中加入化合物7-1(600mg)和2,4-二甲氧基嘧啶-5-硼酸频哪醇酯(455.6mg)，溶于1,4-二氧六环(10ml)和水(5ml)，加入k2co3(473.3mg)和pd(dppf)cl2(139.8mg)，在n2保护下70℃反应1小时。反应完成后，冷却至室温，向反应液中加入水(10ml),并用乙酸乙酯萃取，得到的有机相用无水硫酸钠干燥，并过滤得到液体，然后旋干柱层析分离(pe：ea＝2:1),得420mg淡黄色固体，即化合物7-2。
[0106]
步骤3：化合物d1的合成
[0107]
向50ml的单口瓶中加入化合物7-2(100mg)，溶于1mol/l盐酸(20ml)中，70℃下反应3h。待反应完成后，冷却至室温，旋干，反相色谱柱层析分离产物(ch3cn/h2o＝30％-55％),得白色固体15.0mg，即化合物d1(纯度99.43％)。
[0108]
lc-ms：[m h]

＝332.2
[0109]1h nmr(500mhz,dmso-d6)δ11.71(s,1h),11.56(d,j＝43.1hz,1h),9.10(d,j＝36.0hz,2h),8.43(d,j＝4.8hz,1h),8.29(s,1h),6.25(d,j＝5.0hz,1h),4.40(s,1h),4.26(s,1h),2.98(d,j＝16.5hz,1h),2.28
–
2.16(m,2h),2.10(dd,j＝11.4,6.2hz,1h),1.96(dd,j＝20.2,8.9hz,1h).
[0110]
药理实验
[0111]
实施例1：细胞水平的酶学活性检测
[0112]
将calu-6细胞消化，使用tm buffer(25mm tris,5mm mgcl2,ph 7.5)重悬细胞，按25000细胞、100μl/孔铺96孔板。tm buffer配制梯度浓度的化合物溶液，分别向各孔细胞中加入50μl各浓度的待测化合物dmso溶液，化合物终浓度为20000、6666.7、2222.2、740.7、246.9、82.3、27.4、9.1、3.0、1.0、0.3、0nm(dmso终浓度均为0.625％)。37℃恒温水平摇床预孵育30min，各孔中加入50μl 800μm amp溶液，37℃恒温水平摇床继续孵育120min后，将96孔板离心，每孔转移50μl上清液至新的96孔板中，每孔中加入50μl 130μm atp溶液和100μl cell-titer glo工作液，震荡混匀后室温孵育10min，多功能酶标仪读取luminescence发光值，将发光值读数转换为抑制百分数：
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抑制百分数＝(1-读数/最大值)*100。
[0114]“最大值”为dmso对照。
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用graphpad prism软件进行曲线拟合并得到ic
50
值。
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实施例化合物在calu-6细胞水平的酶学ic
50
数据参见表1。本发明的化合物具有较好活性。
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表1
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化合物名称ic
50
(nm)123.3246.1349.5
4484d11386
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虽然本发明已通过其实施方式进行了全面的描述，但是值得注意的是，各种变化和修改对于本领域技术人员都是显而易见的。这样的变化和修改都应该包括在本发明所附权利要求的范围内。