双阳离子荧光染料的制作方法

技术特征：
1.一种式 a 或 b 荧光染料式 a式 b其中：x = si、ge 或 c；y = me、et、ipr 或 ph；z = 以下项中的任一者：；w = 以下项中的任一者：
；r
1 和 r
2 为以下项的任意组合：并且 l = h、so3h、conh2、co2h、n
3 或经受点击化学官能团的任何部分。2.根据权利要求 1 所述的荧光染料，其中 z = 以下项中的任一者：
。3.根据权利要求 2 所述的荧光染料，其中 z =。4.根据权利要求 1 至 3 中任一项所述的荧光染料，其中所述染料选自由以下项组成的组：
。5.一种用于制备根据权利要求 1 至 4 中任一项所述的荧光染料的方法，所述方法包括以下步骤：a) 用有机锂试剂对二卤化物执行双卤素-金属交换以得到相应的二锂化合物；b) 使所述二锂化合物与烷基酯反应以形成羟基中间体；c) 向所述羟基中间体中加入布朗斯特酸，以通过消除水执行芳构化以形成咪唑；以及d) 使所述咪唑季铵化为咪唑鎓。6.根据权利要求 5 所述的方法，其中季铵化通过用烷基卤化物、烷基甲苯磺酸酯、烷基三氟甲磺酸酯或烷基甲磺酸酯进行的亲核取代来执行。7.根据权利要求 5 所述的方法，其中在路易斯酸存在下用环内酯来执行季铵化。8.根据权利要求 5 所述的方法，其中季铵化用由三氟甲磺酸 2-(三甲基甲硅烷基)苯酯试剂和氟化物供体原位生成的芳炔来执行。9.一种在聚合酶链反应 (pcr) 测定中检测样品中一种或多种靶核酸的存在的方法，其通过以下项进行：
‑ꢀ
使所述样品与用至少一种根据权利要求 1 至 4 中任一项所述的荧光染料标记的寡核苷酸探针接触；以及
‑ꢀ
测量由标记的寡核苷酸生成的荧光信号，从而所述荧光信号的检测指示所述样品中所述一种或多种靶核酸的存在。10.根据权利要求 9 所述的方法，其中所述 pcr 测定为多重 pcr 测定。11.根据权利要求 9 或 10 中任一项所述的方法，其中测量所述荧光信号发生于 65℃或更高的温度下。12.一种在免疫组织化学测定中检测组织样品中一种或多种靶蛋白的存在的方法，其通过以下项进行：
‑ꢀ
使所述组织样品与用至少一种根据权利要求 1 至 4 中任一项所述的荧光染料标记的结合实体接触，所述结合实体与所述靶蛋白直接或间接相互作用；以及
‑ꢀ
显现所述组织样品中所生成的荧光信号，从而所述荧光信号的检测指示所述组织样品中所述一种或多种靶蛋白的存在。13.根据权利要求 12 所述的方法，其中所述结合实体是与所述一种或多种靶蛋白结
合的第一抗体或与所述第一抗体结合的第二抗体。

技术总结
本发明提供了水溶性单阳离子荧光染料和双阳离子荧光染料，其中后者在升高的温度下表现出稳定的荧光。本发明还提供了用于生产所述荧光染料的方法以及在生物测定诸如多重qPCR和组织染色中使用这些染料的方法。和组织染色中使用这些染料的方法。和组织染色中使用这些染料的方法。


技术研发人员：A
受保护的技术使用者：豪夫迈
技术研发日：2020.12.07
技术公布日：2022/7/22