一种富集麦角甾醇黑木耳生产方法

1.本发明涉及黑木耳生产技术领域，更具体的说是一种富集麦角甾醇黑木耳生产方法。


背景技术：

2.黑木耳是人们喜爱的山珍,是我国传统的出口商品,市场潜力大,发展前景好,在国内外市场上货源紧缺,一直供不应求.黑木耳是一种质地鲜脆,滑嫩爽口,营养丰富的食用菌，现有的黑木耳菌种及生产管理技术虽已成熟，但是缺乏对其营养成分和健康因子的重点关注；黑木耳中富含多糖、黑色素、微量元素、磷脂以及麦角甾醇；而这些营养物质富集的生产方法却很少；
3.现有技术只是规定了黑木耳普遍的生产菌种和工艺流程，并没有针对黑木耳的营养特性和健康因子做出相应的调控，无法使黑木耳中的麦角甾醇进行富集。


技术实现要素：

4.为克服现有技术的不足，本发明提供一种富集麦角甾醇黑木耳生产方法，可以使黑木耳中的麦角甾醇进行富集，增加黑木耳的营养价值。
5.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
6.一种富集麦角甾醇黑木耳生产方法，该方法包括以下步骤：
7.步骤一：将菌种接种在活化培养基当中，在25℃的环境温度下培养10d，得到菌种a；
8.步骤二：将菌种a接种至固体培养基当中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；
9.步骤三：加入干预剂，将菌种b接种至液体培养基中，培养后得到菌种c，并使用木屑培养基和水制作出用于菌种c生长的菌包；
10.步骤四：将菌种c接种至菌包上，在菌种c成长为木耳之后进行采收，得到富集麦角甾醇黑木耳。
11.优选的所述活化培养基的原料包括：土豆200g；葡萄糖20g；琼脂15-20g；1000ml水。
12.优选的所述固体培养基的原料包括：土豆200g；麦麸30g；葡萄糖20g；琼脂15-20g；蛋白胨3g；mgso40.5g；kh2po41-1.5g；维生素b10.01g；1000ml水。
13.优选的所述液体培养基的原料包括：土豆200g；麦麸30g；葡萄糖20g；蛋白胨3g；mgso40.5g；kh2po41-1.5g；维生素b10.01g；1000ml水。
14.优选的所述木屑培养基的原料包括：木屑86％；麸皮10％；豆粉2.3％；轻质碳酸钙1.7％。
15.优选的所述干预剂选用米糠油、茉莉酸甲酯和水杨酸中的一种。
16.优选的所述的米糠油含量为0.5-2.5％，茉莉酸甲酯的含量为50-250μmo1/l，水杨
酸的含量为1-1000μmol/l。
17.优选的将所述干预剂加入到液体培养基和木屑培养基中的一种或者两种。
18.优选的所述的活化培养基、固体培养基、液体培养基和木屑培养基均在121℃的温度下进行灭菌。
附图说明
19.下面结合附图和具体实施方法对本发明做进一步详细的说明。
20.图1为本发明中富集麦角甾醇黑木耳生产方法的流程图；
21.图2为本发明中干预剂实验数据表格；
22.图3为本发明中分组实验数据表格。
具体实施方式
23.实施例一：
24.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，并在液体培养基中加入2.5％的米糠油，培养后得到菌种c，并使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)制作出13cm*26cm*0.005cm大小的用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
25.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
26.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
27.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
28.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
29.其中米糠油添加量的确定：首先将等量的米糠油接种到配置好的液体培养基中,使得米糠油的添加量为：0.5、1、1.5、2、2.5％，然后加入菌种b，培养7-12d后，发酵液用干净纱布过滤、蒸馏水洗涤、控干，收集得到五类木耳菌丝，然后冷冻干燥,准确称量菌丝重量,研磨后备用；
30.最后，收获的黑木耳菌丝粉末经过无水乙醇提取后，采用高效液相色谱法测定菌丝中麦角甾醇含量并与没有添加米糠油的液体培养基培养出的木耳菌丝进行对比，最终确定米糠油添加量的2.5％。
31.实施例二：(液体培养基中加入茉莉酸甲酯)
32.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，并在液体培养基中加入200μmo1/l的茉莉酸甲酯，培养后得到菌种c，并使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)制作出13cm*26cm*0.005cm大小的用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
33.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
34.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
35.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
36.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
37.其中茉莉酸甲酯添加量的确定：先将茉莉酸甲酯配制成25mmo1/l的母液，然后经有机滤膜过滤除菌。液体培养基按每瓶100m1分装，并在121℃的温度下灭菌20min，然后冷却后分成5组，分别加入不同量的茉莉酸甲酯无菌母液，使得培养基中分别含有以下5个浓度梯度的茉莉酸甲酯：50μmo1/l,l00μmol/l,150μmol/l，200μmo1/l，250μmol/l,以不含茉莉酸甲酯的培养基为对照。加入菌种b在25℃的温度下静置培养2d，然后在转速150r/min的条件下震荡培养5d，第6d收获菌丝，最后根据菌丝干重及菌丝中麦角甾醇含量最终确定最佳的茉莉酸甲酯浓度，茉莉酸甲酯浓度为200μmo1/l。
38.实施例三：(液体培养基中加入水杨酸)
39.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，并在液体培养基中加入1000μmol/l的水杨酸，培养后得到菌种c，并使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)制作出13cm*26cm*0.005cm大小的用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
40.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
41.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
42.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
43.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
44.水杨酸添加量的确定：将水杨酸加入无水乙醇溶解，配制成母液，有机滤膜过滤除菌。液体培养基按每瓶100m1(250m1三角瓶)分装，121℃灭菌20min，冷却后分成5组分别加入不同浓度水杨酸溶液，使得培养基中水杨酸的浓度分别为：1μmol/l,10μmol/l,l00μmol/l,500μmol/l,1000μmol/l，以不含水杨酸的空白培养基作对照。
45.每瓶接入等量的母液并接种菌种b，25℃静止培养2d后，25℃、150r/min振荡培养7d，收获菌丝，冷冻干燥，称量菌丝重量，无水乙醇提取、测定菌丝麦角甾醇含量，确定水杨酸的最佳添加浓度为1000μmol/l。
46.实施例四：(水杨酸加入到木屑培养基)
47.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，培养后得到菌种c，使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)并加入1000μmol/l的水杨酸制作出用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30
℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
48.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
49.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
50.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
51.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
52.实施例五：(茉莉酸甲酯加入到木屑培养基)
53.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，培养后得到菌种c，使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)并加入200μmo1/l的茉莉酸甲酯制作出用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
54.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
55.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
56.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
57.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
58.实施例六：(米糠油加入到木屑培养基)
59.首先将菌种接种至活化培养基中，在25℃的环境温度下活化培养10d，得到菌种a；然后将菌种a接种到固体培养基中，在25℃的环境温度下培养7d，得到菌种b；再然后将菌种b接种至液体培养基中，培养后得到菌种c，使用木屑培养基和水混合成湿料(含水量约在60％左右)并加入2.5％的米糠油制作出用于菌种c生长的菌包，待菌包温度降低至30℃时，将菌种c接种至菌包里,接种量为15ml；
60.发菌初期，即接种后1-14d环境温度保持在21℃，相对湿度为60％，暗光培养；
61.发菌中期，即接种后15-40d环境温度保持在25℃，湿度60％，暗光；约30d左右，菌丝长满菌包，即可对菌包进行刺孔，刺孔深度为0.5-0.7cm；
62.发菌后期，即接种后40d环境温度可降到20℃，湿度60％左右，暗光；
63.耳片直径达到3.0-3.5
㎝
、耳根收缩变细、边缘产生皱褶、并有少量孢子弹射时，选择晴天进行采收。采收前1-2d停止喷水，采收时采大留小，用手指捏住耳片基部轻轻拧下，少留耳基，清除老龄耳片，避免引起杂菌感染及害虫为害。
64.实施例七：(干预剂同时加入到木屑培养基和液体培养基中)
65.将干预剂同时加入到液体培养基和木屑培养基当中用于得到最佳效果的实验过程以及效果：
66.第一组(c c)：液体培养基培养的菌种c 木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.15mg/g；
67.第二组(y c)：添加2.5％米糠油的液体培养基培养的菌种c 木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.42mg/g；
68.第三组(m c)：添加200μmol/l茉莉酸甲酯的液体培养基培养的菌种c 木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.48mg/g；
69.第四组(s c)：添加1000μmol/l的水杨酸的液体培养基培养的菌种c 木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.38mg/g；
70.第五组(y y)：添加2.5％米糠油的液体培养基培养的菌种c 添加2.5％米糠油的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：3.30mg/g；
71.第六组(m m)：添加200μmol/l茉莉酸甲酯液体培养基培养的菌种c 添加200μmol/l茉莉酸甲酯的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.54mg/g；
72.第七组(s s)：添加1000μmol/l的水杨酸的液体培养基所得菌种c 添加1000μmol/l水杨酸的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.46mg/g；
73.第八组(c y)：液体培养基所得菌种c 添加2.5％米糠油的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.87mg/g；
74.第九组(c m)：液体培养基所得菌种c 添加200μmol/l茉莉酸甲酯的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.31mg/g；
75.第十组(c s)：液体培养基所得菌种c 添加1000μmol/l水杨酸木屑的培木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量为：2.21mg/g；
76.其中：
77.(c c)为液体培养基培养的菌种c接种到木屑培养基的分组标号；
78.(y c)为添加2.5％米糠油的液体培养基培养的菌种c接种到木屑培养基的分组标号；
79.(m c)为添加200μmol/l茉莉酸甲酯的液体培养基培养的菌种c接种到木屑培养基的分组标号
80.(s c)为添加1000μmol/l的水杨酸的液体培养基培养的菌种c接种到木屑培养基的分组标号；
81.(y y)为添加2.5％米糠油的液体培养基培养的菌种c接种到添加2.5％米糠油的木屑培养基的分组标号；
82.(m m)为添加200μmol/l茉莉酸甲酯液体培养基培养的菌种c接种到添加200μmol/l茉莉酸甲酯的木屑培养基的分组标号；
83.(s s)为添加1000μmol/l的水杨酸的液体培养基所得菌种c接种到添加1000μmol/l水杨酸的木屑培养基的分组标号；
84.(c y)为液体培养基所得菌种c接种到添加2.5％米糠油的木屑培养基的分组标号；
85.(c m)为液体培养基所得菌种c接种到添加200μmol/l茉莉酸甲酯的木屑培养基的分组标号；
86.(c s)为液体培养基所得菌种c接种到添加1000μmol/l水杨酸木屑的培木屑培养基的分组标号；
87.综上，通过实验数据可知，第五组(y y)：添加2.5％米糠油的液体培养基培养的菌
种c接种到添加2.5％米糠油的木屑培养基获得的黑木耳当中麦角甾醇含量最高，为效果最佳的分组方案；
88.同时结合其他分组的实验结果可知，通过在液体培养基和木屑培养基当中均添加干预剂能够进一步提升黑木耳当中麦角甾醇的富集效果；
89.所以通过在加入适量的米糠油、茉莉酸甲酯和水杨酸的情况下，均可以使黑木耳中麦角甾醇含量更高，从而提高黑木耳的营养价值和附加值。
90.本发明通过实现使黑木耳菌种当中麦角甾醇富集以及黑木耳栽培的菌包当中麦角甾醇富集的方法，形成了具有特色的一整套由菌种—菌丝体—子实体(木耳)组成的健康因子麦角甾醇富集方法，提高黑木耳的营养价值和附加值。