一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法与流程

技术特征：
1.一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：样本预处理：将胎盘组织取出，对其进行清理和浸泡消毒，将消毒后的胎盘用清洗液进行清洗，然后剥除胎盘表面羊膜，暴露下面的绒毛膜层；s2：绒毛膜层的获取：剥离全部绒毛膜层组织，使用生理盐水清洗后，仔细剥除绒毛膜层组织中的血管组织，并清洗掉残留血液；s3：原代细胞的分离培养：将获取的绒毛膜层剪成2-3 mm3左右的小块组织，将其均匀平铺于培养瓶中，置于细胞培养箱中待组织贴合培养瓶瓶底后，加入间充质干细胞专用培养基进行原代培养；s4：细胞传代培养：观察培养瓶中组织块周围细胞爬出状态，待细胞融合度达到75 %-90 %后，即可采用间充质干细胞专用培养基对获得的间充质干细胞进行传代扩增培养。2.如权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述间充质干细胞专用培养基包括基础培养基以及添加至所述基础培养基中的培养基添加物，所述培养基添加物至少包括β-巯基乙醇、硫辛酸以及n-乙酰半胱氨酸。3. 如权利要求2所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于，每1l基础培养基中含有以下培养基添加物：100-150μmβ-巯基乙醇、2-5 mg/l硫辛酸以及10-20 mg/ln-乙酰半胱氨酸。4. 如权利要求2所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述培养基添加物还包括20-25 μm亚硒酸钠、10-25 mg/l胰岛素、0.4-2mg/l氢化可的松以及生长因子添加物中的任意一种或多种。5. 如权利要求4所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述生长因子添加物为bfgf，所述bfgf的添加浓度为15-20 μg/l。6.如权利要求2所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述基础培养基为dmem-f12培养基、l-dmem培养基或imdm培养基中的任意一种。7.如权利要求6所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述基础培养基中含有氨基酸、微生物以及无机盐类。8.如权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述传代培养的接种密度为5000-5500个/cm2。9.如权利要求1所述的一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，其特征在于：所述清洗液为含青霉素、链霉素和两性霉素的生理盐水溶液。

技术总结
本发明涉及干细胞培养技术领域，具体涉及一种人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法，该人胎盘绒毛膜间充质干细胞的分离培养扩增方法采用胎盘组织作为间充质干细胞来源，并对培养过程进行改进，使得整个胎盘间充质干细胞培养工艺能够标准化、程序化、规范化，细胞质量达到临床应用标准，且在本发明方法中，通过采用组织块贴壁分离法来获得大量的间充质干细胞，其操作简单、成本较低、细胞活性好、纯度高，能够快速高效获得足量hP-MSCs。MSCs。MSCs。


技术研发人员：李晓玉 杨治权 李若鲲 陈晖 彭阳 马浩天 武威
受保护的技术使用者：北京国卫生物科技有限公司
技术研发日：2022.06.14
技术公布日：2022/7/15