一种肿瘤干细胞筛选和基于肿瘤干细胞的肿瘤类器官构建方法

技术特征：
1.一种基于肿瘤干细胞的肿瘤类器官的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取肿瘤样本置于缓冲液中清洗，加入组织裂解液进行酶解匀浆得到匀浆组织液；(2)将步骤(1)中酶解所得匀浆组织液过滤得到组织来源的肿瘤单细胞，对所得肿瘤单细胞进行重悬，之后铺于细胞芯片上，待细胞沉降进入所述细胞芯片的微孔中，加入培养基培养，得到细胞球；(3)将步骤(2)所得细胞球进行扩增，并铺在改性细胞芯片中，培养2-3天，得到所述肿瘤类器官。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述细胞芯片的微孔直径30μm-1mm；微孔间距5μm-500μm；所述细胞芯片的微孔形状为圆柱、圆锥、长方体或正方体。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述培养基选自添加生长因子的dmem/f12基础培养基；所述生长因子选自胰岛素、氢化可的松、jagged-1、sb431542、bfgf和egf中的一种或多种。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述胰岛素含量为2.5-10μg/ml，氢化可的松浓度为0.2-0.8μg/ml，jagged-1的浓度为0.5-2μm，sb431542的浓度为0.5-3μm，egf的浓度为10-35ng/ml，bfgf的浓度为5-20ng/ml。5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，所述改性细胞芯片的功能性改性选自氨基改性、羧基改性、等离子处理、多巴胺改性或胶原改性。6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，细胞球扩增后铺在改性细胞芯片的具体操作：将细胞球平铺在改性细胞芯片后再加入3-5μm厚度的ecm基质；所述基质为水凝胶材质，所述水凝胶的原料选自pegda、海藻酸钠、壳聚糖、琼脂糖、明胶或甲基丙烯酸明胶中的一种或多种。7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述基质还包括胶原、细胞外基质或特定生长因子。8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述特定生长因子选自egf、bfgf和jagged-1中的一种或多种。9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中，所述改性细胞芯片的尺寸为80-100μm。10.一种肿瘤类器官由权利要求1-9任一项所述的构建方法所得。

技术总结
本发明提供了一种肿瘤干细胞筛选和基于肿瘤干细胞的肿瘤类器官构建方法。本发明所述肿瘤类器官构建方法如下：取肿瘤样本置于缓冲液中清洗，加入组织裂解液进行酶解匀浆得到匀浆组织液；将酶解所得匀浆组织液过滤得到组织来源的肿瘤单细胞，对所得肿瘤单细胞进行重悬，并将所得细胞重悬液铺于细胞芯片上，待细胞沉降进入所述细胞芯片的微孔中，加入培养基，培养2-3天，得到细胞球；将所得细胞球进行扩增，并铺在改性细胞芯片中，培养2-3天，得到所述肿瘤类器官，经自动化挑取设备挑取后，进行药敏试验的开展，足量大小与质量均一的类器官为药物筛选的准确性提供可能。官为药物筛选的准确性提供可能。官为药物筛选的准确性提供可能。


技术研发人员：索广力 赵喆 刘星志
受保护的技术使用者：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所
技术研发日：2022.04.21
技术公布日：2022/7/15