一种用于单细胞捕获以及离心液滴生成的装置及其应用

技术特征：
1.用于单细胞捕获以及离心液滴生成的装置，其特征在于，包括管体和盖体，管体的上部设有漏斗部，漏斗部的底部向下设有毛细管，管体的下半部设有油相液体，毛细管底端插入该油相液体中；盖体的底部设有芯片，所述的芯片底部向上设有第一凹槽，所述的第一凹槽的上底面向上设有第二凹槽；第二凹槽的横截面小于第一凹槽的横截面。2.如权利要求1所述的装置，其特征在于，还包括一离心设备。3.如权利要求1或2所述的装置，其特征在于，所述的管体和盖体，为八连管或十二联管的管体和盖体。4.如权利要求1或2所述的装置，其特征在于：所述第一凹槽的横截面为正方形，所述第二凹槽的横截面为正六边形。5.如权利要求1或2所述的装置，其特征在于：所述第一凹槽截面的内切圆直径为5微米-1000微米，所述第二凹槽截面的内切圆直径为1微米-500微米。6.如权利要求1至5任一项所述的装置在液滴生成和/或多重置换扩增反应中的应用。7.一种多重置换扩增反应方法，包括如下步骤：1)配置权利要求1-5任一项所述的装置；2)细胞取用：将细胞悬浮液离心，再用缓冲溶液重悬；3)单细胞捕获在盖子中滴加含细胞的缓冲液，静置待细胞沉降，落入第二凹槽；若细胞未落入第二凹槽，使用吹打后放至震荡孵育器震荡；若细胞仍未落入凹槽，可继续震荡；在第二凹槽捕获细胞后，用缓冲溶液轻轻吹打芯片，洗去多余的细胞，最终只留下第二凹槽的单细胞；4)液滴生成进行细胞裂解，之后进行dna扩增，然后将盖体、芯片和管体组装成完整的装置后，离心，在管体内生成液滴；5)mda产物文库构建纯化后让dna片段化，最后进行pcr富集。8.根据权利要求7所述的一种多重置换扩增反应方法，其特征在于：步骤1)中，在芯片的凹槽上滴加疏水化试剂，后置于烘箱中烘干；然后加入1-5％的聚乙二醇水溶液并在烘箱中烘干。9.根据权利要求7所述的一种多重置换扩增反应方法，其特征在于：步骤3)中，向取用的细胞悬浮液中滴加细胞染剂对细胞进行染色。10.根据权利要求7所述的一种多重置换扩增反应方法，其特征在于：步骤4)的离心，为500-15000rpm下转1-5min。

技术总结
本发明涉及到用于单细胞捕获以及离心液滴生成的装置及其应用，该装置设计了双层微孔结构，方便完成单个细胞的捕获，解决了液滴MDA需要繁琐的单细胞分离的缺点。将该结构整合在管盖中，方便试剂的添加以及液体的转移。另外，还设计了一种离心驱动的液滴生成结构，通过单细胞捕获芯片分离出单个细胞并加入裂解液和PBS缓冲液，裂解释放细胞基因组DNA。随后加入终止缓冲液终止分裂，并加入MDA扩增试剂后生成乳化液滴。本发明方便液滴的生成，解决了传统液滴生成方法成本高，时间长，操作繁琐等缺点。此外，两种装置可以非常好的整合在一起，形成一管式平台，实现单细胞捕获，液滴生成等集成化操作。该平台有望广泛的应用于基础研究以及临床诊断。及临床诊断。


技术研发人员：杨朝勇 尹坤 梁点一 朱志
受保护的技术使用者：厦门大学
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/7/15