一种微粒子流动聚焦装置及方法与流程

1.本发明涉及一种微粒子流动聚焦装置及方法，属于生物医学分析领域。


背景技术：

2.在生物医学分析过程中，往往只对样本中特定的微粒(微球或者细胞)进行研究，比如血液样本中的循环肿瘤细胞，或者细胞培养基中的健康细胞。这些微粒通常具有特殊的性质，因此可以利用这些性质将其进行检测并分选出来。
3.在过去的20年里，流式细胞术由于其检测和分选细胞的能力，已经被广泛用作许多疾病的强大分析工具。其利用激光或者基于阻抗的技术来进行细胞计数或分类，通过将细胞悬浮在流体中通过光学或电器件测试设备，并在下游进行下一步的分选工作，是生物分析的重要工具。传统的流式细胞仪体积庞大，价格昂贵且操作复杂，为了克服这些缺点，研究人员将微流体的概念引入到流式细胞术当中，称之为微流控流式细胞术。微流控是一种在尺寸几十微米范围内的通道中操纵流体的技术。与传统的流式细胞仪类似，微流控流式细胞仪也由五大子系统组成，其中样品泵送、聚焦和分选大多都可以在微流控芯片上完成。微流控芯片的尺寸很小，可以大大地减少所需样品和试剂的体积。并且将其集成在系统中，可以减少设备的总尺寸和维护要求，也正因为如此，和微流控相结合被认为是流式细胞仪未来进一步的发展方向。
4.单个细胞的检测能力是流式细胞仪的主要特征和能力之一。当细胞被注入流式细胞仪时，需要将样品聚焦到一个狭窄的核心流当中，使其能够以一定速率逐个通过检测区域，这是流式细胞仪的前处理阶段。聚焦可以分为主动聚焦和被动聚焦，被动聚焦依赖于流体的固有特性来实现微粒子聚焦，而主动聚焦常常依赖于外部场来产生驱动力，包括声电泳(ap)、介电泳(dep)、磁电泳(mp)和荧光活化分离法。主动聚焦常常需要引入外部设备，这就增加了设备的复杂度，且可能会对细胞造成损伤。比如传统的流体细胞仪通过鞘流来实现样品流的聚焦，在微流控芯片出现以后，通过巧妙的结构设计来引入鞘层流动。鞘流从四面八方将样品流压缩到中间，其虽可以实现对样品流的精确控制，但是需要大量的鞘流试剂，并且高速流动的鞘流也有可能损伤细胞。惯性微流控是一种利用惯性升力将微粒驱动到微通道的一个或多个平衡位置实现聚焦功能的被动聚焦方法。其中，有研究人员利用二次流和惯性升力设计了一种弧形槽阵列微流控装置，但这种装置需要很长的长度，且需要很高的速度才可以做到聚焦，并且其聚焦的准确度比较差，没办法和检测系统结合实现单细胞的高精度分选。又有研究人员设计了一种螺旋微流控装置，这种装置可以根据大小直接将微粒聚焦在不同的位置，然后直接进行分选。为了避免较大的螺旋布局，再有研究人员利用惯性微流控设计了一种包含收缩扩张阵列的直通道微流控芯片。但还是依然无法避免惯性微流控带来的需要高流速，且聚焦分辨率低等一系列问题。其他被动式聚焦，比如确定性横向位移侧向位移(dld)，和惯性微流控一样都很难在后续通过检测微粒来做到确定性分选。
5.综上所述，流式细胞术大多采用鞘流聚焦微粒子，但是其鞘流增加了微流控芯片
的复杂度，且需要大量额外的鞘液，高速流动的鞘液也可能会造成细胞损伤；主动式聚焦设备需要引入外部物理场比如声、光、电、磁等等，这种聚焦方式极大地增加了聚焦的复杂性，且外部物理场的干预也有可能会对细胞本身造成损伤，影响其活性；其他被动式聚焦虽然可以不引入外部物理场，但惯性微流控分辨率低，且需要很高的流速和很长的聚焦长度。其他的被动式聚焦比如dld则很难和图像、荧光以及电信结合起来做到确定性分选。


技术实现要素：

6.本发明提供一种微粒子流动聚焦装置及方法，旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。
7.本发明的技术方案为一种微粒子流动聚焦装置，其包括：芯片层机构，所述芯片层机构的内部设置微粒子聚焦区域，微粒子聚焦区域，所述微粒子聚焦区域的上层及下层分别设置第一流道及与所述第一流道下方对应的至少一行微孔机构，所述微孔机构包括成行排列的多个微孔，所述第一流道的始端设置有微粒子入口。
8.进一步，还包括：微粒子分选区域，所述微粒子分选区域包括多条分选流道，所述分选流道的末端连通有分选出口；对应设置在各个所述分选流道附近的阀门开关机构，其中，所述分选流道的始端与所述第一流道的末端连通。
9.进一步，所述微孔机构还包括第二流道，所述相连所述微孔之间通过第二流道连通。
10.进一步，所述微孔分别与所述第一流道的中轴线互为镜像对称。
11.进一步，多个相邻的所述第二流道及所述微孔沿流动的方向的中轴线对称设置，所述微孔的横截面的形状包括圆形、椭圆形、三角形或菱形等能够汇聚流线形状的一种或多种。
12.进一步，所述阀门开关机构包括压力泵及薄膜层，所述薄膜层的中部设有多条气道，所述气道的两端分别设有入气口及出气口，所述压力泵的高压出口及低压入口分别与入气口及出气口连通，其中，所述薄膜层键合连接在芯片层机构的表面，各个所述气道对应横跨分选流道始端的上方，所述气道的底面与分选流道相交的部分为开关层，当压力泵的高压出口通入高压气体到气道时，所述开关层受到高压气体挤压向分选流道的底面膨胀，使开关层堵塞分选流道，当压力泵的出气口流出高压气体时，所述开关层的形变复原使分选流道疏通。
13.进一步，所述微粒子聚焦区域还包括过渡流道，所述分选流道的始端向微粒子入口方向的第一流道内连通有过渡流道的一端，所述过渡流道的另一端与第一流道的末端连接。
14.进一步，所述阀门开关机构包括压力泵及控制流体通道，所述控制流体通道设置在所述芯片层机构的内部，所述控制流体通道的一端与分选流道的始端连通，所述压力泵的压力口与控制流体通道的另一端连通。
15.一种微粒子流动聚焦和主动分选方法，根据上述的装置的工作方法，其中，所述装置包括设置在所述第一流道末端的检测机构，所述方法包括以下步骤：
16.s100、通过微粒子聚焦区域的始端通入液体及微粒子，微粒子从微粒子聚焦区域的始端到末端流经第一流道；
17.s200、使微粒子从所述第一流道依次经过至少一行排列的多个微孔沿直线聚焦在微粒子聚焦区域的末端；
18.s300、检测机构通过识别微粒子的属性后，控制开启或关闭阀门开关机构以主动控制流入不同属性的微粒子到对应的分选流道，完成微粒子的分选。
19.本发明的有益效果为：
20.1、上述的微粒子流动聚焦装置，聚焦效果好，可以实现对微粒子的一维聚焦。
21.2、上述的装置和惯性微流控相比，本发明的装置所需的通道长度短，可以减少装置的尺寸，并且该装置不需要很高的流速即可以实现微粒的聚焦，可应用在很多低流速的场景，可实现微粒子的准确性检测和分选。
22.3、上述的微粒子分选方法可基于微粒子的大小、荧光、电信号的差异选用不同的检测机构进行分选。
附图说明
23.图1是根据本发明实施例的微粒子流动聚焦装置的俯视图。
24.图2是根据本发明实施例的微粒子聚焦区域的俯视图。
25.图3是根据本发明实施例的微孔及第二流道连接的俯视图。
26.图4是根据本发明实施例的微孔及第二流道连接的立体图。
27.图5是根据本发明实施例的不同形状微粒子及第二流道连接的俯视图。
28.图6是根据本发明实施例一的微孔及第一流道连接的剖视图。
29.图7是根据本发明实施例二的微孔及第一流道连接的剖视图。
30.图8是根据本发明实施例的微粒子流动分选装置的总体示意图。
31.图9是根据本发明实施例的微粒子聚焦区域及微粒子分选区域连接的示意图。
32.图10是根据本发明实施例的微粒子流动聚焦和分选连接阀门外部结构的示意图。
33.图11是根据本发明实施例的阀门开关机构及外部结构的连接示意图。
34.图12是根据本发明实施例的阀门开关机构及外部结构的剖视图。
35.图13是根据本发明实施例的图5的aa部局部放大图。
具体实施方式
36.以下将结合实施例和附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整的描述，以充分地理解本发明的目的、方案和效果。需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
37.需要说明的是，如无特殊说明，当某一特征被称为“固定”、“连接”在另一个特征，它可以直接固定、连接在另一个特征上，也可以间接地固定、连接在另一个特征上。此外，本发明中所使用的上、下、左、右、顶、底等描述仅仅是相对于附图中本发明各组成部分的相互位置关系来说的。
38.此外，除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与本技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例，而不是为了限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的组合。
39.应当理解，尽管在本公开可能采用术语第一、第二、第三等来描述各种元件，但这些元件不应限于这些术语。这些术语仅用来将同一类型的元件彼此区分开。例如，在不脱离本公开范围的情况下，第一元件也可以被称为第二元件，类似地，第二元件也可以被称为第一元件。
40.参照图1至13，在一些实施例中，本发明公开了一种微粒子流动分选装置，包括：芯片层机构1000，所述芯片层机构1000的内部设置微粒子聚焦区域1100。参照图1所示，芯片层机构1000中一段为微粒子聚焦区域1100。
41.参照图1至图4所示的微粒子聚焦区域1100，微粒子聚焦区域1100的上层及下层分别设置第一流道1110及与第一流道1110下方对应的至少一行的微孔机构1120。图4中的微粒子聚焦区域中看出微粒子沿箭头方向逐渐聚焦，最右边三个微粒子所在位置为第一流道1110。参照图5所示，微粒子聚焦区域1100的上层及下层分别设置第一流道1110及与第一流道1110下方对应的一行的微孔机构1120。
42.参照图2结合4所示，微孔机构1120包括成行排列的多个微孔1121，相连微孔1121之间通过第二流道1122连通。参照图1，第一流道1110的始端设置有微粒子入口1111。
43.待聚焦的众多微粒子通过第一流道1110始端的微粒子入口1111随液体输入，微粒子在上层的第一流道1110逐渐下层经过至少一行的微孔机构1120，由于下层有多个微孔1121及通过第二流道1122连通，微粒在重力及流线的作用下经过微孔1121中发生沉降，经过第二流道1122再上升，微粒子每经过一个微孔1121都会逐渐向中线偏转直到完全聚焦到微孔1121的中轴线位置。微粒子还经过多行微粒机构1120时，上游流过来的大量微粒子在不改变流速的情况下聚焦成多行细小的线束，微粒子再通过下游的一行微孔1121排列再进一步汇聚成一束，最后所有微粒子能沿一条直线流向第一流道1110末端。
44.参照图1结合图8所示的微粒子分选区域1200，微粒子分选区域1200包括多条分选流道1220，分选流道1220的末端连通有分选出口1221，废液通道1210的两端均连通有废液出口1211。
45.参照图9所示，对应设置在各个分选流道1220附近的阀门开关机构2000，图中从第一流道1110中引出两条分选流道1220，然后两个分选流道1220上设置各自的阀门开关机构2000，控制微粒子是否进入特定的分选流道1220中。
46.对于微粒子聚焦区域末端的直线留微粒子，对不同属性的微粒子进行分类，通过控制阀门开关机构2000的开启及关闭使不同属性的微粒子进入特定的分选流道1220中，该区域完成对微粒子的分类。
47.参照图1至5、结合图13，微孔机构1120还包括第二流道1122，相连所述微孔1121之间通过第二流道1122连通，多个相邻的第二流道1122及微孔1121沿流动的方向的中轴线对称设置，有助于微粒子在每个微孔流动的过程中逐步实现聚焦。
48.参照图5至图7所示，微孔1121的横截面的形状包括圆形、椭圆形、三角形或菱形的一种或多种，微孔1121的也可以其他汇聚流线的形状组成，整个装置还可以通过调整微孔的形状、高度及排列方式来适应微粒子聚焦的具体的应用场景。
49.参照图9至图12所示，阀门开关机构2000包括压力泵2100及薄膜层2200，薄膜层2200的厚度为9至11μm的pdms薄膜。
50.参照图9至图12所示，薄膜层2200的中部设有多条气道2210，气道2210的两端分别
设有入气口2211及出气口2212，压力泵2100的高压出口2110及低压入口2120分别与入气口2211及出气口2212连通。
51.参照图9，薄膜层2200键合连接在芯片层机构1000的表面，各个气道2210对应横跨分选流道1220始端的上方。参照图13，气道2210的底面与分选流道1220相交的部分为开关层2213。
52.参照图10所示的实施例，气道2210连通压力泵2100，注射泵4000通过管道连通微粒子入口1111，输入流动液体，分选流道1220末端连通容器收集注射泵4000输出的液体。
53.当压力泵2100的高压出口2110通入高压气体到气道2210时，开关层2213受到高压气体挤压向分选流道1220的底面膨胀，使开关层2213堵塞分选流道1220，当压力泵2100的出气口2212流出高压气体时，开关层2213的形变复原使分选流道1220疏通。微粒子随开关层2213的开启及关闭进入到对应的分选流道中，分选的阀门结构操作简单。
54.参照图1至2，微粒子聚焦区域1100还包括过渡流道1130。分选流道1220的始端向微粒子入口1111方向的第一流道1110内连通有过渡流道1130的一端，过渡流道1130的另一端与第一流道1110的末端连接。微粒子在第一流道1110的末端通过只容纳一列微粒子进行流动，保证在过渡流道1130的末端只有单个微粒子进入对应的阀门开关机构进入特定的分选流道1220。
55.参照图1至2的第二中阀门开关机构的实施例，阀门开关机构2000包括压力泵2100及控制流体通道2300，控制流体通道2300设置在芯片层机构1000的内部，控制流体通道2300的一端与分选流道1220的始端连通，压力泵2100的压力口与控制流体通道2300的另一端连通。在多个分选的流道始端设置一个额外的控制流体通道2300，，通过压力泵控制改通道液体的流动。当特定的微粒子通过微粒子聚焦区域时，压力泵控制流体流量从而将微粒子推入到不同的分选流道1220中。
56.本发明还公开了一种粒子流动分选方法，包括：根据上述的微粒子流动分选装置。
57.参照图8，该装置还包括设置在第一流道1110末端的检测机构3000，图中为显微镜结构，通过微粒子不同的视觉属性进行分类，微粒子分选系统基于python开发语言主要由图像采集、图像识别、数据处理、硬件控制以及可视化gui交互页面等部分组成。通过对检测区域快速截屏(35ms/帧)实现了图像的快速采集，利用opencv将采集的图像从rgb空间转化为hsv空间并进行灰度化操作，通过高斯模糊去噪、膨胀、腐蚀、轮廓检测及轮廓绘制进行颜色和大小检测，并通过设定时间阈值判断相邻帧的微粒子是否为同一微粒子，检测结果会实时显示在利用pyqt5开发的gui交互界面上，根据检测结果传输相应指令控制压力泵控制阀门开关结构从而实现了基于颜色或者大小的微粒子自动化分选。每一帧图像从采集到发送指令时间控制在40ms左右，采集图像无需额外硬件支持，高效便捷，整个过程从微粒子聚焦到检测分选完全自动化。该处还可以设置其他的检测设备，检测设备根据微粒子大小、荧光、电信号的差异标准进行过分选。
58.s100、通过微粒子聚焦区域1100的始端通入液体及微粒子，微粒子从微粒子聚焦区域1100的始端到末端流经第一流道1110。
59.s200、使微粒子从所述第一流道1110依次经过至少一行排列的多个微孔1121沿直线聚焦在微粒子聚焦区域1100的末端。
60.s300、检测机构3000通过识别微粒子的属性后，控制开启或关闭阀门开关机构
2000以主动控制流入不同属性的微粒子到对应的分选流道1220，完成微粒子的分选。上述方法聚焦分选的微粒子包括细胞。
61.上述的微粒子流动分选装置及方法，一系列的微粒子通过被动聚焦的方式，避免外加物理场或者鞘流的使用，有效地简化了芯片制作和具体操作的复杂度，并且不会损伤微粒子。
62.上述的微粒子流动聚焦装置，聚焦效果好，可以实现对微粒子的一维聚焦。
63.上述的装置和惯性微流控相比，本发明的装置所需的通道长度短，可以减少装置的尺寸。并且该装置不需要很高的流速即可以实现微粒的聚焦，可应用在很多低流速的场景，可实现单个微粒子的准确性检测和分选。
64.上述的微粒子分选方法可基于微粒子的大小、荧光、电信号的差异选用不同的检测机构进行分选。
65.以上所述，只是本发明的较佳实施例而已，本发明并不局限于上述实施方式，只要其以相同的手段达到本发明的技术效果，凡在本公开的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开保护的范围之内。都应属于本发明的保护范围。在本发明的保护范围内其技术方案和/或实施方式可以有各种不同的修改和变化。