肺及肺癌组织培养方法及用其构建肺癌小鼠动物模型方法与流程

技术特征：
1.一种肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述肺及肺癌组织培养方法包括以下步骤：步骤一，获取人源肺癌组织并进行预处理：获取新鲜的人源肺癌组织(一般为肺穿刺或外科手术标本)；在冰上剪碎或同等低温环境剪碎或同等低温环境机械破碎后，得人源肺癌组织块；利用蛋白酶溶解液将所述人源肺癌组织块裂解为人源肺癌组织单细胞；步骤二，进行肺癌组织类器官模型的构建：将所述人源肺癌组织单细胞与基质胶混匀后置于培养箱进行固化及三维培养，建立肺癌组织类器官模型；步骤三，进行人源肺癌组织单细胞的克隆培养：采用促克隆培养基和基质胶对所述人源肺癌组织单细胞进行克隆培养，得到克隆培养产物；取出所述克隆培养产物中的克隆细胞进行扩增培养，建立肺癌信息数据库；步骤四，进行肺癌细胞类器官库的构建：冻存所述肺癌细胞类器官并建立肺癌细胞类器官库，复苏所述肺癌细胞类器官并重新培养。2.如权利要求1所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中的人源肺癌组织采用低温存储的方式进行运输。3.如权利要求1所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述步骤一中的利用蛋白酶溶解液将所述人源肺癌组织块裂解为人源肺癌组织单细胞包括：(1)清洗所述人源肺癌组织；(2)将所述人源肺癌组织切碎并与所述蛋白酶溶解液混合并置培养箱中培养，并通过70μm细胞过滤器过滤得到单细胞悬液；(3)将所述单细胞悬液离心去上清液后收集单细胞混合液；其中，所述单细胞包括正常人源肺细胞和人源肺癌细胞。4.如权利要求3所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述离心温度为2～8℃，200～400g单细胞悬液离心10～15min。5.如权利要求1所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述步骤二中的肺癌组织类器官模型的构建包括：(1)将所述单细胞混合液与基质胶均匀混合后，得混合细胞液；(2)将所述混合细胞液倒入培养板孔并置于培养箱中固化得到三维结构；(3)将所述培养板孔加入肺组织器官条件培养基并重新置于所述二氧化碳培养箱中培养，构建得到肺癌组织类器官模型。6.如权利要求5所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述置于所述二氧化碳培养箱中进行培养的温度为35～37℃，所述培养时间为24～36h。7.如权利要求1所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述步骤三中的肺癌信息数据库的建立包括：(1)采用扩增培养基和基质胶对所述克隆细胞进行第一扩增培养，得到扩增培养产物；(2)将所述扩增培养产物进行第一分离处理，得到扩增细胞；(3)采用所述扩增培养基对所述扩增细胞进行第二扩增培养，并建立肺癌信息数据库。8.如权利要求1所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述步骤四中的冻存所述肺癌细胞类器官并建立肺癌细胞类器官库包括：去除所述肺组织器官培养基并冲洗所述单细胞后，进行离心去上清液，收集细胞冻存
液；将所述细胞冻存液重悬后倒入冻存管中；将所述冻存管放入程序降温盒保存一段时间后，将所述冻存管转移至液氮中长期存储。9.如权利要求8所述肺及肺癌组织培养方法，其特征在于，所述将所述冻存管放入程序降温盒在-80℃保存24h。10.一种应用如权利要求1～9任意一项所述肺及肺癌组织培养方法的构建肺癌小鼠动物模型方法，其特征在于，所述构建肺癌小鼠动物模型方法包括：(1)获取新鲜的人源肺癌组织，胶原酶消化为单细胞，与基质胶混合后在48孔板中使用条件培养基培养，得到人肺癌组织类器官；(2)将人肺癌组织类器官，原位注射到免疫缺陷的小鼠肺组织中，得到人源、原位肺癌的小鼠动物模型；(3)通过注射将人肺癌组织注射到免疫缺陷的小鼠肺组织，构建动物模型。

技术总结
本发明属于肺及肺癌组织培养技术领域，公开了一种肺及肺癌组织培养方法及用其构建肺癌小鼠动物模型方法，所述肺及肺癌组织培养方法包括：获取人源肺癌组织并进行预处理；进行肺癌组织类器官模型构建；进行人源肺癌组织单细胞的克隆培养；进行肺癌细胞类器官库构建。本发明通过肺及肺癌组织培养方法能够成功培养出大量与来源器官遗传角度高度一致的体外培养细胞，并进行长期保存，培养效果好，对肺组织器官和肺癌发展的研究提供有利工具，能够有助于更深入地了解人类发展，以及为制定疾病建模、药物发现和再生医学提供新的视角；同时在原位注射以后可以分化形成人源、原位肺肿瘤，非常接近人体内肺癌发生情况，可以更好的应用于肺癌研究工作。于肺癌研究工作。于肺癌研究工作。


技术研发人员：戴夕超 卞伟钢 陶累累 陈津津
受保护的技术使用者：盐城市第一人民医院
技术研发日：2022.03.23
技术公布日：2022/7/12