作为alk5抑制剂的经取代的1,5-萘啶或喹啉
1.交叉引用
2.本技术要求2019年11月22日提交的美国临时申请第62/939,186号；2020年6月5日提交的美国临时申请第63/035,100号；和2020年10月30日提交的美国临时申请第63/198,637号的权益，其中的每一个以全文引用的方式并入本文中。
背景技术：
3.人类纤维变性疾病，如全身性硬化症(ssc)、硬皮病样移植物抗宿主疾病、肾源性系统纤维化和放射线诱发的纤维化以及心脏、肺、皮肤、肝脏、膀胱和肾脏纤维化构成重大的健康问题。这些疾病常因缺乏可供使用的治疗而发展成器官功能障碍，最终导致器官衰竭和死亡，这主要是因为失控纤维化的病原性机制为复杂、异源的，并且难以破解。活化成肌纤维细胞可负责用非功能纤维变性组织替换正常组织。因此，负责刺激成肌纤维细胞中的促纤维变性反应的信号传导路径具有作为研发治疗纤维变性疾病的疗法的目标的可能性。
4.正常组织修复涉及经由恒稳调节机制的纤维变性反应。然而，不受控纤维化可能导致胞外基质(ecm)大分子在随时间推移硬化的间质性空间中过量沉积。沿着分子路径存在多个导致成肌纤维细胞活化的位点，包括(但不限于)转化生长因子-β(tgf-β)和骨胳形态发生蛋白(bmp)信号传导路径。在本公开中重要的是涉及转化生长因子-β(tgf-β)、tgf-β受体i(tgf-βri)和tgf-β受体ii(tgf-βrii)的路径。
5.通常通过tgf-β配体结合于tgf-βrii来引发tgf-β信号传导。这又可补充tgf-βri(也称为活化素受体样激酶5(alk5))并使其磷酸化。在磷酸化后，alk5通常采用活性构形并与smad2或smad3自由结合并使其磷酸化。在磷酸化后，smad 2和3蛋白质随后可与smad4形成异二聚复合物，其可在整个核膜中易位并调节smad介导的基因表达，包括例如胶原蛋白的产生。smad蛋白质为转录的胞内调节因子，并因此可充当tgf-β调节基因的调节剂，尤其涉及上皮和造血细胞中的细胞周期停滞、控制间叶细胞增殖和分化、创伤愈合、胞外基质产生、免疫抑制和致癌。
6.据信alk5为纤维变性过程中最相关的活化素样激酶(alk)(罗森布鲁姆(rosenbloom)等人,纤维化：方法和方案(fibrosis:methods and protocols),分子生物学方法(methods in molecular biology),2017,第1627卷,第1章,第1页至第21页)。已研发出针对与肿瘤学最相关的不同治疗适应症抑制alk5活性的若干小分子(参见英林(yingling)等人,自然综述：药物发现(nature reviews:drug discovery),2004年12月,第3卷,第1011页至第1022页)。
技术实现要素：
7.迄今为止研发出的alk5抑制剂的主要问题中的一种为这些分子已与临床前安全性研究中的心室或心脏重塑作用相关，由经口投与的显著全身性暴露量产生。鉴于前述，需要标靶alk5的小分子并使用此类化合物治疗不同疾病，如癌症和纤维化，同时限制不良副
作用。本公开提供这些和其它相关优势。本公开的一个目标为以最小全身性暴露量局部递送有效alk5抑制剂，从而在治疗期间解决alk5抑制的任何非预期和非所需全身性副作用。因此，在一些方面，本公开提供用于治疗特发性肺纤维化的吸入、长效和肺脏选择性alk5抑制剂。本公开的化合物可用于治疗其它疾病，包括(但不限于)肺纤维化、肝纤维化、肾小球硬化和癌症。本公开的化合物可用作单一疗法或与其它疗法共给药，无论通过吸入、经口、静脉内、皮下或体表递送。
8.在某些方面，本公开提供一种式(i)化合物：
[0009][0010]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0011]
w选自ch和n；
[0012]
x和y各自独立地选自c和n；
[0013]
a为0至3的整数；
[0014]
r1在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0015]
l1选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、c
2-6
亚炔基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；
[0016]
l2选自不存在、-o-、-s-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-c(o)o-、-oc(o)-、-oc(o)o-、-c(o)n(r
11
)-、-c(o)n(r
11
)c(o)-、-c(o)n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)o-、-oc(o)n(r
11
)-、-c(nr
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)-、-c(nr
11
)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)n(r
11
)-、-s(o)
2-、-os(o)-、-s(o)o-、-s(o)-、-os(o)2、-s(o)2o-、-n(r
11
)s(o)
2-、-s(o)2n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)-、-s(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)2n(r
11
)-和-n(r
11
)s(o)n(r
11
)-；
[0017]
r2在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0018]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自r
11
；
[0019]r10
在每一情况下，独立地选自：
[0020]
卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)；
[0021]c1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c
(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0022]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0023]
其中r
10
中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0024]r11
在每一情况下，独立地选自：
[0025]
氢、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
；
[0026]c1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0027]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0028]
其中r
11
中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0029]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环；并且
[0030]r13
和r
14
与其所连接的氮原子一起形成杂环，其任选地经一个或多个r
12
取代。
[0031]
对于式(i)化合物，w可为n。在一些实施例中，w为ch。在一些实施例中，x为c并且y为n，任选地其中r3为氢，r4为氢并且r5不存在。在一些实施例中，x为n并且y为c，任选地其中r3不存在并且r4和r5各自为氢。在一些实施例中，x为n并且y为n，任选地其中r3和r4各自不存在并且r5为氢。在一些实施例中，a为1或2。
[0032]
在某些方面，式(i)化合物为式(i-a)化合物
[0033][0034]
在某些方面，式(i)化合物为式(i-b)化合物：
[0035][0036]
在某些方面，式(i)化合物为式(i-c)化合物：
[0037][0038]
对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r1可选自卤素、c
1-4
烷基和c
1-4
卤烷基，如r1为ch3。在一些实施例中，l1选自不存在、c
1-6
亚烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，如l1选自3至10元亚杂环烷基、5至10元亚杂芳基和c
6-10
亚芳基。在一些实施例中，l1为c
1-6
亚烷基。在一些实施例中，l1不存在。在一些实施例中，l2选自不存在、-o-、-n(r
11
)-、-c(o)o-、-c(o)n(r
11
)-和-n(r
11
)c(o)-，如l2选自不存在、-o-、-nh-、-c(o)o-、-c(o)nh-和-nhc(o)-。在一些实施例中，l2为-nh-。在一些实施例中，l2不存在。
[0039]
对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r2可选自：
[0040]
卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2；
[0041]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0042]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0043]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0044]
对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r2可选自：
[0045]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0046]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0047]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0048]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0049]
对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r
12
在每一情况下，可独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经选自卤素、-nh2、-nhch3和-och3的一个或多个取代基取代。
[0050]
对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r2可选自c
3-6
环烷基、c
3-6
环烯、3至6元杂环烷基和5至6元杂芳基，其中的每一个任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2和-ch3。在一些实施例中，r2为经以下取代的c
1-3
烷基：c
3-6
环烷基、c
3-6
环烯、3至6元杂环烷基或5至6元杂芳基，其中的每一个任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2和-ch3。
[0051]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，l1选自不存在、c
3-12
碳环和3至12元杂环；
[0052]
l2不存在；并且
[0053]
r2选自：
[0054]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0055]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0056]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0057]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0058]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，l1选自不存在；
[0059]
l2选自-o-、-nh-、-c(o)o-、-c(o)nh-和-nhc(o)-；并且
[0060]
r2选自：
[0061]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0062]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0063]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0064]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0065]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r1为ch3；
[0066]
l1选自不存在、c
3-6
碳环和3至6元杂环；
[0067]
l2选自不存在和-nh-；
[0068]
r2选自：
[0069]-nh2；
[0070]c1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自c
3-6
碳环和3至6元杂环的取代基取代；以及
[0071]c3-6
碳环和3至6元杂环，
[0072]
其中r2中的每一c
3-6
碳环和3至6元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、＝o、r
12
和c
1-6
烷基；并且
[0073]r12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经卤素、-nh2、-nhch3和-nhch2ch3取代。
[0074]
在某些方面，本公开提供本文所公开的化合物的大体上纯的立体异构体。立体异构体可以至少90％对映异构体过量提供。
[0075]
在某些方面，本公开提供选自表1的化合物。
[0076]
在某些方面，本公开提供一种药物组合物，其包含本文所公开的化合物和药学上可接受的载剂。所述药物组合物可调配用于吸入。
[0077]
在某些方面，本公开提供一种抑制alk5的方法，其包含使alk5与有效量的本文所公开的化合物接触。在某些方面，本公开提供一种治疗受试者的alk5介导的疾病或病状的方法，其包含向所述受试者投与治疗有效量的本文所公开的化合物。在实践本公开方法中的任一种中，疾病或病状可选自纤维化、秃发和癌症。在一些实施例中，疾病或病状为纤维化。在一些实施例中，本公开提供一种治疗纤维化的方法，其包含向患者投与治疗有效量的本文所公开的化合物。纤维化可选自全身性硬化症、肾源性系统纤维化、器官特异性纤维化、与癌症相关的纤维化、囊肿性纤维化和与自体免疫疾病相关的纤维化。任选地，器官特异性纤维化选自心脏纤维化、肾脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、门静脉纤维化、皮肤纤维化、膀胱纤维化、肠道纤维化、腹膜纤维化、骨髓纤维化、口腔粘膜下纤维化和视网膜纤维化。在一些实施例中，器官特异性纤维化为肠道纤维化。任选地，肺纤维化选自特发性肺纤维化(ipf)、家族性肺纤维化(fpf)、肺间质纤维化、与哮喘相关的纤维化、与慢性阻塞性肺病(copd)相关的纤维化、二氧化硅诱发的纤维化、石棉诱发的纤维化和化学疗法诱发的肺脏纤维化。任选地，肺纤维化为特发性肺纤维化(ipf)。在一些实施例中，肺纤维化由病毒感染诱发。
[0078]
在实践本公开方法中的任一种中，疾病或病状可为癌症，任选地其中所述癌症选自乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、肝细胞癌、成胶质细胞瘤、黑素瘤和胰腺癌。在一些实施例中，癌症为肺癌，任选地为非小细胞肺癌。本公开的方法可进一步包含投与第二治疗剂。任选地，第二治疗剂为免疫治疗剂，如pd-1抑制剂或ctla-4抑制剂。在一些实施例中，免疫治疗剂选自帕博利珠单抗(pembrolizumab)和德瓦鲁单抗(durvalumab)。本公开的方法可进一步包含投与有效量的辐射。在实践本公开方法中的任一种中，本文所公开的化合物或盐可通过吸入投与。
[0079]
在某些方面，本公开提供一种用于治疗纤维化的本文所公开的化合物。在某些方面，本公开提供本文所公开的化合物用于制造供治疗纤维化用的药剂的用途。
[0080]
以引用的方式并入
[0081]
本说明书中所提及的所有公开和专利申请均以引用的方式并入本文中，其引用的程度如每一个别公开或专利申请经特定并且单独指示以引入的方式并入般。
具体实施方式
[0082]
除非另外定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的熟练人员通常所理解相同的含义。
[0083]
如软件(马萨诸塞州剑桥的珀金埃尔默公司(perkin elmer,inc.,cambridge,ma))中所实施，本文中根据iupac公约命名化学结构。
[0084]
除非上下文另外明确指示，否则如本说明书和权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括多个参考物。
[0085]
术语“c
x-y”或“c
x-c
y”当与如烷基、烯基或炔基的化学部分结合使用时意指包括链中含有x至y个碳的基团。例如，术语“c
x-y
烷基”是指在链中含有x至y个碳的经取代或未经取代的饱和烃基，其包括直链烷基和分支链烷基。
[0086]“烷基”是指经取代或未经取代的饱和烃基，其包括直链和分支链烷基。烷基可含有一至十二个碳原子(例如c
1-12
烷基)，如一至八个碳原子(c
1-8
烷基)或一至六个碳原子(c
1-6
烷基)。示例性烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。烷基通过单键与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外具体说明，否则烷基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0087]“卤烷基”是指经一个或多个卤素取代的烷基。示例性卤烷基包括三氟甲基、二氟甲基、三氯甲基、2,2,2-三氟乙基、1,2-二氟乙基、3-溴-2-氟丙基和1,2-二溴乙基。
[0088]“烯基”是指含有至少一个双键的经取代或未经取代的烃基，包括直链和分支链烯基。烯基可含有两至十二个碳原子(例如c
2-12
烯基)，如两至八个碳原子(c
2-8
烯基)或二至六个碳原子(c
2-6
烯基)。示例性烯基包括乙烯基(即乙烯基(vinyl))、丙-1-烯基、丁-1-烯基、戊-1-烯基、戊-1,4-二烯基等。除非本说明书中另外具体说明，否则烯基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0089]“炔基”是指含有至少一个三键的经取代或未经取代的烃基，包括直链和分支链炔基。炔基可含有两至十二个碳原子(例如c
2-12
炔基)，如两至八个碳原子(c
2-8
炔基)或二至六个碳原子(c
2-6
炔基)。示例性炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。除非本说明书中另外具体说明，否则炔基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0090]“亚烷基”或“亚烷基链”是指经取代或未经取代的二价饱和烃基，包括直链亚烷基和分支链亚烷基，其含有一至十二个碳原子(例如c
1-12
亚烷基)，如一至八个碳原子(c
1-8
亚烷基)或一至六个碳原子(c
1-6
亚烷基)。示例性亚烷基包括亚甲基、亚乙基、亚丙基和正亚丁基。类似地，“亚烯基”和“亚炔基”是指如上文所定义的亚烷基，其分别包含一个或多个碳-碳双键或三键。亚烷基链、亚烯基链或亚炔基链与分子的其余部分的连接点可经由链的一个碳或任两个碳。除非本说明书中另外具体说明，否则亚烷基、亚烯基或亚炔基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0091]“杂烷基”、“杂烯基”和“杂炔基”分别指经取代或未经取代的烷基、烯基和炔基，其中一个或多个，如1、2或3个碳原子经杂原子，如o、n、p、si、s或其组合置换。链中所存在的任何氮、磷和硫杂原子可任选地氧化，并且任何氮杂原子可任选地经季铵化。如果给出数值范围，那么数值范围是指总链长。例如，3至8元杂烷基的链长为3至8个原子。可经由杂烷基、杂烯基或杂炔基链中的杂原子或碳与分子的其余部分连接。除非本说明书中另外具体说明，否则杂烷基、杂烯基或杂炔基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0092]“亚杂烷基”、“亚杂烯基”和“亚杂炔基”分别指经取代或未经取代的亚烷基、亚烯基和亚炔基，其中一个或多个，如1、2或3个碳原子经杂原子，如o、n、p、si、s或其组合置换。链中所存在的任何氮、磷和硫杂原子可任选地氧化，并且任何氮杂原子可任选地经季铵化。如果给出数值范围，那么数值范围是指总链长。例如，3至8元亚杂烷基的链长为3至8个原子。亚杂烷基、亚杂烯基或亚杂炔基链与分子的其余部分的连接点可经由亚杂烷基、亚杂烯基或亚杂炔基链中的一个杂原子或一个碳，或任两个杂原子、任两个碳或任一个杂原子和任一个碳。除非本说明书中另外具体说明，否则亚杂烷基、亚杂烯基或亚杂炔基任选地经一
个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0093]“碳环”是指饱和、不饱和或芳环，其中环的每一原子为碳原子。碳环可包括c
3-10
单环、c
6-12
双环、c
6-12
螺环和c
6-12
桥接环。双环碳环的每一环可选自饱和、不饱和和芳环。在一些实施例中，碳环为c
6-12
芳基，如c
6-10
芳基。在一些实施例中，碳环为c
6-12
环烷基。在一些实施例中，碳环为c
6-12
环烯基。在一示例性实施例中，芳环(例如苯基)可稠合于饱和或不饱和环，例如环己烷、环戊烷或环己烯。饱和、不饱和和芳香族双环的任何组合在价数准许时包括于碳环的定义中。示例性碳环包括环戊基、环己基、环己烯基、金刚烷基、苯基、二氢茚基和萘基。除非本说明书中另有特定说明，否则碳环任选地经一个或多个取代基，如本文所述的那些取代基取代。
[0094]“杂环”是指包含一个或多个杂原子，例如1、2或3个选自o、s和n的杂原子的饱和、不饱和或芳环。杂环包括3至10元单环、6至12元双环、6至12元螺环和6至12元桥连环。双环杂环的每一环可选自饱和、不饱和和芳环。杂环可在价数允许下经由杂环的任何原子(如杂环的碳或氮原子)连接于分子的其余部分。在一些实施例中，杂环为5至10元杂芳基，如5或6元杂芳基。在一些实施例中，杂环为3至12元杂环烷基。在一示例性实施例中，杂环(例如吡啶基)可稠合于饱和或不饱和环，例如环己烷、环戊烷或环己烯。示例性杂环包括吡咯烷基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、哌啶基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、噻吩基、噁唑基、噻唑基、吗啉基、吲唑基、吲哚基和喹啉基。除非本说明书中另外具体说明，否则杂环任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0095]“杂芳基”是指包含至少一个杂原子，如1、2或3个选自o、s和n的杂原子的5至12元芳环。如本文所用，杂芳基环可选自单环或双环，包括稠合、螺环和桥接环系统，其中环系统中的各环中的至少一个为芳香族。杂芳基中的杂原子可任选地氧化。如果存在一个或多个氮原子，那么其任选地季铵化。杂芳基可在价数允许下经由杂芳基的任何原子(如杂芳基的碳或氮原子)连接于分子的其余部分。杂芳基的实例包括(但不限于)氮杂卓基、苯并咪唑基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、嘌呤基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑基、哒嗪基、哒唑基(pyridazolyl)、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢喹啉基、噻二唑基、噻唑基和噻吩基。除非本说明书中另外具体说明，否则杂芳基任选地经一个或多个取代基(如本文所述的那些取代基)取代。
[0096]
除非另外说明，否则视需要在本文所描绘的结构中隐含氢原子以满足价数需要。
[0097]
跨键绘制的波浪线或虚线键在本文中可互换使用以表示出现键断开或连接。例如，在结构中，ra经由单键连接于氟苯基环的对位。如果ra为如中的2-吡啶，那么ra可描绘为
[0098]
术语“经取代”是指具有替换一个或多个结构的碳或杂原子上的氢的取代基的部分。应理解，“取代”或“经取代”包括隐含限制条件，即此类取代与经取代原子和取代基的准许价态一致，并且取代产生稳定化合物，例如其并不自发地如通过重排、环化、消除等进行转化。如本文所使用的术语“经取代”预期包括有机化合物的所有可容许取代基。在一广泛
方面，准许的取代基包括有机化合物的非环状和环状、分支链和未分支链、碳环和杂环、芳香族和非芳香族取代基。对于合适有机化合物，容许的取代基可为一个或多个并且相同或不同。出于本公开的目的，如氮的杂原子可具有本文所述的满足杂原子价数的有机化合物的任何可容许取代基。
[0099]
本文所公开的化合物，如式(i)化合物任选地经一个或多个，如1、2或3个选自以下的取代基取代：
[0100]
卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)；
[0101]c1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0102]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0103]
其中每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0104]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环；并且
[0105]r13
和r
14
与其所连接的氮原子一起形成杂环，其任选地经一个或多个r
12
取代。
[0106]
在一些实施例中，一种本文所公开的化合物，如式(i)化合物任选地经一个或多个，如1、2或3个选自以下的取代基取代：
[0107]
卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)；
[0108]c1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0109]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0110]
其中每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0111]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环；并且
[0112]r13
和r
14
与其所连接的氮原子一起形成杂环，其任选地经一个或多个r
12
取代。
[0113]
在一些实施例中，本文所公开的化合物，如式(i)化合物任选地经一个或多个，如1、2或3个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3和-och2ch3；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环。
[0114]
所属领域的技术人员应了解，适当时，取代基可自身经取代。除非特别陈述为“未经取代”，否则在本文中提及化学部分应理解为包括经取代的变体。举例来说，提及“杂芳基”基团或部分隐含地包括经取代和未经取代的变体。
[0115]
在二价取代基在本文中通过其从左到右书写的常规化学式指定的情况下，其意图涵盖将由从右向左书写结构产生的异构体，例如-ch2o-还意图涵盖-och
2-。
[0116]“任选(optional/optionally)”意指随后描述的事件或情形可发生或可不发生，并且所述描述包括事件或情形发生的情况和不发生的情况。例如，“任选地经取代”基团可为未经取代或经取代的。
[0117]
本公开的化合物还包括那些化合物的结晶和非晶形式、药学上可接受的盐和具有相同类型的活性的活性代谢物，包括例如化合物的多晶型物、假多晶型物、溶剂化物、水合物、非溶剂化多晶型物(包括无水物)、构形多晶型物、非晶形式和其混合物。
[0118]
本文所述的化合物可展现其天然同位素含量，或可人工富集原子数目相同但原子质量或质量数与自然界中主要发现的原子质量或质量数不同的特定同位素中的一种或多种原子。本公开的化合物的全部同位素变体无论是否具放射性均涵盖于本公开的范围内。举例来说，氢具有三种天然存在的同位素，其表示为1h(氕)、2h(氘)和3h(氚)。氕为自然界中氢的最充足同位素。氘的富集可提供某些治疗优势，如增加体内半衰期和/或暴露，或可提供适用于研究药物消除和代谢的体内路径的化合物。可并入本公开的化合物中的同位素实例包括(但不限于)2h、3h、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
35
s、
36
cl和
18
f。尤其受关注者为富含氚或碳-14的式(i)化合物，其可用于例如组织分布研究；富含氘(尤其在代谢位点处富含氘)的本公开的化合物，其产生例如具有较大代谢稳定性的化合物；和富含正电子发射同位素(如
11
c、
18
f、
15
o和
13
n)的式(i)化合物，其可用于例如正电子发射断层摄影(pet)研究中。同位素富集的化合物可通过所属领域的技术人员熟知的常规技术制备。
[0119]
如本文所使用，短语“式的(of the formula)”或“具有式”或“具有结构”并不意图为限制性的并且以与术语“包含”通常使用的相同方式使用。举例来说，如果描绘一种结构，那么应理解除非另外说明，否则涵盖所有立体异构体和互变异构体形式。
[0120]
某些本文所述的化合物含有一个或多个不对称中心，并且因此可产生对映异构体、非对映异构体和其它立体异构形式，其不对称中心可根据绝对立体化学定义为(r)-或
(s)-。在一些实施例中，为了优化本公开的化合物的治疗活性，例如治疗纤维化，可能需要碳原子具有特定配置(例如(r,r)、(s,s)、(s,r)或(r,s))或富集呈具有此类配置的立体异构形式。本公开化合物可以外消旋混合物提供。相应地，除非另外指明，否则本公开涉及外消旋混合物、纯立体异构体(例如对映异构体和非对映异构体)、富含立体异构体的混合物等。当在本文中描绘无任何立体化学的化学结构时，应理解此类结构包涵所有可能的立体异构体。类似地，当在本文中展示或命名特定立体异构体时，所属领域的技术人员应理解，除非另外指明，否则本公开的组合物中可能存在少量的其它立体异构体，其前提为组合物整体的效用不因所述其它异构体的存在而消除。单独立体异构体可通过所属领域中已知的诸多方法来获得，包括使用手性合成组元或手性试剂的制备；使用适合的手性固定相或载体的手性色谱；或通过将其化学转化为非对映异构体，通过常规手段(如色谱或再结晶)分离所述非对映异构体，随后再生初始立体异构体来获得。
[0121]
另外除非另外说明，否则在适用情况下，本发明的化合物的所有顺-反或e/z异构体(几何异构体)、互变异构形式和拓朴异构形式均包括在本发明的范围内。
[0122]
如本文所使用，术语“互变异构体”是指平衡存在和预备相互转变的化合物的两种或多于两种异构体中的每一种。举例来说，所属领域的技术人员将容易地理解，1,2,3-三唑以两种互变异构形式存在：
[0123][0124]
除非另外说明，否则本文所述的化学实体意图包括所有可能的互变异构体，即使在结构仅描绘其中一者的情况下。举例来说，尽管式(i-a)化合物的单一互变异构体可描绘于本文中，但本公开意图包括所有可能的互变异构体，包括：
[0125][0126]
术语“药学上可接受”是指当用于本公开组合物和方法时，物质不为生物学上不可接受或在其它方面不可接受。例如，术语“药学上可接受的载剂”是指可并入组合物中并且可向患者投与而不会产生不可接受的生物作用或不会以不可接受的方式与组合物的其它组分相互作用的物质，如佐剂、赋形剂、滑动剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料、着色剂、增香剂、表面活性剂、湿润剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等张剂、溶剂或乳化剂。所述药学上可接受的物质通常满足毒理学和制造测试的所需标准，并且包括由美国食品药物管理局(u.s.food and drug administration)鉴别为适合的非活性成分的那些物质。
[0127]
术语“盐”和“药学上可接受的盐”是指由碱或酸制备的盐。药学上可接受的盐适用于向患者，如哺乳动物投与(例如，对于给定给药方案具有可接受哺乳动物安全性的盐)。盐可由无机碱、有机碱、无机酸和有机酸形成。另外，当化合物含有碱性部分(如胺、吡啶或咪唑)和酸性部分(如羧酸或四唑)时，可形成两性离子，并且包括在如本文所用的术语“盐”内。源自无机碱的盐包括铵盐、钙盐、铜盐、正铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、六价锰盐、二价锰
盐、钾盐、钠盐和锌盐，等。源自有机碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，其包括经取代的胺、环胺、天然存在的胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、n,n'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海卓胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多元胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可豆碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。源自无机酸的盐包括以下的盐：硼酸、碳酸、氢卤酸(氢溴酸、盐酸、氢氟酸或氢碘酸)、硝酸、磷酸、胺磺酸和硫酸。源自有机酸的盐包括以下的盐：脂肪族羟基酸(例如柠檬酸、葡萄糖酸、乙醇酸、乳酸、乳糖酸、苹果酸和酒石酸)、脂肪族单羧酸(例如乙酸、丁酸、甲酸、丙酸和三氟乙酸)、氨基酸(例如天冬氨酸和谷氨酸)、芳香族羧酸(例如苯甲酸、对氯苯甲酸、二苯基乙酸、龙胆酸、马尿酸和三苯基乙酸)、芳香族羟基酸(例如邻羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸、1-羟基萘-2-甲酸和3-羟基萘-2-甲酸)、抗坏血酸、二羧酸(例如反丁烯二酸、顺丁烯二酸、草酸和丁二酸)、葡糖醛酸(glucoronic acid)、杏仁酸、黏液酸、烟酸、乳清酸、双羟萘酸(pamoic acid)、泛酸、磺酸(例如苯磺酸、樟脑磺酸、乙二磺酸、乙磺酸、羟乙基磺酸、甲磺酸、萘磺酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2,6-二磺酸和对甲苯磺酸)、昔萘酸(xinafoic acid)等。
[0128]
术语“治疗有效量”是指当向有需要的受试者投与时，足以影响治疗的本文所述的化合物的量。举例来说，治疗肺纤维化的治疗有效量为例如减少、抑制、消除或预防受试者的纤维化形成或治疗肺纤维化的潜在病因所需要的化合物的量。治疗有效量可根据以下而变化：预期治疗应用(体内)，或所治疗的受试者和疾病病状，例如受试者的体重和年龄、疾病病状的严重程度、投药方式等，其可容易由所属领域的一般技术人员确定。特定剂量将视以下而变化：所选特定化合物、所依循的给药方案、其是否与其它化合物组合投与、投与时序、其所投与的组织和载运其的实体递送系统。术语“有效量”是指足以获得所需结果的量，其可能未必为治疗性结果。举例来说，“有效量”可为抑制酶所需要的量。
[0129]
如本文所用，术语“治疗(treating/treatment)”意指用于获得关于受试者的疾病、病症或医学病状(如肺纤维化)的有益或所需结果的方法，其包括(但不限于)以下：(a)预防疾病或医学病状出现，例如预防疾病或医学病状复发或预防性治疗易患所述疾病或医学病状的受试者；(b)改善疾病或医学病状，例如，消除受试者的疾病或医学病状或使所述疾病或医学病状消退；(c)抑制疾病或医学病状，例如，减缓或遏制受试者的疾病或医学病状的发展；或(d)减轻受试者的疾病或医学病状的症状。举例来说，“治疗肺纤维化”将包括预防纤维化出现，改善纤维化，抑制纤维化，和减轻纤维化的症状(例如提高血液中的氧含量和肺脏功能测试改善)。此外，经由根除或改善与潜在病症相关的一种或多种生理症状来达成治疗益处，从而观察到受试者的改善，尽管所述受试者仍可能罹患潜在病症。
[0130]“治疗作用”，如所述术语在本文中所用，涵盖如上文所述的治疗益处和/或预防益处。预防作用包括延缓或消除疾病或病状的出现；延缓或消除疾病或病状的症状发作；减缓、阻止或逆转疾病或病状的进展；或其任何组合。
[0131]
如本文所用，术语“共投药”、“组合投药”和其文法等效语涵盖向包括人类的动物投与两种或更多种药剂，使得两种药剂和/或其代谢物均在相同时间存在于受试者中。共投药包括以个别组合物同时投与、个别组合物在不同时间投与，或以两种药剂均存在于其中的组合物投与。
[0132]
术语“拮抗剂”和“抑制剂”可互换使用，并且其是指具有抑制靶蛋白(例如alk5)的
生物功能(例如活性、表达、结合、蛋白质-蛋白质相互作用)能力的化合物。因此，术语“拮抗剂”与“抑制剂”是在靶蛋白的生物学作用的情形下定义。尽管本文中的优选拮抗剂会与目标发生特异性相互作用(例如结合于目标)，但通过与靶蛋白作为其中成员的信号转导路径中的其它成员发生相互作用来抑制靶蛋白生物活性的化合物也特别包括于这一定义内。
[0133]
术语“选择性抑制(selective inhibition)”或“选择性地抑制(selectively inhibit)”是指生物学活性剂经由与目标的直接或间接相互作用而相较于脱靶信号传导活性优先降低标靶信号传导活性的能力。
[0134]
术语“受试者”和“患者”是指动物，如哺乳动物，例如人类。本文所述方法可适用于人类治疗和兽医应用。在一些实施例中，受试者为哺乳动物，并且在一些实施例中，受试者为人类。“哺乳动物”包括人类，以及家畜(如实验动物和家养宠物(例如猫、犬、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔))和非家畜(如野生动物)两者，等。
[0135]“前药”意指可在生理学条件下或通过溶剂分解而转化为本文所述的生物学活性化合物(例如式(i)、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)的化合物)的化合物。因此，术语“前药”是指药学上可接受的生物学活性化合物的前体。在一些方面，当投与受试者时，前药无活性，但在体内转化为活性化合物，例如通过水解。前药化合物通常在哺乳动物生物体中提供可溶性、组织相容性或延时释放的优点(参见例如，邦加德(bundgard),h.,前药设计(design of prodrugs)(1985),第7-9页,第21-24页(elsevier,阿姆斯特丹(amsterdam))；希古契(higuchi),t.等人,“作为新颖递送系统的前药(pro-drugs as novel delivery systems)”,(1987)a.c.s.专题讨论会系列书(a.c.s.symposium series),第14卷；和药物设计中的生物可逆性载体(bioreversible carriers in drug design),爱德华b.罗氏(edward b.roche)编,美国制药协会和佩加蒙出版社(american pharmaceutical association and pergamon press))，其中的每一个以全文引用的方式并入本文中。术语“前药”还意指包括任何共价键结的载剂，当此类前药投与哺乳动物受试者时，其释放活性化合物于体内。如本文所述的活性化合物的前药通常通过修饰活性化合物中存在的官能团来制备，其方式为使得修饰在常规操作中或在体内裂解为亲本活性化合物。前药包括其中羟基、氨基或巯基键结于任何基团的化合物，当向哺乳动物受试者投与活性化合物前药时，所述基团裂解而分别形成游离羟基、游离氨基或游离巯基。前药的实例包括(但不限于)活性化合物中的羟基官能团的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物，或胺官能团的乙酰胺、甲酰胺和苯甲酰胺衍生物，等。
[0136]
术语“体内”是指发生于受试者体内的事件。
[0137]
术语“体外”是指发生于受试者体外的事件。举例来说，体外分析涵盖受试者体外的任何分析操作。体外分析涵盖基于细胞的分析，其中使用存活或死亡细胞。体外分析还涵盖无细胞分析，其中不使用完整细胞。
[0138]
本公开还意图涵盖所公开的化合物的体内代谢产物。此类产物可例如由所投与化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、酯化等产生，主要由于酶促过程产生。因此，本公开包括通过包含向哺乳动物投与本公开的化合物持续足以产生其代谢产物的时段的方法而产生的化合物。此类产物通常通过向动物(如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴)或向人类投与可检测剂量的放射性标记的本公开化合物，使代谢进行足够时间并将其转化产物从尿液、血液或其它生物样品分离来鉴别。
[0139]
肺脏功能测试包括检查肺脏工作情况的测试。举例来说，肺活量测量法测量肺脏可容纳的空气量以及可从肺脏排空空气的力量情况。用力呼气量(fev)为用力呼吸期间可呼出的量的量度。举例来说，fev1为受试者可在一秒内从其肺脏用力呼出的空气量。用力肺活量(fvc)为fev测试期间呼气的总量。fev1/fvc的比率也称为气流指数或蒂弗诺-皮内利(tiffeneau-pinelli)指数，其为用于评定患者的肺脏功能的健康的量度。《80％的比率指示阻塞性缺陷存在于肺脏中，如慢性阻塞性肺病(copd)。》80％的比率指示限制性缺陷存在于肺脏中，如肺纤维化。限制性肺脏疾病中》80％的比率由fev1和fvc均降低产生，但fvc下降超过fev1，产生高于80％值。
[0140]
术语“转化生长因子-β”也可称为tgf-β、转化生长因子β-1或tgf-β-1。其也裂解为潜伏相关肽(lap)。
[0141]
术语“tgf-β受体ii”也可称为tβrii、ii型tgf-β受体、tgf-βrii、tgf-β受体类型-2、tgfr-2、tgf-βii型受体、转化生长因子-β受体ii型、tgf-β受体ii型或tβr-ii。
[0142]
术语“tgf-β受体i”也可称为tβri、i型tgf-β受体、tgf-βri、tgf-β受体1型、tgfr-1、53kd的活化素a受体ii型样蛋白激酶、活化素受体样激酶5、alk-5、alk5、丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶受体r4、skr4、tgf-βi型受体、转化生长因子-β受体i型、tgf-β受体i型、转化生长因子β受体i、tgf-β受体1或tβr-i。
[0143]
本公开提供能够选择性地结合于alk5和/或调节alk5的化合物。在一些实施例中，化合物通过结合于一种或多种氨基酸和/或一个或多个金属离子或与一种或多种氨基酸和/或一个或多个金属离子相互作用来调节alk5。这些化合物的结合可能破坏alk5下游信号传导。
[0144]
在某些方面，本公开提供一种式(i')化合物：
[0145][0146]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0147]
w选自ch和n；
[0148]
x和y各自独立地选自c和n；
[0149]
a为0至3的整数；
[0150]
b为0至3的整数；
[0151]
r1在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0152]
l1在每一情况下，独立地选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、c
2-6
亚炔基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；
[0153]
l2在每一情况下，独立地选自不存在、-o-、-s-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-c(o)o-、-oc(o)-、-oc(o)o-、-c(o)n(r
11
)-、-c(o)n(r
11
)c(o)-、-c(o)n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)o-、-oc(o)n(r
11
)-、-c(nr
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)-、-c
nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0166]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环；并且
[0167]r13
和r
14
与其所连接的氮原子一起形成杂环，其任选地经一个或多个r
12
取代。
[0168]
在一些实施例中，对于式(i')化合物，b为1至3的整数，如b为1或2。在一些实施例中，b为1。在一些实施例中，b为2。在一些实施例中，式(i')化合物为式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0169][0170]
在一些实施例中，对于式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r3和r4与其所连接的原子一起形成c
3-8
碳环或3至8元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代。例如，r3和r4可一起形成可一起形成其中的每一个可任选地进一步经一个或多个r
10
取代。在一些实施例中，r4和r5与其所连接的原子一起形成3至8元杂环，其中的每一个
任选地经一个或多个r
10
取代。例如，r4和r5可一起形成可一起形成可一起形成其中的每一个可任选地进一步经一个或多个r
10
取代。
[0171]
在某些方面，本公开提供一种式(i)化合物：
[0172][0173]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0174]
w选自ch和n；
[0175]
x和y各自独立地选自c和n；
[0176]
a为0至3的整数；
[0177]
r1在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0178]
l1选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、c
2-6
亚炔基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；
[0179]
l2选自不存在、-o-、-s-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-c(o)o-、-oc(o)-、-oc(o)o-、-c(o)n(r
11
)-、-c(o)n(r
11
)c(o)-、-c(o)n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)o-、-oc(o)n(r
11
)-、-c(nr
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)-、-c(nr
11
)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)n(r
11
)-、-s(o)
2-、-os(o)-、-s(o)o-、-s(o)-、-os(o)2、-s(o)2o-、-n(r
11
)s(o)
2-、-s(o)2n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)-、-s(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)2n(r
11
)-和-n(r
11
)s(o)n(r
11
)-；
[0180]
r2在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0181]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自r
11
；
[0182]r10
在每一情况下，独立地选自：
[0183]
卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)；
[0184]c1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0185]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0186]
其中r
10
中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0187]r11
在每一情况下，独立地选自：
[0188]
氢、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
；
[0189]c1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，其中的每一个在每一情况下，独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0190]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0191]
其中r
11
中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-no2、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-s(＝o)r
12
、-s(＝o)2r
12
、-s(＝o)2n(r
12
)2、-s(＝o)2nr
13r14
、-nr
12
s(＝o)2r
12
、-nr
12
s(＝o)2n(r
12
)2、-nr
12
s(＝o)2nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-oc(o)n(r
12
)2、-oc(o)nr
13r14
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)or
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-nr
12
c(o)nr
13r14
、-c(o)n(r
12
)2、-c(o)nr
13r14
、-p(o)(or
12
)2、-p(o)(r
12
)2、＝o、＝s、＝n(r
12
)、r
12
、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0192]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
2-10
烯基、c
2-10
炔基、1至6元杂烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：卤素、-cn、-no2、-nh2、-nhch3、-nhch2ch3、＝o、-oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-12
碳环或3至6元杂环；并且
[0193]r13
和r
14
与其所连接的氮原子一起形成杂环，其任选地经一个或多个r
12
取代。
[0194]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，a为1至3的整数。例如，a可为1或2。
[0195]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，x和y中的至少一个为n。在一些实施例中，x为c并且y为n，任选地其中r3为氢，r4为氢并且r5不存
在。在一些实施例中，x为n并且y为c，任选地其中r3不存在并且r4和r5各自为氢。在一些实施例中，x为n并且y为n，任选地其中r3和r4各自不存在并且r5为氢。
[0196]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢；c
1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-nr
13r14
、-c(o)r
12
、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-oc(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2、c
3-12
碳环和3至12元杂环；和c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自r
12
的取代基取代。在一些实施例中，r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-ch3、-ch
2-苯基、-ch
2-吡啶基、-och3、-nh2、四氢吡喃基、-ch2nh-(2-氟苯基)、-nhch2ch
2-吗啉基和-ch2c(o)oh。在一些实施例中，r3、r4和r5各自独立地不存在或为氢。在一些实施例中，r3、r4和r5各自独立地不存在或选自-o(c
1-6
烷基)和r
11
。在一些实施例中，r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-ch3、-ch
2-苯基、-ch
2-吡啶基、-oh、-och3、-och2ch3、-nh2、四氢吡喃基、-ch2nh-(2-氟苯基)、-nhch2ch
2-吗啉基和-ch2c(o)oh。在一些实施例中，r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-oh、-och3和-och2ch3。
[0197]
在一些实施例中，式(i)、式(i')或式(i'-a)化合物为式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物：
[0198][0198]
在一些实施例中，对于式(i-a)、式(i-b)或式(i-c)化合物，r1为-ch3。
[0199]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，w为n。在一些实施例中，w为ch。
[0200]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r1在每一情况下，独立地选自卤素、-o(c
1-4
烷基)、-s(c
1-4
烷基)、-n(c
1-4
烷基)、-c(o)(c
1-4
烷基)、-c(o)o(c
1-4
烷基)、-oc(o)(c
1-4
烷基)、c
1-4
烷基、c
2-4
烯基、c
2-4
炔基、c
1-4
卤烷基、c
3-6
碳环和3至6元杂环。在一些实施例中，r1在每一情况下，独立地选自卤素、c
1-4
烷基和c
1-4
卤烷基。在一些实施例中，r1在每一情况下，独立地选自氟、c
1-4
烷基和c
1-4
氟烷基。在一些实施例中，r1在每一情况下，独立地选自-f、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2f、-chf2和-cf3。在一些实施例中，a为1或2，如a为1。在一些实施例中，a为1并且r1选自卤素、c
1-4
烷基和c
1-4
卤烷基。在一些实施例中，a为1并且r1选自-f、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2f、-chf2和-cf3。在一些实施例中，a为1并且r1为ch3，如r1为6-甲基。在一些实施例中，a为2并且r1在每一情况下，独立地选自卤素、c
1-4
烷基和c
1-4
卤烷基。在一些实施例中，a为2并且r1在每一情况下，独立地选自-f、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-ch2f、-chf2和-cf3。在
一些实施例中，a为2并且r1为5-氟-6-甲基。
[0201]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，l1选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代。在一些实施例中，l1选自不存在；c
1-6
亚烷基、3至10元亚杂环烷基、5至10元亚杂芳基和c
6-10
亚芳基，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代。在一些实施例中，l1选自3至10元亚杂环烷基、5至10元亚杂芳基和c
6-10
亚芳基，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代。在一些实施例中，l1为c
1-6
亚烷基，其任选地经一个或多个r
10
取代。在一些实施例中，l1选自不存在、亚吡唑基、亚三唑基、亚咪唑基、亚噁唑基、咪唑[1,2-a]亚吡嗪基、亚苯基、亚吡啶基、亚吡嗪基、亚氮杂环丁烷基、亚吡咯烷基、2,5-亚二氢吡咯基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚二氮杂环庚烷基、氮杂双环[3.2.1]亚辛烷基、二氮杂螺[4.4]亚壬烷基、氮杂螺[3.3]亚庚烷基、亚环己基、亚环己烯基、亚甲基、亚乙基和亚丙基。在一些实施例中，l1选自不存在、亚吡唑基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚环己烯基、亚甲基和亚乙基。在一些实施例中，l1选自不存在、亚吡唑基、亚环己烯基和亚甲基。在一些实施例中，l1不存在。在一些实施例中，l1为亚吡唑基。在一些实施例中，l1为亚环己烯基。在一些实施例中，l1为亚甲基。在一些实施例中，l1未经取代。
[0202]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，l2选自不存在、-o-、-s-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-c(o)o-、-oc(o)-、-oc(o)o-、-c(o)n(r
11
)-、-c(o)n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)o-、-oc(o)n(r
11
)-、-c(nr
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)-、-c(nr
11
)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)n(r
11
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
11
)s(o)
2-和-s(o)2n(r
11
)-。在一些实施例中，l2选自不存在、-o-、-n(r
11
)-、-c(o)o-、-c(o)n(r
11
)-和-n(r
11
)c(o)-。在一些实施例中，l2选自不存在、-o-、-nh-、-c(o)o-、-c(o)nh-和-nhc(o)-。在一些实施例中，l2不存在。在一些实施例中，l2为-o-。在一些实施例中，l2为-nh-。在一些实施例中，l2为-c(o)o-。在一些实施例中，l2为-c(o)nh-。在一些实施例中，l2为-nhc(o)-。
[0203]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r2选自：
[0204]
卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2；
[0205]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0206]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0207]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-nr
12
c(o)n(r
12
)2、-c(o)n(r
12
)2、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。在一些实施例中，r
12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经选自卤素、-nh2、-nhch3和-och3的一个或多个取代基取代。
[0208]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r2选自：
[0209]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0210]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0211]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0212]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。在一些实施例中，r
12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经选自卤素、-nh2、-nhch3和-och3的一个或多个取代基取代。
[0213]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r2选自c
3-6
环烷基、c
3-6
环烯、3至6元杂环烷基和5至6元杂芳基，其中的每一个任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2和-ch3。在一些实施例中，r2为经以下取代的c
1-3
烷基：c
3-6
环烷基、c
3-6
环烯、3至6元杂环烷基或5至6元杂芳基，其中的每一个任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2nh2、-ch2nhch3、-ch2n(ch3)2和-ch3。
[0214]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0215]
l1选自不存在、c
3-12
碳环和3至12元杂环；
[0216]
l2不存在；并且
[0217]
r2选自：
[0218]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0219]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0220]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0221]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0222]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0223]
l1选自不存在；
[0224]
l2选自-o-、-nh-、-c(o)o-、-c(o)nh-和-nhc(o)-；并且
[0225]
r2选自：
[0226]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0227]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0228]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0229]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0230]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r
2-l
2-l
1-选自：
[0231]
[0232]
在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自选自
在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自选自在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自
[0233]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，r
2-l
2-l
1-选自：
[0234]
[0235]
[0236]
在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自选自在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自
[0237]
在一些实施例中，式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物包含式-c(o)or
15
或-oc(o)r
15
的端酯，其中r
15
包含1至12个碳原子和至少一种碱性胺。在一些实施例中，r
15
的分子量在30与200g/mol之间。端酯可通过人类血浆和/或人类肝脏中所存在的一种或多种水解酶(例如酯酶)代谢成羧酸和醇。化合物的生物活性可大于羧酸和醇的生物活性。例如，化合物可展现出比羧酸和醇高至少1个单位或更高的beas2b pic
50
(根据实例71中所提供的分析评定)。在一些实施例中，r
15
为-(c
0-4
烷基)(4至10元杂环烷基)，其中所述杂环烷基包含1、2或3个氮原子，并且其中所述杂环烷基任选地经一个或多个选自c
1-4
烷基的取代基取代。
[0238]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，l2为-c(o)o-或-oc(o)-，或r2包含-c(o)or
12
或-oc(o)r
12
。在一些实施例中，l2为-c(o)o-并且r2包含至少一种碱性胺。在一些实施例中，r2包含-c(o)or
12
，其中r
12
包含至少一种碱性胺。在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自其中d和e各自独立地选自3至8元杂环，其中的每一个独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、-nhch3、-n(ch3)2、-ch2ch2n(ch3)2、-c(o)ch3、-c(o)oh、-c(o)nh2、＝o、-oh、-ch2oh、-ch2ch2oh、-och3、-och2ch3、-ch3、-ch2ch3、-ch(ch3)2、-c(ch3)3、c
3-8
碳环和3至6元杂环。在一些实施例中，d和e各自独立地选自4至6元杂环，其中的每一个独立地任选地经一个或多个-ch3取代。在一些实施例中，杂环包含至少一个氮原子。在一些实施例中，d和e各自未经取代。在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自
在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自选自
在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自选自在一些实施例中，r
2-l
2-l
1-选自
[0239]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0240]
l1选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环；
[0241]
l2选自不存在、-nh-、-c(o)o-和-oc(o)-；
[0242]
r2选自：
[0243]-c(o)or
12
和-oc(o)r
12
；
[0244]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0245]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0246]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-oc(o)r
12
和c
1-6
烷基；并且
[0247]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：-nh2、-ch3、c
3-12
碳环-nh2或3至6元杂环。
[0248]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0249]
l1不存在；
[0250]
l2选自-c(o)o-和-oc(o)-；并且
[0251]
r2选自：
[0252]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0253]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0254]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经选自-nh2和c
1-6
烷基的一个或多个取代基取代。
[0255]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0256]
l1为3至12元杂环；
[0257]
l2选自-c(o)o-和-oc(o)-；并且
[0258]
r2选自：
[0259]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-nh2、c
3-12
碳环和3至12
元杂环；以及
[0260]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0261]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经选自-nh2和c
1-6
烷基的一个或多个取代基取代。
[0262]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0263]
l1不存在；
[0264]
l2为-nh-；并且
[0265]
r2选自：
[0266]c1-10
烷基，经c
3-12
碳环或3至12元杂环取代；以及
[0267]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0268]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环经-c(o)or
12
或-oc(o)r
12
取代；
[0269]r12
在每一情况下，独立地选自氢；和c
1-10
烷基、c
3-12
碳环和3至12元杂环，其中的每一个任选地经以下取代：-nh2、-ch3、c
3-12
碳环-nh2或3至6元杂环。
[0270]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0271]
x和y各自独立地选自c和n，其中x和y中的至少一个为n；
[0272]
a为1；
[0273]
r1为ch3；
[0274]
l1选自不存在、c
3-6
碳环和3至6元杂环；
[0275]
l2选自不存在和-nh-；
[0276]
r2选自：
[0277]-nh2；
[0278]c1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自c
3-6
碳环和3至6元杂环的取代基取代；以及
[0279]c3-6
碳环和3至6元杂环，
[0280]
其中r2中的每一c
3-6
碳环和3至6元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、＝o、r
12
和c
1-6
烷基；
[0281]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-ch3、-ch
2-苯基、-ch
2-吡啶基、-och3、-nh2、四氢吡喃基、-ch2nh-(2-氟苯基)、-nhch2ch
2-吗啉基和-ch2c(o)oh；或r3和r4与其所连接的原子一起形成c
3-8
碳环或3至8元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；或r4和r5与其所连接的原子一起形成3至8元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；并且
[0282]r12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经卤素、-nh2、-nhch3和-nhch2ch3取代。在一些实施例中，w为ch。在一些实施例中，w为n。
[0283]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0284]
w选自ch和n；
[0285]
x和y各自独立地选自c和n；
[0286]
a为0至3的整数；
[0287]
b为0至3的整数；
[0288]
r1在每一情况下，独立地选自r
10
；
[0289]
l1在每一情况下，独立地选自不存在；c
1-6
亚烷基、c
2-6
亚烯基、c
2-6
亚炔基、c
3-12
碳环
和3至12元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；
[0290]
l2在每一情况下，独立地选自不存在、-o-、-s-、-n(r
11
)-、-c(o)-、-c(o)o-、-oc(o)-、-oc(o)o-、-c(o)n(r
11
)-、-c(o)n(r
11
)c(o)-、-c(o)n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)-、-n(r
11
)c(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(o)o-、-oc(o)n(r
11
)-、-c(nr
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)-、-c(nr
11
)n(r
11
)-、-n(r
11
)c(nr
11
)n(r
11
)-、-s(o)
2-、-os(o)-、-s(o)o-、-s(o)-、-os(o)2、-s(o)2o-、-n(r
11
)s(o)
2-、-s(o)2n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)-、-s(o)n(r
11
)-、-n(r
11
)s(o)2n(r
11
)-和-n(r
11
)s(o)n(r
11
)-；
[0291]
r2在每一情况下，独立地选自r
10
；并且
[0292]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自-o(c
1-6
烷基)和r
11
；或r3和r4与其所连接的原子一起形成c
3-8
碳环或3至8元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代；或r4和r5与其所连接的原子一起形成3至8元杂环，其中的每一个任选地经一个或多个r
10
取代。
[0293]
在一些实施例中，对于式(i-a)化合物：
[0294]
r1为ch3；
[0295]
w为ch；
[0296]
l1选自不存在、c
3-12
碳环和3至12元杂环；
[0297]
l2选自不存在、-c(o)o-和-nhc(o)-；并且
[0298]
r2选自：
[0299]-nh2；和
[0300]c0-6
烷基-(3至12元杂环)。
[0301]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0302]
r1为ch3；
[0303]
l1选自不存在、c
3-12
碳环和3至12元杂环；
[0304]
l2不存在；并且
[0305]
r2选自：
[0306]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0307]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0308]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0309]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0310]
在一些实施例中，w为ch。在一些实施例中，w为n。
[0311]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0312]
r1为ch3；
[0313]
l1选自不存在；
[0314]
l2选自-o-、-nh-、-c(o)o-、-c(o)nh-和-nhc(o)-；并且
[0315]
r2选自：
[0316]-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、-c(o)n(r
12
)2；
[0317]c1-10
烷基，其任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-cn、-or
12
、-sr
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、c
3-12
碳环和3至12元杂环；以及
[0318]c3-12
碳环和3至12元杂环，
[0319]
其中r2中的每一c
3-12
碳环和3至12元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-cn、-or
12
、-n(r
12
)2、-c(o)or
12
、-nr
12
c(o)r
12
、＝o、r
12
、c
1-6
烷基和c
1-6
卤烷基。
[0320]
在一些实施例中，w为ch。在一些实施例中，w为n。
[0321]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0322]
r1为ch3；
[0323]
l1选自不存在、c
3-6
碳环和3至6元杂环；
[0324]
l2选自不存在和-nh-；
[0325]
r2选自：
[0326]-nh2；
[0327]c1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自c
3-6
碳环和3至6元杂环的取代基取代；以及
[0328]c3-6
碳环和3至6元杂环，
[0329]
其中r2中的每一c
3-6
碳环和3至6元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、＝o、r
12
和c
1-6
烷基；并且
[0330]r12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经卤素、-nh2、-nhch3和-nhch2ch3取代。在一些实施例中，w为ch。在一些实施例中，w为n。
[0331]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0332]
w为ch；
[0333]
l1选自不存在、c
3-6
碳环和3至6元杂环；
[0334]
l2选自不存在和-nh-；
[0335]
r2选自：
[0336]-nh2；
[0337]c1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自c
3-6
碳环和3至6元杂环的取代基取代；以及
[0338]c3-6
碳环和3至6元杂环，
[0339]
其中r2中的每一c
3-6
碳环和3至6元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、＝o、r
12
和c
1-6
烷基；
[0340]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-ch3、-ch
2-苯基、-ch
2-吡啶基、-och3、-nh2、四氢吡喃基、-ch2nh-(2-氟苯基)、-nhch2ch
2-吗啉基和-ch2c(o)oh；并且
[0341]r12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经卤素、-nh2、-nhch3和-nhch2ch3取代。
[0342]
在一些实施例中，对于式(i)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物：
[0343]
w为n；
[0344]
l1选自不存在、c
3-6
碳环和3至6元杂环；
[0345]
l2选自不存在和-nh-；
[0346]
r2选自：
[0347]-nh2；
[0348]c1-6
烷基，其任选地经一个或多个选自c
3-6
碳环和3至6元杂环的取代基取代；以及
[0349]c3-6
碳环和3至6元杂环，
[0350]
其中r2中的每一c
3-6
碳环和3至6元杂环独立地任选地经一个或多个选自以下的取代基取代：-n(r
12
)2、＝o、r
12
和c
1-6
烷基；
[0351]
r3、r4和r5各自独立地不存在或选自氢、-ch3、-ch
2-苯基、-ch
2-吡啶基、-och3、-nh2、四氢吡喃基、-ch2nh-(2-氟苯基)、-nhch2ch
2-吗啉基和-ch2c(o)oh；并且
[0352]r12
在每一情况下，独立地选自氢和c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基任选地经卤素、-nh2、-nhch3和-nhch2ch3取代。
[0353]
在一些实施例中，式(i')化合物为选自以下的式的化合物：在一些实施例中，式(i')化合物为选自以下的式的化合物：
[0354]
[0355][0355]
或其药学上可接受的盐。在一些实施例中，式(i')化合物为式如化合物。
[0356]
在一些实施例中，式(i)、式(i')、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物以大体上纯的立体异构体形式提供。在一些实施例中，以至少80％对映异构体过量，如至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.9％对映异构体过量提供立体异构体。
[0357]
在一些实施例中，本公开提供软性alk5抑制剂。如本文所使用，术语“软性药物”或“软性alk5抑制剂”是指在进入全身循环后转化成相对于母体化合物展现降低的生物活性
的可预测代谢物的生物活性化合物。软性药物优选在目标器官或组织处局部发挥其所需治疗作用，随后在进入全身循环后快速转化成经设计活性低于母体软性药物的可预测代谢物，由此降低生物活性化合物的全身性暴露量。因此，软性药物相对于具有相当生物活性的非软性药物化合物具有更低的非所需副作用可能性。优选地，本公开的软性药物在预期作用部位(例如肺脏)处展现良好稳定性，在进入全身循环后快速代谢，并且相比于对应代谢物呈现更大功能活性。
[0358]
在一些实施例中，本文所提供的软性药物展现大于或等于9的alk5 pki，同时对应软性药物代谢物展现9或更小(如8或更小)的alk5 pki(根据实例70中所提供的分析评定)。在一些实施例中，软性药物与对应软性药物代谢物的pki差值为至少0.5，如至少0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或至少2.0。在一些实施例中，本文所提供的软性药物展现大于或等于7的beas2b pic
50
，同时对应软性药物代谢物展现6或更小的beas2b pic
50
(根据实例71中所提供的分析评定)。在一些实施例中，软性药物与对应软性药物代谢物的pic
50
差值为至少1.0，如至少1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或至少2.0。在一些实施例中，软性药物与对应软性药物代谢物展现相似alk5 pki值，但软性药物在细胞中更具活性(例如，软性药物展现出比软性药物代谢物高至少1.0的beas2b pic
50
)。
[0359]
在一些实施例中，本公开提供包含酯的软性alk5抑制剂。优选地，酯抑制alk5活性，同时酯的对应羧酸展现降低的alk5抑制活性。举例来说，酯与对应酸的alk5 pki差值可为至少1.0。在一些实施例中，本公开的软性药物酯(例如)通过吸入投与到肺脏，并抑制肺脏中的alk5活性。然而，在离开肺脏后，酯可容易地水解成对应羧酸，因此降低酯的全身性暴露量。
[0360][0361]
本文所述的化学实体可根据本文中的一个或多个说明流程和/或所属领域中已知的技术合成。本文所使用的材料为市售的或通过所属领域中通常已知的合成方法制备。这些流程不限于实例中所列出的化合物或任何特定取代基，其出于说明的目的而采用。尽管不同步骤描述并描绘于流程1-5和实例1-69中，但在一些情况下可以与流程1-5和实例1-69中所示的次序不同的次序进行所述步骤。可对这些合成反应流程进行各种修改并将向本公开已提及的所属领域的技术人员提出。除非另外指明，否则每一方案中的编号或r基团通常具有与本文中其它地方所定义的那些相同的含义。
[0362]
除非相反地说明，否则本文所述的反应在大气压下一般在-10℃至200℃的温度范围内发生。另外，除非另外指定，否则反应时间和条件意图为近似值，例如在约大气压下在约-10℃至约110℃的温度范围内经约1至约24小时的时段发生；使反应过夜进行平均约16小时的时段。
[0363]
一般来说，本公开的化合物可通过以下反应流程制备：
[0364]
流程1
[0365][0366]
在一些实施例中，式1h或式1k化合物可根据流程1制备。例如，3-氨基吡啶1a可与丁烯醛1b在适合酸存在下反应，得到萘啶1c。可进行未经取代或r1取代的n-甲氧基-n-甲基吡啶甲酰胺的偶合，得到乙酮1e。为了将1e转化成吡唑，1e可首先与dmf
·
dma在高温下反应得到中间物1f，其可与肼单水合物反应，得到吡唑1g。任选地，1g可经历一种或多种偶合反应并任选地进行一种或多种保护基操作，以提供式1h的吡唑。替代地，1e的氧化可提供二酮1i，其可在乌洛托品(urotropine)和乙酸铵存在下转化成咪唑1j。任选地，1j可经历一种或多种偶合反应并任选地进行一种或多种保护基操作，以提供式1k的咪唑。
[0367]
流程2
[0368][0369]
在一些实施例中，式2f化合物可根据流程2制备。例如，萘啶1c可氧化，得到醛2a。醛可经历赛弗思-吉伯特(seyferth-gilbert)同系化，任选地使用贝特曼-大平(bestmann-ohira)试剂，得到炔烃2b。2b经由薗头反应与未经取代或r1取代的碘吡啶(2c)的交叉偶合得到炔烃2d，其在适合叠氮，如tms-n3存在下可转化为三唑2e。任选地，2e可经历一个或多个偶合反应，并任选地进行一种或多种保护基操作，得到式2f的三唑。
[0370]
流程3
[0371][0372]
在一些实施例中，式3h或式3k化合物可根据流程3制备。举例来说，未经取代或r1取代的2-吡啶甲醛(3a)可在phnh2存在下与膦酸酯3b反应以提供3c，其可与醛3d偶合，得到乙酮3e。从3e开始，可遵循流程1中概述的相同通用程序以提供式3h的吡唑或式3k的咪唑。
[0373]
流程4
[0374][0375]
在一些实施例中，式4b化合物可根据流程4制备。举例来说，遵循流程2中概述的相同通用程序，喹啉3d可经历赛弗思-吉伯特同系化并经由薗头反应与适合的吡啶偶合以提供炔烃4a。在环化成三唑之后，一种或多种任选的偶合反应和任选的一种或多种保护基操作可提供式4b的三唑。
[0376]
流程5
[0377][0378]
在一些实施例中，式5c、式5e或式5g化合物可根据流程5制备。举例来说，杂芳基溴化物5a可经历与非环状伯胺或仲胺(5b)或环状仲胺(5d)的c-n偶合反应，任选的pd催化的偶合反应，如布赫瓦尔德-哈特维希(buchwald-hartwig)胺化，以分别提供式5c或式5e的杂芳基胺。替代地，可经由铃木反应进行所需-l1l2r2取代基的安设，得到式5g化合物。
[0379]
在一些实施例中，本公开的化合物，例如表1中给出的式的化合物根据流程1-5、实
例1-69中概述的通用途径中的一种或通过所属领域中一般已知的方法合成。在一些实施例中，示例性化合物可包括(但不限于)选自表1的化合物或其盐。
[0380]
表1
[0381]
[0382]
[0383]
[0384]
[0385]
[0386]
[0387]
[0388]
[0389]
[0390]
[0391]
[0392]
[0393]
[0394]
[0395]
[0396]
[0397]
[0398]
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[0555]
[0556]
[0557][0558]
方法
[0559]
在一些方面，本公开提供一种抑制tgfβ信号传导的方法，其包含使细胞与有效量的本文所公开的化合物，如式(i)、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物接触。在一些实施例中，本公开提供一种抑制alk5的方法，其包含使alk5与有效量的本文所公开的化合物接触。alk5或tgfβ信号传导的抑制可通过所属领域中已知的多种方法评定。非限制性实例包括展示(a)alk5的激酶活性降低；(b)tgfβ/tgfβ-rii复合物与alk5之间的结合亲和力降低；(c)tgfβ信号传导路径下游的磷酸化胞内信号传导分子含量降低，如psmad2或psmad3含量降低；(d)alk5对下游信号传导分子，如smad2和smad3的结合降低；和/或(e)atp含量提高或adp含量降低。试剂盒和市售分析可用于测定以上中的一项或多项。
[0560]
在一些方面，本公开提供一种治疗受试者的alk5介导的疾病或病状的方法，其包含向受试者投与治疗有效量的本文所公开的化合物。在一些实施例中，所述疾病或病状选
自纤维化和癌症。在一些实施例中，疾病或病状为肺纤维化，如特发性肺纤维化或病毒诱发的纤维化。在一些实施例中，疾病或病状为肠道纤维化。在一些实施例中，所述疾病或病状为秃发。在一些实施例中，疾病为神经退化性疾病，如阿尔茨海默病(alzheimer's disease)。在一些实施例中，本公开提供一种逆转老化症状的方法。举例来说，所述方法可增强神经生成、减少神经发炎、改善认知性能、再生肝脏组织和降低p16含量。
[0561]
在一些方面，本公开提供一种治疗纤维化的方法，其包含向患者投与有效量的本文所公开的化合物。在一些实施例中，纤维化通过alk5介导。在一些实施例中，纤维化选自全身性硬化症、全身性纤维化、器官特异性纤维化、肾脏纤维化、肺纤维化、肝纤维化、门静脉纤维化、皮肤纤维化、膀胱纤维化、肠道纤维化、腹膜纤维化、骨髓纤维化、口腔粘膜下纤维化和视网膜纤维化。在一些实施例中，纤维化为肺纤维化，如特发性肺纤维化(ipf)、家族性肺纤维化(fpf)、肺间质纤维化、与哮喘相关的纤维化、与慢性阻塞性肺病(copd)相关的纤维化、二氧化硅诱发的纤维化、石棉诱发的纤维化或化学疗法诱发的肺脏纤维化。在一些实施例中，纤维化为特发性肺纤维化(ipf)。在一些实施例中，纤维化为tgf-β介导的肺纤维化。在一些实施例中，患者已经诊断患有急性呼吸窘迫综合征(ards)。在一些实施例中，纤维化为急性纤维化。在一些实施例中，纤维化为慢性纤维化。
[0562]
在一些方面，本公开提供一种治疗由病毒感染诱发的肺纤维化的方法，其包含向患者投与本文所公开的化合物。肺纤维化可由以下诱发：红细胞病毒、依赖病毒、乳突状瘤病毒、多瘤病毒、哺乳动物腺病毒、α疱疹病毒亚科、水痘疱疹病毒、γ疱疹病毒亚科、β疱疹病毒亚科、玫瑰疹病毒、正痘病毒、副痘病毒、软疣痘病毒、正肝炎dna病毒、肠病毒、鼻病毒、肝病毒、口蹄疫病毒、杯状病毒、星状病毒、α病毒、风疹病毒、黄病毒、c型肝炎病毒、呼肠孤病毒、环状病毒、轮状病毒、a型流感病毒、b型流感病毒、c型流感病毒、副粘液病毒、麻疹病毒、德国麻疹病毒(rubulavirus)、肺病毒、水泡病毒、狂犬病毒、布尼亚病毒(bunyavirus)、汉坦病毒(hantavirus)、内罗毕病毒(nairovirus)、白蛉热病毒、冠状病毒、沙状病毒、blv-htlv反转录病毒、慢病毒亚科(lentivirinae)、泡沫病毒亚科(spumavirinae)或纤丝病毒。在一些实施例中，纤维化为病毒诱发的纤维化，如病毒诱发的肺纤维化。在一些实施例中，纤维化选自ebv诱发的肺纤维化、cmv诱发的肺纤维化、疱疹病毒诱发的肺纤维化和冠状病毒诱发的肺纤维化。在一些实施例中，纤维化选自ebv诱发的肺纤维化、cmv诱发的肺纤维化、hhv-6诱发的肺纤维化、hhv-7诱发的肺纤维化、hhv-8诱发的肺纤维化、h5n1病毒诱发的肺纤维化、sars-cov诱发的肺纤维化、mers-cov诱发的肺纤维化和sars-cov-2诱发的肺纤维化。在一些实施例中，肺纤维化为冠状病毒诱发的肺纤维化。在一些实施例中，肺纤维化为sars-cov-2诱发的肺纤维化。在一些实施例中，肺纤维化为covid-19诱发的肺纤维化。
[0563]
在一些方面，本公开提供一种治疗急性肺损伤(ali)，其包含向患者投与本文所公开的化合物。在一些实施例中，本公开提供一种治疗急性呼吸窘迫综合征(ards)的方法，其包含向患者投与本文所公开的化合物。ards可处于早期急性损伤期或纤维增生期。在一些实施例中，ards为纤维增生ards。在一些实施例中，本公开提供一种治疗由ards引起的纤维化的方法，其包含向患者投与本文所公开的化合物。由ards引起的纤维化可为肺纤维化。在一些实施例中，本公开提供一种治疗由ali引起的纤维化的方法，其包含向患者投与本文所公开的化合物。由ali引起的纤维化可为肺纤维化。
[0564]
在一些方面，本公开提供一种治疗肠道纤维化的方法，其包含向患者投与本文所
公开的化合物。在一些实施例中，肠道纤维化是由alk5介导。在一些实施例中，以有效延迟与肠道纤维化相关的一种或多种特征的进展、减小其发生率或降低其程度的量投与化合物。在一些实施例中，以单次剂量或多剂量且以有效逆转已形成的纤维化的量投与化合物。
[0565]
在一些方面，本公开提供一种治疗癌症的方法，其包含向患者投与有效量的本文所公开的化合物。在一些实施例中，癌症是由alk5介导。在一些实施例中，癌症选自乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肺癌、肝细胞癌、成胶质细胞瘤、黑素瘤和胰腺癌。在一些实施例中，癌症为肺癌，如非小细胞肺癌。在一些方面，本公开提供一种治疗癌症(如非小细胞肺癌)的方法，其包含向患者投与有效量的本文所公开的化合物和免疫治疗剂。在一些实施例中，癌症为iii期非小细胞肺癌。在一些实施例中，所述方法进一步包含向患者投与辐射。在一些实施例中，免疫治疗剂为pd-1抑制剂或ctla-4抑制剂。在一些实施例中，免疫治疗剂选自阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗、德瓦鲁单抗、bgb-a317、曲美单抗(tremelimumab)和伊派利单抗(ipilimumab)。在一些实施例中，免疫治疗剂选自帕博利珠单抗和德瓦鲁单抗。
[0566]
本文所述的化合物(包括式(i)、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)和式(i'-c)化合物)为限制tgfβ活性的alk5抑制剂。tgfβ为涉及纤维变性疾病在全身中的引发和发展的若干因子中的一种。因而，本公开的化合物预期适用于通过投与治疗有效量的本文所公开的化合物来治疗、预防和/或降低患者的纤维化。通过抑制alk5，预期化合物增强罹患胞外基质过度沉积的身体区域中的纤维化形成。在下文描述那些区域。
[0567]
全身性纤维变性疾病
[0568]
全身性硬化症(ssc)为影响皮肤和内脏并导致自体抗体产生、小血管的血管内皮活化和由于成纤维细胞功能障碍的组织纤维化的自体免疫病症。转化生长因子β(tgf-β)已鉴别为ssc中的病理学纤维生成的调节因子(艾尔斯(ayers),n.b.等人，生物医学研究杂志(journal of biomedical research),2018,32(1)，第3页至第12页)。根据作者，“理解tgf-β路径在全身性硬化症的病理学中所起的必不可少的作用可提供治疗的可能出路和这一重度疾病的较好理解”。在一些实施例中，本公开提供一种治疗ssc的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0569]
多灶性纤维硬化(mf)和特发性多灶性纤维硬化(imf)为特征在于不同位点处的纤维损伤的病症并且包括腹膜后纤维化、纵隔纤维化和弗瑞德氏甲状腺炎(riedel'sthyroiditis)。多灶性纤维硬化和特发性多灶性纤维硬化均被视为igg4相关纤维化/疾病的结果并且据信tgf-β为涉及纤维化引发和发展的一种因子(帕达利(pardali),e.等人,国际分子科学杂志(int.j.mol.sci.),18,2157,第1页至第22页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗多灶性纤维硬化或特发性多灶性纤维硬化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0570]
在一些实施例中，本公开提供一种治疗肾源性全身性纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。肾源性全身性纤维化为主要发生在患有晚期肾衰竭的人(具有或不具有透析)中的罕见疾病。在凯利(kelly)等人进行的研究中(美国皮肤科学院杂志(j.am.acad.dermatol.),2008,58,6,第1025页至第1030页)，其展示tgf-β以及smad 2/3似乎与肾源性全身性纤维化中可见的纤维化有关。
[0571]
硬皮病样移植物抗宿主病(gvhd)为在同种异体骨髓移植之后两至三个月出现的
同种异体造血干细胞移植的普遍并发症。所述疾病导致自体抗体的产生以及皮肤和内部器官的纤维化。使用鼠皮肤gvhd模型，已展示，早期皮肤和肺脏疾病的进展可用tgf-β中和抗体抑制(麦科米克(mccormick),l.l.等人,免疫学杂志(j.immunol.),1999,163,第5693页至第5699页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗硬皮病样gvhd的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0572]
器官特异性纤维变性疾病
[0573]
心脏纤维化是指归因于心脏成纤维细胞异常增殖的心瓣膜异常增厚，导致心肌中的ecm过量沉积。成纤维细胞分泌胶原蛋白，其充当心脏的结构载体。然而，当在心脏中过度分泌胶原蛋白时，壁和瓣膜增厚会导致组织积聚于三尖瓣和肺瓣膜。这又造成失去灵活性并且最终瓣膜功能障碍导致心脏衰竭。心脏纤维化的特定类型为高血压相关心脏纤维化，如j.迪茨(diez)(临床高血压杂志(j.clin.hypertens.),2007,7月9日(7),第546页至第550页)所述。根据diez，心脏组织的组分变化在患有左心室肥大的高血压患者中产生并导致心脏组织的结构性重塑。一种改变涉及胶原蛋白类型i和iii分子的合成与降解之间的平衡破坏，导致胶原蛋白纤维过度积聚于心脏组织中。其它类型的心脏纤维化包括心肌梗塞后和却格司氏病(chagas disease)诱发的心肌纤维化。在却格司氏病中，转化生长因子β1(tgf-β1)已牵涉却格司氏病生理病理学，其中在感染期间上调动物模型表明tgf-β1路径(阿罗约-乔治(araujo-jorge),t.c.等人,临床药理学和治疗学(clin.pharmacol.ther.),2012,92(5),第613页至第621页；科沃(curvo),e.,奥斯瓦尔多
·
克鲁兹研究所(mem inst oswaldo cruz),2018,第113卷(4),e170440,第1页至第8页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗各种形式的心脏纤维化，如高血压相关心脏纤维化，心肌梗塞后或却格司氏病诱发的心肌纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0574]
肾纤维化涵盖与tgf-β的异常表达和活性相关的多种病症，包括(但不限于)糖尿病和高血压肾病、泌尿道阻塞诱发的肾脏纤维化、发炎性/自体免疫诱发的肾脏纤维化、马兜铃酸肾病、进行性肾脏纤维化和多囊肾脏疾病。如上文所论述，纤维化涉及ecm过量积聚，当用疤痕组织替换正常组织时，其又造成功能缺失(温(wynn),t.a.,临床研究杂志(j clin invest.),2007,117,第524页至第529页)。早在2005年，已在肾病模型中研究alk5抑制剂(拉平(laping),n.j.,药理学新见(current opinion in pharmacology),2003,3,第204页至第208页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗肾纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0575]
尤其难以治疗的一种纤维变性疾病为特发性肺纤维化(ipf)。ipf为存活率仅通过肺脏移植改善的慢性、进行性并且致死性纤维变性肺脏疾病。如尼达尼布(nintedanib)和吡非尼酮(pirfenidone)的目前经口疗法已展示减缓疾病进展，但具有导致患者顺应性中断和缺乏的不良作用。尽管在标靶不同路径的研发中存在其它疗法，患有ipf的患者仍存在未被满足的需要。
[0576]
尽管alk5为纤维变性疾病路径中重要并且已知的组分，但归因于全身性不良作用，尤其在心脏中的不良作用，在ipf中尚未实现alk5抑制剂的疗效。因此，本公开的目标之一为研发具有较高肺脏选择性和快速清除率的alk5抑制剂。本公开的一种优选实施例为用本文所述的化合物治疗患有特发性肺纤维化的患者，例如通过每天一次或两次投与具有最小全身性暴露量的可吸入alk5抑制剂。吸入的alk5抑制剂可以单一疗法形式投与或与其它
经口有效ipf疗法共同给药。在一些实施例中，本公开提供一种治疗特发性肺纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。在一些实施例中，化合物通过吸入投与。
[0577]
家族性肺纤维化为其中两个或更多个家庭成员已确诊ipf的遗传性疾病。在一些实施例中，本公开提供一种治疗家族性肺纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0578]
肺纤维化为与如sars和covid-19的病毒感染相关的典型临床特征。已显示sars介导的tgf-β信号传导促进纤维化并阻断感染sars-cov的宿主细胞的凋亡(赵(zhao),x.等人,生物化学杂志(j.biol.chem.),2008,283(6),第3272-3280页)。增加的tgf-β表达同样在经sars-cov-2感染的患者观察到，最终导致罹患肺纤维化。由sars-cov-2介导的tgf-β信号传导可促进成纤维细胞增殖和成肌纤维细胞分化，并阻断宿主细胞凋亡。(熊(xiong),y.等人,新兴微生物与感染(emerging microbes&infections),2020,9(1),第761-770页)。预期本公开化合物抑制增加的由病毒感染介导的tgf-β信号传导并预防、阻止、减缓或逆转与感染相关的肺纤维化的进展。因此，在一些实施例中，本公开提供一种治疗由病毒感染诱发的肺纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。在一些实施例中，肺纤维化由sars-cov或sars-cov-2诱发。在一些实施例中，化合物通过吸入投与。
[0579]
如间质性肺病(ild)、慢性阻塞性肺病(copd)和特发性肺纤维化(ipf)的慢性肺脏疾病会引起肺高血压(ph)。肺高血压为一种进行性疾病，其特征在于肺脏存在高血压。世界卫生组织(who)已界定五类ph(who第i类：肺动脉性高血压(pah)；who第ii类：左心病所致的肺高血压；who第iii类：肺脏疾病和/或缺氧所致的肺高血压；who第iv类：慢性血栓栓塞性肺高血压(cteph)；和who第v类：不明多因素机制的肺高血压)。tgf-β信号传导已牵涉ph的发病机制。另外，显示重度ph的野百合碱(mct)模型中的alk5的抑制减弱ph的发展并以剂量依赖型方式减少肺血管重塑，即通过降低rv收缩压、降低rv舒张压、增加心输出量和降低rv肥大(再尔曼(zaiman),a.l.等人,美国呼吸和重症监护医学杂志(am.j.respir.crit.care med.),2008,177,第896-905页)。预期本公开化合物抑制肺脏组织中的tgf-β信号传导并预防、阻止、减缓或逆转ph，尤其who第iii类ph的进展。因此，在一些实施例中，本公开提供一种治疗肺高血压的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。肺高血压可为who第iii类肺高血压，如肺纤维化相关肺高血压(ph-pf)或间质性肺病相关肺高血压(ph-ild)。在一些实施例中，化合物通过吸入投与。
[0580]
其它类型的间质性肺病包括(但不限于)：(1)起因于细菌、病毒或真菌的间质性肺炎；(2)通常与自体免疫病状，如类风湿性关节炎或硬皮病相关的非特异性间质性肺炎；(3)起因于吸入粉尘、霉菌或其它刺激物的过敏性肺炎；(4)隐源性机化性肺炎；(5)急性间质性肺炎；(6)脱屑性间质性肺炎；(7)类肉瘤病；(8)药物诱发的间质性肺病；和(9)进行性纤维化间质性肺病(pf-ild)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗间质性肺病的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0581]
转化生长因子(tgf)-β(1)和活化素-a均已牵涉哮喘中的呼吸道重塑(卡里亚瓦萨姆(kariyawasam),h.h.,过敏及临床免疫学期刊(j allergy clin immunol.),2009,9月,124(3),第454页至第462页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗哮喘的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0582]
慢性阻塞性肺病(copd)为特征在于起因于气管发炎和气肿的不良可逆和进行性气流限制的肺部病症，而ipf与漫射能力受损相关(奇洛西(chilosi),m.等人,呼吸研究(respir.res.),2012,13(1),3,第1页至第9页)。然而，两个疾病均证明肺泡的进行性损失，导致呼吸道功能重度障碍。与气肿相关的纤维化为已知的并且研究已展现慢性鼻窦疾病、肺纤维化、哮喘和copd中的tgf-β1参与(杨(yang),y.c.等人,过敏(allergy),2012,67,第1193页至第1202页)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗copd的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0583]
导致纤维化的其它类型的肺损伤包括二氧化硅诱发的肺尘埃沉着病(硅肺病)、石棉诱发的肺纤维化(石棉沉着病)和化学治疗剂诱发的肺纤维化。在一些实施例中，本公开提供一种治疗损伤诱发的纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0584]
在一些实施例中，本公开提供一种治疗肝纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。当肝脏重复或连续受损时，例如在患有慢性肝炎的患者中，肝脏中产生纤维化。tgf-β信号传导参与疾病进展的所有阶段，从初次肝脏损伤直到发炎和纤维化，到肝硬化和癌症(法夫雷加特(fabregat),i.等人,the febs期刊,2016,283(12),第2219页至第2232页)。
[0585]
相关病状涉及由特发性非肝硬化门静脉高血压(incph)产生的纤维化。这一疾病具有不明确病因，其特征在于门脉周性纤维化并涉及门静脉的小和中等分支。根据中沼(nakanuma)等人，患有硬皮病和incph的患者之间的小门静脉和皮肤发现类似(中沼,y.,肝脏病学研究(hepatol.res.),2009,39,第1023页至第1031页)。转化生长因子-β(tgf-β)和结缔组织生长因子(分别为纤维化相关和血管内皮生长因子)在血清、皮肤和门静脉中增加表明这些可为incph中的门静脉闭塞的机制。另外，kitao等人基于这些发现提出内皮间质转化(endmt)理论(北尾(kitao),a.等人,美国病理学杂志(am.j.pathol.),2009,175,第616页至第626页)。血清中tgf-β的增加可充当endmt的有效诱导物。在一些实施例中，本公开提供一种治疗incph的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0586]
其它类型的肝纤维化包括酒精性和非酒精性肝纤维化、c型肝炎诱发的肝纤维化、原发性胆汁性肝硬化或胆管炎和寄生虫诱发的肝纤维化(血吸虫病)。在一些实施例中，本公开提供一种治疗酒精性肝纤维化、非酒精性肝纤维化、c型肝炎诱发的肝纤维化、原发性胆汁性肝硬化、原发性胆汁性胆管炎或寄生虫诱发的肝纤维化(血吸虫病)的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0587]
原发性胆汁性胆管炎(pbc)和原发性硬化性胆管炎(psc)为两种类型的慢性肝病，其通常引起肝硬化和肝功能衰竭。pbc或psc患者的肝脏活检体通常展现发炎和纤维化。已显示结合于上皮细胞上的tgfβ1并且将其活化的整合素αvβ6的抑制会抑制啮齿动物中的胆道纤维化。(彭(peng),z-w.等人,肝脏病学(hepatology),2016,63,第217-232页)。因此，还预期tgf-β路径的抑制会抑制pbc和psc中的纤维变性过程。预期本公开化合物抑制肝脏组织中的tgf-β信号传导并预防、阻止、减缓或逆转pbc和psc的进展。因此，在一些实施例中，本公开提供一种治疗原发性胆汁性胆管炎或原发性硬化性胆管炎的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所述的化合物。在一些实施例中，本公开提供一种任选地在罹患pbc或psc的受试者中治疗肝纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所述的化合物。
[0588]
纤维变性皮肤病状包括(但不限于)肥厚性瘢痕形成、瘢痕瘤和局限性或全身性硬化症(硬皮病)。如先前所论述，tgf-β为结缔组织积聚的有效刺激物，并已牵涉硬皮病和其它纤维变性病症的致病机制(拉科斯(lakos),g.等人,美国病理学杂志,2004,165(1),第203页至第217页)。lakos等人证明，smad3充当正常皮肤成纤维细胞中的促纤维变性tgf-β反应的关键的胞内信号转导蛋白并发现tgf-β/smad3信号传导的定向破坏调节硬皮病小鼠模型中的皮肤纤维化。在一些实施例中，本公开提供一种治疗皮肤纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0589]
肠道纤维化为发炎性肠病(ibd)的常见并发症并且为严重临床问题。已表明tgf-β为肠道纤维化的主要驱动因子。另外，tgf-β1信号传导通过在肠道平滑肌中诱导胰岛素样生长因子i(igf-i)和机械生长因子(mgf)产生而促成纤维狭窄克罗恩氏病中的狭窄形成。(拉泰拉(latella),g.,里德(rieder),f.,胃肠病学新见(curr.opin.gastroenterol.),2017,33(4),第239-245页)。tgf-β信号传导的抑制可由此减缓、阻止逆转肠道中的纤维化的进展。然而，ibd患者担忧的相关不良副作用，如发炎和赘瘤将可能由tgf-β信号传导的全身性抑制引起。本公开的一个目标在于研发对胃肠道具有高选择性并且具有快速清除率的alk5抑制剂。在一些实施例中，本公开提供一种治疗肠道纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所述的化合物，例如通过每天一次或两次投与具有极低全身暴露量的口服alk5抑制剂。在一些实施例中，受试者罹患发炎性肠病，如克罗恩氏病或结肠炎。治疗功效的程度可相对于受试者的起始病状(例如基线梅欧评分(mayo score)、基线里奇泰格评分(lichtiger score)或一种或多种症状的严重程度或发生率)或相对于参考群体(例如未经治疗的群体，或用不同药剂治疗的群体)。肠道纤维化的严重程度可使用任何适合的方法评定,如延迟增强mri、超声波弹性成像、剪切波弹性成像、磁化mri或通过如胶原蛋白的大分子的直接检测。优选地，用本公开化合物治疗降低纤维化的严重程度，如将重度纤维化减轻为中度或轻度纤维化。在一些实施例中，治疗增加肠道组织弹性、降低组织硬度和/或降低胶原蛋白含量。在一些实施例中，治疗预防成肌纤维细胞积聚、抑制促纤维变性因子的表达和/或抑制纤维变性组织的积聚。
[0590]
其它类型的器官特异性纤维化或涉及tgf-β路径的纤维变性疾病包括(但不限于)放射线诱发的纤维化(不同器官)、膀胱纤维化、肠道纤维化、腹膜硬化症、弥漫性筋膜炎、杜普宜特朗氏病(dupuytren's disease)、骨髓纤维化、口腔粘膜下纤维化和视网膜纤维化。在一些实施例中，本公开提供一种治疗放射线诱发的纤维化、膀胱纤维化、肠道纤维化、腹膜硬化症、弥漫性筋膜炎、杜普宜特朗氏病、骨髓纤维化、口腔粘膜下纤维化或视网膜纤维化的方法，其包含向受试者投与有效量的本文所公开的化合物。
[0591]
尽管本公开的目标之一为局部或以定向方式治疗纤维变性疾病和肺病，但也可使用本文所述的化合物来全身性治疗患者。可全身性治疗的疾病包括例如肿瘤学疾病，如成胶质细胞瘤、胰腺癌和肝细胞癌瘤、转移到肺脏的乳腺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、囊肿性纤维化和原发癌亚型的其它形式的癌转移。同样也可局部治疗前述疾病中的一些。
[0592]
本文所公开的化合物可治疗的其它纤维变性疾病包括血管性水肿、抗老化和秃发。秃发包括全秃、普秃、雄性型秃发、斑秃、弥漫性秃发、产后秃发和牵引性秃发。
[0593]
其它适应症
[0594]
在某些方面，本公开提供一种逆转老化的一个或多个症状的方法，其包含向受试
者投与alk5抑制剂。所述方法可进一步包含投与mapk路径的活化剂，如催产素。所述方法可在增强海马体中的神经生成、减少神经发炎、改善认知能力、减少肝脏肥胖症、减少肝纤维化和减少p16
细胞数目中的一个或多个方面有效。在一些实施例中，本文所述的方法提高干细胞活性。干细胞活性增强可允许受试者产生新肌纤维和/或在海马体中形成新神经元。alk5抑制剂，如本文所述的化合物的治疗可预防或减缓年龄相关的疾病，如阿尔茨海默病的发作。(参见迈迪普尔(mehdipour),m.等人衰老(aging)2018,10,5628-5645)。
[0595]
药物组合物
[0596]
在一些方面，本公开提供一种药物组合物。所述药物组合物可包含本文所公开的化合物，如式(i)、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物，和药学上可接受的载剂。在一些实施例中，药物组合物经调配以用于经口投与。在一些实施例中，药物组合物经调配以用于吸入。在一些实施例中，药物组合物包含本文所公开的化合物和另外治疗剂。下文描述此类治疗剂的非限制性实例。
[0597]
药物组合物通常包括至少一种药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂，和至少一种式(i)、式(i-a)、式(i-b)、式(i-c)、式(i')、式(i'-a)、式(i'-b)或式(i'-c)化合物或表1中提供的化合物(本文中描述为活性剂)。活性剂可以适合于特定投与模式的任何形式提供，如游离碱、游离酸或药学上可接受的盐。另外，本公开的方法和药物组合物包括使用n-氧化物、结晶形式(例如多晶型物)以及具有类似活性的这些化合物的代谢物。本文所述的化合物的所有互变异构体包括于本公开的范围内。另外，本文所述的化合物涵盖与如水、乙醇等的药学上可接受的溶剂的非溶剂化以及溶剂化形式。
[0598]
适合的投与途径包括(但不限于)经口、静脉内、经直肠、经阴道、气雾剂、经肺、经鼻、经粘膜、局部、经皮、经耳、经眼和肠胃外投与模式。另外，仅举例来说，肠胃外递送包括肌肉内、皮下、静脉内、髓内注射以及鞘内、直接心室内、腹膜内、淋巴管内和鼻内注射。
[0599]
在某些实施例中，本文所述的化合物以局部而非全身方式投与，例如常常以储槽式制剂或持续释放调配物形式经由将化合物直接注射于器官中。在一些实施例中，长效调配物通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌肉内注射投与。在一些实施例中，本文所述的化合物以快速释放调配物、延长释放调配物或中等释放调配物的形式提供。在一些实施例中，本文所述的化合物以雾化调配物的形式提供。在一些实施例中，本文所述的化合物通过吸入局部投与到肺脏。
[0600]
本公开的化合物在较宽剂量范围内为有效的。举例来说，在治疗成年人类时，可向对其有需要的受试者每天投与0.01至1000mg，0.5至100mg，1至50mg或5至40mg的剂量。精确剂量将视投与途径、化合物的投与形式、待治疗的受试者、待治疗的受试者的体重以及主治医师的偏好和经历而定。
[0601]
本公开的化合物可以单次剂量形式投与。在一些实施例中，本公开的化合物以多次剂量形式投与，如每天约一次、两次、三次、四次、五次、六次或超过六次。在一些实施例中，给药为约一月一次、每两周一次、一周一次或每隔一天一次。在一些实施例中，本公开的化合物和另外治疗剂一起每天约一次至每天约6次投与。在一些实施例中，投与继续超过约6、10、14、28天、两个月、六个月或超过约一年。在一些实施例中，给药时程维持所需时长。本公开的化合物可持续长期投与，例如用于治疗慢性作用。
[0602]
本公开的药物组合物通常含有治疗有效量的本公开的化合物。然而，所属领域的
技术人员将认识到，药物组合物可含有超过治疗有效量(例如主体组合物)或小于治疗有效量(例如经设计用于共投与以获得治疗有效量的个别单位剂量)。
[0603]
通常，本公开的药物组合物含有约0.01至约95重量％活性剂；包括例如约0.05至约30重量％；和约0.1重量％至约10重量％活性剂。
[0604]
任何常规载剂或赋形剂可用于本公开的药物组合物中。选择特定载剂或赋形剂，或载剂或赋形剂的组合将视用于治疗特定患者或类型的医学病状或疾病病况的投与模式而定。另外，本公开的药物组合物中使用的载剂或赋形剂可为市售的。常规调配技术描述于雷明顿：医药科学和实践(remington:the science and practice of pharmacy),第20版,利平科特威廉姆斯和怀特(lippincott williams&white),马里兰州巴尔的摩(baltimore,maryland)(2000)；和h.c.安塞尔(ansel)等人,药物剂型和药物递送系统(pharmaceutical dosage forms and drug delivery systems),第7版,利平科特威廉姆斯和怀特,马里兰州巴尔的摩(1999)中。
[0605]
可充当药学上可接受的载剂的材料的代表性实例包括(但不限于)以下：糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素，如微晶纤维素和其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；粉末状黄芪；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，如丙二醇；多元醇，如丙三醇、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；褐藻酸；不含热原质水；等张生理盐水；林格氏溶液(ringer's solution)；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；和药物组合物中采用的其它无毒可相容物质。
[0606]
通常通过将活性剂与药学上可接受的载剂和一种或多种任选的成分充分并且紧密地混合或掺合来制备药物组合物。随后可使用常规程序和设备将所得均匀掺合的混合物成形为锭剂、胶囊、丸剂等或装载到其中。
[0607]
在一个方面，药物组合物适用于吸入投与。用于吸入投与的药物组合物通常呈气雾剂或散剂形式。此类组合物一般使用吸入剂递送装置投与，如干燥散剂吸入器(dpi)、定量吸入器(mdi)、喷雾器吸入器或类似递送装置。
[0608]
在一特定实施例中，药物组合物通过吸入，使用干燥散剂吸入器投与。此类干燥散剂吸入器通常以在吸气期间分散于患者的气流中的自由流动散剂形式投与药物组合物。为了获得自由流动散剂组合物，治疗剂通常以如乳糖、淀粉、甘露糖醇、右旋糖、聚乳酸(pla)、聚乳酸交酯-共-乙交酯(plga)或其组合的适合的赋形剂调配。通常，使治疗剂微粉化并与适合的载剂组合以形成适用于吸入的组合物。
[0609]
用于干燥散剂吸入器中的代表性药物组合物包含乳糖和本文所公开的化合物的微粉化形式。此类干燥散剂组合物可例如通过将干燥研磨乳糖与治疗剂组合，并随后干掺合组分制得。随后通常将组合物装载到干燥散剂施配器中或与干燥散剂递送装置一起使用的吸入套筒或胶囊中。
[0610]
适用于通过吸入投与治疗剂的干燥散剂吸入器递送装置描述于所属领域中并且此类装置的实例为市售的。举例来说，代表性干燥散剂吸入剂递送装置或产品包括aeolizer(诺华(novartis))；airmax(ivax)；clickhaler(英诺伐拓(innovata biomed))；diskhaler(葛兰素史克(glaxosmithkline))；diskus/accuhaler(葛兰素史克)；ellipta
(葛兰素史克)；easyhaler(猎户医药公司(orion pharma))；eclipse(安万特(aventis))；flowcaps(好利安(hovione))；handihaler(勃林格殷格翰(boehringer ingelheim))；pulvinal(凯西(chiesi))；rotahaler(葛兰素史克)；skyehaler/certihaler(斯凯医药(skyepharma))；twisthaler(先灵葆雅(schering-plough))；turbuhaler(阿斯特捷利康(astrazeneca))；ultrahaler(安万特)；等。
[0611]
本公开的药物组合物可通过吸入使用定量吸入器投与。此类定量吸入器通常使用压缩推进剂气体，排出测量量的治疗剂。因此，使用定量吸入器投与的药物组合物通常包含治疗剂于液化推进剂中的溶液或悬浮液。可采用任何适合的液化推进剂，包括氢氟烷烃(hfa)，如1,1,1,2-四氟乙烷(hfa 134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟-正丙烷(hfa 227)；和氯氟碳化物，如ccl3f。在一特定实施例中，推进剂为氢氟烷烃。在一些实施例中，氢氟烷烃调配物含有共溶剂，如乙醇或戊烷；和/或表面活性剂，如脱水山梨糖醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和丙三醇。
[0612]
用于定量吸入器中的代表性药物组合物包含约0.01重量％至约5重量％本公开的化合物；约0重量％至约20重量％乙醇；和约0重量％至约5重量％表面活性剂；其余部分为hfa推进剂。此类组合物通常通过向含有治疗剂、乙醇(如果存在)和表面活性剂(如果存在)的适合的容器中添加经冷却或经加压的氢氟烷烃来制备。为制备悬浮液，将治疗剂微粉化，并随后与推进剂合并。随后将组合物装载到气雾剂罐中，其通常形成定量吸入器装置的一部分。
[0613]
适用于通过吸入投与治疗剂的定量吸入器装置描述于所属领域中并且此类装置的实例为市售的。举例来说，代表性定量吸入器装置或产品包括aerobid吸入器系统(森林医药(forest pharmaceuticals))；atrovent吸入气雾剂(勃林格殷格翰)；flovent(葛兰素史克)；maxair吸入器(3m)；proventil吸入器(先灵(schering))；serevent吸入气雾剂(葛兰素史克)；等。
[0614]
本公开的药物组合物可通过吸入使用喷雾器吸入器投与。此类喷雾器装置通常产生使药物组合物喷雾为进入患者的呼吸道的雾状物的高速空气流。因此，当用于喷雾器吸入器调配时，可使治疗剂溶解于适合的载剂中以形成溶液。或者，治疗剂可经微粉化或纳米研磨并与适合的载剂组合以形成悬浮液。
[0615]
用于喷雾器吸入器的代表性药物组合物包含溶液或悬浮液，其包含约0.05μg/ml至约20mg/ml本公开的化合物和与雾化调配物相容的赋形剂。在一个实施例中，溶液具有约3至约8的ph。
[0616]
适用于通过吸入投与治疗剂的喷雾器装置描述于所属领域中并且此类装置的实例为市售的。举例来说，代表性喷雾器装置或产品包括softmist
tm inhalaler(勃林格殷格翰)；经肺递送系统(阿拉迪姆公司(aradigm corp.))；pari lc可重复使用喷雾器或pari快速喷雾器系统(帕瑞公司(pari gmbh))；等。
[0617]
本公开的药物组合物可以意图用于经口投与的剂量形式制备。用于经口投与的适合的药物组合物可呈胶囊、锭剂、丸剂、口含锭、扁囊剂、糖衣药丸、散剂、颗粒形式；或呈于水性或非水性液体中的溶液或悬浮液形式；或呈水包油或油包水液体乳液形式；或呈酏剂或糖浆形式；等；各自含有预定量的本公开的化合物作为活性成份。
[0618]
当以固体剂量形式意图用于经口投与时，本公开的药物组合物将通常包含活性剂
和一种或多种药学上可接受的载剂，如柠檬酸钠或磷酸二钙。任选地或替代地，此类固体剂量形式还可包含：填充剂或增量剂、粘合剂、保湿剂、溶液阻滞剂、吸收加速剂、湿润剂、吸附剂、润滑剂、着色剂和缓冲剂。脱模剂、湿润剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于本公开的药物组合物中。
[0619]
替代调配物可包括控制释放调配物、用于经口投与的液体剂量形式、经皮贴片和肠胃外调配物。制备此类替代调配物的常规赋形剂和方法描述于例如前述雷明顿参考文献中。
[0620]
以下非限制性实例说明了本公开的代表性药物组合物。
[0621]
干燥散剂组合物
[0622]
将本公开的微粉化化合物(1g)与经研磨的乳糖(25g)掺合。随后以足以提供每剂量约0.1mg至约4mg之间的化合物的量将这一经掺合的混合物装载到可剥离泡罩封装的个别泡罩中。使用干燥散剂吸入器投与泡罩的内含物。
[0623]
干燥散剂组合物
[0624]
将本公开的微粉化化合物(1g)与经研磨的乳糖(20g)掺合以形成化合物与经研磨的乳糖的重量比为1:20的主体组合物。将掺合组合物封装于每剂量能够递送约0.1mg至约4mg之间的化合物的干燥散剂吸入装置中。
[0625]
定量吸入器组合物
[0626]
使本公开的微粉化化合物(10g)分散于通过使卵磷脂(0.2g)溶解于去矿物质水(200ml)中制备的溶液中。喷雾干燥所得悬浮液，并随后经微粉化以形成包含平均直径小于约1.5μm的粒子的微粉化组合物。随后将微粉化组合物装载到以当通过定量吸入器投与时每剂量足以提供约0.1mg至约4mg化合物的量含有加压1,1,1,2-四氟乙烷的定量吸入器套筒中。
[0627]
喷雾器组合物
[0628]
代表性喷雾器组合物如下。使本公开的化合物(2g游离碱等效物)溶解于含有80ml逆渗透水、0.1-1重量％无水柠檬酸和0.5-1.5当量盐酸的溶液中，继而添加氢氧化钠以将ph调节到3.5至5.5。其后，添加4至6重量％之间的右旋甘露醇并使溶液足量至100ml。随后经由0.2μm过滤器过滤溶液并在使用之前储存于室温下。使用每剂量提供约0.1mg至约4mg化合物的喷雾器装置投与溶液。
[0629]
试剂盒
[0630]
在某些方面，本公开提供一种包含一个或多个单位剂量的化合物或本文所述的药物组合物的试剂盒，任选地其中所述试剂盒进一步包含使用化合物或药物组合物的说明书。在一些实施例中，所述试剂盒包含载剂、封装，或经分隔以接收一个或多个容器(如小瓶、导管等)的容器，容器中的每一个包含本文所述的方法中所使用的个别元件中的一个。适合的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器和试管。容器可由如玻璃或塑料的多种材料形成。
[0631]
本文所提供的制品可含有封装材料。用于封装医药产品的封装材料包括例如美国专利第5,323,907号、第5,052,558号和第5,033,252号中所见的封装材料。医药封装材料的实例包括(但不限于)泡罩包装、瓶子、导管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、瓶子以及适合于所选调配物和预期投与和治疗模式的任何封装材料。举例来说，容器可包括一种或多种本文所述的化合物，任选地呈组合物形式或与如本文所公开的其它药剂组合。容器可任
选地具有无菌进入口(例如容器为静脉内溶液袋或具有可通过皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶)。此类试剂盒可任选地包含化合物和识别描述或标签或与其在本文所述的方法中的用途相关的说明书。
[0632]
在一些实施例中，试剂盒包括一个或多个容器，每一容器具有从商业和用户角度出发使用本文所述的化合物所需的各种物质(如任选地呈浓缩形式的试剂和/或装置)中的一种或多种。此类物质的非限制性实例包括(但不限于)缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器、载剂、封装、容器、小瓶和/或列出内含物和/或使用说明书和药品说明书与使用说明书的导管标签。通常还将包括一组说明书。标签任选地附于容器上或与容器系连。举例来说，当形成标签的字母、数字或其它字符附着、成型或蚀刻于容器本身上时，标签可附于容器上；当标签存在于还装有容器的接收器或运载器内时，标签与容器系连，例如呈药品说明书形式。另外，标签用以指示用于特定治疗应用的内含物。另外，标签指示内含物如在本文所述的方法中的使用指南。在某些实施例中，药物组合物呈现于含有一个或多个含有本文所提供的化合物的单位剂型的封装或施配器装置中。封装可含有金属或塑料箔片，如泡罩封装。在一些实施例中，封装或施配器装置附有投与说明书。任选地，封装或施配器附有与容器相关的注意事项，其呈管制医药品的制造、使用或销售的政府机构指定的形式，所述注意事项反映所述机构批准所述药物形式用于人类或兽医学投与。此类通知例如为经美国食品药物管理局核准用于处方药物的标签，或核准的药品说明书。在一些实施例中，制备含有本文所提供的化合物于相容医药载剂中所调配的组合物，放置于适当容器中，并针对所指定病状的治疗加以标记。
[0633]
组合疗法
[0634]
本公开的化合物和药物组合物可与一种或多种治疗剂组合使用，所述治疗剂通过相同机制或通过不同机制起作用来治疗疾病。一种或多种药剂可在分开的组合物或同一组合物中依序或同时投与。对于组合疗法适用的药剂类别包括(但不限于)用于治疗心脏、肾脏、肺脏、肝脏、皮肤、免疫和肿瘤病状的化合物。
[0635]
在实施本公开方法中的任一种时，可依次投与alk5抑制剂和第二治疗剂，其中两种药剂在两个不同时间点引入到受试者中。两个时间点可间隔超过2小时、1天或更多天、1周或更多周、1个月或多个月或根据本文所公开的任何间歇性方案时程。
[0636]
在一些实施例中，alk5抑制剂和第二治疗剂同时投与。两种药剂可形成相同组合物的部分，或两种药剂可以一个或多个单位剂量形式提供。
[0637]
在一些实施例中，alk5抑制剂或第二治疗剂肠胃外、经口、吸入、腹膜内、静脉内、动脉内、经皮、肌内、经脂质体、通过导管或血管内支架经由局部递送、皮下、脂肪内或鞘内投与。如本文所使用，治疗有效量的alk5抑制剂与第二治疗剂的组合是指alk5抑制剂与第二治疗剂的组合，其中组合足以影响预期应用，包括(但不限于)如本文所定义的疾病治疗。本公开方法中还涵盖使用呈组合形式的低于治疗量的alk5抑制剂和第二治疗剂来治疗预期疾病病状。组合的个别组分(但以低于治疗量存在)协同产生有效作用和/或降低预期应用中的副作用。
[0638]
alk5抑制剂和第二治疗剂的投与量可视预期应用(体外或体内)或待治疗的受试者和疾病病状(例如受试者的体重和年龄)、疾病病状的严重程度、投与方式等而变化，其可容易地通过所属领域的一般技术人员决定。
[0639]
测量免疫反应和/或alk5的生物作用的抑制可包含对生物样品，如来自受试者的样品进行分析。可根据分析选择多种样品中的任一种。样品的实例包括(但不限于)血液样品(例如血浆或血清)、呼气冷凝液样品、支气管肺泡灌洗液、唾液样品、尿液样品和组织样品。
[0640]
可监测用alk5抑制剂和第二治疗剂治疗的受试者以测定治疗有效性，并可基于受试者对治疗的生理反应调节治疗方案。举例来说，如果alk5抑制的生物作用的抑制高于或低于阈值，那么可分别减少或增加给药量或频率。替代地，可相对于免疫反应调节治疗方案。如果确定疗法有效，那么所述方法可进一步包含继续疗法。如果确定疗法有效，那么所述方法可包含维持、渐减、减少或停止疗法中(一种或多种)化合物的投与量。如果确定其无效，那么所述方法可包含增加疗法中(一种或多种)化合物的投与量。替代地，如果确定其无效，那么所述方法可包含停止疗法。在一些实施例中，如果生物作用的抑制高于或低于阈值，如缺乏反应或反应不良，那么中断用alk5抑制剂和第二治疗剂治疗。生物作用可为多种生理指标中任一种的变化。
[0641]
可与本文所公开的化合物组合使用的特定药剂包括(但不限于)(尼达尼布)和(吡非尼酮)。在一些实施例中，本文所公开的化合物与吡非尼酮组合投与，任选地其中通过吸入投与吡非尼酮。在一些实施例中，本公开提供一种治疗受试者的纤维化，如特发性肺纤维化的方法，其包含向受试者投与alk5抑制剂，如表1中所公开的化合物和尼达尼布或吡非尼酮。在一些实施例中，本公开提供一种治疗受试者的癌症，如肺癌的方法，其包含向受试者投与alk5抑制剂，如表1中所公开的化合物和尼达尼布或吡非尼酮。
[0642]
在一些实施例中，本公开提供一种用于治疗有需要的受试者的增生性病症(例如肺癌)的方法，其包含向所述受试者投与alk5抑制剂和免疫治疗剂。tgf-β已展示调节淋巴细胞分化，抑制t细胞增殖并增强肿瘤生长。另外，tgf-β已展示预防免疫疗法耐受性患者中的免疫系统的最优活化(参见罗菲克s.肿瘤学期刊(j.oncolo.)2018,1-9；以全文引用的方式并入本文中)。不希望受任何特定理论束缚，本公开人预期alk5抑制可增强特定免疫疗法的疗效。因而，预期用如德瓦鲁单抗或帕博利珠单抗的免疫治疗剂和如本公开的化合物的alk5抑制剂治疗可改善患有癌症的受试者，如患有非小细胞肺癌的受试者的临床结果。预期组合产生协同作用。对于辐射疗法、免疫疗法和alk5抑制的三重组合，还预期协同组合。另外，alk5抑制剂，甚至在局部投与(例如通过吸入投与到肺脏)时，可刺激局部和全身性免疫反应，允许治疗除局部递送位点以外的组织中的原发性或转移性肿瘤。举例来说，吸入的alk5抑制剂可与免疫治疗剂组合投与来治疗黑素瘤、肾细胞癌、结肠癌或乳腺癌。
[0643]
在一些实施例中，alk5抑制剂和免疫治疗剂依次或同时投与。在一些实施例中，alk5抑制剂和免疫治疗剂在治疗增生性病症方面比单独药剂更有效。在一些实施例中，alk5抑制剂和免疫治疗剂在治疗增生性病症方面产生协同作用。协同作用可为大于在相当条件下以相当量单独使用的药剂的治疗作用。协同作用可为大于每一单独药剂的作用相加的预期结果的治疗作用。在一些实施例中，增生性病症为癌症病状。在一些实施例中，癌症病状为肺癌，如非小细胞肺癌。
[0644]
术语“免疫治疗剂”是指诱导、增强、遏制或以其它方式修改免疫反应的任何药剂。
这包括向受试者投与活性剂或对受试者进行任何类型的干预或处理，目标为修改免疫反应。免疫治疗剂可例如提高或增强受试者的现有免疫反应的有效性或效力，例如通过刺激增强内源性宿主免疫反应的机制或克服抑制内源性宿主免疫反应的机制。
[0645]“免疫反应”是指免疫系统细胞的作用，所述细胞包括例如b淋巴细胞、t淋巴细胞、自然杀伤(nk)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、骨髓衍生的抑制细胞、树突状细胞和嗜中性粒细胞以及这些细胞或肝脏中的任一种所产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和互补序列)，其导致选择性标靶、结合于、损伤、破坏和/或消除感染有病原体、癌性或其它异常细胞的侵入病原体、细胞或组织，或在自体免疫或病理学发炎的情况下，来自受试者身体的正常人类细胞或组织。
[0646]
在一个实施例中，免疫治疗剂可包含pd-1抑制剂。在另一实施例中，免疫治疗剂可包含ctla-4抑制剂。在再一实施例中，免疫治疗剂可包含b7抑制剂。
[0647]
示例性pd-1抑制剂：适用于本公开方法的pd-1抑制剂可选自多种类型的分子。举例来说，pd-1抑制剂可为生物或化学化合物，如有机分子或无机分子、肽、肽模拟物、抗体或抗体的抗原结合片段。适用于本公开方法的一些示例性类别的药剂详述于以下部分中。用于本公开中的pd-1抑制剂可为所属领域中已知的任何pd-1抑制剂，并且可包括在向患者投与后导致患者中pd-1路径的抑制的任何实体。pd-1抑制剂可通过任何生物化学机制抑制pd-1，包括破坏pd-1/pd-l1、pd1/pd-l2和pd-l1/cd80相互作用中的任何一种或多种。
[0648]
在一些实施例中，pd-1抑制剂为抑制pd-1与其配体结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，pd-1配体结合搭配物为pd-l1和/或pd-l2。在另一实施例中，pd-1抑制剂为抑制pd-l1与其结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，pd-l1结合搭配物为pd1和/或cd80。在另一实施例中，pd-1抑制剂为抑制pd-l2与其结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，pd-l2结合搭配物为pd1。抑制剂可为抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。
[0649]
在一些实施例中，pd-1抑制剂为抗pd-1抗体。在一些其它实施例中，抗pd-1抗体能够抑制pd-1与pd-l1之间的结合。在另一实施例中，抗pd-1抗体能够抑制pd-1与pd-l2之间的结合。在一些实施例中，pd-1抑制剂为抗pd-l1抗体。在一些实施例中，抗pd-l1抗体能够抑制pd-l1与pd-1之间和/或pd-l1与cd80之间的结合。在一些实施例中，pd-1抑制剂为抗pd-l2抗体。在一些其它实施例中，抗pd-l2抗体能够抑制pd-1与pd-l2之间的结合。在又一实施例中，pd-1抑制剂为纳武单抗或帕博利珠单抗。在一些实施例中，pd-1抑制剂选自阿特珠单抗、阿维鲁单抗、纳武单抗、帕博利珠单抗、德瓦鲁单抗和bgb-a317。
[0650]
抑制pd-1路径可增强患者对于癌细胞的免疫反应。pd-1与pd-l1之间的相互作用削弱t细胞反应，如通过肿瘤浸润性淋巴细胞(til)的减少和t细胞受体介导的增殖的减少所体现，从而导致t细胞惰能、耗竭或细胞凋亡和癌细胞免疫逃避。这一免疫抑止可通过使用pd-1抑制剂(包括例如抗pd-1和/或抗pd-l1 ab)抑制pd-l1与pd-1之间的局部相互作用而逆转。pd-1抑制剂可增进或恢复抗肿瘤t细胞功能。
[0651]
适用于本公开中的抗pd-1抗体可使用所属领域中熟知的方法产生。示例性pd-1抑制剂包括(但不限于)：纳武单抗(bms936558)、帕博利珠单抗(mk-3475)、皮立珠单抗(pidilizumab)(ct-011)、amp-224、amp-514、bms-936559、rg7446(mpdl3280a)、mdx-1106(美达瑞公司(medarex inc.))、msb0010718c、medi4736和hengrui mab005(wo 15/085847)。其它pd-1抗体和其它pd-1抑制剂包括wo 04/056875、wo 06/121168、wo 07/
005874、wo 08/156712、wo 09/014708、wo 09/114335、wo 09/101611、wo 10/036959、wo 10/089411、wo 10/027827、wo 10/077634、wo 11/066342、wo 12/145493、wo 13/019906、wo 13/181452、wo 14/022758、wo 14/100079、wo 14/206107、wo 15/036394、wo 15/085847、wo 15/112900、wo 15/112805、wo 15/112800、wo 15/109124、wo 15/061668、wo 15/048520、wo 15/044900、wo 15/036927、wo 15/035606；美国公开第2015/0071910号；和美国专利第7,488,802号、第7,521,051号、第7,595,048号、第7,722,868号、第7,794,710号、第8,008,449号、第8,354,509号、第8,383,796号、第8,652,465号；和第8,735,553号中所述的那些；所述文献均以引用的方式并入本文中。一些抗pd-1抗体为可商购的，例如可购自abcam(ab137132)、biolegend(eh12.2h7，rmp 1-14)和affymetrix ebioscience(j105、j116、m1h4)。
[0652]
示例性ctla-4抑制剂：适用于本公开方法的ctla-4抑制剂可选自多种类型的分子。举例来说，ctla-4抑制剂可为生物或化学化合物，如有机或无机分子、肽、肽模拟物、抗体或抗体的抗原结合片段。适用于本公开方法的一些示例性类别的药剂详述于以下部分中。用于本公开中的ctla-4抑制剂可为所属领域中已知的任何ctla-4抑制剂，并且可包括在向患者投与后导致患者中ctla-4路径的抑制的任何实体。ctla-4抑制剂可通过任何生物化学机制抑制ctla-4，包括破坏ctla-4/cd80和ctla-4/cd86相互作用中的一种或两种。
[0653]
在一些实施例中，ctla-4抑制剂为抑制ctla-4与其配体结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，ctla-4配体结合搭配物为cd80和/或cd86。在另一实施例中，ctla-4抑制剂为抑制cd80与其结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，cd80结合搭配物为ctla-4。在另一实施例中，ctla-4抑制剂为抑制cd86与其结合搭配物的结合的分子。在一特定方面，cd86结合搭配物为ctla-4。抑制剂可为抗体、其抗原结合片段、免疫粘附素、融合蛋白或寡肽。
[0654]
在一些实施例中，ctla-4抑制剂为抗ctla-4抗体。在一些其它实施例中，抗ctla-4抗体能够抑制ctla-4与cd80之间的结合。在另一实施例中，抗ctla-4抗体能够抑制ctla-4与cd86之间的结合。在一些实施例中，ctla-4抑制剂为抗cd80抗体。在一些实施例中，抗cd80抗体能够抑制ctla-4与cd80之间的结合。在一些实施例中，ctla-4抑制剂为抗cd86抗体。在一些其它实施例中，抗cd86抗体能够抑制ctla-4与cd86之间的结合。在又一实施例中，ctla-4抑制剂为曲美单抗或伊派利单抗。
[0655]
抑制ctla-4路径可增强患者对于癌细胞的免疫反应。ctla-4与其天然配体(cd80和cd86)中的一种之间的相互作用递送负调控信号到t细胞。这一免疫抑止可通过使用ctla-4抑制剂(包括例如抗ctla-4ab、抗cd80 ab或抗cd86 ab)抑制cd80或cd86与ctla-4之间的局部相互作用而逆转。ctla-4抑制剂可增进或恢复抗肿瘤t细胞功能。
[0656]
适用于本公开中的抗ctla-4抗体可使用所属领域中熟知的方法产生。示例性ctla-4抑制剂包括(但不限于)曲美单抗和伊派利单抗(也称为10d1或mdx-010)。其它ctla-4抗体和其它ctla-4抑制剂包括wo 98/042752、wo 00/037504、wo 01/014424和wo 04/035607；美国公开第2002/0039581号、第2002/086014号和第2005/0201994号；美国专利第5,811,097号；第5,855,887号；第5,977,318号；第6,051,227号；第6,207,156号；第6,682,736号；第6,984,720号；第7,109,003号；第7,132,281号；第7,605,238号；第8,143,379号；第8,318,916号；第8,435,516号；第8,784,815号；和第8,883,984号；欧洲专利第1212422
号；赫尔维茨(hurwitz)等人,pnas 1998,95(17):10067-10071；卡马乔(camacho)等人,临床肿瘤学杂志(j clin oncology)2004,22(145):摘要号2505(抗体cp675206)；和莫基尔(mokyr)等人,癌症研究(cancer research)1998,58:5301-5304中所述的那些；所述文献中的每一个以引用的方式并入本文中。
[0657]
本文还提供一种药物组合物，其包含本公开的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其它治疗剂。治疗剂可选自上文所指定的药剂类别和上文所述的特定药剂清单。在一些实施例中，药物组合物适合于递送到肺脏。在一些实施例中，药物组合物适合于吸入或雾化投与。在一些实施例中，药物组合物为干燥散剂或液体组合物。
[0658]
另外，在一个方法方面，本公开提供一种治疗哺乳动物的疾病或病症的方法，其包含向哺乳动物投与本公开的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种其它治疗剂。
[0659]
当用于组合疗法中时，药剂可调配成单一药物组合物，或药剂可提供于单独组合物中，其同时或在不同时间通过相同或不同投与途径投与。此类组合物可分开地封装或可作为试剂盒封装在一起。试剂盒中两种或更多种治疗剂可通过相同投与途径或通过不同投与途径投与。
[0660]
实例
[0661]
以下实例是为了说明本公开的各种实施例的目的而给出并且不意指以任何方式限制本公开。本公开实例以及本文所述的方法和组合物目前代表优选实施例，为示例性的，并且不意图作为对本公开范围的限制。所属领域的技术人员将想到涵盖在本公开的精神内、如由权利要求书的范围所限定的其中的变化和其它用途。
[0662]
除非另外指明，否则下列缩写具有下列含义，并且本文中所用但未定义的任何其它缩写具有其一般接受的标准含义：
[0663]
acoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙酸
[0664]
acona
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙酸钠
[0665]
acn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙腈
[0666]
atm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝大气压
[0667]
boc2o
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二碳酸二叔丁酯
[0668]
(bpin)2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝双(频哪醇合)二硼
[0669]
brettphos
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝2-(二环己基膦基)3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯
[0670]
brettphos pd g4 ＝n取代的2-氨基联苯甲烷磺酸钯预催化剂
[0671]
bsa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝牛血清白蛋白，洗脱份v
[0672]
cp*rucl(pph3)2ꢀꢀ
＝五甲基环戊二烯基双(三苯基膦)氯化钌(ii)
[0673]dꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝天
[0674]
dce
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝1,2-二氯乙烷
[0675]
dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二氯甲烷或氯化甲烷
[0676]
dhp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二氢吡喃
[0677]
diad
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝偶氮二甲酸二异丙酯
[0678]
dibah
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝氢化二异丁基铝
[0679]
dipea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝n,n-二异丙基乙胺
[0680]
dma或dmac
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二甲基乙酰胺
[0681]
dmap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝4-二甲氨基吡啶
[0682]
dmeda
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝1,2-双(甲氨基)乙烷
[0683]
dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝n,n-二甲基甲酰胺
[0684]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二甲亚砜
[0685]
dppa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二苯基磷酰基叠氮化物
[0686]
dtt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二硫苏糖醇
[0687]
edci
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝n-乙基-n'-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐
[0688]
edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙二胺四乙酸
[0689]
egta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-n,n,n',n'-四乙酸
[0690]
etoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙醇
[0691]
etoac或ea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙酸乙酯
[0692]gꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝克
[0693]hꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝小时
[0694]
hatu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝六氟磷酸n,n,n',n'-四甲基-o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲鎓
[0695]
hepes
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
[0696]
hobt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝羟基苯并三唑
[0697]
i-probpin
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝2-异丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷
[0698]
khmds
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝双(三甲基硅烷基)酰胺钾
[0699]
lda
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二异丙基氨基锂
[0700]
lihdms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝六甲基二硅氮烷锂盐
[0701]
m-cpba
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝间氯过氧苯甲酸
[0702]
mecn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙腈
[0703]
meoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝甲醇
[0704]
min
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝分钟
[0705]
mtbe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝甲基叔丁基醚
[0706]
nbs
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝n-溴丁二酰亚胺
[0707]
n-buli
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝正丁基锂
[0708]
pd(dppf)cl2ꢀꢀꢀꢀ
＝[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]-二氯钯(ii)
[0709]
pd(oac)2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝乙酸钯(ii)
[0710]
pd(pph3)4ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝四(三苯基膦)钯(0)
[0711]
pd/c
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝钯/活性碳，10％装载量
[0712]
pd2(dba)3ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)
[0713]
pe
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝石油醚
[0714]
phn2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝苯重氮离子
[0715]
rt、rt或r.t.
ꢀꢀꢀ
＝室温
[0716]
ruphos
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基联苯
[0717]
ruphos pd g2
ꢀꢀꢀ
＝氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(ii)
[0718]
ruphos pd g4
ꢀꢀꢀꢀ
＝巴哈法(buchwald)第4代钯环的配体
[0719]
semcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基氯
[0720]
sio2ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝二氧化硅(silicon dioxide/silica)
[0721]
sphos pd g3
ꢀꢀꢀꢀ
＝(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(ii)甲烷磺酸盐
[0722]
tbab
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝四丁基溴化铵
[0723]
tbscl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝叔丁基二甲基氯硅烷
[0724]
t-buok
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝叔丁醇钾
[0725]
tea，et3n
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝三乙胺
[0726]
tfa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝三氟乙酸
[0727]
thf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝四氢呋喃
[0728]
tms
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝四甲基硅烷
[0729]
toscl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝对甲苯磺酰氯
[0730]
tris-hcl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐
[0731]
tween-20
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝聚氧化乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯
[0732]
xantphos
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
＝4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽
[0733]
xphos pd g4
ꢀꢀꢀꢀꢀ
＝巴哈法第4代钯环
[0734]
除非另外提及，否则所有物质(如试剂、起始物质和溶剂)均购自商业供应商(如西格玛-奥德里奇(sigma-aldrich)、福鲁卡(fluka riedel-de)等)，并且不经进一步纯化即使用。
[0735]
除非另外提及，否则反应在氮气气氛下进行。通过薄层色谱(tlc)、分析型高效液相色谱(anal.hplc)和质谱监测反应的进程，监测的细节在特定实例中给出。
[0736]
如在每一制备中具体描述来处理反应；通常通过萃取和其它纯化方法(如温度依赖性和溶剂依赖性结晶以及沉淀)来纯化反应混合物。另外，通过制备型hplc来常规纯化反应混合物，其中通常使用microsorb c18和microsorb bds柱填充物和常规洗脱剂。通常通过液相色谱质谱(lcms)来监测反应进程。通常通过核奥氏效应光谱法(nuclear overhauser effect spectroscopy，noe)进行异构体表征。通过质谱分析和/或1h-nmr光谱法常规地进行反应产物的表征。对nmr测量来说，样品溶解于氘化溶剂(cd3od、cdcl3或dmso-d6)中，并在标准观察条件下用varian gemini 2000仪器(400mhz)获得1h-nmr光谱。通常用应用生物系统公司(applied biosystems)(加利福尼亚州福斯特城(foster city,ca))型号api 150ex仪器或安捷伦(agilent)(加利福尼亚州帕罗奥图(palo alto,ca))型号1200lc/msd仪器使用电喷雾电离法(esms)来进行化合物的质谱鉴别。
[0737]
实例1：合成6-[3-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-吡唑-4-基]-n-(2-吡咯烷-1-基乙基)-1,5-萘啶-3-胺(597).
[0738][0739]
步骤a：制备n-甲氧基-n,6-二甲基吡啶甲酰胺.在25℃下向1-1(25.0g，0.182mol)、1-2(26.6g，0.273mol)、hobt(29.5g，0.218mol)和edci(41.8g，0.218mol)于dcm(500ml)中的溶液中添加et3n(73.7g，0.728mol)。随后将混合物在25℃下搅拌3小时。将混合物真空浓缩。用ea(3
×
300ml)萃取残余物。用盐水(2
×
500ml)洗涤合并的有机层并经na2so4干燥。浓缩之后，经由柱(dcm:meoh＝20:1至10:1)纯化粗产物，得到呈黄色油状的1-3(23g，70％产率)。
[0740]
步骤b：制备7-溴-2-甲基-1,5-萘啶(1-4).在100℃下将含(e)-丁-2-烯醛(30.66g，437mmol)的甲苯(90ml)逐滴添加到含5-溴吡啶-3-胺(18.0g，104.0mmol)的hcl(1.8l，6m)，并将混合物在100℃下搅拌1小时。一次性添加其它量的含(e)-丁-2-烯醛(30.66g，437mmol)的甲苯(90ml)，并将混合物在100℃下再搅拌4小时。真空去除溶剂到干燥并用nahco3固体将残余物的ph调节到ph 8.0。重复这一程序四次并合并粗产物并通过柱色谱(pe:ea＝100:1至5:1)纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物1-4(71g，95％纯度，15.3％产率)。[m h]
c9h8brn2的计算值222.99，实测值222.9。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.89(d,j＝1.6hz,1h),8.46(d,j＝1.6hz,1h),8.23(d,j＝8.8hz,1h),7.50(d,j＝8.4hz,1h),2.76(s,3h)。
[0741]
步骤c：制备2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1-酮(1-5).在-78℃下在n2下向1-4(23.0g，103.6mmol)和1-3(18.7g，103.6mmol)于thf(250ml)中的溶液中添加khmds(155ml，155.4mmol)。将混合物在-78℃下搅拌2小时。使混合物升温到25℃并在25℃下搅拌2小时。用h2o(800ml)淬灭混合物并用ea(3
×
1200ml)萃取。经na2so4干燥合并的有机相并浓缩。用ea(2
×
100ml)洗涤残余物，得到呈黄色固体状的1-5(11g，31％产率)。回收15g化合物1-4。
[0742]
步骤d：制备(e)-2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-3-(二甲氨基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(1-6).在80℃下将1-5(11g，32.3mmol)于dmf-dma(120ml)中的溶液搅拌4小
时，得到1-6。真空浓缩混合物并且残余物直接用于下一步骤(16g)。[m h]
c19h17
brn4o的计算值397.06，实测值397.1。
[0743]
步骤e：制备7-溴-2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(1-7).向1-6(16g，粗物质)于etoh(80ml)中的溶液中添加acoh(13.8g，229.3mmol)和肼单水合物(8.9g，177.7mmol)。将混合物在25℃下搅拌15小时。真空浓缩混合物并通过柱色谱(pe:ea＝1:6至1:1)纯化残余物，得到呈褐色固体状的1-7(6.0g，51％产率)，其不经进一步纯化即直接使用。
[0744]
步骤f：制备7-溴-2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(1-8).向1-7(5.0g，13.7mmol)于dhp(40ml)中的溶液中添加tfa(0.15ml，催化量)。将混合物在80℃下搅拌15小时。将混合物与另一批相同反应物(以1.0g 1-7开始)合并。将反应物倒入100ml h2o中。用ea(3
×
50ml)萃取混合物。用饱和nahco3(50ml)洗涤有机层，经na2so4干燥并真空浓缩到干燥，得到粗产物。通过柱(pe:ea＝10:1至1:1)纯化粗产物，得到呈黄色固体状的1-8(5.4g，73％产率，98％纯度)。[m h]
c22h20
brn5o的计算值450.09，实测值450.2。
[0745]
步骤g：制备6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-n-(2-(吡咯烷-1-基)乙基)-1,5-萘啶-3-胺(597).向化合物1-8(30mg，0.067mmol)和1-(2-胺乙基)吡咯烷(11.4mg，0.100mmol)中添加brettphos(7.15mg，0.013mmol)、brettphos pd g4(12.26mg，0.013mmol)和碳酸铯(65.1mg，0.200mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(666μl)并且之后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物并在85℃下搅拌16小时。冷却反应物并真空浓缩。用tfa(0.5ml)处理所得残余物并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(7至35％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(34mg)。[m h]
c23h25
n7的计算值40.22，实测值400.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.87(s,1h),8.64(d,j＝2.6hz,1h),8.55(d,j＝8.8hz,1h),8.43(d,j＝8.1hz,1h),8.20-8.08(m,2h),7.65-7.58(m,1h),7.44(d,j＝2.5hz,1h),3.76(t,j＝5.9hz,3h),3.70-3.57(m,3h),3.58-3.51(m,1h),3.06(s,3h),2.17(s,2h),2.08(s,3h)。
[0746]
实例2：合成2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基)-1,5-萘啶(335).
[0747][0748]
向装有化合物1-8(60mg，0.133mmol)和4-(1-吡咯烷基)哌啶(31mg，0.200mmol)的小瓶中添加ruphos(6.22mg，0.013mmol)、ruphos pd g2(10.35mg，0.013mmol)和叔丁醇钠(38.4mg，0.400mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(700μl)并且之后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物，在105℃下搅拌16小时。冷却反应物并随后真空浓缩。用1ml tfa处理所得残余物并在55℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物，并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(13至27％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(20mg)。[m h]
c26h29
n7的计算值440.25，实测值440.3。
[0749]
实例3：合成2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-1,5-萘啶(75).
[0750][0751]
步骤a：制备(6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)硼酸(3-2).向1-8(5
×
500mg，5
×
1.11mmol)、3-1(5
×
423mg，5
×
1.67mmol)和koac(5
×
327mg，5
×
3.33mmol)于二噁烷(5
×
25ml)中的溶液中添加pd(dppf)cl2(5
×
81mg，5
×
0.111mmol)。将混合物在100℃下在n2下搅拌2小时。将混合物倒入h2o(250ml)中并用ea(4
×
100ml)萃取。将有机层真空浓缩到干燥，得到粗产物。通过制备型hplc(具有0.05％nh3h2o的水/acn 5至25％，柱(gemini 150
×
25，5μm)，100ml/分钟)纯化粗产物，得到呈黄色固体状的3-2(1.2g，52％产率，98％纯度)。[m h]
c22h22
bn5o3的计算值416.18，实测值416.4。
[0752]
步骤b：制备2-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-1,5-萘啶(75).向含有化合物3-2(70mg，0.169mmol)的小瓶添加2-溴-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8h)-甲酸叔丁酯(61.1mg，0.202mmol)之后添加磷酸三钾(107mg，0.506mmol)、xphos pd g4(14.51mg，0.017mmol)和xphos(8.04mg，0.017mmol)。用氮气吹扫所得混合物，之后添加脱气水(337μl)和1,4-二噁烷(337μl)。小瓶封盖并在105℃下搅拌1.5小时。随后冷却反应物，经由硅藻土塞过滤，用thf(7ml)洗涤并真空浓缩。用1.2ml tfa处理所得残余物并在55℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(41.3mg)。[m h] c
23h20
n8的计算值409.18，实测值409.3。
[0753]
实例4：合成2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(115).
[0754][0755]
步骤a：制备(5-(叔丁氧基羰基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)硼酸和2-(6-甲基吡啶-2-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4h)-甲酸叔丁酯(4-3).将2-溴-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4h)-甲酸叔丁酯4-1(300mg，0.993mmol)、乙酸钾(292mg，2.98mmol)、双(频哪醇合)二硼(504mg，1.986mmol)和pd(dppf)cl2(145mg，0.199mmol)于1,4-二噁烷(4.7ml)中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到100℃持续16小时。冷却反应物，并且以0.21m溶液将4-2用于下一步骤中。[m h]
c11h18
bn3o4的计算值268.14，实测值268.0。用n2鼓泡2-溴-6-甲基-吡啶(0.226ml，1.986mmol)、含4-2的二噁烷(4.7ml，0.993mmol)、pd(dppf)cl2(0.145g，0.199mmol)和含碳酸钠(0.316g，2.98mmol)的水(1.8ml)的小瓶10分钟，之后加热到100℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。经由正相色谱(0至100％ea/己烷)纯化残余物，得到呈棕色固体状的4-3(152mg，49％产率)。[m h]
c17h22
n4o2的计算值315.17，实测值315.0。
[0756]
步骤b：制备3-碘-2-(6-甲基吡啶-2-基)-6,7-二氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-5(4h)-甲酸叔丁酯(4-4).将4-3(41mg，0.130mmol)于dmf(195μl)中的小瓶冷却到0℃并添加nis(58.7mg，0.261mmol)。5分钟之后，随后将混合物加热到90℃持续16小时。将反应混合物浓
缩于二氧化硅垫上，并经由正相色谱(0至20％meoh/dcm)纯化，得到呈黄色固体状的4-4(29.8mg，51.9％产率)。[m h]
c17h21
in4o2的计算值441.07，实测值441.0。
[0757]
步骤c：制备3-溴-1,5-萘啶(4-6).在80℃下向br2(59.2g，372mmol)于acoh(150ml)中的溶液逐滴添加4-5(44.0g，338mmol)与acona(55.4g，676mmol)于acoh(350ml)中的混合物。将混合物在80℃下搅拌16小时。浓缩混合物以去除acoh，随后用水(100ml)缓慢稀释，用固态na2co3中和到ph 7，用ea(3
×
400ml)萃取。用盐水(300ml)洗涤合并的有机相，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。通过硅胶柱(pe:ea＝100:1-10:1)纯化残余物，获得呈黄色固体状的4-6(30.0g，42％产率)。
[0758]
步骤d：制备7-溴-1,5-萘啶1-氧化物(4-7).在0℃下向4-6(30.0g，144mmol)于dcm(400ml)中的溶液中逐份添加m-cpba(35.0g，172mmol)。将混合物在25℃下搅拌25小时。依次用饱和na2so3(200ml)和饱和nahco3(300ml)洗涤反应混合物，并随后用盐水(300ml)洗涤，经na2so4干燥并且过滤并真空浓缩。通过用ea(200ml)湿磨来纯化残余物，得到呈黄色固体状的4-7(18.0g，56％产率)。[m h]
c8h5brn2o的计算值224.96，实测值225.0。
[0759]
步骤e：制备7-溴-1,5-萘啶-2(1h)-酮(4-8).
[0760]
向4-7(13.0g，57.8mmol)、toscl(13.2g，69.4mmol)于chcl3(130ml)中的混合物中逐滴添加含k2co3(23.9g，173mmol)的h2o(43ml)。将混合物在25℃下搅拌16小时。用水(200ml)稀释反应混合物并过滤。用水(200ml)洗涤滤饼并干燥，得到呈白色固体状的4-8(15.0g，83％纯度)。
[0761]
步骤f：制备7-溴-2-氯-1,5-萘啶(4-9).将4-8(12.0g，53.3mmol)于pocl3(220.0g)中的溶液在100℃下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物。用h2o(200ml)淬灭反应混合物，用3.0m naoh碱化到ph 8，过滤。用h2o(100ml)洗涤滤饼。真空干燥残余物，得到呈灰色固体状的4-9(13.0g，80％产率，91％纯度)。[m h]
c8h4brcln2的计算值242.92，实测值242.9。
[0762]
步骤g：制备2-氯-7-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(4-11).在80℃下在n2下将4-9(9.0g，37.0mmol)、4-10(10.3g，37.0mmol)、k2co3(15.3g，111mmol)、pd(dppf)cl2(2.7g，3.70mmol)于二噁烷(150ml)和h2o(15ml)中的混合物搅拌1小时。通过柱来纯化反应混合物(ea:pe＝1:5至1:1)，得到呈黄色固体状的4-11(5.7g，50％产率)。
[0763]
步骤h：制备2-碘-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(4-12).将4-11(5.0g，15.9mmol)、nai(14.3g，95.4mmol)于hi(100ml)中的混合物在20℃下搅拌12小时。用固态nahco3将反应混合物碱化到ph 8，用ea(3
×
200ml)萃取。用na2so3(100ml)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤。真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的4-12(3.5g，70％产率)。
[0764]
步骤i：制备4-(6-碘-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-甲酸叔丁酯(4-13).将4-12(1.0g，3.11mmol)、boc2o(1.4g，6.22mmol)、dmap(189mg，1.55mmol)于dcm(20ml)中的混合物在20℃下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物。通过柱(ea:pe＝1:5至1:1)纯化残余物，得到呈白色固体状的4-13(1.0g，76％产率，95％产率)。[m h]
c16h15
in4o2的计算值423.02，实测值422.9。
[0765]
步骤j：制备4-(6-(三甲基锡烷基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-甲酸叔丁酯(4-14).将4-13(850mg，2.01mmol)、sn2me6(3.4g，10.2mmol)、pd(pph3)2cl2(142mg，0.201mmol)于二噁烷(10.0ml)中的溶液在80℃下在n2下搅拌6小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型
hplc，使用一定梯度(50至80％)的乙腈/0.05％氢氧化氨水溶液纯化残余物，得到呈白色固体状的4-14(450mg，38％产率，95％纯度)。[m h]
c19h24
n4o2sn的计算值461.09，实测值461.2。
[0766]
步骤k：制备2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(115).用n2鼓泡4-14(24.06mg，0.052mmol)、4-4(30mg，0.068mmol)和四(三苯基膦)钯(3.03mg，2.62μmol)于二噁烷(524μl)中的小瓶10分钟，之后将其在25℃下搅拌1小时。随后使反应物加热到100℃持续16小时。将cysteine(0.052mmol)添加到反应混合物中并将其在25℃下搅拌2小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(5.8mg)。[m h]
c23h20
n8的计算值409.18，实测值409.2。
[0767]
实例5：合成2-(6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶(5-1).
[0768][0769]
步骤a：制备2-甲基-6-((三甲基硅烷基)乙炔基)吡啶(5-4).将5-2(100.0g，582mmol)、5-3(114.2g，1162mmol)、pd(pph3)2cl2(10.0g，14.6mmol)和cui(11.0g，58.2mmol)于tea(1000ml)中的溶液在20℃下搅拌2小时。经由硅藻土过滤反应混合物。真空浓缩滤液，得到呈棕色油状的粗物质5-4(120.0g，75％纯度)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。[m h]
c11h15
nsi的计算值190.10，实测值190.0。
[0770]
步骤b：制备2-乙炔基-6-甲基吡啶(5-5).将5-4(120g，476mmol)、k2co3(197g，1428mmol)于dcm(800ml)和meoh(400ml)中的溶液在20℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。用h2o(300ml)稀释残余物，用ea(3
×
500ml)萃取。用盐水(200ml)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱(ea:pe＝1:20至1:10)纯化残余物，得到呈黄色油状的5-5(36.0g，53％产率，经由两个步骤)。
[0771]
步骤c：制备3-(6-甲基吡啶-2-基)丙炔酸甲酯(5-7).在-78℃下向5-5(36.0g，290mmol)于thf(500ml)中的溶液中添加n-buli(128.0ml，319mmol)。将反应混合物在这一温度下搅拌1小时。随后在-78℃下添加5-6(134.7g，1425mmol)。使反应物升温到20℃并在这一温度下搅拌3小时。用h2o(500ml)淬灭反应混合物，用ea(500ml
×
3)萃取。用盐水(300ml
×
3)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱(ea/pe＝1/50至1/5)纯化残余物，得到呈黄色固体状的5-7(38.7g，72％产率)。
[0772]
步骤d：制备((均三甲苯基磺酰基)氧基)氨基甲酸叔丁酯(5-11).在0℃下向5-8(80.0g，367mmol)、5-9(53.7g，404mmol)于thf(800ml)中的混合物中添加tea(44.4g，440mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物，用h2o(500ml)稀释，用dcm(500ml
×
3)萃取。用盐水(500ml)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤。真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的5-10(110.0g，95％产率)。
[0773]
步骤e：制备o-(均三甲苯基磺酰基)羟胺(5-11).在0℃下向tfa(400ml)的溶液中添加5-10(110.0g，360mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(2l)中。过滤沉淀物，用h2o(200ml
×
6)洗涤到ph＝7。用dcm(500ml)稀释滤饼，经mgso4干燥，过滤。将滤液5-11直接用于下一步骤(500ml，0.72m于dcm中)。
[0774]
步骤f：制备2,4,6-三甲基苯磺酸1-氨基-3-氯吡啶-1-鎓(5-13).在0℃下向5-11(500ml，0.72m于dcm中)的溶液中添加含5-12(25.0g，221.2mmol)的dcm(200ml)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。向反应混合物添加pe(2l)。过滤沉淀物，真空干燥滤饼，得到呈白色固体状的5-13(35.0g，81％产率)。
[0775]
步骤g：制备6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸甲酯(5-14).向5-7(15.0g，85.7mmol)、5-13(31.0g，94.3mmol)于meoh(200ml)中的溶液中添加naome(9.3g，171.4mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌4小时。真空浓缩反应混合物。通过柱(ea/pe＝1/10至1/3)纯化残余物，得到呈黄色固体状的5-14(3.0g，12％产率)。[m h]
c15h12
cln3o2的计算值302.06，实测值302.0。
[0776]
步骤h：制备6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸(5-15).向5-14(3.0g，9.97mmol)于meoh(30ml)中的溶液中添加含naoh(2.0g，49.85mmol)的h2o(30ml)。将反应混合物在60℃下搅拌13小时。真空浓缩反应混合物。用h2o(10ml)稀释残余物，用hoac酸化到ph＝6，用dcm(30ml
×
3)萃取。用盐水(50ml)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤。真空浓缩滤液，得到呈黄色固体状的5-15(2.4g，85％产率，90％纯度)。[m h]
c14h10
cln3o2的计算值288.05，实测值288.0。
[0777]
步骤i：制备3-溴-6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶(5-16).向5-15(2.4g，8.36mmol)、nahco3(1.4g，16.72mmol)于dmf(30ml)中的混合物中添加nbs(1.8g，10.03mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。用h2o(50ml)稀释反应混合物，用ea(50ml
×
3)萃取。用盐水(50ml
×
3)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤。真空浓缩滤液，得到呈黄色固
体状的5-16(2.5g，93％产率，86％纯度)。[m h]
c13
h9brcln3的计算值321.97，实测值321.9。
[0778]
步骤j：制备(6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)硼酸(5-17).在0℃下在n2下向5-16(300mg，0.93mmol)和i-probpin(1.04g，5.58mmol)于thf(16ml)中的混合物中逐滴添加i-prmgcl(2.4ml，4.66mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。用饱和nh4cl水溶液(80ml)淬灭反应混合物，并用ea(150ml
×
3)萃取。用盐水(150ml
×
2)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型hplc，使用一定梯度(50至80％)的乙腈/0.05％氢氧化氨水溶液纯化残余物，得到呈黄色固体状的5-17(60mg，20％产率，96％纯度)。[m h]
c13h11
bcln3o2的计算值288.06，实测值288.2。
[0779]
步骤k：制备1,5-萘啶1-氧化物(5-18).在0℃下向4-5(40.0g，306mmol)于dcm(0.8l)中的溶液中以若干份添加m-cpba(58.4g，338mmol)。添加之后，将混合物在20℃下搅拌16小时。过滤混合物。将母滤液浓缩到干燥，用pe(2
×
200ml)湿磨并通过硅胶柱(pe/ea＝10/1至dcm/meoh＝100/1至10/1)纯化，得到呈白色固体状的5-18(39.0g，84％产率，99％纯度)。[m h]
c8h6n2o的计算值147.05，实测值147.3。
[0780]
步骤l：制备2-溴-1,5-萘啶和3-溴-1,5-萘啶(5-19和5-20).在0℃下向5-18(36g，246.3mmol)于chcl3(0.26l)中的溶液中逐滴添加pobr3(84.6g*3，295.5mmol)于chcl3(0.18l)中的溶液。添加之后，将混合物在0℃下搅拌30分钟，并随后在20℃下再搅拌30分钟。将反应混合物逐份倒入饱和nahco3(300ml)中。用dcm(200ml*3)萃取所得混合物。真空浓缩合并的有机层并通过硅胶柱(pe/ea＝100/1至1/1)纯化两次，得到呈白色固体状的5-19(13.3g，15％产率，99％纯度)、呈白色固体状的5-20(6.8g，87％纯度)和呈白色固体状的5-19与5-20的混合物(3.8g)。[m h]
c8h5brn2的计算值208.96，实测值209.0。
[0781]
步骤m：制备2-(6-氯-2-(6-甲基吡啶-2-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶(5-1).将5-19(29.1mg，0.139mmol)、5-17(20mg，0.070mmol)、碳酸钠(22.12mg，0.209mmol)和pd(dppf)cl2(10.18mg，0.014mmol)于脱气水(116μl):dmf(232μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(10.9mg)。[m h]
c21h14
cln5的计算值372.09，实测值372.2。
[0782]
实例6：合成3-(6-甲基吡啶-2-基)-n-(2-(n-吗啉基)乙基)-4-(7-(吡啶-4-基)-1,5-萘啶-2-基)-1h-吡唑-5-胺(468).
[0783][0784]
步骤a：制备中间物6-1.向小瓶中添加4-吡啶硼酸(12.0mg，0.096mmol)、乙酸钯(ii)(1.658mg，7.38μmol)、二环己基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(7.04mg，0.015mmol)、碳酸铯(72.2mg，0.222mmol)，并用氮气吹扫所得混合物，之后在无空气条件下添加脱气水(250μl)，之后添加1-8(35.0mg，0.074mmol)于脱气thf(250μl)中的储备溶液。封盖所得混合物并在85℃下搅拌16小时，随后经由硅藻土垫过滤，用thf(3ml)在过滤器上洗涤并浓缩。在55℃下用tfa(1ml)处理残余物1小时。浓缩粗混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(7至22％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，得到呈白色固体状的中间物6-1的2tfa盐(18.0mg，41％产率)。[m h]
c22h16
n6的计算值365.14，实测值365.1。
[0785]
步骤b：制备中间物6-2.在室温下用n-碘代丁二酰亚胺(15mg，0.067mmol)处理6-1的2tfa(14mg，0.024mmol)于dmf(350μl)中的溶液，并随后在80℃下搅拌过夜。加热后透明黄色溶液变为混浊黄色。15小时之后，将另外量的n-碘代丁二酰亚胺(25g)(26mg，0.116mmol)引入到反应混合物中，并再继续加热7小时。浓缩反应混合物，并通过硅胶柱色谱(0至15％甲醇/dcm梯度)纯化，得到呈黄色固体状的中间物6-2(13mg，80％纯度，90％产率)。[m h]
c22h15
in6的计算值491.04，实测值491.0。
[0786]
步骤c：制备3-(6-甲基吡啶-2-基)-n-(2-(n-吗啉基)乙基)-4-(7-(吡啶-4-基)-1,5-萘啶-2-基)-1h-吡唑-5-胺(468).向含有6-2(13mg，0.021mmol)的小瓶中添加4-(2-胺乙基)吗啉(4.18μl，0.032mmol)、brettphos pd g4(1.953mg，2.121μmol)、brettphos(1.139mg，2.121μmol)，并用氮气吹扫所得混合物并在氮气气氛下用1m于thf中的lihmds(70μl，0.070mmol)处理。将所得深色混合物在85℃下搅拌16小时。经由硅藻土塞过滤反应混合物之后，用thf(2ml)洗涤，浓缩并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至22％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生呈淡黄色固体状的标题化合物的tfa盐(3.9mg)。[m h]
c28h28
n8o的计算值493.24，实测值493.2。
[0787]
实例7.合成6-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(600).
[0788][0789]
步骤a：制备(6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)氨基甲酸苯甲酯(7-1).向1-8(3.0g，6.66mmol)于二噁烷(40ml)中的溶液中添加氯甲酸苯甲酯(1.51g，9.99mmol)、pd2(dba)3(610mg，0.666mmol)、xantphos(1.15g，2.0mmol)和碳酸铯(3.25g，9.99mmol)。真空脱气混合物并且n2吹扫3次。随后将反应混合物加热到85℃并搅拌16小时。将混合物倒入水(50ml)中并用ea(50ml
×
3)萃取。用饱和nacl(50ml
×
3)洗涤有机层并经硫酸钠干燥。在真空中去除溶剂，得到粗产物，通过硅胶柱色谱(pe/ea 6:1至1:2梯度)纯化，得到呈淡黄色固体状的7-1(2.0g，60％)。[m h]
521.4。
[0790]
步骤b：制备中间物7-2.将7-1(2.0g，3.8mmol)添加到1m氯化氢的乙酸乙酯(40ml)溶液中。将混合物在25℃下搅拌3.0小时。去除溶剂并用ea(80ml)稀释残余物。用碳酸氢钠饱和水溶液(30ml
×
3)和盐水(40ml
×
3)洗涤混合物。经硫酸钠干燥混合物，并真空浓缩到干燥，得到呈黄色固体状的7-2(1.6g)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤。
[0791]
步骤c：制备(6-(5-碘-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)氨基甲酸苯甲酯(7-3).向7-2(1.5g，3.43mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加nis(3.1g，13.75mmol)。将混合物在85℃下搅拌15小时。将反应物倒入水(80ml)中。过滤混合物。干燥滤饼并用ea(5ml
×
2)洗涤，得到呈黄色固体状的7-3(1.0g)。[m h]
c20h19
in6o2的计算值563.06，实测值563.0。
[0792]
步骤d：制备(6-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)氨基甲酸甲酯(7-4).向7-3(450mg，0.8mmol)于甲醇(50ml)中的溶液中添加甲醇钠(432mg，8.0mmol)、碘化铜(i)(76mg，0.4mmol)和l-脯氨酸(92mg，0.8mmol)。将反应物在80℃下搅拌16小时。过滤混合物。真空浓缩滤液到干燥，得到粗产物。通过硅胶柱色谱(pe/ea5:1至1:2梯度)纯化粗产物，得到呈黄色固体状的7-4(220mg，31％产率)。[m h]
c20h18
n6o3的计算值391.14，实测值391.3。
[0793]
步骤e：制备6-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(600).向7-4(180mg，0.46mmol)于etoh/h2o(2ml/2ml)中的混合物中添加naoh(110.0mg，2.77mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。之后浓缩混合物。用etoh/h2o(3ml/3ml)湿磨，得到呈黄色固体状的标题化合物(88mg)。[m h]
c18h16
n6o的计算值333.14，实测值333.1。
[0794]
实例8：合成7-溴-2-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(42).
[0795][0796]
步骤a：制备7-溴-2-(5-碘-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(8-1).向1-7(3.0g，8.19mmol)于dmf(30ml)中的溶液中添加nis(2.8g，12.29mmol)。将混合物在80℃下搅拌5小时。之后将混合物倒入冰水(100ml)中，并随后用ea(50ml
×
3)萃取。用盐水(50ml
×
2)洗涤有机层，经硫酸钠干燥并真空浓缩。用ea(5ml)湿磨固体并通过过滤收集，得到呈黄色固体状的8-1(3.0g，75％产率)。[m h]
c17h11
brin5的计算值491.92，实测值492.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.04(s,1h),8.67(d,j＝1.9hz,1h),8.65-8.54(m,2h),8.47(t,j＝7.5hz,1h),8.27(d,j＝7.5hz,1h),7.90(d,j＝7.5hz,1h),4.21(s,3h),3.00(s,3h)。
[0797]
步骤b：制备7-溴-2-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(42).向8-1(100mg
×
4，0.20mmol
×
4)于meoh(10ml
×
4)中的溶液中添加甲醇钠(55mg
×
4，1.02mmol
×
4)、cui(19mg
×
4，0.10mmol
×
4)和l-脯氨酸(22mg
×
4，0.20mmol
×
4)。在微波照射下在85℃下加热混合物10小时。真空去除溶剂。通过硅胶柱色谱(pe/ea 5:1至1:2梯度)纯化粗产物，得到呈黄色固体状的标题化合物(42)(400mg，25％)。[m h]
c18h14
brn5o的计算值396.04，实测值396.1。
[0798]
实例9：合成2-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(哌嗪-1-基)-1,5-萘啶(33).
[0799][0800]
向含有42(16.19mg，0.041mmol)的小瓶中添加哌嗪(14.07mg，0.163mmol)、三(二苯亚甲基丙酮)二钯(0)(3.74mg，4.08μmol)、ruphos(3.81mg，8.17μmol)和叔丁醇钠(5.89mg，0.061mmol)。用氮气吹扫小瓶的内含物并添加二噁烷(163μl)。使反应混合物在室温下静置10分钟并随后在105℃下搅拌50分钟。经由硅藻土塞过滤深色浆液并用thf(3ml)在过滤器上洗涤。浓缩合并滤液并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至45％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生呈淡黄色固体状的标题化合物的tfa盐(8.8mg)。[m h]
c22h23
n7o的计算值402.20，实测值402.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.06(d,j＝2.6hz,1h),8.65(d,j＝8.9hz,1h),8.43(d,j＝8.9hz,1h),8.02(t,j＝7.8hz,1h),7.89-7.84(m,1h),7.69(s,1h),7.55(d,j＝7.8hz,1h),4.17(s,3h),3.82(t,j＝5.2hz,4h),3.49(t,j＝5.2hz,4h),2.91(s,3h)。
[0801]
实例10：合成2-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(吡啶-3-基)-1,5-萘啶(105).
[0802][0803]
步骤a：向含有42(100mg，0.252mmol)的小瓶中添加单水合对甲苯磺酸(7.20mg，0.038mmol)，之后添加dmf(1.2ml)。用3,4-二氢-2h-吡喃(0.115ml，1.262mmol)处理所得黄色浆液，并在85℃下搅拌18小时。之后添加三乙胺(10.55μl，0.076mmol)并浓缩所得混合物，并使用硅胶色谱(0至100％ea/己烷)纯化，得到呈白色固体状的所需中间物7-溴-2-(5-甲氧基-3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(10-1)(32mg，26％产率)。[m h]
c23h22
brn5o2的计算值480.10，实测值480.0。
[0804]
步骤b：向含有吡啶-3-硼酸(4.98mg，0.031mmol)的小瓶添加乙酸钯(ii)(0.935mg，4.16μmol)、xphos(3.97mg，8.33μmol)和碳酸铯(20.35mg，0.062mmol)。用氮气吹扫小瓶的内含物，之后添加10-1(10mg，0.021mmol)于二噁烷(95μl)和水(9.46μl)中的溶液。将混合物在105℃下搅拌3.5小时，之后冷却到室温，经由硅藻土塞过滤并用2ml thf洗涤。浓缩合并滤液并在50下用0.7ml tfa处理残余物1小时。浓缩所得混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(15至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生呈淡黄色固体状的标题化合物的tfa盐(5.2mg)。[m h]
c23h18
n6o的计算值395.15，实测值395.3。
[0805]
实例11：合成2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(644).
[0806][0807]
步骤a：制备1-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1,2-二酮(11-1).将1-5(7.0g，20.5mmol)、seo2(6.8g，61.5mmol)于二噁烷(100ml)中的溶液在100℃下搅拌1小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物。真空浓缩滤液到干燥，得到呈黄色固体状的11-1(7.0g，粗物质)。[m h]
c16h10
brn3o2的计算值356.00，实测值356.1。
[0808]
步骤b：制备7-溴-2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶(11-2).将粗物质11-1(7.0g，19.7mmol)、六胺(8.3g，59.1mmol)和nh4oac(9.1g，118mmol)于acoh(100ml)中的溶液在95℃下搅拌2.5小时。真空浓缩反应混合物并用nahco3饱和水溶液(100ml)碱化到ph＝9。用ea(400ml
×
3)萃取混合物。用盐水(400ml
×
2)洗涤合并的有机相，经na2so4干燥，过滤，并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶柱(ea:meoh＝1:0至10:1)纯化残余
物，得到呈黄色固体状的11-2(3.6g，39％产率，74％纯度)。[m h]
c17h12
brn5的计算值366.03，实测值366.2。
[0809]
步骤c：制备7-溴-2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶(11-3)和7-溴-2-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)-1,5-萘啶(11-4).在0℃下向11-2(3.3g，9.01mmol)于dmf(50ml)中的溶液中添加nah(469mg，11.7mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。随后向混合物添加semcl(1.8g，10.8mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。用h2o(100ml)稀释反应混合物，用ea(200ml
×
3)萃取。用盐水(200ml
×
2)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱(pe:ea＝10:1至1:1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的异构体11-3与11-4的混合物(2.0g，43％产率，96％产率)。[m h]
c23h26
brn5osi的计算值496.11，实测值496.3。
[0810]
步骤d：制备2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(644).将1-boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(28.5mg，0.097mmol)、11-3和11-4(40.0mg，0.081mmol)、碳酸钠(34.2mg，0.322mmol)和pd(dppf)cl2(11.8mg，0.016mmol)于脱气水(161μl):dmf(645μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至95％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(14.3mg)。[m h]
c20h15
n7的计算值354.14，实测值354.1。
[0811]
实例12：合成n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(104).
[0812][0813]
将11-3和11-4(19.0mg，0.038mmol)、2-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-乙胺(24.69mg，0.144mmol)、叔丁醇钠(11.03mg，0.115mmol)、brettphos(2.05mg，3.83μmol)和brettphos pd g3(3.47mg，3.83μmol)于脱气1,4-二噁烷(382μl)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(7.4mg)。[m h]
c26h32
n8的计算值457.28，实测值457.3。
[0814]
实例13：合成7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶(307).
[0815][0816]
将11-3和11-4(19mg，0.038mmol)、ruphos(3.57mg，7.65μmol)、1-boc-六氢-1,4-二氮呯(30.7mg，0.153mmol)、叔丁醇钠(11.03mg，0.115mmol)和ruphos pd g2(5.94mg，7.65μmol)于脱气1,4-二噁烷(250μl)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(5.7mg)。[m h]
c22h23
n7的计算值386.20，实测值386.2。
[0817]
实例14：合成2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-7-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-1,5-萘啶(414).
[0818][0819]
步骤a：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)硼酸和(6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)-1,5-萘啶-3-基)硼酸.将11-3和11-4(50mg，0.101mmol)、双(频哪醇合)二硼(33.2mg，0.131mmol)、pd(dppf)cl2(14.74mg，0.020mmol)和乙酸钾(29.7mg，0.302mmol)于1,4-二噁烷(0.480ml)中的小瓶用n2鼓泡5分钟，之后加热到85℃持续16小时。以于二噁烷中的0.21m溶液将粗物质14-1和14-2直接用于下一反应。[m h]
c23h28
bn5o3si的计算值462.21，实测值462.0。
[0820]
步骤b：制备2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-7-(5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-1,5-萘啶(414).将14-1和14-2(480μl，0.101mmol，粗物质，0.21m于二噁烷中)、14-3(30.5mg，0.101mmol)、碳酸钠(32.1mg，0.303mmol)和pd(dppf)cl2(14.78mg，0.020mol)于水(240μl)中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液
(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(12.4mg)。[m h]
c23h20
n8的计算值409.18，实测值409.2。
[0821]
实例15：合成n-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(653).
[0822][0823]
步骤a：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h咪唑-4-基)-n-(5-(哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-1,5-萘啶-3-胺(15-1).将11-3和11-4(50.1mg，0.101mmol)、4-(6-氨基吡啶-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(33.7mg，0.121mmol)、碳酸铯(99.0mg，0.303mmol)、brettphos(10.83mg，0.020mmol)和brettphos pd g4(18.6mg，0.020mmol)于脱气1,4-二噁烷(673μl)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至80％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，得到15-1的tfa盐(44.6mg)。[m h]
c26h25
n9的计算值464.22，实测值464.2。
[0824]
步骤b：制备n-(5-(4-甲基哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(653).将15-1(10.38mg，0.022mmol)、含37wt.％甲醛的h2o(3.33μl，0.045mmol)和acoh(1.28μl，0.022mmol)于甲醇(0.2ml)中的小瓶在25℃下搅拌1小时，之后添加三乙酰氧基硼氢化钠(16.67mg，0.079mmol)。使所得混合物在25℃下搅拌16小时。用h2o(0.2ml)淬灭反应物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(5.8mg)。[m h] c
27h27
n9的计算值478.24，实测值478.1。
[0825]
实例16：合成n-异丙基-4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)环己-3-烯-1-胺(258).
[0826][0827]
步骤a：制备4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)环己-3-烯-1-胺(16-1).将4-(n-boc-氨基环己-1-烯基-1-硼酸频哪醇酯(33.9mg，0.105mmol)、11-3和11-4(40.0mg，0.081mmol)、碳酸钠(34.2mg，0.322mmol)和pd(dppf)cl2(11.8mg，0.016mmol)于脱气水(130μl):二噁烷(300μl)中的混合物加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，得到16-1的tfa盐(45.5mg)。[m h]
c23h22
n6的计算值383.19，实测值383.2。
[0828]
步骤b：将16-1(10.0mg，0.026mmol)、丙酮(3.85μl，0.052mmol)和acoh(1.50μl，0.061mmol)于甲醇(0.2ml)中的小瓶在25℃下搅拌1小时，之后添加三乙酰氧基硼氢化钠(16.67mg，0.079mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。用h2o(0.2ml)淬灭反应物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(6.0mg)。[m h] c
26h28
n6的计算值425.24，实测值425.1。
[0829]
实例17：合成2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(469).
[0830][0831]
步骤a：制备2-溴-2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1-酮(17-1).向1-5(2.3g，6.9mmol)于dcm(50ml)中的混合物中冷却到0℃，随后添加nbs(1.2g，
6.9mmol)并将混合物在25℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物。通过柱色谱(pe/ea＝3/1)纯化残余物，得到呈棕色油状的17-1(2.6g，81％产率，91％纯度)。[m h]
c16h11
br2n3o的计算值421.92，实测值421.8。
[0832]
步骤b：制备7-溴-2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶(17-2).向17-1(2.6g，6.17mmol)于二噁烷(50ml)中的混合物中添加2-氨基吡啶(1.8g，18.52mmol)，将混合物在60℃下搅拌16小时。用ea(50ml)湿磨混合物，收集滤饼并真空干燥，得到呈白色固体状的17-2(1.7g，63％产率，98％纯度)。[m h]
c21h14
brn5的计算值416.04，实测值415.9。
[0833]
步骤c：制备2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(469).将1-boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(14.13mg，0.048mmol)、17-2(10.0mg，0.024mmol)、碳酸钠(7.64mg，0.072mmol)和pd(dppf)cl2(3.92mg，4.80μmol)于脱气水(200μl):dmf(400μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。在铃木反应期间去除boc基团。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(2.7mg)。[m h]
c24h17
n7的计算值404.15，实测值404.2。
[0834]
实例18：合成n-甲基-2-(4-(6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(527).
[0835][0836]
使用实例17的程序，伴随另外boc脱保护步骤制得标题化合物。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa，之后纯化。[m h]
c27h24
n8的计算值461.21，实测值461.2。
[0837]
实例19：合成n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶-3-胺(120).
[0838][0839]
将17-2(30mg，0.072mmol)、2-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-乙胺(24.69mg，0.144mmol)、叔丁醇钠(20.78mg，0.216mmol)、brettphos(3.87mg，7.21μmol)和brettphos pd g3(6.53mg，7.21μmol)于脱气1,4-二噁烷(360μl)中的小瓶加热到90℃持续16小时。真空浓缩反应混合物，并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(36.1mg)。[m h]
c30h34
n8的计算值
507.29，实测值507.2。
[0840]
实例20：合成2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-1,5-萘啶(587).
[0841][0842]
步骤a：制备(6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-1,5-萘啶-3-基)硼酸(20-1).将17-2(550mg，1.32mmol)、双(频哪醇合)二硼(671mg，2.64mmol)、pd(dppf)cl2(193mg，0.264mmol)和乙酸钾(389mg，3.96mmol)于1,4-二噁烷(6.30ml)中的小瓶用n2鼓泡5分钟，之后加热到85℃持续16小时。以于二噁烷中的0.21m溶液将粗物质20-1直接用于下一反应。[m h]
c21h16
bn5o2的计算值382.14，实测值382.0。
[0843]
步骤b：制备2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)-7-(4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]吡嗪-3-基)-1,5-萘啶(587).将20-1(15mg，0.039mmol，粗物质，0.21m于二噁烷中)、20-2(17.84mg，0.059mmol)、碳酸钠(8.34mg，0.079mmol)和pd(dppf)cl2(5.76mg，7.87μmol)于水(65.6μl):1,4-二噁烷(131μl)中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(23.5mg)。[m h]
c27h22
n8的计算值459.20，实测值459.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.45(dt,j＝7.1,1.2hz,1h),9.19(d,j＝2.2hz,1h),8.53(dd,j＝2.2,0.8hz,1h),8.44(dd,j＝8.8,0.8hz,1h),8.21(s,1h),7.99-7.83(m,4h),7.70(d,j＝7.8hz,1h),7.50(d,j＝7.8hz,1h),7.38(td,j＝6.9,1.3hz,1h),4.94(s,2h),4.57(t,j＝5.8hz,2h),3.90(t,j＝5.9hz,2h),2.59(s,3h)。
[0844]
实例21：合成2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]嘧啶-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(676).
[0845][0846]
步骤a：制备7-溴-2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]嘧啶-3-基)-1,5-萘啶(21-1).将1-5(100mg，0.292mmol)、嘧啶-2-胺(30.6mg，0.321mmol)和碳酸氢钾(29.3mg，0.292mmol)于9:1乙腈(526μl):cbrcl3(58.4μl)的小瓶在微波中加热到100℃持续4小时。真空浓缩反应混合物。通过正相色谱(0至10％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈米色固体状的21-1(53.6mg，44.1％产率)。[m h]
c20h13
brn6的计算值417.04，实测值416.9。
[0847]
步骤b：制备2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]嘧啶-3-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(676).将1-boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(17.48mg，0.059mmol)、21-1(12.4mg，
0.030mmol)、碳酸钠(9.45mg，0.089mmol)和pd(dppf)cl2(4.85mg，5.94μmol)于脱气水(200μl):dmf(400μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。在铃木反应期间去除boc基团。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(3.4mg)。[m h]
c23h16
n8的计算值405.15，实测值405.0。
[0848]
实例22：合成5-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-6-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[2,1-b]噻唑(511).
[0849][0850]
将1-5(100mg，0.292mmol)、2-氨基-1,3-噻唑(32.2mg，0.321mmol)和碳酸氢钾(29.3mg，0.292mmol)于9:1乙腈(526μl):cbrcl3(58.4μl)的小瓶在微波中加热到100℃持续4小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(20至80％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(5.3mg)。[m h]
c19h12
brn5s的计算值422.00，实测值421.9。
[0851]
实例23：合成6-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-1,5-萘啶-3-胺(373).
[0852][0853]
步骤a：制备7-溴-1,5-萘啶-2-甲醛(23-1).向1-4(16.0g，71.7mmol)于二噁烷(300ml)中的溶液中添加seo2(9.5g，86.1mmol)。将混合物在100℃下在n2气氛下搅拌3小时。过滤混合物并真空浓缩，通过柱色谱(pe/ea＝10/1至5/1)纯化残余物，得到呈棕色固体状的23-1(12.8g，54％产率，72％纯度)。[m h]
c9h5brn2o的计算值236.96，实测值236.9。
[0854]
步骤b：制备7-溴-2-乙炔基-1,5-萘啶(23-2).向23-1(7.8g，32.5mmol)于meoh(250ml)中的溶液中添加k2co3(9.0g，65.0mmol)和bor(7.5g，39.0mmol)。将混合物在25℃下在n2气氛下搅拌1.5小时。用h2o(300ml)稀释混合物，用ea(300ml*3)萃取水相。用盐水洗涤有机相，经无水na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型hplc(phenomenex luna c18 250*50mm*10μm，水(0.1％tfa)-acn)和柱色谱(pe/ea＝10/1至1/1)纯化残余物，得到呈黄色固体状的23-2(5.8g，46％产率，99％纯度)。[m h]
c10
h5brn2的计算值232.96，实测值233.0。
[0855]
步骤c：制备7-溴-2-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)-1,5-萘啶(23-4).将23-2
(2.9g，12.5mmol)和23-3(3.6g，16.2mmol)、pd(dppf)cl2(455mg，0.62mmol)、cui(237mg，1.25mmol)和tea(2.5g，24.9mmol)于甲苯(80ml)中的混合物在60℃下在n2下搅拌16小时。用h2o(100ml)稀释混合物，用ea(80ml*3)萃取水相，用盐水洗涤有机相，经无水na2so4干燥，过滤并真空浓缩，随后通过柱(pe/ea＝10/1至1/1)来纯化，获得呈黄色固体状的23-4(2.0g，48％产率，98％纯度)。[m h]
c16h10
brn3的计算值324.01，实测值323.9。
[0856]
步骤d：制备2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-溴-1,5-萘啶(23-6).将23-4(300mg，0.925mmol)、五甲基环戊二烯基双-(三苯基膦)氯化钌(ii)(36.8mg，0.046mmol)和23-5(2036μl，1.018mmol)于1,4-二噁烷(9.25ml)中的小瓶脱气10分钟。随后密封反应混合物，加热到80℃并搅拌16小时。冷却所得混合物，并真空浓缩。通过硅胶柱(ea/己烷0％至70％)纯化粗产物，获得呈两种可能异构体的混合物的23-6(211mg，50％产率)。[m h]
c23h17
brn6的计算值457.07，实测值457。
[0857]
步骤e：制备6-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-1,5-萘啶-3-胺(373).向2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-溴-1,5-萘啶(23-6)(呈两种三唑异构体的混合物)(30mg，0.066mmol)和2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙-1-胺(33.7mg，0.197mmol)添加brettphos(3.52mg，6.56μmol)、brettphos pd g3(5.95mg，6.56μmol)和叔丁醇钠(18.91mg，0.197mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(328μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物并在80℃下搅拌16小时。冷却反应物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化粗产物(并与非所需三唑区位异构体分离)，产生标题化合物的tfa盐(9.8mg)。[m h]
c32h37
n9的计算值548.32，实测值548.2。
[0858]
实例24：合成2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-(哌嗪-1-基)-1,5-萘啶(359).
[0859][0860]
向装有2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-溴-1,5-萘啶(23-6)(呈两种三唑异构体的混合物)(30mg，0.066mmol)和1-boc-哌嗪(48.9mg，0.262mmol)的小瓶中添加ruphos(6.12mg，0.013mmol)、ruphos pd g2(10.19mg，0.013mmol)和叔丁醇钠(18.91mg，0.197mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(219μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物并在90℃下搅拌16小时。冷却反应物并随后真空浓缩。用1ml tfa处理所得残余物并在55℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物，并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化(并与非所需三唑区位异构体分离)，产生标题化合物的tfa盐(11.1mg)。[m h]
c27h26
n8的计算值463.23，实测值462.1。
[0861]
实例25：合成2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-(1-(哌啶-3-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(216).
[0862][0863]
向装有2-(1-苯甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)-7-溴-1,5-萘啶(23-6)(呈两种三唑异构体的混合物)(30mg，0.067mmol)的小瓶中添加3-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)哌啶hcl(41.1mg，0.131mmol)，之后添加碳酸钠(20.86mg，0.197mmol)和pd(dppf)cl2(10.71mg，0.013mmol)。用氮气吹扫所得混合物，之后添加脱气水(164μl)和dmf(325μl)。封盖小瓶并在95℃下搅拌16小时。随后冷却反应物，经由硅藻土塞过滤，用thf(5ml)洗涤并真空浓缩。用0.3ml tfa处理所得残余物并在室温下搅拌3小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(15至55％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化(并与非所需三唑区位异构体分离)，产生标题化合物的tfa盐(9.1mg)。[m h] c
24h23
n7的计算值410.20，实测值410.1。
[0864]
实例26：合成n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(29).
[0865][0866]
步骤a：制备7-溴-2-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-1,5-萘啶(26-1).将23-4(300mg，0.925mmol)和叠氮化钠(180mg，2.78mmol)于dmf(9.25ml)中的小瓶加热100℃持续16小时。将反应物用水(10ml)淬灭并用dcm(30ml
×
3)萃取。将有机层经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。经由正相色谱(0至20％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈米色固体状的26-1(311mg，92％产率)。[m h]
c16h11
brn6的计算值367.02，实测值367.0。
[0867]
步骤b：制备n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(29).将甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(57.4mg，0.163mmol)、26-1(30mg，0.082mmol)、碳酸钠(26.0mg，0.245mmol)和pd(dppf)cl2(13.34mg，0.016mmol)于脱气水(272μl):dmf(545μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(16.9mg)。[m h]
c22h21
n9的计算值412.19，实测值412.1。
[0868]
实例27：合成(s)-n,n-二甲基-1-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)吡咯烷-3-胺(188).
[0869][0870]
将26-1(30mg，0.082mmol)、(s)-(-)-3-(二甲氨基)吡咯烷(18.66，0.163mmol)、ruphos(7.62mg，0.016mmol)、叔丁醇钠(23.55mg，0.245mmol)和ruphos pd g2(63.4mg，0.064mmol)于1,4-二噁烷(272μl)(用n2脱气)中的小瓶加热到90℃持续72小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(20.1mg)。[m h]
c22h24
n8的计算值401.21，实测值401.3。
[0871]
实例28：合成2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基)-1,5-萘啶(532).
[0872][0873]
步骤a：制备6-乙基-n-甲氧基-n-甲基吡啶甲酰胺(28-3).在25℃下向28-1(850mg，5.62mmol)、28-2(822mg，8.43mmol)、hobt(911mg，6.74mmol)和edci(1.3g，6.74mmol)于dcm(20ml)中的溶液中逐滴添加et3n(2.3g，22.5mmol)。随后将混合物在25℃下搅拌3小时。用h2o(20ml)稀释反应物，用dcm(50ml
×
3)萃取。用盐水(20ml
×
2)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。通过柱(pe:ea＝10:1至1:1)纯化粗产物，得到呈黄色油状的28-3(800mg，73％产率，85％纯度)。[m h]
c10h14
n2o2的计算值195.11，实测值195.3。
[0874]
步骤b：制备2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-1-(6-乙基吡啶-2-基)乙-1-酮(28-4).在-78℃下向1-4(765mg，3.43mmol)和28-3(800mg，4.12mmol)于thf(20ml)中的混合物中逐滴添加khmds(6.9ml，6.86mmol)。将混合物在-78℃下搅拌30分钟。将混合物与另一批相同反应物(以143mg 1-4开始)合并，并随后用h2o(30ml)淬灭并用ea(50ml
×
3)萃取。经na2so4干燥合并的有机相，并浓缩，得到呈黄色固体状的粗产物28-4(1.6g)。[m h]
c17h14
brn3o的计算值356.03，实测值356.2。
[0875]
步骤c：制备(e)-2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-3-(二甲氨基)-1-(6-乙基吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(28-5).将28-4(1.5g，4.21mmol)于dmf-dma(20ml)中的溶液在80℃下搅拌4
小时。真空浓缩混合物，并且残余粗物质28-5(1.5g)直接用于下一步骤。[m h]
c20h19
brn4o的计算值411.08，实测值413.3。
[0876]
步骤d：制备7-溴-2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(28-6).向28-5(1.5g，2.70mmol)于etoh(20ml)中的溶液中添加acoh(1.2g，19.2mmol)和nh2nh
2 h2o(746mg，14.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌15小时。真空浓缩混合物(与另一批相同反应物合并，以100mg 28-5开始)，并通过柱(pe:ea＝6/1至1:1)纯化残余物，得到呈棕色固体状的28-6(780mg，71％产率，95％纯度)。[m h]
c18h14
brn5的计算值380.04，实测值380.2。
[0877]
步骤e：制备7-溴-2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(28-7).向28-6(680mg，1.79mmol)于thf(20ml)中的溶液中添加dhp(1.5g，17.9mmol)和tsoh(31mg，0.179mmol)。将混合物在80℃下搅拌15小时。用h2o(100ml)稀释反应混合物(与另一批相同反应物合并，以100mg 28-6开始)，用固态nahco3碱化到ph＝9并用ea(200ml
×
3)萃取。用盐水(200ml
×
2)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过柱(pe:ea＝10:1至3:1)纯化残余物，得到呈黄色油状的28-7(260mg，27％产率，94％纯度)。[m h]
c23h22
brn5o的计算值464.10，实测值466.3。
[0878]
步骤f：制备2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(4-(吡咯烷-1-基)哌啶-1-基)-1,5-萘啶(532).向装有7-溴-2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(28-7)(21mg，0.044mmol)和4-(1-吡咯烷基)-哌啶(10mg，0.066mmol)的小瓶中添加ruphos(2.05mg，4.40μmol)、ruphos pd g2(3.42mg，4.40μmol)和叔丁醇钠(13mg，0.132mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(400μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物，在105℃下搅拌16小时。冷却反应物并随后真空浓缩。用1ml tfa处理所得残余物并在45℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至43％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(8.2mg)。[m h]
c27h31
n7的计算值454.26，实测值454.2。
[0879]
实例29：合成2-(3-(6-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)-n-甲基乙-1-胺(92).
[0880][0881]
向装有7-溴-2-(3-(6-乙基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(28-7)(35mg，0.075mmol)的小瓶中添加甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(30.5mg，0.087mmol)之后添加磷酸三钾(48mg，0.226mmol)、xphos pd g4(6.49mg，7.54μmol)和xphos(3.59mg，7.54μmol)。用氮气吹扫所得混合物，之后添加脱气水(151μl)和1,4-二噁烷(151μl)。封盖小瓶并在105℃下搅拌16小时。随后冷却反应物，经由硅藻土塞过滤，用thf(5ml)洗涤并真空浓缩。用1ml tfa处理所得残余物并在55℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(21.1mg)。[m h] c
24h24
n8的计算值425.21，实测值425.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.55
(d,j＝2.0hz,1h),8.91-8.84(m,1h),8.88(s,1h),8.64(dd,j＝8.2,1.2hz,1h),8.58(dd,j＝8.9,0.8hz,1h),8.50(t,j＝8.0hz,1h),8.35(d,j＝9.0hz,1h),7.95-7.87(m,2h),7.02(d,j＝2.4hz,1h),4.70-4.62(m,2h),3.68-3.61(m,2h),3.49(q,j＝7.6hz,2h),2.81(s,3h),1.53(t,j＝7.6hz,3h)。
[0882]
实例30：n-(2-(2,2-二甲基吡咯烷-1-基)乙基)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(526).
[0883][0884]
步骤a：制备5-氟-6-甲基吡啶甲酸甲酯(30-2).向30-1(29.0g，153mmol)和pd(dppf)cl2(3.5g，4.58mmol)于meoh(500ml)中的溶液中添加tea(46.3g，458mmol)。将混合物在80℃下在co(50psi)下搅拌16小时。减压浓缩混合物。通过柱色谱(0至20％ea/pe)纯化残余物，得到呈白色固体状的30-2(24.4g，94％产率，99％纯度)。
[0885]
步骤b：制备5-氟-6-甲基吡啶甲酸(30-3).向30-2(13.8g，81.6mmol)于etoh(150ml)和h2o(50ml)中的溶液中添加lioh
·
h2o(17.1g，408mmol)。将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物与另一批相同反应物(以13.8g 30-2开始)合并。添加2m hcl到ph＝6，减压去除etoh。用ea(400ml
×
3)萃取混合物。经na2so4干燥合并的有机相，减压浓缩并真空干燥，得到呈白色固体状的30-3(20.7g，82％产率)。
[0886]
步骤c：制备5-氟-n-甲氧基-n,6-二甲基吡啶甲酰胺(30-4).向30-3(19.7g，127mmol)、28-2(18.6g，190mmol)、hobt(20.6g，152mmol)和edci(29.2g，152mmol)于dcm(800ml)中的溶液中逐滴添加et3n(51.4g，508mmol)、将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物与另一批相同反应物(以1.0g 30-3开始)合并。用h2o(800ml)稀释合并混合物，分离dcm层，用ea(80ml
×
2)萃取水层，用有机层合并dcm层，经na2so4干燥，减压浓缩。通过柱(0至20％ea/pe)纯化残余物，得到呈淡黄色油状的30-4(15.3g，55％产率，95％纯度)。[m h]
c9h
11
fn2o2的计算值199.08，实测值199.1。
[0887]
步骤d：制备2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-1-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)乙-1-酮(30-5).在-78℃下在n2下向1-4(1.25g*2，5.60mmol*2)和30-4(1.33g*2，6.72mmol*2)于thf(30ml*2)中的混合物中添加khmds(11.2ml*2，11.2mmol*2)。将混合物在-78℃下搅拌1.0小时。在-78℃下用h2o(20ml*2)淬灭反应物。将混合物与7种其它相同反应物批料(各自以1.0g 30-4开始)合并。过滤合并混合物，并用ea(300ml*3)萃取滤液，将合并的有机相与滤饼合并。减压浓缩合并的混合物，真空干燥，得到呈黄色固体状的粗30-5(14.0g，50％产率，52％纯度)。[m h]
c16h11
brfn3o的计算值360.01，实测值360.1。
[0888]
步骤e：制备(e)-2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-3-(二甲氨基)-1-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(30-6).将30-5(13.0g*2，16.3*2mmol)于dmf
·
dma(130*2ml)中的溶液在80℃下在n2下搅拌2小时。减压浓缩混合物并真空干燥，得到呈棕色固体状的粗30-6(15.0g，79％产率，41％纯度)。[m h]
c19h16
brfn4o的计算值415.05，实测值415.1。
[0889]
步骤f：制备7-溴-2-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(30-7).向30-6(15.0g，14.8mmol)于mecn(150ml)中的溶液中添加acoh(6.3g，105mmol)和nh2nh
2 h2o(4.1g，81.5mmol)。将混合物在15℃下搅拌16小时。将混合物与2种其它批相同反应物(以1.0g和1.5g 30-6开始)合并。过滤合并混合物，用h2o(50ml*3)洗涤滤饼，用饱和nahco3将滤液碱化到ph＝8。用h2o(300ml)稀释滤液，用ea(500ml*3)萃取，经na2so4干燥合并混合物，减压浓缩合并的混合物。将残余物与滤饼合并并真空干燥，得到呈棕色固体状的粗30-7(17.6g)。[m h]
c17h11
brfn5的计算值384.02，实测值386.1。
[0890]
步骤g：制备7-溴-2-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(30-8).向30-7(12.5g，32.5mmol)于thf(130ml)中的溶液中添加msoh(50滴)和dhp(13.7g，163mmol)。将混合物在80℃下搅拌2小时。将混合物与另一批相同反应物(以100mg 30-7开始)合并。用饱和nahco3(200ml)和饱和nacl(200ml)洗涤合并混合物。经na2so4干燥有机层并减压浓缩。通过柱(5％至30％ea/pe)纯化残余物，得到呈黄色固体状的30-8(4.9g，22％产率，95％纯度)和呈黄色油状物的30-8和30-9(0.7g)的混合物。[m h]
c22h19
brfn5o的计算值468.08，实测值470.1。
[0891]
步骤h：制备n-(2-(2,2-二甲基吡咯烷-1-基)乙基)-6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(526).向7-溴-2-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(30-8)(29.3mg，0.063mmol)和2-(2,2-二甲基吡咯烷-1-基)乙-1-胺(11.6mg，0.081mmol)添加brettphos(6.72mg，0.013mmol)、brettphos pd g4(11.52mg，0.013mmol)和叔丁醇钠(18.04mg，0.188mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(417μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物并在85℃下搅拌16小时。冷却反应物并真空浓缩。用tfa(0.5ml)处理所得残余物并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至45％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(17.5mg)。[m h]
c25h28
fn7的计算值446.24，实测值446。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.86(s,1h),8.73-8.63(m,2h),8.28(dd,j＝8.8,4.0hz,1h),8.11(d,j＝8.8hz,1h),7.81(t,j＝8.8hz,1h),7.38(d,j＝2.5hz,1h),3.92(s,1h),3.78(t,j＝6.1hz,2h),3.64(s,1h),3.36(s,2h),2.86(d,j＝2.8hz,3h),2.17(s,1h),2.08(s,3h),1.53(s,3h),1.34(s,3h)。
[0892]
实例31：合成(1r,2r)-2-(4-(6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)环己-1-胺(490).
[0893][0894]
步骤a：制备2-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)-7-(1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(31-2).向含有30-8(150mg，0.320mmol)的小瓶添加31-1(122mg，0.416mmol)，之后添加磷酸三钾(204mg，0.384mmol)、xphos pd g4(27.6mg，0.032mmol)和xphos(15.27mg，0.032mmol)。用氮气吹扫所得混合物，之后添加脱气水(650μl)和1,4-二噁烷(650μl)。小瓶封盖并在85℃下搅拌1.5小时。随后，将反应物在105℃下搅拌20分钟。随后冷却反应物，并真空浓缩。通过柱(0％至15％meoh/dcm)纯化残余物，得到31-2(117mg，72％产率，90％纯度)。[m h] c
25h22
fn7o的计算值456.19，实测值456。
[0895]
步骤b：制备(1r,2s)-2-(4-(6-(3-(5-氟-6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)环己-1-胺(490).向含有(1r,2r)-反-n-boc-2-氨基环己醇(35.4mg，0.165mmol)的小瓶添加dcm(1ml)和三乙胺(0.038ml，0.274mmol)，并将所得混合物冷却到0℃，之后用甲磺酰氯(0.015ml，0.198mmol)处理。将所得澄清溶液在0℃下搅拌，并使其缓慢升温到室温过夜。用nahco3(饱和)淬灭反应物，并用dcm萃取水层。经na2so4干燥合并的有机物并真空浓缩。向所得白色固体添加碳酸铯(71.5mg，0.220mmol)，之后添加含31-2(50mg，0.110mmol)于乙腈(1000μl)中的溶液，并封盖所得混合物，并在100℃下搅拌6小时。随后，真空浓缩反应物。用1ml tfa处理所得残余物并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(40.4mg)。[m h] c
26h25
fn8的计算值469.22，实测值469.2。通过noe确认产物的立体化学。
[0896]
实例32：合成n-甲基-2-(4-(6-(3-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(237).
[0897][0898]
步骤a：制备2-(7-溴-1,5-萘啶-2-基)-1-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)乙-1-酮(32-2).在氮气气氛下，将含32-1(36.8mg，0.179mmol)和1-4(40mg，0.179mmol)于无水thf(897μl)中的溶液冷却到-78℃。15分钟之后，逐滴添加1.0m khmds于thf(215μl，0.215mmol)的溶液。使所得混合物缓慢升温到25℃并搅拌16小时。用200μl h2o淬灭反应物。添加meoh(2ml)并浓缩混合物。通过硅胶柱色谱(0至100％ea/hex)纯化残余物，得到32-2(49.2mg，69.3％产率)。[m h]
c16
h9brf3n3o的计算值395.99，实测值396.0。
[0899]
步骤b：制备7-溴-2-(3-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(32-4).向含有32-2(49.2mg，0.124mmol)的小瓶添加n,n-二甲基甲酰胺二甲缩醛(412μl，3.10mmol)，并将所得混合物在80℃下搅拌3.5小时。浓缩反应混合物，得到粗32-3。[m h]
c19h14
brf3n4o的计算值451.03，实测值451.0。向粗32-3于etoh(621μl)中的溶液中添加乙酸(35.5μl，0.621mmol)和水合肼(31.1μl，0.621mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌2小时。真空浓缩反应混合物。通过硅胶柱色谱(0至15％meoh/dcm)纯化残余物，得到32-4(26.5mg，50.8％产率)。[m h]
c17
h9brf3n5的计算值420.00，实测值420.0。
[0900]
步骤c：制备7-溴-2-(1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-3-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶(32-5).向32-4(26.5mg，0.063mmol)于dmf(420μl)中的溶液中添加单水合对甲苯磺酸(1.799mg，9.46μmol)和3,4-二氢-2h-吡喃(17.26μl、0.189mmol)。将所得混合物在85℃下搅拌16小时。用三乙胺(2.198μl，0.016mmol)处理反应混合物并真空浓缩。通过硅胶柱色谱(0至10％meoh/dcm)纯化残余物，得到32-5(7.3mg，23％产率)。[m h]
c22h17
brf3n5o的计算值504.06，实测值504.0。
[0901]
步骤d：制备n-甲基-2-(4-(6-(3-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(237).向含有32-5(6.8mg，0.013mmol)和氨基甲酸的小瓶添加甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(7.10mg，0.020mmol)、xphos pd g3(1.141mg，1.348μmol)、2-二环己基膦
基-2',4',6'-三异丙基联苯(0.643mg，1.348μmol)和磷酸钾(10.02mg，0.047mmol)，之后添加thf(33.7μl)和水(33.7μl)。用n2鼓泡反应混合物3分钟，之后封盖并在85℃下搅拌2.5小时。真空浓缩反应混合物。用0.5ml tfa处理所得残余物并在55℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。使用制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(3.7mg)。[m h]
c23h19
f3n8的计算值465.17，实测值465.0。
[0902]
实例33：合成n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(3-(6-(三氟甲基)吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)-1,5-萘啶-3-胺(201).
[0903][0904]
装有brettphos pd g4(6.57mg，7.14μmol)、brettphos(3.83mg，7.14μmol)、叔丁醇钠(9.15mg，0.095mmol)、2-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-乙胺(13.00μl，0.071mmol)和32-4(20mg，0.048mmol)于二噁烷(238μl)中的小瓶用氮气鼓泡10分钟，并在105℃下搅拌7小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(24.8mg)。[m h]
c26h29
f3n8的计算值511.25，实测值511.2。
[0905]
实例34：合成n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-3-胺(664).
[0906][0907]
步骤a：制备((6-甲基吡啶-2-基)(苯氨基)甲基)膦酸二苯酯(34-3).在25℃下向34-1(20.0g，165mmol)、phnh2(18.4g，198mmol)于i-proh(500ml)中的混合物中添加34-2(67.1g，215mmol)。将反应混合物在25℃下搅拌3小时。过滤混合物。真空浓缩固体，得到呈白色固体的34-3(29.0g，41％产率，100％纯度)。[m h]
c25h23
n2o3p的计算值431.14，实测值431.2。
[0908]
步骤b：制备2-(3-溴喹啉-6-基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1-酮(34-5).在20℃下向34-3(18.8g，43.6mmol)、cs2co3(21.3g，65.4mmol)于thf(200ml)和i-proh(40ml)中的混合物中添加34-4(10.3g，43.6mmol)。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。用3.0m hcl(80ml)稀释反应混合物，并在20℃下搅拌1小时。用固态naoh将反应混合物碱化到ph＝8，用ea(200ml
×
3)萃取。用盐水(150ml
×
2)洗涤有机层，经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。通过再结晶纯化一部分，获得呈黄色固体状的34-5(9.2g，88％纯度)。[m h]
c17h13
brn2o的计算值341.02，实测值342.9。通过硅胶柱纯化另一部分，获得呈白色固体状的34-5(6.0g，40％产率，99％纯度)。[m h]
c17h13
brn2o的计算值341.02，实测值342.9。
[0909]
步骤c：制备(z)-2-(3-溴喹啉-6-基)-3-(二甲氨基)-1-(6-甲基吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(34-6).将34-5(11.2g，32.8mmol)于dmf
·
dma(100ml)中的溶液在80℃下搅拌4小时。真空浓缩反应物，获得呈红色油状物的粗34-6(17.5g)。
[0910]
步骤d：制备3-溴-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉(34-7).将粗34-6(17.5g，32.8mmol)和nh2nh2h2o(8.2g，164mmol)于etoh(100ml)中的溶液在80℃下搅拌4小时。真空浓缩混合物，并通过硅胶柱(20％至60％ea/pe)纯化，获得呈红色固体状的34-7(8.0g，66％产量(经由2个步骤)，91％纯度)。[m h]
c18h13
brn4的计算值365.03，实测值366.9。
[0911]
步骤e：制备3-溴-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉(34-8).将34-7(8.0g，21.9mmol)、dhp(9.2g，110mmol)和p-tsoh(377mg，2.19mmol)于thf(100ml)中的溶液在80℃下搅拌2小时。通过tlc来检测反应物。真空浓缩混合物，并通过硅胶柱(10％至60％ea/pe)纯化，将其与另一批相同反应物(以460mg 34-7开始)合并，获得呈黄色固体状的34-8(8.0g，76％产率，98％纯度)。[m h]
c23h21
brn4o的计算值449.09，实测值450.9。
[0912]
步骤f：制备n-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-3-胺(664).向3-溴-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉(34-8)(20mg，0.045mmol)和4-(4-甲基-1-哌嗪基)苯胺(17.03mg，0.089mmol)添加brettphos(2.389mg，4.45μmol)、brettphos pd g4(4.10mg，4.45μmol)和叔丁醇钠(12.83mg，0.089mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(223μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物并在85℃下搅拌16小时。冷却反应物并真空浓缩。用tfa(0.3ml)处理所得残余物并在60℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(21.5mg)。[m h]
c29h29
n7的计算值476.25，实测值476.2。
[0913]
实例35：合成3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉(82).
[0914][0915]
向装有3-溴-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)
喹啉(34-8)(30mg，0.067mmol)和1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪(49.0mg，0.267mmol)的小瓶添加ruphos(6.23mg，0.013mmol)、ruphos pd g2(10.37mg，0.013mmol)和叔丁醇钠(19.25mg，0.200mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(223μl)并随后用氮气鼓泡5分钟。封盖所得黄色反应混合物，在80℃下搅拌16小时。冷却反应物并随后真空浓缩。所得残余物用0.5ml tfa处理并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至30％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(11.2mg)。[m h]
c27h31
fn8的计算值487.27，实测值487.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.03(d,j＝2.8hz,1h),8.21-8.12(m,3h),8.05-7.98(m,2h),7.72(dd,j＝8.9,1.7hz,2h),7.56(d,j＝8.0hz,1h),4.17-4.09(m,2h),3.50(s,4h),3.41(s,4h),3.24(tt,j＝11.6,3.7hz,1h),3.07(td,j＝12.7,2.3hz,2h),2.92(s,3h),2.78(s,3h),2.26-2.17(m,2h),1.95-1.79(m,2h)。
[0916]
实例36：合成n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(17).
[0917][0918]
步骤a：制备1-(3-溴喹啉-6-基)-2-(6-甲基吡啶-2-基)乙-1,2-二酮(36-2).将36-1(7.0g，20.5mmol)和seo2(4.6g，41.0mmol)于二噁烷(100ml)中的混合物在100℃下搅拌1小时。过滤混合物并减压浓缩滤液，得到呈黄色油状的36-2(9.5g，70％纯度)，其直接用于下一步骤。[m h]
c17h11
brn2o2的计算值355.00，实测值355.0。
[0919]
步骤b：制备3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉(36-3).将36-2(9.5g，18.7mmol)、六胺(7.9g，56.2mmol)和nh4oac(8.6g，112mmol)于acoh(100ml)中的混合物在95℃下搅拌2.5小时。真空浓缩混合物到约40ml。用h2o(100ml)稀释残余物，在0℃下用固态naoh碱化到ph＝7。将混合物用dcm(150ml
×
3)萃取。真空干燥合并的有机层，得到残余物。通过柱(0至10％meoh/ea)纯化残余物，得到呈棕色固体状的36-3(3.4g，40％产率，80％纯度)。[m h]
c18h13
brn4的计算值365.03，实测值364.9。
[0920]
步骤c：制备3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉和3-溴-6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉(36-4).向36-3(3.3g，9.04mmol)于thf(40ml)中的溶液中添
加nah(723mg，18.1mmol)，在0℃下搅拌0.5小时。添加semcl(2.3g，13.6mmol)，将混合物在20℃下搅拌2小时。用h2o(100ml)淬灭反应物并用ea(100ml
×
3)萃取。经na2so4干燥合并的有机层并减压浓缩，得到残余物。通过柱(0至100％ea(含25％dcm)/pe)纯化残余物，得到呈棕色油状的36-4(1.9g，43％产率，98％纯度，合并的2种异构体)。[m h]
c24h27
brn4osi的计算值495.11，实测值495.0。
[0921]
步骤d：制备n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(17).将甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(25.1mg，0.072mmol)、36-4(27.3mg，0.055mmol)、碳酸钠(17.49mg，0.165mmol)和pd(dppf)cl2(8.98mg，0.011mmol)于脱气水(137μl):dmf(274μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(32.7mg)。[m h]
c24h23
n7的计算值410.20，实测值410.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.27(d,j＝2.2hz,1h),8.93(s,1h),8.67(dd,j＝2.2,0.8hz,1h),8.40(d,j＝0.7hz,1h),8.28(d,j＝1.9hz,1h),8.22-8.12(m,2h),7.90(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),7.75(t,j＝7.9hz,1h),7.36(ddt,j＝9.5,7.8,0.8hz,2h),4.65-4.57(m,2h),3.63-3.51(m,2h),2.78(s,3h),2.63(s,3h)。
[0922]
实例37：合成4-[6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]-3-喹啉基]环己-3-烯-1-胺(196).
[0923][0924]
将4-(n-boc-氨基)环己-1-烯基-1-硼酸频哪醇酯(33.9mg，0.105mmol)、36-4(40.1mg，0.081mmol)、碳酸钠(34.2mg，0.322mmol)和pd(dppf)cl2(11.8mg，0.016mmol)于脱气水(130μl):二噁烷(300μl)中的混合物加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，得到196的tfa盐(48.2mg)。[m h]
c24h23
n5的计算值382.20，实测值382.1。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.19(d,j＝2.2hz,1h),8.93(s,1h),8.52(d,j＝2.2hz,1h),8.32(d,j＝2.0hz,1h),8.23-8.14(m,1h),7.94(dd,j＝8.8,2.0hz,1h),7.74(t,j＝7.9hz,1h),7.35(ddt,j＝21.7,7.9,0.8hz,2h),6.47(td,j＝3.2,1.6hz,1h),3.61-3.47(m,1h),2.85-2.71(m,3h),2.64(s,3h),2.48-2.22(m,2h),1.95(dddd,j＝12.6,10.7,8.5,7.1hz,1h)。
[0925]
实例38：合成n,n-二甲基-4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)环己-3-烯-1-胺(629).
2-基)乙酸甲酯(60).
[0935][0936]
将粗物质2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)哌嗪-2-基)乙酸(500)(23mg，0.054mmol)和硫酸(2.86μl，0.054mmol)于meoh(0.5ml)中的混合物加热到回流持续16小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(12.2mg)。[m h]
c25h26
n6o2的计算值443.21，实测值443.1。
[0937]
实例42：合成6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-n-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)喹啉-3-胺(338).
[0938][0939]
步骤a：制备(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)氨基甲酸叔丁酯和(6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉-3-基)氨基甲酸叔丁酯(42-1).将36-4(3.7g，7.47mmol)、nh2boc(1.3g，11.2mmol)、pd2(dba)3(684mg，0.747mmol)、xantphos(432mg，0.747mmol)和cs2co3(7.3g，22.4mmol)于二噁烷(40ml)中的混合物在100℃下在n2下搅拌2小时。将混合物与第二反应物合并。减压浓缩合并的混合物。通过柱色谱(20至100％ea/pe)纯化残余物，得到呈黄色固体状的42-1(1.7g，92％纯度，合并的2种异构体)。[m h]
c29h37
n5o3si的计算值532.27，实测值532.4。
[0940]
步骤b：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-胺(42-2)和6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)
甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉-3-胺(42-3).将42-1(1.1g，2.07mmol)和naoh(828mg，20.7mmol)于etoh(40ml)和h2o(20ml)中的混合物在100℃下搅拌12小时。将混合物与第二反应物合并。用acoh将合并混合物酸化到ph＝6。减压去除etoh。用ea(20ml
×
3)萃取混合物，经na2so4干燥合并的有机层并减压浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(22至52％)乙腈/0.25％三氟乙酸水溶液纯化残余物，得到得到呈黄色固体状的42-2(730mg，56％纯度，99％产率)和呈淡黄色固体状的42-3(220mg，17％纯度，97％纯度)。[m h]
c24h29
n5osi的计算值432.21，实测值432.3。
[0941]
步骤c：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)-n-(5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-2-基)喹啉-3-胺(338).叔丁基-2-碘-5,6-二氢[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-7(8h)-甲酸酯(26.8mg，0.076mmol)、42-2(30mg，0.070mmol)、brettphos(7.46mg，0.014mmol)、brettphos pd g4(12.80mg，0.014mmol)和碳酸铯(67.9mg，0.209mmol)于1,4-二噁烷(695μl)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至60％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(3.5mg)。[m h]
c23h21
n9的计算值424.19，实测值424.1。
[0942]
实例43：合成(r)-n-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-甲酰胺(407).
[0943][0944]
使(1s,2r,4s)-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-甲酸(14.11mg，0.090mmol)、dipea(60.7μl，0.348mmol)和hatu(39.6mg，0.104mmol)于dmf(348μl)中的溶液搅拌0.5小时，之后添加42-2(30mg，0.070mmol)。在25℃下将所得混合物搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至20％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(8.2mg)。[m h]
c25h25
n7o的计算值440.21，实测值440.1。
[0945]
实例44：合成n-(2-((3r,5s)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)乙基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-胺(313).
[0946][0947]
步骤a：制备2-((6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)氨基)乙-1-醇和2-((6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉-3-基)氨基)乙-1-醇.向装有36-4(272mg，0.549mmol)和乙醇胺(132.8μl、2.196mmol)的小瓶中添加brettphos pd g4(50.5mg，0.055mmol)、brettphos(29.5mg，0.055mmol)和叔丁醇钠(158mg，1.647mmol)。用n2吹扫所得混合物并添加二噁烷(2745μl)。封盖所得混合物并在95℃下搅拌32小时。lcms显示44-1的形成。经由硅藻土垫过滤反应物，并真空浓缩。经由正相色谱(0至15％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈黄色油状的44-1(76mg，29.1％产率)。[m h]
c26h33
n5o2si的计算值476.24，实测值476.0。
[0948]
步骤b：制备甲烷磺酸2-((6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)氨基)乙酯和甲烷磺酸2-((6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉-3-基)氨基)乙酯(44-2).向含有44-1(76mg，0.160mmol)于dcm(1.6ml)中的小瓶添加tea(44.5μl，0.320mmol)。将所得溶液冷却到0℃，之后用甲磺酰氯(24.73μl，0.320mmol)处理。将反应混合物加热到25℃并搅拌1小时。用nahco3饱和水溶液(1ml)淬灭反应混合物并用dcm(3ml
×
3)萃取。经na2so4干燥合并的有机层，并真空浓缩，得到呈黄色油状的44-2(68.5mg，合并的两种异构体，粗物质)。[m h]
c27h35
n5o4ssi的计算值554.22，实测值554.0。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.92(s,1h),8.72(d,j＝2.7hz,1h),8.16(d,j＝1.9hz,1h),8.07(dd,j＝8.8,0.8hz,1h),7.81-7.69(m,3h),7.36(ddt,j＝21.6,7.9,0.8hz,2h),3.71-3.55(m,6h),3.24(t,j＝6.1hz,2h),2.76(dd,j＝12.9,11.3hz,2h),2.64(s,3h),1.37(d,j＝6.5hz,6h)。
[0949]
步骤c：制备n-(2-((3r,5s)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)乙基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-胺(313).将44-2(17mg，0.031mmol)、dipea(21.45μl，0.123mmol)和(2r,6s)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(14.53mg，0.068mmol)于乙腈(0.3ml)中的粗混合物的溶液加热到80℃持续16小时。真空浓缩反应物。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓
缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至15％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(4.8mg)。[m h]
c26h31
n7的计算值442.26，实测值442.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.92(s,1h),8.72(d,j＝2.7hz,1h),8.16(d,j＝1.9hz,1h),8.07(dd,j＝8.8,0.8hz,1h),7.81-7.69(m,3h),7.36(ddt,j＝21.6,7.9,0.8hz,2h),3.71-3.55(m,6h),3.24(t,j＝6.1hz,2h),2.76(dd,j＝12.9,11.3hz,2h),2.64(s,3h),1.37(d,j＝6.5hz,6h)。
[0950]
实例45：合成n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(125).
[0951][0952]
步骤a：制备3-溴-6-乙炔基喹啉(45-2).向45-1(2.8g，11.86mmol)和k2co3(3.3g，23.72mmol)于meoh(40ml)中的悬浮液中逐滴添加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(4.6g，23.72mmol)并在25℃下搅拌2小时。用水(100ml)稀释混合物并用ea(100ml
×
3)萃取。真空浓缩有机层。通过硅胶柱(0至10％ea/pe)纯化残余物，获得呈白色固体状的45-2(2.2g，80％产率，100％纯度)。[m h]
c11
h6brn的计算值231.97，实测值231.9。
[0953]
步骤b：制备3-溴-6-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)喹啉(45-4).将45-2(1.0g，4.4mmol)、45-3(1.7g，5.2mmol)、pd(pph3)2cl2(300mg，0.44mmol)、cui(80mg，0.44mmol)和tea(900mg，8.8mmol)于甲苯(20ml)中的混合物在60℃下在n2下搅拌2小时。过滤混合物并真空浓缩滤液。通过硅胶柱(0至30％ea/pe)纯化残余物，得到呈黄色固体状的45-4(2.85g，75％产率，97％纯度)。[m h]
c17h11
brn2的计算值323.01，实测值323.0。
[0954]
步骤c：制备3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)喹啉(45-5).将45-4(100mg，0.309mmol)和叠氮化钠(60.3mg，0.928mmol)于dmf(3.09ml)中的小瓶加热100℃持续16小时。用水(10ml)淬灭反应物并用dcm(20ml
×
3)萃取。将有机层经na2so4干燥，过滤并真空浓缩。经由正相色谱(0至20％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈黄色固体状的45-5(58mg，51.2％产率)。[m h]
c17h12
brn5的计算值366.03，实测值366.0。
[0955]
步骤d：制备n-甲基-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(125).将甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(55.6mg，0.158mmol)、45-5(29mg，0.079mmol)、碳酸钠(25.2mg，0.238mmol)和pd(dppf)cl2(12.93mg，0.016mmol)于脱气水(264μl):dmf(528μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa并通过制备
型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(13.2mg)。[m h]
c23h22
n8的计算值411.20，实测值411.1。
[0956]
实例46：合成n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-4-基)喹啉-3-胺(621).
[0957][0958]
将45-4(50mg，0.155mmol)、2-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-乙胺(79mg，0.464mmol)、叔丁醇钠(44.6mg，0.464mmol)、brettphos(8.30mg，0.015mmol)、brettphos pd g3(14.02mg，0.015mmol)于1,4-二噁烷(774μl)(用n2脱气)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。通过柱色谱(0至70％ea/hex)纯化残余物，得到n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)喹啉-3-胺(61mg)。将含n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-((6-甲基吡啶-2-基)乙炔基)喹啉-3-胺(58mg，0.140mmol)和三甲基硅烷基叠氮化物(74.1μl，0.561mmol)的dmf(0.815ml)加热100℃持续16小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(2.1mg)。[m h]
c26h32
n8的计算值457.28，实测值457.2。
[0959]
实例47：合成n-甲基-2-(4-(6-(1-甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(628).
[0960][0961]
步骤a：制备3-溴-6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((三甲基硅烷基)甲基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)喹啉(47-1).将45-4(150mg，0.464mmol)、三甲基硅烷基甲基叠氮化物(96mg，0.743mmol)和cp*rucl(pph3)2(37.0mg，0.046mmol)于1,4-二噁烷(2.47ml)中的小瓶用n2鼓泡10分钟。随后将反应混合物加热到80℃持续16小时。形成两种异构体。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。经由正相色谱(0至85％ea/hex)纯化残余物，得到47-1(139mg，66.2％产率，合并的2种异构体)。[m h]
c21h22
brn5si的计算值452.08，实测值452.0。
[0962]
步骤b：制备n-甲基-2-(4-(6-(1-甲基-4-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-1,2,3-三唑-5-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(628).将甲基(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(40.4mg，0.115mmol)、47-1(26mg，0.057mmol)、碳酸钠(18.27mg，0.172mmol)和pd(dppf)cl2(9.39mg，0.011mmol)于脱气水(192μl):dmf(383μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。铃木-宫浦反应期间去除tms基团。
经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(28.4mg)。[m h]
c24h24
n8的计算值425.21，实测值425.2。
[0963]
实例48：合成n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)喹啉-3-胺(293).
[0964][0965]
步骤a：制备3-溴-6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)喹啉(48-1).将36-1(200mg、0.586mmol)、2-氨基吡啶(112mg，0.645mmol)和碳酸氢钾(58.7mg，0.586mmol)于9:2乙腈(1.05ml):cbrcl3(0.117ml)在微波中加热到110℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过正相色谱(0至10％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈米色固体状的48-1(222mg，91％产率)。[m h]
c22h15
brn4的计算值415.05，实测值415.0。
[0966]
步骤b：制备n-(2-(4-异丙基哌嗪-1-基)乙基)-6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)喹啉-3-胺(293).将48-1(30mg，0.072mmol)、2-(4-异丙基-哌嗪-1-基)-乙胺(24.72mg，0.144mmol)、叔丁醇钠(20.83mg，0.217mmol)、brettphos(3.88mg，7.22μmol)、brettphos pd g3(6.55mg，7.22μmol)于1,4-二噁烷(346μl)(用n2脱气)中的小瓶加热到90℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(25.8mg)。[m h]
c31h35
n7的计算值506.30，实测值506.1。
[0967]
实例49：合成n-甲基-2-(4-(6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(306).
基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(49-7).在0℃下向49-6(40.0g，114mmol)、i-probpin(31.8g，171mmol)于thf(300ml)中的混合物中添加i-prmgcl(114ml，228mmol)。将反应物在20℃下搅拌12小时。真空浓缩反应混合物，得到直接使用的呈黄色固体状的49-7(91.0g，51％纯度)。[m h]
c17h30
bn3o4的计算值352.23，实测值352.0。
[0973]
步骤e：制备乙酸3-(1-(2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-6-基酯(49-8).向49-3(9.2g，34.6mmol)、49-7(30.0g，38.1mmol)和k3po4(14.7g，69.3mmol)于二噁烷(160ml)和h2o(32ml)中的溶液中添加pd(dppf)cl2(2.5g，3.46mmol)。将混合物在60℃下在n2下搅拌2小时。真空浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱(40％至80％ea/pe)纯化，获得呈黑色油状的49-8(6.3g，41％产率)。
[0974]
步骤f：制备(2-(4-(6-羟基喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯.将49-8(6.3g，15.3mmol)于naoh/h2o(14ml，40％)和meoh(80ml)中的溶液在40℃下搅拌3小时。tlc显示起始物质被消耗掉。真空浓缩混合物。通过hcl(2m)将残余物酸化到ph＝7。用水(100ml)稀释混合物并用ea(100ml*3)萃取。真空浓缩有机层，并通过硅胶柱色谱(40至90％ea/pe)纯化，获得呈白色固体状的标题醇(4.6g，81％产率)。
[0975]
步骤g：制备三氟甲烷磺酸3-(1-(2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-6-基酯.经由0.5小时在0℃下向(2-(4-(6-羟基喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.6g，12.5mmol)和dmap(3.1g，25.0mmol)于dcm(50ml)中的溶液逐滴添加三氟甲烷磺酸酐(4.2g，15.0mmol)。将混合物在0℃下搅拌0.5小时。tlc显示起始物质被消耗掉。真空浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱(30至60％ea/pe)纯化，获得呈白色固体状的标题三氟甲磺酸酯(4.0g，64％产率)。
[0976]
步骤h：制备甲基(2-(4-(6-(4,4,5-三甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(49-9).向三氟甲烷磺酸3-(1-(2-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)乙基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-6-基酯(4.0g，7.99mmol)和(bpin)2(2.4g，9.59mmol)于二噁烷(60ml)中的溶液添加pd(dppf)cl2(584mg，0.799mmol)和koac(1.6g，16.0mmol)。将混合物在100℃下在n2气氛下搅拌2小时。真空浓缩混合物，并通过硅胶柱色谱(30至70％ea/pe)纯化，获得呈白色固体状的49-9(4.1g，76％产率，99％纯度)。
[0977]
步骤i：制备2-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(49-12).将49-10(60.8μl，0.535mmol)、49-11(66.6mg，0.411mmol)、pd(dppf)cl2(60.2mg，0.082mmol)和碳酸钠(131mg，1.234mmol)于水(686μl):1,4-二噁烷(1371μl)中的混合物用n2鼓泡5分钟，之后加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩，得到49-12(86mg)，其未经进一步纯化即直接用于下一步骤。[m h]
c13h11
n3的计算值210.10，实测值210.0。
[0978]
步骤j：制备3-溴-2-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶(49-13).向49-12(86mg，0.411mmol，粗物质)于无水dmf(2.0ml)中的溶液中添加n-溴代丁二酰亚胺(117mg，0.658mmol)。使所得混合物在25℃下搅拌16小时。浓缩反应物并经由正相色谱(5至80％ea/hex)纯化残余物，得到呈米色固体状的49-13(21mg，17.7％产率)。[m h]
c13h10
brn3的计算值288.01，实测值288.0。
[0979]
步骤k：制备n-甲基-2-(4-(6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)乙-1-胺(306).将49-9(16.50mg，0.042mmol)、49-13(10.0mg，0.035mmol)、碳酸钠(14.7mg，0.139mmol)和pd(dppf)cl2(5.1mg，6.94μmol)于脱
气水(69μl):1,4-二噁烷(278μl)中的小瓶加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中且加热到50℃持续1小时。真空去除tfa。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(4.4mg)。[m h]
c28h25
n7的计算值460.22，实测值460.1。
[0980]
实例50：合成6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)-3-(1h-吡唑-4-基)喹啉(635).
[0981][0982]
步骤a：制备2-(6-甲基吡啶-2-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8h)-甲酸叔丁酯(50-3).将50-1(80mg，0.265mmol)、50-2(172mg，0.450mmol)和pd(dppf)cl2(38.7mg，0.053mmol)于1,4-二噁烷(1324μl)中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后将其在25℃下搅拌1小时。随后将反应物加热到100℃持续16小时。将cysteine(0.691mmol)添加到反应混合物中，并使其在25℃下搅拌2小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。经由柱色谱(0至20％meoh/dcm)来纯化残余物，得到50-3(55mg，66.1％产率)。[m h]
c17h22
n4o2的计算值315.17，实测值315.0。
[0983]
步骤b：制备3-碘-2-(6-甲基吡啶-2-基)-5,6-二氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-7(8h)-甲酸叔丁酯(50-4).向50-3(55mg，0.175mmol)于acn(875μl)的小瓶中添加n-碘代丁二酰亚胺(55.1mg，0.245mmol)。使混合物在65℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。经由柱色谱(0至10％meoh/dcm)来纯化残余物，得到呈黄色固体状的50-4(37mg，48％产率)。[m h]
c17h21
in4o2的计算值441.07，实测值441.0。
[0984]
步骤c：制备6-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-5,6,7,8-四氢咪唑并[1,2-a]吡嗪-3-基)-3-(1h-吡唑-4-基)喹啉(635).将50-5(44.3mg，0.109mmol)、50-4(37.0mg，0.084mmol)、pd(dppf)cl2(12.3mg，0.017mmol)和碳酸钠(26.7mg，0.252mmol)于1,4-二噁烷(336μl):水(84μl)中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到100℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将tfa(300μl)添加到残余物中并加热到50℃持续1小时。真空去除tfa。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至20％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(6.4mg)。[m h]
c24h21
n7的计算值408.19，实测值408.1。
[0985]
实例51：合成n-甲基-1-(6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-4-基)甲胺(356).
[0986][0987]
步骤a：制备2-(3-溴-6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-4-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(51-2).向含有34-8(15.06mg，0.034mmol)的小瓶添加51-1(14.35mg，0.084mmol)、(ir[df(cf3)ppy]2(dtbpy))pf6(0.752mg，0.670μmol)、丙酮(335μl)、tfa(5.16μl、0.067mmol)和50wt.％过乙酸叔丁酯于无味矿油精(21.40μl、0.067mmol)中的溶液。用氮气鼓泡所得黄色混合物1分钟，并随后密封并用36w蓝色led在照射下在室温下搅拌24小时。用tea(23.36μl，0.168mmol)处理所得混合物并随后真空浓缩。通过柱色谱(meoh/dcm＝0％至10％)纯化粗产物，得到呈白色固体状的51-2(12.6mg，55％产率，90％纯度)。[m h]
c32h36
brn5o3的计算值618.10，实测值618。
[0988]
步骤b：制备n-甲基-1-(6-(3-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-4-基)甲胺(356).向含有51-2(12.6mg，0.020mmol)的小瓶添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-1h-吡唑-1-甲酸叔丁酯(15.45mg，0.053mmol)之后添加磷酸家钾(16.7mg，0.079mmol)、xphos(1.25mg，2.63μmol)和xphos pd g4(2.26mg，2.63μmol)。用氮气吹扫所得混合物，之后添加脱气水(13μl)和1,4-二噁烷(118μl)。封盖小瓶并在100℃下搅拌2小时。随后冷却反应物，并真空浓缩。用0.3ml tfa处理所得残余物并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至40％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(2.3mg)。[m h] c
25h23
n7的计算值422.20，实测值422.1。
[0989]
实例52：合成(1r,2r)-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)环己-1-胺(194).
[0990][0991]
步骤a：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)-3-(1h-吡唑-4-基)喹啉(52-1).向含有36-4(303mg，0.612mmol)的小瓶添加31-1(234mg，0.795mmol)，之后添加1n碳酸钠水溶液(3.06ml，3.06mmol)和pd(dppf)cl2(45mg，0.061mmol)。用n2吹扫所得混合物，之后添加1,4-二噁烷(3.06ml)。将所得混合物在100℃下搅拌16小时。随后，经由硅藻土垫过滤反应物，并真空浓缩。通过柱(0至10％meoh/dcm)纯化残余物，得到呈棕色油状的52-1(238mg)。[m h] c
27h30
n6osi的计算值483.23，实测值483.1。
[0992]
步骤b：制备(1r,2r)-2-(4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-1h-吡唑-1-基)环己-1-胺(194).向含有(1r,2r)-反-n-boc-2-氨基环己醇(194mg，0.902mmol)的小瓶添加dcm(4.51ml)和三乙胺(0.314ml，2.25mmol)，并将所得混合物冷却
到0℃，之后用甲磺酰氯(0.126ml，1.624mmol)处理。将所得澄清溶液在0℃下搅拌并使其缓慢升温到25℃持续7小时。用nahco3(饱和)淬灭反应物，并用dcm萃取水层。经na2so4干燥合并的有机物并真空浓缩。向所得白色固体添加碳酸铯(399mg，1.22mmol)，之后添加含有52-1(295mg，0.612mmol)于乙腈(3.06ml)中的溶液，并封盖所得混合物并在100℃下搅拌16小时。随后，真空浓缩反应物。用5ml tfa处理所得残余物并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩粗产物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至75％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(103.8mg)。[m h] c
27h27
n7的计算值450.23，实测值450.2。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ9.29(d,j＝2.2hz,1h),8.94(s,1h),8.65(dd,j＝2.2,0.8hz,1h),8.45(d,j＝0.8hz,1h),8.27(d,j＝1.9hz,1h),8.24-8.14(m,2h),7.90(dd,j＝8.7,2.0hz,1h),7.74(t,j＝7.9hz,1h),7.36(ddt,j＝16.8,7.9,0.8hz,2h),4.41-4.29(m,1h),3.72(td,j＝11.2,4.1hz,1h),2.65(s,3h),2.30-2.17(m,2h),1.96(q,j＝9.0,7.0hz,4h),1.55(q,j＝11.1,9.9hz,2h)。通过noe确认产物的立体化学。
[0993]
实例53：合成6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]喹啉-3-甲酸(796).
[0994][0995]
3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉(1.25g，2.52mmol)、乙基草酸钾5g(0.492g，3.15mmol)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷(0.031g，0.076mmol)和反-二氯双(三苯基膦)钯(ii)(0.035g，0.050mmol)添加到0.5至2.0mlμw小瓶并真空放置2分钟。用n2回填小瓶，随后添加n-甲基-2-吡咯烷酮(5.05ml)，并经由真空/n2回填(5
×
)使所得混合物脱气，密封并加热到150℃持续8小时。冷却反应物并减压去除溶剂。将所得残余物溶解于tfa(10ml)中并加热到50℃持续30分钟。浓缩反应物，与甲苯(2
×
5ml)共沸，随后溶解于meoh(25ml)中。添加naoh(10ml，3.0m，30.0mmol)并将混合物在23℃下搅拌2小时。通过lcms将反应视为完成，并用tfa(1.0ml)酸化，随后浓缩。经由制备型hplc纯化残余物，得到呈黄色粉末的产物(1.01g，90％产率)。
[0996]
实例54：合成6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-甲酸哌啶-4-基酯(740).
[0997][0998]
向含有6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-甲酸(796)、tfa(15.0mg，0.034mmol)的小瓶添加1-boc-4-羟基哌啶(10.2mg，0.051mmol)，之后添加n-(3-二甲氨基丙基)-n'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(9.71mg，0.051mmol)和dmap(0.825mg，6.75μmol)于ch2cl2(300μl)中的溶液。密封小瓶并在23℃下运作反应持续3天。添加tfa(200μl，2.60mmol)并将反应物再搅拌1小时，随后减压浓缩。通过制备型hplc纯化粗残余物，得到呈
淡黄色粉末状的所需酯(9.9mg，53％产率)。
[0999]
实例55：合成6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-吡唑-4-基]喹啉-3-甲酸(783).
[1000][1001]
3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-(四氢-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉(0.300g，0.668mmol)、乙基草酸钾(0.130g，0.835mmol)、1,3-双(二苯基膦基)丙烷(8.26mg，0.020mmol)和反-二氯双(三苯基膦)钯(ii)(9.37mg，0.013mmol)添加到0.5至2.0mlμw小瓶中并真空放置2分钟。用n2回填小瓶，随后添加n-甲基-2-吡咯烷酮(1.34ml)，并经由真空/n2回填(5
×
)使所得混合物脱气，密封并加热到150℃持续8小时。减压浓缩反应物并将粗物质溶解于tfa(5.0ml)中并加热到50℃持续1小时。浓缩反应物，与phme(3
×
5ml)共沸。将粗残余物溶解于meoh(5.0ml)中，并添加naoh(3.20ml，9.60mmol)。将混合物搅拌3天。完成后，用tfa(1.0ml)酸化反应物，随后减压浓缩。经由制备型hplc纯化残余物，得到呈黄色粉末的产物(0.175g，59％产率)。
[1002]
实例56：合成6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-3-甲酸氮杂环丁烷-3-基甲酯(790).
[1003][1004]
向含有6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-吡唑-4-基)喹啉-3-甲酸(783)、tfa(15.0mg，0.034mmol)的小瓶添加1-boc-氮杂环丁烷-3-基-甲醇(9.5mg，0.051mmol)，之后添加n-(3-二甲氨基丙基)-n'-乙基碳化二亚胺盐酸盐(9.71mg，0.051mmol)和dmap(0.825mg，6.75μmol)于ch2cl2(300μl)中的溶液。密封小瓶并在23℃下运作反应持续3天。添加tfa(200μl，2.60mmol)并将反应物再搅拌1小时，随后减压浓缩。通过制备型hplc纯化粗残余物，得到呈淡黄色粉末状的所需酯(4.6mg，20％产率)。
[1005]
实例57：合成2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-4,5,6,7-四氢噻唑并[4,5-c]吡啶(727).
[1006][1007]
步骤a：制备(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)硼酸和(6-(4-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-5-基)喹啉-3-基)硼酸.将36-4(65mg，0.131mmol)、双(频哪醇合)二硼(43.3mg，0.171mmol)、pd(dppf)cl2(19.20mg，0.026mmol)和乙酸钾(38.6mg，0.394mmol)于1,4-二噁烷(0.625ml)中的小瓶用n2鼓泡5分钟，之后加热到85℃持续16小时。以于二噁烷中的0.21m溶液将粗物质57-1和57-2直接用于下一反应。[m h]
c24h29
bn4o3si的计算值461.21，实测值461.0。
[1008]
步骤b：制备2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-4,5,6,7-四氢噻唑并[4,5-c]吡啶(727).将粗57-1和57-2(71.0mg，0.131mmol，0.21m于二噁烷中)、57-3(50.0mg，0.157mmol)、碳酸钠(42.0mg，0.393mmol)和pd(dppf)cl2(19.0mg，0.026mmol)于1,4-二噁烷(0.524ml)和水(0.131ml)中的混合物的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续1小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。用4n hcl/二噁烷(0.426ml)处理粗物质并添加etoh(0.421ml)。将混合物加热到50℃持续1小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(46.8mg)。[m h]
c24h20
n6s的计算值425.15，实测值425.1。
[1009]
实例58：合成5-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)吡啶甲酸(541).
[1010][1011]
将粗57-1和57-2(350mg，0.645mmol，0.21m于二噁烷中)、5-溴吡啶甲酸叔丁酯(183mg，0.710mmol)、碳酸钠(205mg，1.93mmol)和pd(dppf)cl2(94mg，0.129mmol)于1,4-二噁烷(2.58ml)和水(0.645ml)的混合物中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续1小
时。真空浓缩反应混合物并通过柱(0至15％meoh/dcm)色谱纯化。合并含有所需产物的洗脱份并真空浓缩。将tfa(1.16ml):dcm(1.36ml)的混合物添加到残余物中，并在45℃下平缓地加热2小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(26mg)。[m h]
c24h17
n5o2的计算值408.14，实测值408.1。
[1012]
实例59：合成5-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)吡啶甲酸(r)-1-甲基吡咯烷-3-基酯(273).
[1013][1014]
向溶解于dcm(0.500ml)中的541(50.0mg，0.079mmol)和edci(22.63mg，0.118mmol)的溶液中添加dmap(1.92mg，0.016mmol)和(r)-(-)-1-甲基-3-吡咯烷醇(11.94mg，0.118mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(21.6mg)。[m h]
c29h26
n6o2的计算值491.21，实测值491.1。
[1015]
实例60：合成1-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)哌啶-4-甲酸(213).
[1016][1017]
向装有36-4(100mg，0.202mmol)和异六氢烟酸甲酯(87mg，0.605mmol)的小瓶中添加ruphos(18.8mg，0.040mmol)、ruphos pd g4(34.3mg，0.040mmol)和碳酸铯(263mg，0.807mmol)。向所得混合物中添加二噁烷(1.00ml)，并且之后用n2鼓泡10分钟。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。真空浓缩反应物。将粗物质溶解于dce(0.300ml)中并添加6m hcl水溶液(0.200ml)。将混合物加热到80℃持续3小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(13.3mg)。[m h]
c24h23
n5o2的计算值414.19，实测值414.2。
[1018]
实例61：合成1-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)哌啶-4-甲酸哌啶-4-基酯(701).
[1019][1020]
将213(19.5mg，0.047mmol)、hatu(35.9mg，0.094mmol)和dipea(0.041ml，0.236mmol)于dmf(0.200ml)中的溶液在25℃下搅拌0.5小时，之后添加1-boc-羟基哌啶(18.98mg，0.094mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将tfa(0.200ml)添加到残余物中并在50℃下搅拌1小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(1.6mg)。[m h]
c29h32
n6o2的计算值497.25，实测值497.1。
[1021]
实例62：合成5-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)吡啶甲酸哌啶-4-基酯(110).
[1022][1023]
向溶解于dcm(0.800ml)中的541(35.0mg，0.067mmol)和edci(19.30mg，0.101mmol)的溶液中添加dmap(1.64mg，0.013mmol)和4-羟基哌啶-1-甲酸叔丁酯(20.26mg，0.101mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将tfa(200μl)添加到反应混合物中并在25℃下搅拌30分钟。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(2至50％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(44.7mg)。[m h]
c29h26
n6o2的计算值490.57，实测值491.2。
[1024]
实例63：合成2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑-4-甲酸(s)-吡咯烷-3-基酯(748).
[1025][1026]
步骤a：制备2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑-4-甲酸甲酯(63-1，63-2).将粗57-1和57-2(547mg，
1.01mmol)、2-溴噻唑-4-甲酸甲酯(269mg，1.21mmol)、碳酸钠(321mg，3.03mmol)和pd(dppf)cl2(74mg，0.101mmol)于1,4-二噁烷(4.0ml)和水(1.0ml)中的混合物的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续1小时。真空浓缩反应混合物并通过柱色谱(0至15％meoh/dcm)纯化。合并含有所需产物的洗脱份并真空浓缩，得到63-1和63-2的混合物(313mg)。[m h]
c29h31
n5o3ssi的计算值557.74，实测值558.1。
[1027]
步骤b：制备2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑-4-甲酸(797).向63-1和63-2(313mg，0.561mmol)溶解于thf:meoh:h2o(1.4ml，0.9ml，0.5ml)的3:2:1混合物中的小瓶中添加氢氧化锂(26.9mg，1.122mmol)。将反应混合物在65℃下加热3小时。真空浓缩反应混合物，得到粗残余物。向残余物直接添加dcm(1.6ml)和tfa(1.9ml)并在45℃下加热1小时。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至30％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，得到797的tfa盐(59.8mg)。[m h]
c22h15
n5o2s的计算值413.46，实测值414.1。
[1028]
步骤c：制备2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑-4-甲酸(s)-吡咯烷-3-基酯(748).向溶解于dcm(0.500ml)中的797(20.0mg，0.038mmol)和edci(10.9mg，0.057mmol)的溶液中添加dmap(0.93mg，7.58μmol)和(s)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(10.65mg，0.057mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将tfa(200μl)添加到反应混合物中并在45℃下加热30分钟。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(14.5mg)。[m h]
c26h22
n6o2s的计算值482.56，实测值483.0。
[1029]
实例64：合成4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻吩-2-甲酸氮杂环丁烷-3-基甲酯(753).
[1030][1031]
步骤a：制备4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻吩-2-甲酸甲酯(64-1，64-2).将36-4(350mg，0.706mmol)、(5-(甲氧羰基)噻吩-3-基)硼酸(158mg，0.847mmol)、碳酸钠(224mg，2.118mmol)和pd(dppf)cl2(103mg，0.141mmol)于1,4-二噁烷(2.8ml)和水(0.7ml)的混合物中的小瓶用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续1小时。真空浓缩反应混合物并通过柱色谱(0至15％meoh/dcm)纯化。合并含有所需产物的洗脱份并真空浓缩，得到64-1和64-2的混合物(349mg)。[m h]
c30h32
n4o3ssi的计算值556.76，实测值557.1。
[1032]
步骤b：制备4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻吩-2-甲
酸(798).向64-1和64-2(349mg，0.627mmol)溶解于thf:meoh:h2o(1.4ml，0.9ml，0.5ml)的3:2:1混合物中的小瓶中添加氢氧化锂(26.9mg，1.122mmol)。将反应混合物在65℃下加热3小时。真空浓缩反应混合物，得到粗残余物。向残余物直接添加dcm(1.6ml)和tfa(1.9ml)并在45℃下加热1小时。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至30％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，得到798的tfa盐(49.7mg)。[m h]
c23h16
n4o2s的计算值412.47，实测值413.1。
[1033]
步骤c：制备4-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻吩-2-甲酸氮杂环丁烷-3-基甲酯(753).向798(20.0mg，0.038mmol)和edci(10.9mg，0.057mmol)溶解于dcm(0.500ml)中的溶液中添加dmap(0.93mg，7.58μmol)和3-(羟甲基)氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(10.67mg，0.057mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物。将tfa(200μl)添加到反应混合物中并在45℃下加热30分钟。真空浓缩反应混合物并通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(5至65％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化，产生标题化合物的tfa盐(17.2mg)。[m h]
c27h23
n5o2s的计算值481.57，实测值482.1。
[1034]
实例65：合成2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)噻唑(1051).
[1035][1036]
步骤a：制备4-溴-2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑(65-1和65-2).使化合物57-1和57-2(2.50g，5.43mmol)、2,4-二溴噻唑(923mg，3.80mmol)和na2co3(2.30g，21.7mmol)于二噁烷(15.0ml)和h2o(1.5ml)中的混合物脱气并用n2吹扫。添加pd(dppf)cl2(159mg，217μmol)并使混合物脱气，用n2吹扫，并在110℃下在n2气氛下搅拌16小时。将反应混合物分配于h2o(20.0ml)与dcm(40.0ml)之间。将有机相分离，用盐水(15.0ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(sio2，石油醚:乙酸乙酯＝2:1至0:1，nh3·
h2o 2％)纯化残余物，得到呈棕色油状的呈区位异构体65-1和65-2的混合物的标题化合物(950mg，1.64mmol)。[m h]
c27h28
brn5ossi的计算值578.60，实测值578.2。
[1037]
步骤b：制备4-(2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)噻唑-4-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(65-3和65-4).将65-1和65-2(0.50g，864μmol)、na2co3(366mg，3.46mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,
2-二氧杂硼烷-2-基)-3,6-二氢吡啶-1(2h)-甲酸叔丁酯(401mg，1.30mmol)于二噁烷(4.0ml)和h2o(0.4ml)中的混合物脱气并用n2吹扫。添加pd(dppf)cl2(63.2mg，86.4μmol)并使所得混合物脱气，用n2吹扫并在110℃下在n2气氛下搅拌16小时。将反应混合物分配于h2o(15.0ml)与dcm(25.0ml)之间，分离有机相，用盐水(15.0ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(sio2，石油醚:乙酸乙酯＝30:1至0:1，nh3·
h2o)纯化残余物，得到呈黄色固体状的呈区位异构体65-3和65-4的混合物的标题化合物(370mg，543μmol)。[m h]
c37h44
n6o3ssi的计算值680.94，实测值681.4。
[1038]
步骤c：制备2-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-4-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)噻唑(1051).向65-3和65-4(350mg，514μmol)于meoh(4.0ml)中的溶液中添加hcl水溶液(12.0m，214μl)。将混合物在70℃下搅拌1小时。过滤反应物并减压浓缩滤饼，得到呈黄色固体状的标题化合物1051(57.0mg，109μmol，hcl盐)。[m h]
c26h22
n6s的计算值450.56，实测值451.2。
[1039]
实例66：合成3-(5-(((3s,5r)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉(1045).
[1040][1041]
步骤a：制备5-溴-2-吡啶甲醛(66-2).在-78℃下向66-1(0.5g，2.31mmol)于thf(5.0ml)中的溶液中添加dibal-h(1m，4.63ml)。将混合物在-78℃下搅拌2小时，随后在0至10℃下通过h2o(10.0ml)淬灭，用etoac(20.0ml)稀释并用etoac(10.0ml
×
3)萃取。用盐水(20.0ml)洗涤合并的有机层，经无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体状的标题化合物66-2(0.4g，粗物质)。
[1042]
步骤b：制备(2s,6r)-4-((5-溴吡啶-2-基)甲基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(66-3).向66-2(0.20g，1.08mmol)于dcm(2.0ml)中的溶液中添加(2s,6r)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(215mg，1.00mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。随后在25℃下添加nabh(oac)3(639mg，3.01mmol)。将混合物在25℃下搅拌12小时，随后在0至10℃下通过h2o(10.0ml)淬灭，用dcm(20.0ml)稀释并用dcm(10.0ml)萃取。用盐水(20.0ml)洗涤合并的有机层，经无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状的标题化合物66-3(0.3g，粗物
质)。
[1043]
步骤c：制备(2s,6r)-2,6-二甲基-4-((5-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)吡啶-2-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(66-4).使66-3(0.3g，780.62μmol)、57-1和57-2(359.4mg，781μmol)、na2co3(248mg，2.34mmol)和pd(pph3)4(36.1mg，31.2μmol)于二噁烷(4.00ml)和h2o(2.0ml)中的混合物脱气并用n2吹扫，并将混合物在100℃下在n2气氛下搅拌持续16小时。在0至10℃下通过h2o(10.0ml)淬灭反应混合物，用etoac(20.0ml)稀释并用etoac(10.0ml
×
3)萃取。用盐水(20.0ml)洗涤合并的有机层，经无水na2so4干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状的标题化合物66-4(0.3g，粗物质)。[m h]
c41h53
n7o3si的计算值720.01，实测值720.3。
[1044]
步骤d：制备3-(6-(((3s,5r)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉(1045).向化合物66-4(0.3g，416.67μmol)于meoh(1.0ml)中的溶液中添加12m hcl水溶液(15.2mg，417μmol，14.9μl)。将混合物在70℃下搅拌1小时，随后浓缩并通过制备型hplc(柱：phenomenex luna c18 80*40mm*3μm；移动相：[水(0.04％hcl)-acn]；b％：1％至20％，7分钟)来纯化所得残余物，得到呈黄色固体状的标题化合物1045(80.0mg，163μmol)。[m h]
c30h31
n7的计算值489.63，实测值490.2。
[1045]
实例67：合成9-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一-8-烯(392).
[1046][1047]
步骤a：制备9-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-3-氮杂螺[5.5]十一-8-烯-3-甲酸叔丁酯(67-2).在氮气气氛下，向冷却到-78℃的9-氧代-3-氮-螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯67-1(300mg，1.122mmol)于thf(6234μl)中的溶液中逐滴添加于thf(1290μl，1.290mmol)中的1.0m双(三甲基硅烷基)氨基锂溶液。将混合物在-78℃下搅拌45分钟。添加n-苯基-双(三氟甲烷磺酰亚胺)(633mg，1.773mmol)。使混合物升温到室温并搅拌过夜。用nh4cl饱和水溶液淬灭反应物。用乙酸乙酯(
×
3)萃取所得水相并合并有机萃取物，用饱和水性碳酸氢钠溶液(
×
2)、水(
×
2)、盐水洗涤，干燥，过滤并浓缩。经由正相色谱(0至40％ea/hex)纯化残余物，得到呈无色油状的67-2(552mg)。
[1048]
步骤b：制备9-(6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-基)-3-氮杂螺[5.5]十一-8-烯(392).将14-1和14-2(232mg，0.504mmol，粗物质)、67-2(241mg，0.603mmol)、碳酸钠(214mg，2.016mmol)和pd(dppf)cl2(73.8mg，0.101mmol)于1,4-二噁烷(2016μl):水(504μl)中的混合物用n2鼓泡10分钟，之后加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩，得到粗67-3。将tfa(500μl)添加到67-3中并将所得混合
物加热到60℃持续1.5小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至30％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(155mg)。[m h]
c28h29
n5的计算值436.24，实测值436.2。
[1049]
实例68：合成(2s)-n-[(1r)-4-[6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]-3-喹啉基]环己-3-烯-1-基]吡咯烷-2-甲酰胺(418).
[1050][1051]
步骤a：制备(1r)-4-[6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]-3-喹啉基]环己-3-烯-1-胺(81).将(r)-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)环己-3-烯-1-基)氨基甲酸叔丁酯68-1(22.4mg，0.069mmol)、36-4(30mg，0.061mmol)、碳酸钠(25.7mg，0.242mmol)和pd(dppf)cl2(8.86mg，0.012mmol)于脱气水(60.5μl):二噁烷(242μl)中的混合物加热到95℃持续16小时。经由硅藻土垫过滤反应混合物并真空浓缩。将粗物质溶解于tfa(500μl)中。将混合物加热到60℃持续1.5小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(10至20％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生81的tfa盐(3.9mg)。[m h]
c24h23
n5的计算值382.20，实测值382.1。
[1052]
步骤b：制备(2s)-n-[(1r)-4-[6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]-3-喹啉基]环己-3-烯-1-基]吡咯烷-2-甲酰胺(418).使boc-pro-oh 68-2(33.9mg，0.157mmol)、dipea(68.7μl，0.393mmol)和hatu(71.8mg，0.189mmol)于dmf(393μl)中的混合物搅拌0.5小时，之后添加81(30mg，0.079mmol)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。真空去除溶剂。添加tfa(500μl)并将所得混合物加热到50℃持续1小时。真空浓缩反应混合物。通过制备型hplc色谱，使用一定梯度(13至48％)的乙腈/0.05％三氟乙酸水溶液纯化残余物，产生标题化合物的tfa盐(40mg)。[m h]
c29h30
n6o的计算值479.25，实测值479.2。
[1053]
实例69：合成6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-甲酸2-(哌嗪-1-基)乙酯(756).
[1054][1055]
步骤a：制备6-[5-(6-甲基-2-吡啶基)-1h-咪唑-4-基]喹啉-3-甲酸(796).将3-溴-6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1-((2-(三甲基硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-咪唑-4-基)喹啉36-4(1.00g，2.02mmol)、乙基草酸钾(0.394g，2.52mmol)、1,3双(二苯基膦基)-丙烷(0.025g，0.061mmol)和反-二氯双(三苯基膦)钯(ii)(0.028g，0.040mmol)添加到小瓶中，并真空放置2分钟。用n2回填小瓶，随后添加n-甲基-2-吡咯烷酮(4.04ml)，并经由真空/n2回填(5
×
)使所得混合物脱气，密封并加热到150℃持续8小时。lcms证实36-4完全转化为所需乙酯/sem保护物质、游离酸/sem保护、游离酸/sem脱保护和完全脱保护796的混合物。用水
(25ml)稀释混合物并用etoac(2
×
30ml)萃取。用水、盐水洗涤合并的有机物，经mgso4干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色油状的产物的混合物。经由下文所述的tfa/naoh顺序将这混合物脱保护。用tfa将水性洗液酸化到约ph 3，随后用3:1chcl3/iproh(2
×
15ml)萃取以回收形成于反应物中的796。将其经mgso4干燥，过滤并浓缩。将来自etoac萃取物的残余物溶解于tfa(10ml)中并加热到50℃持续30分钟。浓缩反应物，与甲苯(2
×
5ml)共沸，随后溶解于meoh(20ml)中。添加naoh(5.38ml，16.14mmol)并将混合物在23℃下搅拌2小时。通过lcms将反应视为完成，用tfa(1.0ml)酸化，随后浓缩。将残余物与粗796合并并经由反相色谱纯化，得到呈黄色粉末的796的tfa盐(0.564g)。[m h]
c19h14
n4o2的计算值331.1，实测值331.2。
[1056]
步骤b：制备6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-甲酸2-(哌嗪-1-基)乙酯(756).向含有4-(2-羟乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(34.5mg，0.150mmol)和6-(5-(6-甲基吡啶-2-基)-1h-咪唑-4-基)喹啉-3-甲酸hcl 796(36.7mg，0.100mmol)于ch2cl2(500μl)中的小瓶添加edc(28.8mg，0.150mmol)，之后添加dmap(1.22mg，10.0μmol)和dipea(34.8μl，0.200mmol)。将反应物搅拌3天。用tfa(500μl)稀释反应物，搅拌15分钟，并随后浓缩。经由反相色谱纯化残余物，得到呈黄色粉末的756的双tfa盐(0.0484g)。[m h]
c25h26
n6o2的计算值443.2，实测值443.2。
[1057]
实例70：测量pki的生物化学alk5(tgf-βr1)分析.
[1058]
使用如下文所描述的重组人类alk5(tgf-βr1)蛋白质(产品编号pr9075a或等效物，生命技术公司(life technologies))和市售激酶分析((镧系螯合激发)ultra ulight
tm
激酶分析，产品编号trf0130-m和trf02108-m，珀金埃尔默)测定本公开的化合物的表观pki值。
[1059]
在384孔板(24列
×
16孔/行)中进行分析。550液体处理器(拉伯赛特公司(labcyte))用于在100％dmso中制备不同中间浓度的本公开的化合物。从中间浓度开始，制备一系列浓度(10μm至25pm，对应于高达105nl的体积)，并喷射进用于产生每一目标化合物的个别剂量反应曲线的最终分析板中。向分析板内的单独列中，在每一孔中105nl dmso用于确定最大分析信号。另外，在孔的其它列中使用105nl 100μmsd-208(选择性tgf-βr1抑制剂(目录号s7624，塞勒克化学公司(selleck chemicals)))以确定最小分析信号。
[1060]
利用多头施配器，将8μl酶混合物(1.25
×
最终)添加到每一孔中。酶混合物由在使用之前添加2mm dtt的分析缓冲液(50mm hepes、10mm mgcl2、1mm egta、0.01％tween-20，ph 7.5，在室温下)中制备的250pm alk5酶和62.5nm肽底物((镧系螯合激发)ultra ulight
tm-dna拓朴异构酶2-α(thr1342))组成。培养板随后用粘着性密封件密封并使其在室温下平衡60分钟。
[1061]
随后，将2μl 125μm atp(5
×
最终，具有2mm dtt的分析缓冲液中制备的125μmatp)添加到经培育的混合物中，用环境盖(产品编号lls-0310，拉伯赛特公司)覆盖，并立即转移到37℃。使反应在37℃下进行60分钟，之后在室温下在检测混合物(12mm edta，在检测缓冲液(50mm tris-hcl、150mm nacl、0.5％bsa(洗脱份v)，ph 7.0)中制备的4nm检测抗体)中添加10μl检测抗体((镧系螯合激发)ultra铕-抗磷光dna拓朴异构酶2-α(thr1342))来终止反应。随后在珀金埃尔默envision板读取器上使用具有分别设定为320或340nm和665nm的激发和发射波长的铕特定读取器设置读取培养板。这些数据用
于基于dmso和sd-208背景对照物计算酶抑制百分比值。
[1062]
对于剂量-反应分析，绘制相对于化合物浓度的抑制百分比，并根据4参数稳固拟合模型用graphpad prism v5软件(加利福尼亚州拉荷亚的格拉夫帕德软件公司(graphpad software,inc.,la jolla,ca))测定pic
50
值。这一模型通过将s形剂量-反应(变量斜率)等式与数据拟合来获得pic
50
值。结果表示为pic
50
(ic
50
的负对数)，并随后使用cheng-prusoff等式变换为pki(解离常数ki的负对数)。pki值越高(ki值越低)，alk5活性抑制越大。当在生物化学alk5分析中测试时，本文所公开的某些化合物展现大于8或大于9的pki值。
[1063]
表2展示生物化学alk5分析中的所选化合物的生物活性。化合物编号与表1和实例1-69中所提供的编号和结构相对应。
[1064]
表2
[1065]
[1066][1067]
实例71：测量pic
50
的细胞alk5效力分析，beas-2b细胞中的tgf-β刺激psmad3形成的抑制.
[1068]
在beas-2b细胞(一种人类肺脏上皮细胞系)中测量本公开的化合物抑制tgf-β刺激的smad3磷酸化的效力。tgf-β经由活化素受体样激酶5(alk5)传导信号，随后smad3立即
磷酸化。因为alphalisa surefire ultra试剂盒(珀金埃尔默)定量地测量裂解物中的psmad3含量，分析展现测试化合物的alk5细胞效力。
[1069]
使用补充有10％胎牛血清(atcc)、25mm hepes(生命技术公司)和1
×
pen-strep(生命技术公司)的50％dmem(生命技术公司)和50％f-12(生命技术公司)培养基，使beas-2b细胞生长。在设定为37℃、5％co2的含湿气培育箱中培养细胞，并使用具有0.5％聚乙烯吡咯烷酮(pvp)的0.25％胰蛋白酶进行胰蛋白酶处理。
[1070]
对于所述分析，在384孔板中以7,500个细胞/孔(25μl/孔)接种beas-2b细胞，并培养过夜。在给药之前，抽取生长培养基并用补充有25mm hepes(生命技术公司)和1％牛血清白蛋白(罗氏(roche))的hbss缓冲液(具有钙和镁的hbss，生命技术公司)冲洗孔。在dmso中连续稀释化合物，随后用经补充的hbss缓冲液(50μl/孔)进一步稀释以产生3
×
最终分析浓度的化合物培养板，在0.3％dmso下。随后将经稀释的化合物添加到细胞中(8μl/孔)并在37℃，5％co2下培育1小时。在化合物培育之后，将在经补充的hbss缓冲液中复原的tgf-β(r&d系统)添加到细胞中(12μl/孔，最终浓度10ng/ml)，并另外培育30分钟，其后细胞立即用alphalisa裂解缓冲液(珀金埃尔默)裂解。相隔2小时添加alphalisa受体和检测器珠粒(珀金埃尔默)，随后培育过夜以便次日读取。经由psmad3信号相对于基线(非化合物处理的tgf-β刺激细胞)的剂量依赖性定量变化的分析，测定化合物的效力。数据表示为pic
50
(负十进位对数ic
50
)值。当在beas-2b细胞中测试时，本文所公开的某些化合物展现大于6或大于7的pic
50
值。
[1071]
表3展示细胞alk5效力分析中的所选化合物的生物活性。化合物编号与表1和实例1-69中所提供的编号和结构相对应。
[1072]
表3
[1073]
[1074]
[1075][1076]
实例72：通过过早染色体缩合测量的细胞毒性[15](pcc
15
).
[1077]
在beas2b细胞(一种人类肺脏上皮细胞系)中测量本公开的化合物对细胞三磷酸腺苷(atp)含量的影响。atp的含量与细胞的生存力相关并且经常测量以测定化合物的可能的细胞毒性。celltiter-glo使细胞溶解并产生与所存在的atp的量成正比的发光信号，其用于测定测试化合物对细胞生存力的作用。
[1078]
在补充有10％胎牛血清(atcc)、25mm hepes(生命技术公司)和1
×
pen-strep(生命技术公司)的50％dmem(生命技术公司)和50％f-12(生命技术公司)培养基中，使beas2b细胞生长。在设定为37℃、5％co2的含湿气培育箱中培养细胞，并使用具有0.5％聚乙烯吡咯烷酮(pvp)的0.25％胰蛋白酶进行胰蛋白酶处理。
[1079]
对于所述分析，在384孔板中以500个细胞/孔(25μl/孔)接种beas2b细胞，并培养过夜。在dmso中连续稀释化合物，随后用生长培养基(40μl/孔)进一步稀释以产生6
×
最终分析浓度的化合物培养板，在0.6％dmso下。将经稀释的化合物随后添加到细胞(5μl/孔)中并在37℃，5％co2下培育48小时。在化合物培育之后，将celltiter-glo(普洛麦格(promega))直接添加到细胞中(30μl/ml)。密封分析培养板并在变暗环境中以700rpm震荡15分钟，随后以1500rpm离心2分钟以使裂解物在孔底部沉降。经由atp相对于基线(非化合物处理的细胞)的剂量依赖性定量变化的分析和用60μm at9283(充分表征的细胞毒性化合物)处理的孔，测定化合物对细胞生存力的作用。数据表示为pcc
15
(负十进位对数cc
15
)值。当在beas2b细胞中测试时，本文所公开的某些化合物展现小于6或小于5.5的pcc
15
值。
[1080]
表4展示过早染色体缩合分析中的所选化合物的细胞毒性。化合物编号与表1和实
例1-69中所提供的编号和结构相对应。
[1081]
表4
[1082]
ivt,baltimore md))的等分试样解冻并稀释于100mm磷酸钾缓冲液中，得到0.2mg/ml的微粒体蛋白质浓度。在保持在37℃下的水浴中单独地预温热辅因子/药物和微粒体溶液4分钟。通过相等体积的辅因子/药物溶液与微粒体溶液的组合开始培育(n＝1)。测试化合物的最终浓度为0.1μm，其中最终蛋白质浓度为0.1mg/ml并且最终nadph浓度为1mm。在0、3、8、15、30和45分钟时采集样品以监测测试化合物消失。在每一时间点，去除50μl培育样品并掺入到25μl水加3％甲酸加内标物中以便反应终止。随后将样品注射于ab sciex api 4000三重四极质谱仪上以便通过lc-ms/ms定量。流动相a由hplc级水/0.2％甲酸组成并且流动相b由hplc级乙腈/0.2％甲酸组成，其中所有样品穿过thermo hypurity c18 50
×
2.1mm柱(马萨诸塞州沃尔瑟姆(waltham,ma))。hlm cl
int
数据以μl/min/mg的单位报告。参见瑞利(riley),r.j.等人,药物代谢与处置(drug metab.dispos.),2005,9月,33(9),第1304页至第1311页。本文所公开的某些化合物展现大于50μl/min/mg或大于100μl/min/mg的hlm cl
int
。
[1086]
实例74：肺脏pk/pd.
[1087]
生活中部分
[1088]
在使用之前使c57bl/6n小鼠适应至少3天。在实验当天，将动物分组成5的样品尺寸(对于tgf-β刺激组，n＝10)。经由经口吸气(oa；通过覆盖其鼻子强迫动物将溶液抽吸到肺脏中)预处理本公开的化合物(在含3％甘油的pbs中调配；ph＝4)。所有经口抽吸使用50μl给药体积进行并附有适当的媒剂对照组。在化合物oa处理之后，动物返回到其饲养笼并进行监测。化合物预处理在采集用于筛选和剂量-反应研究之前4小时进行；持续时间研究具有不同化合物预处理时间。在采集之前一小时，经由经口吸气用pbs媒剂或重组人类tgf-β1蛋白质(0.01μg每动物溶解于1份4mm hcl和2份含3％甘油的pbs中)刺激动物第二次。在采集之前五分钟，动物在异氟醚下深度麻醉并经由颈椎脱位术安乐死。在采集期间收集支气管肺泡灌洗液(balf)、血浆和左肺叶。
[1089]
样品收集和处理
[1090]
经由开胸心脏穿刺收集血浆。在全血收集之后，将样品放置于经edta涂布的导管中以预防凝血。血液样品在4℃下以15300xg's旋转4分钟以分离血浆。血浆立即经分离、冷冻并提交用于生物分析(ba)。
[1091]
为了收集balf，经由气管用0.7ml pbs冲洗肺脏3次。由几乎全部组织衍生的巨噬细胞构成的balf以700xg's立即离心15分钟。在离心之后，去除上清液，使balf再悬浮于1
×
细胞溶解缓冲液中并立即冷冻。在ba提交之前，使balf解冻并在冷水上声波处理30分钟以使细胞溶解开。
[1092]
在balf收集之后立即采集左肺叶。在500μl 1
×
细胞溶解缓冲液中使肺脏样品均质化。在均匀化之后，分离样品：一半样品立即放置于烤器上10分钟，同时另一半立即冷冻以用于ba分析。放置于烤器上的样品随后以10,000xg's离心10分钟以便分离来自粒化残渣的上清液中的蛋白质。在收集上清液之后，进行总蛋白质定量分析(布莱德福(bradford))以使所有样品的浓度归一化。使用汉弥尔顿(hamilton)星形液体处置系统，在1
×
细胞溶解缓冲液中每一样品稀释成2mg/ml蛋白质。样品储存于-80℃下或使用中标度discovery系统立即处理。
[1093]
使用中标度discovery的磷酸基-smad3(psmad3)和总smad3(tsmad3)定量
[1094]
中标度discovery(msd)为需要具有连接于底部的碳电极的特殊化微量培养板的电化学蛋白质定量分析。这些碳电极允许生物试剂更多连接于微量培养板，因此允许当相比于传统elisa时更灵敏的读出。与标准夹心elisa类似，msd需要使用结合样品内的目标蛋白的包被抗体。在样品培育之后，一级抗体用于结合相关表位。在添加一级抗体之后，具有sulfo-tag检测的二级抗体用于允许定量相关表位。最后，经由使得sulfo-tag发射光的电脉冲读取微量培养板，其充当分析的最终读出结果。
[1095]
在4℃下在特殊化msd微量培养板中培育包被抗体(smad3，克隆＝5g-11)过夜。次日，在3％bsa(牛血清白蛋白)中阻断微量培养板70分钟以防止非特异性蛋白质结合于微量培养板底部。在洗涤步骤之后，将50μg肺脏样品装载到msd培养板中并在室温下培育2小时。再次洗涤培养板以去除未结合样品；培育磷光-smad3(psmad3；克隆＝ep568y)或总smad3(tsmad3)一级抗体1小时。在洗涤步骤之后，培育抗兔sulfo标记物检测抗体50分钟。在最终洗涤步骤之后，将msd读取缓冲液添加到每一样品中。使用msd特定板读取器(sector s 600)进行psmad3和tsmad3定量。
[1096]
数据分析
[1097]
使用离群值分析(格拉布氏测试(grubbs test)，α＝0.05)立即分析样品。在离群值去除之后，原始psmad3除以tsmad3发光读数。在筛选和剂量-反应研究中，使psmad3/tsmad3比率归一化到tgf-β诱导组(设定为100％)以便使刺激之间的变化降到最低。首先，用斯图登氏t检验(student's t-test)(截止值：p＝0.05)将3％甘油/pbs组与3％甘油/tgf-β进行相比于以确保存在psmad3窗口。单向anova(费雪未校正的lsd)用于比较所有药物处理组与3％甘油/tgf-β组以确定是否观察到统计显著差异。使用媒剂psmad3作为基线值计算psmad3抑制百分比并呈现为最终读数。剂量反应曲线与4个参数非线性回归算法拟合；最小反应设定为0％psmad3抑制并且最大反应设定为100％psmad3抑制。化合物效力由回归获得并报告为id50。
[1098]
pk研究
[1099]
对血浆、肺脏和巨噬细胞药物浓度进行定量。相对于balf中回收的全部药物，总巨噬细胞浓度归一化为总巨噬细胞体积。计算中使用的肺泡巨噬细胞体积基于科隆巴赫(krombach)等人(环境健康视角(environmental health perspectives),1997年9月,第105卷,增刊5,第1261页至第1263页)的出版物，其估算大鼠肺泡巨噬细胞体积为大致1200μm3或1.2e-9
ml。假设小鼠肺泡巨噬细胞体积与大鼠类似。归一化总回收巨噬细胞浓度＝(从balf回收的全部药物)/(全部细胞计数
×
1.2e-9
ml)。
[1100]
本文所公开的某些化合物展现大于10，如大于50，大于75或大于100的(肺脏auc
0-t
):(血浆auc
0-t
)比率。具有最小全身性暴露量的意图用于局部递送到肺脏的化合物优选展现大于50的(肺脏auc
0-t
):(血浆auc
0-t
)比率。具有大于9.5的pki值的表2中所提供的某些化合物展现大于75的(肺脏auc
0-t
):(血浆auc
0-t
)比率。
[1101]
实例75：心脏pk/pd.
[1102]
生活中部分
[1103]
在使用之前使c57bl/6n小鼠适应至少3天。在实验当天，将动物分组成5-10的样品尺寸。经由经口吸气(oa；通过覆盖其鼻子强迫动物将溶液抽吸到肺脏中)预处理测试化合物。所有经口抽吸使用50μl给药体积进行并附有媒剂对照组(含3％甘油的pbs，ph＝4)。在
化合物oa处理之后，动物返回到其饲养笼并进行监测。在采集之前2或4小时进行化合物预处理。在采集之前一小时，经由尾静脉静脉内注射pbs媒剂或重组人类tgf-β1蛋白质(1μg每动物溶解于1份4mm hcl和2份含3％甘油的pbs中)刺激动物。在采集之前五分钟，动物在异氟醚下深度麻醉并经由颈椎脱位术安乐死。在采集期间收集血浆、左肺叶和整个心脏。
[1104]
样品收集和处理
[1105]
如上文所描述在肺脏pk/pd实验中采集血浆。在与肺脏pk/pd实验中的左肺叶相同的方式中处理整个心脏。在500μl水中使左肺叶均质化并提交用于ba分析。
[1106]
使用中标度discovery的磷酸基-smad3(psmad3)和总smad3(tsmad3)定量
[1107]
使用msd以与上述左肺叶相同的方式处理心脏样品。以与肺脏pk/pd实验相同的方式进行数据分析。对血浆、肺脏和心脏药物浓度进行定量。
[1108]
在用本文所公开的一种或多种化合物全身性处理后存在最小靶接合，如通过smad3磷酸化抑制所测量。在一些实例中，本文所公开的化合物展现小于10％全身性靶接合，如通过smad3磷酸化抑制所测量。
[1109]
实例76：同基因型癌症模型中的疗效研究.
[1110]
当单独或与免疫治疗剂组合投与时，本文所公开的一种或多种化合物，例如具有大于9.5，优选大于10.5的alk5 pki值(反映化合物抑制alk5活性的能力的量度，根据实例70测量)的表1中所提供的化合物预期抑制同基因型癌症模型中的肿瘤生长。根据iacuc指南，6至8周龄balb/c小鼠用于体内疗效研究。可商购的4t1细胞(0.5-2.0
×
104个细胞/小鼠)皮下植入到balb/c小鼠的右侧腹中。当肿瘤直径达到大致8-10mm的可触尺寸时，以手术方式去除原发性肿瘤，并将小鼠随机地分到媒剂对照或化合物处理组。替代地，将ct26细胞(0.5-2.0
×
104个细胞/小鼠)静脉内注射于balb/c小鼠中以产生癌症模型。在手术之后两天，或在注射ct26细胞之后7天，小鼠用以下处理：(1)媒剂对照，(2)经由经口吸气或鼻内适当量和频率(在含3％甘油的pbs中调配；ph＝4)的本公开的化合物，(3)适当量和频率的免疫治疗剂(例如帕博利珠单抗或德瓦鲁单抗)，或(4)本公开的化合物和免疫治疗剂，各自在适当量和频率下。
[1111]
每周两次测量体重。在处理2至4周之后，采集每一动物的肺脏和肝脏以及使用克隆源性癌转移分析测定的每一组织样品中的转移性细胞的数目。细胞可进一步经受facs分析、t细胞功能分析和rna萃取中的一种或多种。预期用本文所公开的alk5抑制剂中的一种或多种处理的动物组展现肺肿瘤负荷降低。通过alk5抑制剂活化免疫反应可刺激局部和全身性抗肿瘤t细胞活化，因此还可观察到肝脏肿瘤负荷降低。当与免疫治疗剂组合投与时，本公开的化合物，如表1中所提供的化合物预期使得肺肿瘤负荷降低相对于在用单独单一药剂处理的动物中观察到的肿瘤负荷降低提高。本文所描述的化合物预期与免疫治疗剂协同相互作用以抑制肿瘤生长和提高存活率。
[1112]
实例77：dss诱发的鼠肠道纤维化模型中的预防性研究.
[1113]
本文所公开的一种或多种化合物，例如具有大于9.5，优选大于10.5的alk5 pki值(反映化合物抑制alk5活性的能力的量度，根据实例70测量)的表1中所提供的化合物预期减缓、阻止或逆转鼠结肠炎模型中的肠道纤维化的进展。对6至8周龄雄性c57bl/6j小鼠加标签并称重。用2.5％葡聚糖硫酸钠(dss)处理动物的饮用水7天以诱发急性结肠炎，之后2天使用正常饮用水。接着完成三个3周2.5％dss处理周期(1周2.5％dss水溶液；2周正常水)
以诱发肠道纤维化。
[1114]
从dss投与的第一天开始，以适当量和频率经由经口管饲(例如每日一次)用媒剂对照或本公开化合物处理小鼠。首次dss投与之后9周处死动物，随后收集结肠的远端、中部和近端区段用于组织学分析、rna提取和细胞因子测量。本公开化合物，如表1中所提供的化合物预期降低结肠中的alk5活性并减缓或预防肠道纤维化，如相对于经媒剂处理的对照组，通过以下中的一种或多种证明：(1)结肠重量与结肠长度的比率降低；(2)如通过组织学所观察，胞外基质的沉积减少；(3)结肠组织中胶原蛋白1(col1a1)和结缔组织生长因子(ctgf)的表达减少；和(4)结肠中的tgf-β1和il6产生减少。
[1115]
实例78：dss诱发的鼠肠道纤维化模型中的功效研究.
[1116]
本文所公开的一种或多种化合物，例如具有大于9.5，优选大于10.5的alk5 pki值(反映化合物抑制alk5活性的能力的量度，根据实例70测量)的表1中所提供的化合物预期减缓、阻止或逆转鼠结肠炎模型中的肠道纤维化的进展。对6至8周龄雄性c57bl/6j小鼠加标签并称重。用2.5％葡聚糖硫酸钠(dss)处理动物的饮用水7天以诱发急性结肠炎，之后2天使用正常饮用水。接着完成三个3周2.5％dss处理周期(1周2.5％dss水溶液；2周正常水)以诱发肠道纤维化。
[1117]
3个dss投与周期的第二周期之后，以适当量和频率经由经口管饲(例如每日一次)用媒剂对照或本公开化合物处理小鼠。第一dss周期之后6、9或12周处死动物，随后收集结肠的远端、中部和近端区段用于组织学分析、rna提取和细胞因子测量。本公开化合物，如表1中所提供的化合物预期降低结肠中的alk5活性并减缓、阻止或逆转肠道纤维化，如相对于经媒剂处理的对照组，通过以下中的一种或多种证明：(1)结肠重量与结肠长度的比率降低；(2)如通过组织学所观察，胞外基质的沉积减少；(3)结肠组织中胶原蛋白1(col1a1)和结缔组织生长因子(ctgf)的表达减少；和(4)结肠中的tgf-β1和il6产生减少。
[1118]
实例79：结肠炎的过继性t细胞转移模型的功效研究.
[1119]
本文所公开的一种或多种化合物，例如具有大于9.5，优选大于10.5的alk5 pki值(反映化合物抑制alk5活性的能力的量度，根据实例70测量)的表1中所提供的化合物预期减缓、阻止或逆转结肠炎的过继性t细胞转移模型中的肠道纤维化的进展。对6至8周龄雌性cb17 scid小鼠加标签并称重，随后投与与balb/c小鼠的脾脏分离的cd4
cd25-cd62l
初始t细胞(ip；1
×
106个细胞)以诱发结肠炎。
[1120]
观察到腹泻和体重降低10％或更多(通常约2周)后，以适当量和频率经由经口管饲(例如每日一次)用媒剂对照或本公开化合物处理小鼠。诱发结肠炎之后45天处死动物，随后收集结肠的远端、中部和近端区段用于组织学分析、rna提取和细胞因子测量。本公开化合物，如表1中所提供的化合物预期降低结肠中的alk5活性并减缓、阻止或逆转肠道纤维化，如相对于经媒剂处理的对照组，通过以下中的一种或多种证明：(1)结肠重量与结肠长度的比率降低；(2)如通过组织学所观察，胞外基质的沉积减少；(3)结肠组织中胶原蛋白1(col1a1)和结缔组织生长因子(ctgf)的表达减少；和(4)结肠中的tgf-β1和il6产生减少。
[1121]
实例80：重度肺高血压的野百合碱模型中的功效研究.
[1122]
本文所公开的一种或多种化合物，例如具有大于9.5，优选大于10.5的alk5 pki值(反映化合物抑制alk5活性的能力的量度，根据实例70测量)的表1中所提供的化合物预期减缓、阻止或逆转重度肺高血压的野百合碱(mct)模型中的肺高血压的进展。对雄性史泊
格-多利大鼠加标签，称重并随机划分成对照组与mct处理组。向mct处理组中的大鼠投与单次剂量的mct(60mg/kg，s.c.)，随后以适当量和频率(调配于3％甘油的pbs溶液中，ph＝4中)经由经口吸入用(1)媒剂对照；(2)西地那非(sildenafil)(30mg/kg，p.o.，b.i.d.)；或(3)本公开化合物处理。
[1123]
2周处理之后，用氯胺酮/甲苯噻嗪麻醉动物以用于最终监测肺和全身性动脉压以及心跳速率。随后收集每一动物的肺脏以用于组织学分析。本公开化合物，如表1中所提供的化合物预期降低肺脏中的alk5活性并减缓、阻止或逆转肺高血压的进展，如通过以下中的一种或多种证明：(1)收缩肺动脉压下降；(2)右心室(rv)收缩压下降；(3)rv舒张压下降；(4)心输出量增加；(5)rv肥大减少；(6)血管和/或肺泡细胞中的psmad2或psmad3染色减少；(7)中膜厚度减小；(8)血管平滑肌细胞增殖减少；(9)血管平滑肌肥大减少；和(10)基质金属蛋白酶(mmp)-2和/或mmp-9的表达减少。
再多了解一些
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