一种中药组合物在制备抗SARS病毒药物中的应用的制作方法

一种中药组合物在制备抗sars病毒药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及一种中药组合物在制备抗病毒药物中的应用，特别是用于抗sars病毒的应用，属于中草药领域。


背景技术：

2.sars病毒属于冠状病毒科( coronavirus) ，病毒粒子多呈圆形，有囊膜，外周有冠状排列的纤突,分布于细胞浆中，呈圆形，病毒直径在80~120nm之间。sars病毒是冠状病毒的一个变种，是引起非典型肺炎的病原体。变种冠状病毒与流感病毒具有亲缘关系，但它是非常独特的一种冠状病毒，在2002年冬到2003年春肆虐全球的严重急性呼吸综合征（sars、传染性非典型肺炎）的元凶就是这种冠状病毒。
3.sars病毒在世界各地极为普遍。大约有15种不同冠状病毒株被发现，能够感染多种哺乳动物和鸟类，有些可使人发病。
4.sars病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染（包括严重急性呼吸综合症）。该病毒对温度很敏感，在33℃时生长良好，但35℃就使之受到抑制。由于这个特性，冬季和早春是该病毒疾病的流行季节。sars病毒是成人普通感冒的主要病原之一，儿童感染率较高，主要是上呼吸道感染，一般很少波及下呼吸道。另外，还可引起婴儿和新生儿急性肠胃炎，主要症状是水样大便、发热、呕吐，每天可拉10余次，严重者甚至出现血水样便，极少数情况下也引起神经系统综合征。
5.病毒的生长多位于上皮细胞内，也可以感染肝脏、肾、心脏和眼睛，在另外的一些细胞类型（例如巨噬细胞）中也能生长。如今人类冠状病毒还没有合适的可作研究用的动物模型（人类疾病的动物模型（animal model of human disease）是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究），因此对冠状病毒的分离工作难度很大，需用人肝脏细胞、气管及鼻黏膜细胞，经器官培养才能分离得到。增殖病毒也要用上述材料，亦很困难。
6.sars病毒的血清型和抗原变异性还不明确。sars病毒可以发生重复感染，表明其存在有多种血清型（至少有4种已知）并有抗原的变异，其免疫较困难。
7.冠状病毒科分为α、β、γ、δ属等4个属。α属冠状病毒包括人冠状病毒229e、长翼蝠冠状病毒1、猪流行性腹泻病毒等11种。β属冠状病毒包括鼠肝炎病毒、果蝠冠状病毒hku9、严重急性呼吸综合征（sars）相关病毒等9种。γ属冠状病毒包含禽冠状病毒和白鲸冠状病毒sw1两个种。δ属冠状病毒包含猪δ冠状病毒（pdcov)。
8.一些冠状病毒感染后可造成人畜共患病。已知的人类冠状病毒共有七型，其中三种对我们人类的"杀伤力"巨大。这就是新冠病毒（2019-ncov）、sars（严重急性呼吸系统综合症）病毒、mers（中东呼吸综合征病毒）。作为迄今最神秘的人类冠状病毒，sars病毒还有许多秘密需要破解。
9.病毒性疫病作为一类具有高度传染性的疾病,目前尚缺乏理想的抗病毒药物,目前上市的抗病毒化学药物分为以下几类：
1. 穿入和脱壳抑制剂：金刚烷胺、金刚乙胺、恩夫韦地、马拉韦罗2. dna多聚酶抑制剂：阿昔洛韦、更昔洛韦、伐昔洛韦、泛昔洛韦、膦甲酸钠3. 逆转录酶抑制剂：核苷类：拉米夫定、齐多夫定、恩曲他滨、替诺福韦、阿德福韦酯非核苷类：依法韦仑、奈韦拉平4.蛋白质抑制剂：沙奎那韦5.神经氨酸酶抑制剂：奥司他韦、扎那米韦6.广谱抗病毒药：利巴韦林、干扰素每一种抗病毒的化学药物的副作用也会有所不同，比如临床上比较常用的抗病毒药物利巴韦林在大剂量使用时，会出现心脏的损害，还会引起白细胞的减少导致可逆性的贫血。而中药因其独特的病毒病防治视角,成为近年来我国学者们研究的热点。研究显示,多种中药及其有效成分对病毒有一定的抑制作用。
10.本发明是在申请号为2008100894475的专利基础上进行的改进发明，在此全文引用该专利文件记载的内容。上述专利未公开该中药组合物有抗病毒的作用。申请号为202010153827.1号专利公开了本中药组合物具有抗流感病毒和抗新冠病毒的作用，但是并未公开本中药组合物具有抗sars病毒的作用。


技术实现要素：

11.本发明提供一种中药组合物制备抗sars病毒药物中的应用，特别是抗sars-cov-2病毒的作用。该中药组合物由下列重量份的原料药制成：麻黄52-86；石膏194-324；连翘194-324；黄芩78-130；桑白皮194-324；苦杏仁78-130； 前胡78-130； 半夏78-130； 陈皮78-130； 贝母78-130；牛蒡子78-130； 金银花78-130； 大黄39-65； 桔梗46-76； 甘草39-65。
12.本发明中药组合物的原料药的重量份比优选为：麻黄52；石膏324；连翘194；黄芩78；桑白皮194；苦杏仁130；前胡78；半夏130；陈皮78；贝母78；牛蒡子130；金银花130；大黄39；桔梗76；甘草65。
13.本发明中药组合物的原料药的重量份比还优选为：麻黄86；石膏194；连翘324；黄芩130；桑白皮324；苦杏仁78；前胡130；半夏78；陈皮130；贝母130； 牛蒡子78；金银花78 ；大黄65；桔梗46； 甘草39。
14.本发明中药组合物的原料药的重量份比还优选为：麻黄69；石膏259；连翘259；黄芩104；桑白皮259；苦杏仁104；前胡104；半夏104；陈皮104；贝母104； 牛蒡子104；金银花104；大黄52；桔梗61；甘草52。
15.本发明中药组合物的原料药的重量份比还优选为：麻黄55；石膏254；连翘318；黄芩107；桑白皮203；苦杏仁107；前胡82；半夏105；陈皮84；贝母125； 牛蒡子122；金银花113；大黄42；桔梗60； 甘草50。
16.本发明中药组合物中，所述苦杏仁为炒苦杏仁、贝母为浙贝母、金银花为山银花、半夏为清半夏。
17.本发明中药组合物主要由麻黄、石膏、连翘、黄芩、桑白皮等组成，发挥复方中药的整体调节优势，具有多向性、多层面、多靶点的特点，经实验证实能有效杀灭sars病毒，效果
显著。
18.本发明所述中药可以被有相同或相似功效的中药代替，并且这些药材均可以按照《全国中药炮制规范》或《中药大辞典》炮制。
19.本发明中药组合物的活性成分由以下步骤制成:a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、清半夏、牛蒡子、大黄加40-70%乙醇回流提取2次，每次1-4小时，第一次加8-10倍量，第二次加6-9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.14-1.16的清膏，备用；c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次1-4小时，第一次加9-11倍量，第二次加7-9倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.14-1.16的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；步骤a所得细粉和步骤c所得合并后的清膏共同构成该药物组合物的活性成分。
20.本发明药物的剂型为胶囊剂、片剂、散剂、颗粒剂、口服液、软胶囊、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
21.为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：peg6000，peg4000，虫蜡等。
22.其中片剂由如下步骤制成：a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、清半夏、牛蒡子、大黄加40-70%乙醇回流提取2次，每次1-4小时，第一次加8-10倍量，第二次加6-9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.14-1.16的清膏，备用；c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次1-4小时，第一次加9-11倍量，第二次加7-9倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.14-1.16的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；d、将步骤c所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；e、步骤d所得喷雾粉与步骤a所得细粉，以乙醇为黏合剂制软材，过筛制粒；按药学常规方法压片即得。
23.优选的片剂的制备方法为：a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、清半夏、牛蒡子、大黄加50%乙醇回流提取2次，每次3小时，第一次加10倍量，第二次加6倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，备用；
c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；d、将步骤c所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；e、步骤d所得喷雾粉与步骤a所得细粉，以乙醇为黏合剂制软材，过筛制粒干燥后整粒，加入羧甲淀粉钠、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，压片即得。本发明药物其他剂型的制备方法为：按比例称取原料药，采用常规的制备方法制备，例如，范碧亭《中药药剂学》（上海科学出版社1997年12月第1版）记载的制备工艺，制成药剂学可接受的常规剂型。
24.本发明中药组合物可以抗sars病毒，特别是sars-cov-2型病毒。
25.附图说明：图1：肺组织病理改变，a模型组小鼠5天3号动物中度间质性肺炎h.e.x200 b本发明药物组小鼠5天1号动物轻度间质性肺炎h.e.x200 c本发明药物组小鼠5天2号动物中度间质性肺炎h.e.x200。
具体实施方式
26.下述实施例用于举例说明本发明药物的制备，但其不能对本发明的范围构成任何限制。
27.实施例1处方：麻黄52克；石膏324克；连翘194克；黄芩78克；桑白皮194克；苦杏仁130克；前胡78克；半夏130克；陈皮78克；浙贝母78克；牛蒡子130克；山银花130克；大黄39克；桔梗76克；甘草65克。
28.制备方法：a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加50%乙醇回流提取2次，每次3小时，第一次加10倍量，第二次加6倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，备用；c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；d、将步骤c所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；e、步骤d所得喷雾粉，步骤a所得细粉，以80%乙醇为黏合剂制备软材，过筛制粒，60度干燥后，整粒。加入羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀，按常规制剂方法制成片剂，即得。
29.实施例2处方：麻黄86克；石膏194克；连翘324克；黄芩130克；桑白皮324克；炒苦杏仁78克；前胡130克；半夏78克；陈皮130克；贝母130克； 牛蒡子78克；山银花78克 ；大黄65克；桔梗46克； 甘草39克。
30.制备方法：a、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加40%乙醇回流提取2次，每次4小时，第一次加8倍量，第二次加9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.14的清膏，备用；c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次4小时，第一次加9倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.16的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；d、将步骤c所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；e、步骤d所得喷雾粉，步骤a所得细粉，以80%乙醇为黏合剂制备软材，过筛制粒，60度干燥后，整粒。加入羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀，按常规制剂方法制成片剂，即得。
31.实施例3处方：麻黄69克；石膏259克；连翘259克；黄芩104克；桑白皮259克；炒苦杏仁104克；前胡104克；清半夏104克；陈皮104克；浙贝母104克； 牛蒡子104克；山银花104克；大黄52克；桔梗61克；甘草52克。
32.制备方法：a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、清半夏、牛蒡子、大黄加70%乙醇回流提取2次，每次1小时，第一次加10倍量，第二次加6倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.16的清膏，备用；c、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、山银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次1小时，第一次加11倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.14的清膏，与步骤b所得的清膏合并，备用；d、将步骤c所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；e、步骤d所得喷雾粉，步骤a所得细粉，以80%乙醇为黏合剂制备软材，过筛制粒，60度干燥后，整粒。加入羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、硬脂酸镁混匀，按常规制剂方法制成片剂，即得。
33.实施例4：原料药配方为：麻黄55克；石膏254克；连翘318克；黄芩107克；桑白皮203克；炒苦杏仁107克；前胡82克；半夏105克；陈皮84克；浙贝母125克； 牛蒡子122克；山银花113克；大黄42克；桔梗60克； 甘草50克。
34.制备方法：a、按组方比例称取浙贝母，粉碎成细粉，备用；b、按组方比例称取麻黄、连翘、炒苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加60%乙醇回流提取2次，每次2小时，第一次加9倍量，第二次加7倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，备用；
24g,动物来源：中国医学科学院医学实验动物研究所4、方法与结果动物分组：分为本发明药物组合物组和模型组每组动物数量：6只给药剂量：360mg/ml，按照体积1ml/100g体重给予，最终给药剂量本发明药物组合物14.67生药/kg/d，为临床拟用量的40倍。
41.给药途径：灌胃给药时间：攻毒后1小时给药，每天1次，连续给药5天，模型组按照等体积给予蒸馏水。
42.5、观察指标小鼠攻毒后连续观察5天，记录体重变化。感染后第5天，小鼠全部安乐死，3只检测肺组织病毒载量，3只进行肺组织病理学检查。
43.6数据统计处理方法本实验所产生的定量数据，应用统计处理软件spss（version.17.0）进行方差分析。
44.7、实验结果7.1药物抗病毒效果7.1.1实验结果动物临床表现：模型组小鼠感染后出现体重下降，平均下降百分比最高为5.41%。与模型组比较，本发明药物组合物组感染后第3天体重升高，至第5天平均升高4.55%。其他一般状态良好，显示出给予本发明药物组合物组小鼠症状有一定程度缓解。结果见表2。
45.病毒载量：模型组小鼠感染后5天，肺组织平均病毒载量检测结果为10
5.97
copies/ml。本发明药物组合物组小鼠感染后5天肺组织平均病毒载量为10
5.26
copies/ml，显著低于模型组。给予本发明药物组合物组病毒载量下降0.72 lg值，见表3。
46.各组受试物小鼠体重下降率与模型组比较，
*
p《0.05有显著差异3病理诊断sars-cov-2感染5天的hace2转基因模型组小鼠3例（3/3）肺组织呈中度间质性肺炎改变，可见肺泡隔明显增宽，炎细胞浸润，血管周围少量炎细胞浸润，肺泡腔内少量炎细胞及浆液渗出。
47.本发明药物组合物组小鼠2例（2/3）肺组织呈中度间质性肺炎改变，可见肺泡隔明显增宽，炎细胞浸润，血管周围少量炎细胞浸润；1例（1/3）肺组织呈轻度间质性肺炎改变，
可见肺泡隔轻度增宽，炎细胞浸润，血管周围少量炎细胞浸润，见表４。与模型组相比，本发明药物组合物组肺组织病变有改善。
48.附：病变分级标准：1肺泡隔增宽： ，轻度病变，肺泡隔轻度增宽。
49. ，中度病变，肺泡隔明显增宽，病变范围大于1/2。
50. ，重度病变，肺泡隔明显增宽，并出现肺泡隔增宽、融合、肺泡腔明显缩窄，病变范围大于1/2。
51. ，极重度病变，肺泡隔增宽、融合、肺泡腔明显缩窄以至消失，局部肺组织实变，病变范围大于3/4。
52.2其他病变（肺泡内渗出、血管周围炎细胞浸润等） ，轻度病变，病变范围小于肺组织切面1/4。
53. ，中度病变，病变范围约占肺组织切面1/4-2/4。
54. ，重度病变，病变范围约占肺组织切面2/4-3/4。
55. ，极重度病变，病变范围大于肺组织切面3/4。
56.结论：模型组小鼠体重下降5.41%，肺组织病毒载量为10
5.97
copies/ml，肺组织呈中度间质性肺炎改变。
57.本发明药物组合物组与模型组相比，感染后体重升高4.55%，症状有明显改善，肺组织病毒载量为10
5.26
copies/ml，下降0.72 lg值，肺组织病变有改善。