一种膜融合脂质体及其应用

技术特征：
1.一种膜融合脂质体，其特征在于，所述膜融合脂质体的磷脂双分子层内侧或者外侧修饰有修饰物，或者磷脂双分子层内侧和磷脂双分子层外侧同时修饰有修饰物，所述修饰物为含有疏水端基的修饰物；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna序列、含有疏水结构的蛋白、含有疏水端的催化剂或者其混合物。2.如权利要求1所述的磷脂双分子层外侧修饰有修饰物的膜融合脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将饱和磷脂、不饱和磷脂、正电磷脂、胆固醇混合，形成混合脂质，孵育，挤压得到膜融合脂质体，在形成的脂质体中加入修饰物，二次孵育，得到磷脂双分子层外侧修饰有修饰物的膜融合脂质体；所述修饰物为含有疏水端基的修饰物；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna序列、含有疏水结构的蛋白、含有疏水端的催化剂或者其混合物。3.如权利要求1所述的磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有修饰物的膜融合脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将饱和磷脂、不饱和磷脂、正电磷脂、胆固醇混合，形成混合脂质，孵育，得到脂质，在形成的脂质中加入修饰物，二次孵育，得到磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有修饰物的膜融合脂质体；所述修饰物为含有疏水端基的修饰物；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna序列、含有疏水结构的蛋白、含有疏水端的催化剂或者其混合物。4.如权利要求1所述的磷脂双分子层内侧修饰有修饰物的膜融合脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将饱和磷脂、不饱和磷脂、正电磷脂、胆固醇混合，形成混合脂质，孵育，得到脂质，在形成的脂质中加入修饰物，二次孵育，然后使用试剂去掉磷脂双分子层外侧的修饰物从而得到磷脂双分子层内侧修饰有修饰物的膜融合脂质体;所述修饰物为含有疏水端基的修饰物；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna序列、含有疏水结构的蛋白、含有疏水端的催化剂或者其混合物。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna时，去掉磷脂双分子层外侧的修饰物的方法为使用酶切除脂质体磷脂双分子层外侧的dna或者使得外膜上dna序列失去原有功能的方法；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的蛋白时，去掉磷脂双分子层外侧的修饰物的方法为通过蛋白酶水解，或使用金属离子使得磷脂双分子层外侧的蛋白失去活性；所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的催化剂时，去掉磷脂双分子层外侧的修饰物的方法为使用螯合剂使得磷脂双分子层外侧的催化剂被中和或者钝化。6.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的dna序列。7.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，饱
和磷脂占混合脂质不超过50%。8.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，不饱和磷脂占混合脂质不超过50%。9.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，胆固醇占混合脂质不超过60%。10.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，正电磷脂占混合脂质不超过20%。11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，正电磷脂占混合脂质为5%。12.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述修饰物与脂质的摩尔比为1:100-100000；优选的，所述修饰物与脂质的摩尔比为1:10000。13.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，混合脂质中，按摩尔比计，饱和磷脂、不饱和磷脂、胆固醇、正电脂质为1： 1：1：2：0.25。14.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述饱和磷脂为1,2-双十六酰基-sn-甘油-3-磷酰胆碱、1,2-二棕榈酰基-sn-丙三基-3-磷酸乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺中的一种或者几种。15.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述不饱和磷脂为2-二-(9z-十八烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二-（9z，12z-十八碳二烯酰基）-sn-甘油-3-磷酸胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺。16.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，所述正电磷脂为(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵，氯化三甲基-2, 3-二油烯氧基丙基铵， 3β-[n-（n’，n
’‑
二甲基胺乙基）胺基甲酰基]胆固醇。17.根据权利要求2-5任一项所述的制备方法，其特征在于，含有疏水端基的dna为带胆固醇或dspe端基的dna；优选的，带dspe端基的dna的制备方法包括：将带有叠氮的dspe脂质与带有dbco的dna序列混合，加入溶液，反应过夜，除杂，得到带dspe端基的dna溶液。18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，带有叠氮的dspe脂质与带有dbco的dna序列的质量比为1:3。19.根据权利要求18所述的制备方法，其特征在于，所述含有疏水端基的dna携带atp响应荧光dna序列。20.一种组装细胞的方法，其特征在于，将权利要求1所述的外膜或者内外膜同时修饰有dna序列的膜融合脂质体、需要组装的细胞、互补dna序列共孵育，得到组装好的细胞。21.根据权利要求20所述的组装细胞的方法，其特征在于，所述dna序列如seq id no.1所示。22.根据权利要求20所述的组装细胞的方法，其特征在于，互补dna为2条；优选的，互补dna中其中一条序列如seq id no.2所示；互补dna中另一条如seq id no.3所示。23.如权利要求1所述的磷脂双分子层内侧或者磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有dna序列的膜融合脂质体在制备检测atp的试剂中的应用，其特征在于，所述dna序列为atp响应荧光dna序列。

技术总结
本发明属于医药技术领域，涉及一种磷脂双分子层内侧或磷脂双分子层外侧、或者磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有修饰物的膜融合脂质体及其在细胞膜修饰上的应用，所述含有疏水端基的修饰物为含有疏水端基的DNA序列、含有疏水结构的蛋白、含有疏水端的催化剂或者其混合物。所述的磷脂双分子层内侧或者磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有DNA序列的膜融合脂质体可用于制备检测ATP的试剂，所述的磷脂双分子层外侧或者磷脂双分子层内侧和外侧同时修饰有DNA序列的膜融合脂质体可用于组装细胞，构建人工组织。本发明通过合理设计，实现将修饰物锚定在细胞膜结构特定位置，保证修饰物功能和性质不发生改变，生物相容性合适，膜融合效率可调性。效率可调性。


技术研发人员：邢航 林珉杰 张倩 陈圆圆
受保护的技术使用者：湖南大学
技术研发日：2021.11.02
技术公布日：2022/7/1