N-甲基-N的制作方法

n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及一种n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法。


背景技术：

2.这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。
3.n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺是一种重要的合成原料，该原料为油状物，其中含有大量的有机溶剂，稳定性相对较差，不便于长期储存。一般工业生产时基本上都是现用现制备。所以，发明人将其成盐处理，而该种物质的草酸盐被证明可以工业应用。由于纯度直接影响终产品的质量，所以需要对其有关物质进行检测。
4.n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐(az-md_r-s3)及主要杂质的信息如下：
[0005][0006]
从结构上分析，本品不含共轭双键和芳香环，只含一个五元烷基杂环和一个碳氧双键，因此紫外吸收较弱，仅在200nm左右有紫外吸收。所以首先考虑采用蒸发光检测器检查本品的有关物质，结果表明，蒸发光检测器的响应值太低，检测限太高，无法检测出本品的杂质。考虑采用气相色谱进行检测，检测结果受汽化温度的影响很大，进而难以用气相色谱检测方法进行有效检测。故而选用紫外检测器检查本品的有关物质，由于本品为小分子化合物，仅存在末端吸收现象(200nm左右有最大吸收)，存在较大的溶剂干扰，较大地影响检测的准确性。


技术实现要素：

[0007]
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法。
[0008]
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
[0009]
n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法，采用液相色谱进行检测，其中，色谱柱为waters xselect hss t3150mm*4.6mm,3.5μm或ymc triart c18 150mm*4.6mm,3.0μm，流动相a为三氟乙酸稀溶液；流动相b为含三氟乙酸的乙腈溶液，检测器为紫外检测器。
[0010]
上述本发明的一种或多种实施例取得的有益效果如下：
[0011]
当采用该种色谱柱和流动相测定时，可以将溶剂峰、杂质峰以及产品主峰进行良好分离，当采用紫外检测器进行检测时，可以有效避免溶剂干扰，进而可以对杂质含量进行准确检测。
[0012]
而采用传统的c18柱进行检测时，由于无法将溶剂主峰、杂质峰和产品主峰进行有效分离，进而无法对杂质进行检测。
附图说明
[0013]
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
[0014]
图1是本发明实施例的空白溶液和分离度溶液色谱图；
[0015]
图2是本发明实施例的检测供试品溶液色谱图；
[0016]
图3是本发明实施例的不同色谱柱下分离度溶液色谱图；
[0017]
图4是本发明实施例中梯度筛选对比图；
[0018]
图5是本发明对比例1中有关物质检查供试品溶液色谱图；
[0019]
图6是本发明实施例中本品及有关物质uv图；
[0020]
图7是本发明对比例2的供试品溶液气相色谱图；
[0021]
图8是本发明对比例2中不同进样口温度对应的气相色谱图。
具体实施方式
[0022]
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0023]
n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法，采用液相色谱进行检测，其中，色谱柱为waters xselect hss t3 150mm*4.6mm,3.5μm或ymc triart c18 150mm*4.6mm,3.0μm，流动相a为三氟乙酸稀溶液；流动相b为含三氟乙酸的乙腈溶液。
[0024]
发明人在对n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质进行检测的过程中发现，很多情况下都难以检测出其中的主要杂质az-md_r-s3-im03，经过反复试验发现，一是因为供试品溶液中的待测物质仅存在末端吸收现象，采用传统的色谱柱难以将该杂质峰、产品主峰和溶剂峰进行有效分离，进而难以采用紫外检测器进行检测。
[0025]
其二，发明人经过研究发现，该杂质中的官能团与主产品的官能团基本一致，如呋喃基团、羰基、氨基所在位置，以及碳链长度均基本相同，导致该杂质与主产品的极性非常接近，所以采用传统的色谱柱(如c18柱)进行检测时，即使对流动相和梯度洗脱程序进行反复优化，都难以对主产品和该杂质进行有效分离，所以产品主峰与该杂质峰之间的分离度难以达到检测要求，甚至是产品主峰与该杂质峰重叠，检测不出杂质的存在。
[0026]
当采用该种特殊的色谱柱和流动相进行检测时，可以使得溶剂峰、该杂质峰以及产品主峰进行良好分离，当采用紫外检测器进行检测时，可以有效避免溶剂干扰，进而可以对杂质含量进行准确检测。
[0027]
在一些实施例中，检测器为紫外检测器。
[0028]
在一些实施例中，流动相a为0.1％三氟乙酸溶液。
[0029]
在一些实施例中，流动相b为含0.05％三氟乙酸的乙腈溶液。
[0030]
虽然三氟乙酸稀溶液和含有三氟乙酸的乙腈溶液是液相色谱中常用的流动相，但是由于本发明中的检测对象极性较大，紫外吸收弱(仅存在末端吸收)，这就为流动相体系的选择及优化造成了较大的困难。
[0031]
在一些实施例中，梯度洗脱程序，如表1所示：
[0032]
表1
[0033]
时间(min)流动相a(％)流动相b(％)0100018307020307020.11000301000
[0034]
在一些实施例中，检测波长为210nm。
[0035]
在一些实施例中，流动相流速为1ml/min。
[0036]
在一些实施例中，柱温为40℃。
[0037]
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
[0038]
实施例
[0039]
n-甲基-n
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四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐的合成过程同时伴随一个副反应的发生，生成杂质az-md-r-s3-im03。
[0040]
n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐有关物质的检测方法，步骤如下：
[0041]
步骤1，系统适用性溶液制备：方法如下：取杂质az-md-r-s3-im03对照品约10mg，精密称定，置于20ml容量瓶中，加入稀释剂超声使其溶解，用稀释剂定容作为杂质贮备溶液；取n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐对照品约50mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入稀释剂超声使其溶解，加入杂质贮备溶液1ml，用稀释剂定容，摇匀，作为系统适用性溶液；
[0042]
步骤2，供试品溶液制备：方法如下：取n-甲基-n
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四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐样品约50mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，加入稀释剂超声使其溶解，用稀释剂定容，摇匀，作为供试品溶液；
[0043]
步骤3，有关物质的计算：方法如下：取系统适用性溶液10μl注入液相色谱仪，主峰与相邻峰的分离度应不小于1.5，已知杂质与相邻峰的分离度应不小于1.5；精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
[0044]
按面积归一化法计算，任一未知杂质不得超过0.5％；总杂质不得过1.0％。
[0045]
该液相色谱检测方法的各个试验参数均是经过筛选获得的，筛选过程如下：色谱柱筛选条件列表，见表2。
[0046]
表2
[0047][0048][0049]
结果表明，该物质在色谱柱二上保留较好，采用色谱柱二进行后续方法优化，如图3所示。
[0050]
梯度筛选色谱条件，如表3所示。
[0051]
表3
[0052][0053]
结果表明：梯度程序1的峰型最好，故暂时采用梯度一进行后续方法开发，如图4所示。
[0054]
按照上述确定的方法参数(梯度程序一色谱条件)进行检测，本品和其有关物质的uv响应见图6所示，根据已知杂质和主成分的uv谱图，以及流动相中tfa的截止波长，主峰和各杂质在210nm下，紫外吸收均良好。
[0055]
采用选定色谱柱，在梯度程序一的基础上，对梯度程序进一步优化，并最终确定了有关物质的色谱条件。
[0056]
筛选得到的液相色谱条件如下：
[0057]
色谱柱：waters xselect hss t3 150mm*4.6mm,3.5μm；
[0058]
流动相a：0.1％三氟乙酸溶液；
[0059]
流动相b：乙腈(含0.05％三氟乙酸)；
[0060]
检测波长：210nm；
[0061]
流速：1.0ml/min；
[0062]
柱温：40℃。
[0063]
梯度洗脱程序如下表4所示：
[0064]
表4
[0065]
时间(min)流动相a(％)流动相b(％)0.0100018.0307020.0307020.1100030.01000
[0066]
以含本品的溶液为例，采用既定的色谱条件进行以下方法学验证：
[0067]
1.专属性试验：空白溶液在主峰及已知杂质出峰位置无干扰，如图1所示。分离度溶液中主峰与相邻峰分离度≥1.5，已知杂质与相邻峰分离度≥1.5。峰纯度考察溶液中主峰峰纯度≥990均符合要求。
[0068]
2.检测限、定量限试验：检测限(0.002555mg/ml)：主成分的s/n＝6；定量限(0.005110mg/ml)：主成分的s/n＝22。
[0069]
3.线性：有关物质测定项下，在0.1％(0.005083mg/ml)～120％(6.099mg/ml)浓度区间，本品线性方程y＝19.1716x 0.9047，相关系数r＝0.9992。
[0070]
4.系统精密度：连续6针的精密度溶液色谱图中n-甲基-n
′‑
四氢呋喃甲酰基丙二胺草酸盐峰面积的rsd为0.1％，保留时间的rsd为0.1％。
[0071]
5.重复性：3份重复性考察溶液中杂质的最大绝对差值≤0.03％。
[0072]
6.溶液稳定性：室温条件下，23.5h内，有关物质测定样品溶液各时间点样品溶液中杂质含量与0时相比，均满足绝对差值≤0.05％，未出现新的≥0.10％的杂质。
[0073]
7.检测：取本品，采用既定方法进行检测，如图2所示。检测结果为：最大单杂为0.68％，总杂为0.74％，主峰纯度为99.26％。
[0074]
对比例1
[0075]
采用蒸发光检测器检查本品的有关物质见图5，检测工艺参数如表5所示。
[0076]
表5
[0077][0078]
结果表明，蒸发光检测器不能检出本品中的主要杂质，且灵敏度低。
[0079]
对比例2
[0080]
采用gc法检查本品的有关物质，检测工艺参数如表6所示。
[0081]
表6
[0082]
[0083][0084]
检验过程中发现，供试品中始终存在两个较大的杂质，降低进样口温度至190℃及以下，主峰的峰型变差，杂质随着温度降低出现下降，推测为汽化不完全，见图8。进样口温度320℃时，可能有降解，见图7。所以采用气相色谱难以对该物质的有关物质进行检测。
[0085]
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。