一种放射标记肿瘤显像剂及其制作方法与流程

1.本发明涉及医疗诊断领域，具体涉及一种放射标记肿瘤显像剂及其制作方法。


背景技术：

2.三阴性乳腺癌(tnbc)容易转移，预后较差。对tnbc的早期诊断能有有效改善其预后。在日常医疗实践中，乳腺癌的影像诊断主要包括：乳房x光检查、核磁共振成像(mri)及超声检查等。但是tnbc更容易发生于年轻女性，其乳腺组织相对致密，会干扰常规影像对肿瘤病灶的检测。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于克服上述问题，提供了一种放射标记肿瘤显像剂及其制作方法。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
4.一种放射标记肿瘤显像剂，所述显像剂为[
99m
tc]tc-phlip(var7)，其分子结构为：
[0005][0006]
所述phlip(var7)的序列为：gagg-gaba-aceeqnpwarylewlfptetlllel-nh2。
[0007]
本发明的制作方法，包括如下步骤：
[0008]
s1.合成多肽
[0009]
使用固相多肽合成法合成phlip(var7)；在gly-(d)-ala-gly-gly，形成1个含有n4结构的强螯合基团；在在n4结构与phlip(var7)之间引入1个γ-氨基丁酸(gaba)作为隔离物；修饰后的phlip(var7)序列如下：
[0010]
phlip(var7)：gagg-gaba-aceeqnpwarylewlfptetlllel-nh2；
[0011]
s2.制备[
99m
tc]tc-phlip(var7)
[0012]
取s1所得多肽粉末，溶解于磷酸盐缓冲液(pbs)中，再次使用pbs稀释后，依次加入二氯化锡溶液、磷酸钠溶液和新鲜的99mtc-pertechnetate；混合后90℃水浴15分钟；产物通过葡聚糖凝胶g-25纯化，然后使用磷酸盐缓冲液洗脱。
[0013]
作为改进，步骤s2中所述二氯化锡溶液的浓度为1mg/ml，所述磷酸钠溶液的浓度为8.2mg/ml，99mtc-pertechnetate的剂量为74mbq。
[0014]
作为改进，步骤s2中所述磷酸盐缓冲液的ph为7.4。
[0015]
本发明的优点在于：
[0016]
本发明通过低成本、半衰期及射线能量适合显像的锝-99m首次标记能够靶向三阴
性乳腺癌(tnbc)肿瘤微环境的phlip(var7)，已得到能有用于spect显像的分子探针。
[0017]
[
99m
tc]tc-phlip(var7)标记率高，稳定性好，在tnbc组织中有较高的浓聚；尽管[
99m
tc]tc-phlip(var7)在腹部有非常强的放射性浓聚，但并不妨碍对tnbc原发灶的显像。
[0018]
本发明spect显像灵敏度高、价格低易推广，联合该分子探针可进行tnbc的功能显像，有望用于tnbc的早期诊断及筛查。
附图说明
[0019]
图1为实施例1中一种放射标记肿瘤显像剂的分子结构；
[0020]
图2为本发明中一种放射标记肿瘤显像剂在室温pbs及37℃新鲜人血清中其放化纯度与时间的关系图；
[0021]
图3为本发明中一种放射标记肿瘤显像剂在大鼠体内的分布图。
具体实施方式
[0022]
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限定本发明的保护范围。
[0023]
实施例1
[0024]
本实施例公开了一种放射标记肿瘤显像剂。
[0025]
显像剂为[
99m
tc]tc-phlip(var7)，其分子结构如图1所示。
[0026]
本实施例的制作方法包括如下步骤：
[0027]
s1.合成多肽
[0028]
使用固相多肽合成法合成phlip(var7)；在gly-(d)-ala-gly-gly，形成1个含有n4结构的强螯合基团；在在n4结构与phlip(var7)之间引入1个γ-氨基丁酸(gaba)作为隔离物；修饰后的phlip(var7)的序列如下：
[0029]
phlip(var7)：gagg-gaba-aceeqnpwarylewlfptetlllel-nh2；
[0030]
s2.制备[
99m
tc]tc-phlip(var7)
[0031]
取1mgs1所得多肽粉末，溶解于1ml0.02m磷酸盐缓冲液(pbs)中，取10μl所得溶液加入90μlpbs稀释，依次加入20μl1mg/ml二氯化锡溶液、20μl磷酸钠溶液(8.2mg/ml和74mbq新鲜的99mtc-pertechnetate；混合后90℃水浴15分钟；产物通过葡聚糖凝胶g-25(1.0
×
25cm)纯化，然后使用磷酸盐缓冲液(0.1m，ph7.4)洗脱。
[0032]
对照组：
[0033]
对照组为[
99m
tc]tc-kvar7，其制作方法包括：
[0034]
s1.合成多肽
[0035]
使用固相多肽合成法合成kvar7；在gly-(d)-ala-gly-gly，形成1个含有n4结构的强螯合基团；在在n4结构与kvar7之间引入1个γ-氨基丁酸(gaba)作为隔离物；修饰后的kvar7的序列如下：
[0036]
kvar7：gagg-gaba-aceeqnpwarylkwlfptktlllkl-nh2[0037]
s2.制备[
99m
tc]tc-kvar7
[0038]
取1mgs1所得多肽粉末，溶解于1ml0.02m磷酸盐缓冲液(pbs)中，取10μl所得溶液加入90μlpbs稀释，依次加入20μl1mg/ml二氯化锡溶液、20μl磷酸钠溶液(8.2mg/ml和74mbq
新鲜的99mtc-pertechnetate；混合后90℃水浴15分钟；产物通过葡聚糖凝胶g-25(1.0
×
25cm)纯化，然后使用磷酸盐缓冲液(0.1m，ph7.4)洗脱。
[0039]
s3.使用毛细管吸取s2所得标记产物，点于层析滤纸的原点处，晾干垂直放入加有展开剂的试管内，将展开后的聚酰胺薄膜取出，晾干；放在薄层色谱扫描仪上检测产物的放射化学纯度；本步骤中的固定相为聚酰胺薄膜，展开剂为乙腈。
[0040]
以下对[
99m
tc]tc-phlip(var7)及[
99m
tc]tc-kvar7进行测试实验：
[0041]
1)体外稳定性测试
[0042]
分别将实施例1和对照组所得产物置于室温(25℃)pbs溶液及37℃新鲜人血清中，在标记后1、4、6、24h取样测定放化纯度。
[0043]
结果如图2所示，在1-6小时内，[
99m
tc]tc-phlip(var7)及[
99m
tc]tc-kvar7在室温pbs溶液以及人血清中均保持在99％以上具有良好的稳定性；6-24h后，在人血清中的放化纯度下降，但仍然保持在95％以上。
[0044]
2)小动物spect/ct显像
[0045]
待肿瘤直径长至0.8～1.0cm时，选取6只荷瘤裸鼠用于显像。每只裸鼠通过尾静脉注射约11.1mbq/200μl的[99mtc]tc-phlip(var7)，在注射后1h、2h、4h、6h通过2％的异氟烷麻醉荷瘤鼠，俯卧位固定于小动物spect/ct成像系统显像床上，采用针孔准直器进行显像。主要参数如下：矩阵256
×
256，放大倍数1.45，每个时间点的采集时间是10min。
[0046]
根据图3所示，[
99m
tc]tc-phlip(var7)在tnbc组织中有较高的浓聚；尽管[
99m
tc]tc-phlip(var7)在腹部有非常强的放射性浓聚，但并不妨碍对tnbc原发灶的显像。
[0047]
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不等同于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，不脱离本发明的精神和范围下所做的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。