一种猪胰蛋白酶原突变体及其在毕赤酵母中的表达的制作方法

技术特征：
1.一种猪胰蛋白酶原突变体基因，其核苷酸序列选自（a1）或（a2）：（a1）如seq id no.1所示；（a2）由seq id no.1中所示的核苷酸序列经过取代、缺失或者添加一个或者几个核苷酸且编码猪胰蛋白酶原的由seq id no.1衍生的基因。2.权利要求1所述的猪胰蛋白酶原突变体基因编码的蛋白。3.根据权利要求2所述的蛋白，其氨基酸序列选自（b1）或（b2）：（b1）由seq id no.2所示氨基酸序列组成的蛋白质；（b2）由seq id no.2所示氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或者几个氨基酸且能够生成具有酶活性的猪胰蛋白酶由seq id no.2衍生的蛋白质。4.一种包含权利要求1所述基因的生物材料，所述生物材料为重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或基因工程菌。5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述载体通过将权利要求1所述猪胰蛋白酶原突变体基因插入穿梭载体构建而成。6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述载体为以pgapzα为基础改造的载体。7.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是将含权利要求1所述基因的重组表达载体导入真菌得到的基因工程菌。8.根据权利要求7所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为酵母菌，优选为毕赤酵母，更优选为毕赤酵母x33。9.一种利用权利要求8所述的基因工程菌制备猪胰蛋白酶原突变体的方法，其特征在于，包括构建该基因工程菌，筛选得到该基因工程菌，发酵培养该基因工程菌，以及收集和制备猪胰蛋白酶原突变体；优选的，具体步骤如下：（1）将权利要求1所述猪胰蛋白酶原突变体基因插入质粒构成重组表达载体，并连接到含有对应筛选标记的酵母表达载体中，并将载体转化至对应酵母宿主中；（2）诱导上述酵母宿主表达猪胰蛋白酶原突变体；（3）通过肠激酶处理上述猪胰蛋白酶原，生成猪胰蛋白酶；（4）纯化上述猪胰蛋白酶。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，发酵培养该基因工程菌所用生长碳源为酵母粉或葡萄糖。

技术总结
本发明公开了一种猪胰蛋白酶原突变体及其在毕赤酵母中的表达；经肠激酶切割该猪胰蛋白酶原突变体，获得一种新型猪胰蛋白酶突变体。本发明以P


技术研发人员：文良柱 窦俊 方宏清 徐登圆 辛中帅 赵珊珊 王媛 朱家齐 王玉刚
受保护的技术使用者：江苏万邦生化医药集团有限责任公司
技术研发日：2020.12.24
技术公布日：2022/6/24