新制剂的制作方法

1.本发明涉及特定药物活性成分的碱金属盐，以及此类盐在医药中的用途。特别地，本发明涉及包含研磨的活性成分碱金属盐的口服制剂。


背景技术：

2.amp活化蛋白激酶(ampk)是这样的蛋白激酶，其由三个蛋白质亚基组成，并通过激素、细胞因子、运动和降低细胞能量状态的压力(例如葡萄糖剥夺)激活。ampk的激活增加了产生腺苷5
′‑
三磷酸(atp)的过程(例如脂肪酸氧化)，并抑制了其他过程，例如脂肪酸、甘油脂和蛋白质合成，其消耗atp但绝不是生存所必需的。相反，当细胞呈现持续过量的葡萄糖时，ampk活性会降低，而脂肪酸、甘油脂和蛋白质的合成会增强。因此，ampk是一种蛋白激酶，其在细胞能量稳态中起重要作用。因此，ampk的激活与降低葡萄糖的作用相结合，并引发其他几种生物学作用，包括抑制胆固醇合成、脂肪生成、甘油三酯合成和降低高胰岛素血症。
3.鉴于上述情况，ampk是治疗代谢综合征，尤其是2型糖尿病的优选靶点。ampk还涉及对许多不同疾病很重要的许多途径(例如，ampk还涉及对cns病症、纤维化、骨质疏松症、心力衰竭和性功能障碍很重要的许多途径)。
4.ampk还涉及许多对癌症很重要的途径。几种肿瘤抑制因子是ampk途径的一部分。ampk用作哺乳动物tor(mtor)和ef2途径的负调节剂，它们是细胞生长和增殖的关键调节剂。因此，放松管制可能与癌症(以及糖尿病)等疾病有关。因此，ampk激活剂可用作抗癌药物。
5.4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺(即式i化合物)首次公开于wo 2011/004162中并已被证明是一种ampk激活剂。
[0006][0007]
作为ampk激动剂(即ampk激活剂)，式i化合物可用于治疗通过激活ampk而改善的病症或病况。此类化合物可用于治疗癌症、糖尿病、心血管疾病、高胰岛素血症和相关病况、其中纤维化起作用的病况/病症、性功能障碍、骨质疏松症和神经退行性疾病。
[0008]
仍然需要提高活性成分例如4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺在体内的生物利用度，以提高其在医学上的有效性。本发明人现已发现，式i化合物的特定盐的使用出人意料地提高了所述化合物在体内的生物利用度。
[0009]
本说明书中对显然先前公开的文献的列举或论述不必应视为承认所述文献是目前先进技术的一部分或是公共常识。
[0010]
发明详述
[0011]
根据本发明的第一方面，提供4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二
唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐。
[0012]“碱金属”是与氢一起在元素周期表第i族中发现的金属。碱金属是锂、钠、钾、铷、铯和钫。因此应当理解，“碱金属盐”是由一种或多种碱金属的阳离子和缔合阴离子的集合体组成的化合物。
[0013]
因此，术语“4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐”是指包含碱金属阳离子(例如锂、铷、铯，特别是钠和钾)和4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的阴离子的化合物。例如，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐可称为式ii化合物，
[0014][0015]
其中x

代表碱金属(例如锂、铷、铯或特别是钠或钾)阳离子。
[0016]
本领域技术人员将认识到，当溶解在合适的溶剂(例如水)中时，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐可以解离成阴离子和阳离子组分。
[0017]
使用市售软件包autonom(mdl information systems销售的symyx draw 2.1(tm)办公套件中作为附件提供的命名软件的品牌)，得到化合物名称4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺。
[0018]
在本说明书中，该结构可能会或可能不会以化学名称表示。如果出现关于命名的任何问题，则以结构为准。在化合物可能作为互变异构体存在的情况下(例如以替代的共振形式)，所描绘的结构代表可能的互变异构形式之一，其中观察到的实际互变异构形式可以根据环境因素例如溶剂、温度或ph值而变化。所有互变异构(和共振)形式及其混合物都包含在本发明的范围内。例如，以下互变异构体包括在本发明的范围内：
[0019][0020]
为免生疑问，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐在环境条件下为固体，因此本发明的范围包括其所有无定形、结晶和部分结晶形式。
[0021]
4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐可以根据本领域的技术人员众所周知的技术制备。例如，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺可以与适当的碱金属氢氧化物或替代的碱金属碱化
合物反应。盐转换技术也可用于将一种盐转化为另一种盐。
[0022]
在销售品由4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺制备的情况下，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺可以根据本领域技术人员熟知的技术制备。例如，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺可以根据国际专利申请wo 2011/004162中描述的技术制备，并且其所有内容通过引用并入本文。
[0023]
除非另外指示，否则本文中使用的全部技术与科学术语将具有本发明所属领域的普通技术人员理解的常用含义。
[0024]
在具体实施方案中，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐是4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的钠盐或钾盐。优选地，该盐是4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的钠盐。已发现钠盐在体内表现出特别增强的生物利用度，正如实施例中的数据所证明的，该实施例显示当活性成分以这种形式施用时血浆暴露增加。
[0025]
为避免疑义，技术人员将理解，本文中对本发明特定方面(如本发明的第一方面)的提及将包含对所有实施方案及其特定特征的提及，所述实施方案和特定特征可以组合以形成本发明的另外的实施方案和特征。
[0026]
根据本发明第一方面的盐在本文中称为“本发明的盐”。
[0027]
药物制剂
[0028]
如本文所指出的，本发明的盐可用作治疗剂以治疗多种医学病症或病况。通常，本发明的盐将以药物制剂的形式施用于有需要的受试者。
[0029]
根据本发明的第二方面，提供了包含4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐(例如钠盐)的药物制剂。此类制剂在本文中称为本发明的制剂。关于本发明的第一方面本文描述的所有实施方案及其特定特征在本文关于本发明的第二方面公开。
[0030]
在特定实施方案中，药物制剂包含如本发明第一方面定义的盐，包括所有实施方案及其特定特征，其中所述盐已被研磨。
[0031]
如本文所用，术语“研磨(milled)”(其可与本领域的其他术语例如“减小尺寸(reduced size)”、“粉碎(comminuted)”、“磨碎(ground)”和“碎化(pulverised)”互换使用)是指固体样品(例如颗粒)经受机械能(例如通过研磨(grinding))以减小固体样品粒径。例如，可以将粗颗粒分解成更细的颗粒，从而减小平均粒径。
[0032]
短语“盐已被研磨”将被理解为是指本发明的盐(如本发明的第一方面所定义的)，其已通过涉及研磨所述盐的步骤的任何方法获得，使得固体盐产物的平均粒径小于4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的相应盐的平均粒径，该相应盐已通过本领域已知的方法生产，但尚未进行处理以减小其粒径。
[0033]
研磨被认为是生产细颗粒的
‘
自上而下’的方法。例如，药物固体可以通过锋利的刀片(例如切磨机)切割、用锤子撞击、经受高压均化，或通过施加压力压碎或压缩(例如辊磨机或杵和研钵)。由于通常给予有限量的能量，因此通过这些方法产生的颗粒保持相对粗糙。研磨设备的技术进步使超细药物颗粒的生产达到微米(即μm单位范围)或甚至亚微米(例如nm单位范围)尺寸。
[0034]
某些研磨工艺可以表征为干研磨工艺。此类方法优选用于加工本发明的盐。
[0035]“干研磨”是指药物在其干燥状态下研磨的过程，即在不存在液体介质的情况下(例如在基本不存在水的情况下)。在干燥状态下，药物可以单独研磨，或在一种或多种其他组分如药学上可接受的赋形剂存在下研磨。在研磨过程中可以存在其他研磨材料，例如盐，以帮助减小粒度。干研磨所赋予的机械能通过范德华力或氢键促进药物颗粒(和任选存在的其他物质)之间的相互作用。
[0036]
药品研磨工艺的综述可见于loh等人，asian journal of pharmaceutical sciences，10(2015)，255-274。适合包含在药物颗粒中的赋形剂是本领域已知的，例如在以下文献中描述：peltonen等人，handbook of polymers for pharmaceutical technologies，thakur和thakur编辑，wiley，第4卷，第3章，67-87，和nekkanti等人，drug nanoparticles-an overview，the delivery of nanoparticles，intechopen。这些文件的内容通过引用并入。
[0037]
已经发现，与包含游离碱形式的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的药物制剂比较，本发明的盐和制剂(如本发明的第一和第二方面以及这些方面的所有实施方案所定义)在改善(例如增加)4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的体内生物利用度方面令人惊讶地有效。在将药物制剂施用于动物，通常是哺乳动物之后，可通过测量c
max
或曲线下面积(auc)来证明生物利用度的改善。本发明的盐和制剂可用于本文所述的治疗中，用于需要这种治疗的受试者。优选地，所述受试者是人。
[0038]
在本发明的上下文中，术语“游离碱”是指不是盐的形式的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5的形式-基]苯甲酰胺。例如，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺不是与一种或多种带相反电荷的离子(例如阳离子)结合的离子(例如阴离子)形式。游离碱4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺可描述为式i化合物，
[0039][0040]
本领域技术人员将充分理解术语“c
max”和“auc”在本文中是分别指4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺在施用(例如给人类受试者)后的峰值血浆浓度和在施用本发明的盐或制剂后该物质的浓度/时间曲线的积分。
[0041]
已经发现，与以非盐形式(即所述化合物的游离形式)施用化合物相比，活性成分的盐的施用令人惊讶地导致4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露显著增加。
[0042]
经常在研磨过程中使用稳定剂，例如聚合物和表面活性剂，以增加颗粒之间的排斥力并抑制聚集。在微粉化过程中可能会发生细磨颗粒的聚集，这最终会减慢溶解过程并影响生物利用度。已发现，即使不添加稳定剂，在施用干研磨的活性成分盐之后，发生了4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露增加。因此，在一个实施方案中，药物制剂不包含任何稳定剂。
[0043]
因此，与包含4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的游离碱形式的药物制剂相比，本发明第二方面的制剂能够增加4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的生物利用度。
[0044]
当我们说“与包含4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的游离碱形式的药物制剂相比，能够增加4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的生物利用度”，我们是指与施用包含游离的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的制剂比较，施用包含本发明的盐的制剂导致4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺在体内更大的全身可用部分。与施用包含游离的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的制剂比较，施用包含本发明的盐的制剂后全身可用的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的量的增加可以是至少约10％，(至少)约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％(即2倍)、约150％、约200％(即3倍)、约250％、约300％(即4倍)、约350％或约400％(即5倍)。
[0045]
可以使用本领域已知的合适方法证明本发明的制剂提供的生物利用度的改善。例如，可以通过比较已经施用包含本发明的盐的制剂的受试者的药代动力学数据(例如auc数据)与已经施用包含游离碱形式的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的药物制剂的受试者的相应数据，证明生物利用度的改善。
[0046]
研磨降低了含有4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的碱金属盐的颗粒的平均尺寸。研磨的程度和有效性可以通过在研磨过程之前和之后测量所述颗粒的粒度分布来确定。
[0047]
术语“粒度分布”是指根据尺寸存在于固体样品(例如粉末、颗粒材料)中的颗粒或分散在流体中的颗粒的相对数量。粒度分布以多种方式影响固体样品(例如粉末等)的性质。我们已经发现平均粒度的减小导致所得药物产品的生物利用度的惊人改善。
[0048]
可以使用本领域熟知的技术测量固体样品的粒度分布。例如，固体样品的粒度分布可以通过激光衍射、动态光散射、图像分析(例如动态图像分析)、筛分分析、空气淘析分析、光学计数、电阻计数、沉降、激光遮蔽和声学(例如超声衰减)光谱学来测量。可提及的用于测量本发明的盐的颗粒的粒度分布的具体方法是动态光散射和激光衍射。
[0049]
粒度分布也可以基于筛分分析的结果来确定。筛分分析以每个筛子上保留的累积质量与筛孔尺寸的s曲线形式呈现粒度信息。描述粒度分布时最常用的度量是d值(例如d10、d50和d90，它们分别是累积质量的10％、50％和90％的截距)。本发明的粒度分布优选使用一个或多个这样的值来定义。d值本质上表示球体的直径，当颗粒以质量递增的方式排列时，该直径将样品的质量分成指定的百分比。例如，d10值是样品质量的10％由直径小于该值的颗粒组成的直径。d50值是样品质量的50％小于其和样品质量的50％大于其的颗粒直径。
[0050]
含有本发明的盐的颗粒可具有由d90小于约10μm(例如从大约5μm到大约10μm)限定的粒度分布。由本发明的盐组成的颗粒可具有由d50小于约6μm(例如从大约1μm到大约6μm)限定的粒度分布。由本发明的盐组成的颗粒的粒度分布可以进一步由d10小于约2μm(例如从大约0.5μm到大约2μm)限定。在特定实施方案中，制剂包括含有本发明的盐的颗粒，所述颗粒具有由小于约10μm的d90限定的粒度分布。
[0051]
上述粒度分布参数可单独或组合适用于任何给定的盐、混合物或制剂。例如，在特定实施方案中，制剂包括含有本发明盐的颗粒，所述颗粒具有由小于约10μm的d90和大于约6μm的d50限定的粒度分布。
[0052]
包含本发明的盐的颗粒的粒度分布可以通过激光衍射测量，例如使用粒度分析仪(例如shimadzu sald-2300)。当这种方法涉及将待分析的物质分散在液体介质(例如水)中时，可以使用适量的分散剂，例如吐温20(聚乙二醇脱水山梨糖醇单月桂酸酯)。
[0053]
本发明还包括药物制剂，其包含含有本发明的盐的颗粒，所述盐具有本文限定的任何粒度分布，而与制备颗粒的方法无关。
[0054]
优选地，本发明第二方面的药物制剂包含具有本文所述的任何特定粒度分布的本发明的盐的颗粒，其中颗粒通过涉及研磨所述盐的方法获得。
[0055]
本发明第二方面的药物制剂可以根据标准和/或公认的药物实践来制备。
[0056]
在本发明第二方面的实施方案中，本发明的盐是存在于含有该盐的颗粒中的唯一活性药物成分。在本发明第二方面的另一个实施方案中，本发明的盐与一种或多种其他活性药物成分一起存在于制剂中，或者可以作为与一种或多种其他活性药物成分的联合疗法的一部分施用。
[0057]
如本文所述，例如，本发明第二方面的制剂可以包含含有本发明的盐的颗粒，该盐已经被研磨，使得颗粒具有由小于约10μm的d90限定的粒度分布。
[0058]
因此，根据本发明的第三方面，提供了制备如上文定义的制剂(即根据本发明第二方面及其所有实施方案的制剂)的方法，其中该方法包括研磨本发明的盐，任选地与一种或多种赋形剂一起，以生产具有由小于约10μm的d90限定的粒度分布的颗粒。
[0059]
在本发明第三方面的一个实施方案中，使用干研磨来研磨颗粒。干研磨通常涉及在基本不存在其他组分的情况下(例如在基本不存在药物制剂的任何其他组分的情况下)研磨物质(即药物)。因此，在一个实施方案中，颗粒基本上由本发明的盐组成并且具有如本文限定的粒度分布。在另一个实施方案中，颗粒基本上由本发明的盐组成并且通过干研磨获得。
[0060]
任选地，干研磨包括喷射研磨。喷射研磨是一种研磨工艺，它涉及高速压缩空气流，以减小药物颗粒的尺寸，通常从20到100μm范围内减小到小于10μm。粒径的减小是通过冲击(颗粒之间冲击或颗粒在研磨室的壁上冲击)和磨损(当颗粒相互移动时)的组合来实现的。技术人员将理解粒度的控制可以通过根据本领域已知的方法改变研磨条件来实现。
[0061]
在本发明第三方面的方法的具体实施方案中，在研磨4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的盐后，将4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基的盐]苯甲酰胺的盐与一种或多种赋形剂混合。
[0062]
在本发明第三方面的方法的其他实施方案中，可以在任何时间点将肠溶衣引入制剂中，条件是所得制剂中的本发明的盐被包封在肠溶衣内。例如，当药物制剂以胶囊或片剂的形式提供时，该方法可以进一步包括在研磨的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺盐已掺入所述胶囊或片剂中之前或之后(优选之后)用肠溶衣包衣所述胶囊或片剂的步骤。可选地，该方法可以进一步包括在将所述颗粒掺入胶囊或片剂中之前将肠溶衣施加于研磨的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺盐的步骤。
[0063]
干研磨可用于生产通常比湿研磨获得的颗粒尺寸更大的颗粒。在本文中可提及的特定粒度分布包括具有小于约10μm、小于约9μm、小于约8μm、小于约7μm或小于约6μm的d90的那些。
[0064]
更具体地，本文限定的制剂中存在的含有本发明的盐的颗粒可以具有由约5μm、约5.5μm、约6μm、约6.5μm、约7μm、约7.5μm、约8μm、约8.5μm、约9μm、约9.5μm或约10μm的d90限定的粒度分布。所述粒度分布优选涉及基本上由本发明的盐组成的颗粒。
[0065]
优选地，含有本发明的盐的颗粒具有由小于约6μm、小于约5μm、小于约4μm、小于约3μm或小于约2μm的d50限定的粒度分布。
[0066]
含有本发明的盐的颗粒的粒度分布也可以由约1μm、约1.5μm、约2μm、约2.5μm、约3μm、约3.5μm、约4μm、约4.5μm、约5、约5.5或约6μm的d50限定。
[0067]
更进一步，含有本发明的盐的颗粒可以具有由小于约2μm、小于约1.5μm或小于约1μm的d10限定的粒度分布。
[0068]
含有本发明的盐的颗粒的粒度分布也可以由约0.5μm、约1μm、约1.5μm或约2μm的d10限定。
[0069]
因此，在制剂(即根据本发明第二方面的任何实施方案的制剂)的具体实施方案中，含有本发明盐的颗粒具有由小于9μm的d90；小于6μm的d50；小于5μm的d50；小于2μm的d10；或小于1.5μm的d10限定的粒度分布。
[0070]
本发明第二方面的制剂通常作为混合物提供，该混合物包含本发明的盐和一种或多种药学上可接受的赋形剂。一个或多个药学上可接受的赋形剂可以根据标准药学实践适当考虑预期的给药途径来选择。这种药学上可接受的赋形剂对于活性化合物优选地是化学惰性的，并且在使用条件下优选地不具有有害的副作用或毒性。合适的药物制剂可见于例如remington the science and practice of pharmacy，19th ed.，mack printing company，easton，pennsylvania(1995)。也可以在例如langer，science 249，1527(1990)中找到对药物递送方法的简要综述。
[0071]
已经发现，ph调节赋形剂在本发明的制剂中特别有利。ph调节赋形剂是与不包含所述赋形剂的相同制剂的水溶液的ph相比显著改变制剂水溶液的ph的那些。与不包含所述赋形剂的相同制剂的水溶液相比，ph调节赋形剂可以提高(或降低)制剂水溶液的ph(例如至8或更高的ph)。此类赋形剂可用于增加(即改善)本发明化合物在制剂中的水溶性和/或稳定性。
[0072]
在本发明的制剂中，已发现碱性赋形剂可与本发明的盐组合并导致化合物溶解度的改善。因此，在本发明第二方面的具体实施方案中，至少一种药学上可接受的赋形剂是碱性赋形剂。
[0073]
如本文所用，术语“碱性赋形剂”是指增加制剂微环境ph的药学上可接受的赋形剂。已发现调节制剂的微环境ph值可改善制剂中活性成分的溶解度，这又可能导致活性成分的口服吸收增强。可提及的特定碱性赋形剂包括氧化镁、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸镁和碳酸钙。在特定实施方案中，碱性赋形剂是氧化镁。
[0074]
因此，根据特定实施方案，该制剂还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。特别地，至少一个药学上可接受的赋形剂可以是润滑剂、粘合剂、填充剂、表面活性剂、稀释剂、抗粘附剂、涂料、调味剂、着色剂、助流剂、防腐剂、甜味剂、崩解剂、吸附剂、缓冲剂、抗氧化
剂、螯合剂、溶解促进剂、溶解延迟剂或润湿剂。
[0075]
可提及的特定药学上可接受的赋形剂包括甘露醇、pvp(聚乙烯吡咯烷酮)k30、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、淀粉、支链淀粉、纤维素衍生物、明胶或其他合适的成分，以及崩解剂和润滑剂，例如多库酯钠、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂富马酸钠和聚乙二醇蜡。在制备用于口服给药的本发明的盐的药物制剂中，可以将含有本发明的盐(优选在研磨后)与甘露醇、pvp(聚乙烯吡咯烷酮)k30和多库酯钠一起或单独混合。因此，在特定实施方案中，本发明的制剂包含pvp k30、多库酯钠和甘露醇。
[0076]
然后可将此类混合物加工成丸粒或颗粒或压制成片剂。因此，本发明的药物制剂包括以片剂、小片剂、块、丸粒、颗粒(particles)、颗粒剂(granules)或粉末形式提供的用于口服给药的制剂。
[0077]
技术人员将理解，本文所述的制剂可全身起作用，并且因此可使用所属领域技术人员已知的合适技术相应地施用。本文所述的制剂通常以药学上可接受的剂型口服给药。因此，本发明第二方面的药物制剂优选是口服药物制剂。
[0078]
本发明的制剂可以制备成胶囊形式用于口服给药。例如，可制备胶囊如软明胶胶囊，其单独含有本发明的盐，或与合适的载体如植物油、脂肪等一起。类似地，硬明胶胶囊可单独含有本发明的盐，或与固体粉末成分例如二糖(例如乳糖或蔗糖)、醇糖(例如山梨糖醇或甘露糖醇)、植物淀粉(例如马铃薯淀粉或玉米淀粉)、多糖(例如支链淀粉或纤维素衍生物)或胶凝剂(例如明胶)组合。
[0079]
因此，本发明的药物制剂包括以胶囊或片剂形式提供的制剂，例如用于口服给药。
[0080]
用于口服给药的制剂还可包含肠溶衣以防止或最小化在胃环境中的溶解或崩解。因此，用肠溶衣包衣的口服制剂(例如胶囊或片剂)可以提供本发明的盐在小肠中的靶向释放。例如，肠溶衣可以存在于制剂的表面(例如片剂或胶囊的表面)，或每个含有本发明的盐的颗粒可以用肠溶衣包衣。因此，在特定实施方案中，制剂还包含肠溶衣。
[0081]
可能期望使胶囊或片剂(等)在胃环境中的溶解或崩解最小化和/或提供活性成分在小肠中的靶向释放。因此，在特定实施方案中，肠溶衣存在于所述胶囊或片剂上。例如，所述包衣可以作为所述胶囊或片剂上的外层提供。
[0082]
可选地，含有本发明盐的颗粒可以单独用肠溶衣包衣，并且可以将所述包衣颗粒装入胶囊或压制成片剂。因此，在特定的实施方案中，胶囊或片剂含有包含本发明的盐的颗粒并且每个颗粒都被肠溶衣包衣。
[0083]
术语“肠溶衣”是指掺入口服药物中(例如施加到片剂、胶囊、颗粒或丸剂的表面)并且抑制药物在胃环境中溶解或崩解的物质(例如聚合物)。肠溶衣通常在胃中的高酸性ph值下稳定，但在小肠相对碱性的ph值下迅速分解。因此，肠溶衣可防止药物中的活性成分释放，直到它到达小肠。
[0084]
本领域技术人员已知的任何肠溶衣均可用于本发明。可提及的特定肠溶衣材料包括包含蜂蜡、虫胶、烷基纤维素聚合物树脂(例如乙基纤维素聚合物、羧甲基乙基纤维素或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯)或丙烯酸聚合物树脂(例如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸甲酯、共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸酯共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙
烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸)(酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、甲基丙烯酸甲酯共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物)、乙酸邻苯二甲酸纤维素和聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯)的那些。可提及的特定聚丙烯酸树脂是聚丙烯酸树脂hb-50。
[0085]
优选地，本发明第二方面的药物制剂包含本发明盐的研磨颗粒，所述颗粒具有本文所述的任何特定粒度分布，并且其中所述制剂还包含肠溶衣。因此，在具体实施方案中，在本发明第二方面的药物制剂中，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的盐已被研磨，以使含有盐的颗粒具有由小于10μm的d90限定的粒度分布，并且该制剂还包含肠溶衣。
[0086]
可提到的药物制剂包括其中本发明的盐的存在总量为制剂的至少1重量％(或至少10重量％、至少30重量％或至少50重量％)的那些。也就是说，本发明的盐与药物制剂的全部组分(即本发明的盐和所有药物赋形剂，例如佐剂、稀释剂和载体)的重量比为至少1∶99(或至少10∶90、至少30∶70或至少50∶50)。
[0087]
如本文所用，“治疗有效量”、“有效量”或“剂量”是指足以产生期望效果的本发明的盐的量，所述期望效果可以是治疗和/或有益效果。有效量或剂量将随受试者(例如人)的年龄或一般状况、被治疗状况的严重程度、所施用的特定药剂、治疗持续时间、任何同时治疗的性质、所使用的药学上可接受的载体，以及本领域技术人员的知识和专长范围内的类似因素而变化。视情况而定，在任何个别情况下，“治疗有效量”、“有效量”或“剂量”可以由本领域技术人员通过参考相关文本和文献和/或通过使用常规实验来确定。本领域技术人员将理解，治疗效果不必是完全的或治愈性的，只要为受试者提供一些益处即可。
[0088]
技术人员将理解，本发明的制剂可以不同剂量施用(例如，通过如本文所述的一种或多种制剂)，其中所属领域技术人员容易地确定适当的剂量。向有需要的受试者施用的本发明盐的总剂量范围可以为每天约0.01至约2000mg/kg体重(mg/kg/天)、约0.1至约500mg/kg/天、或约1至约100mg/kg/天。这样的剂量可以是例如本发明第二方面的制剂的口服剂量。
[0089]
当口服给药时，用此类制剂(包括含有此类制剂的胶囊)的治疗可包括施用含有约0.01mg至约3000mg本发明盐，例如约0.1mg至约2000mg或约1mg至约1000mg(例如约10mg至约500mg)的本发明的盐的单位剂量制剂。有利地，治疗可以包括使用单次日剂量施用本发明的盐(包括含有所述制剂的胶囊)。可选地，本发明的盐的总日剂量可以分剂量给药，每天两次、三次或四次(例如，参照本文所述的剂量，每天两次，例如100mg、250mg、500mg或1000mg的剂量，每天两次)。熟练的医师会认识到剂量会因受试者而异。
[0090]
在特定实施方案中，给予受试者的本发明的盐的日剂量在约1至约3000mg、优选约1至约1000mg的范围内。
[0091]
如本文所用，术语“约”指可测量的值，例如化合物的量、剂量、时间、温度等，是指指定数量的20％、10％、5％、1％、0.5％或者甚至0.1％的变化。可预期，在每种情况下，这类术语可用符号
“±
10％”等替换(或通过指示基于相关值计算的特定量的方差)。还考虑，在每种情况下，可删除这类术语。
[0092]
为了避免疑惑，在本发明的上下文中，向受试者，具体地人受试者施用的剂量应足以在合理的时间范围内对受试者产生治疗反应。本领域的技术人员将认识到，确切剂量和组合物以及最适当的递送方案的选择还将受到尤其是调配物的药理学性质、所治疗病状的性质和严重程度、接受者的身体状况和精神敏度，以及特定化合物的效力、待治疗受试者的年龄、状况、体重、性别和反应以及疾病的阶段/严重程度的影响。
[0093]
无论如何，医疗从业者或其它技术人员将能够常规地确定最适合个体受试者的实际剂量。上文所提及的剂量在一般情况下是示例性的；当然，在个别情况下，可能需要更高或更低的剂量范围，并且此类剂量范围都处于本发明的范围内。
[0094]
医学用途
[0095]
本发明的盐及其制剂可用作药物。
[0096]
本发明的盐(即如本发明第一方面所限定的盐，包括其所有实施方案及其特定特征)及其制剂(即如本发明第二方面所限定的制剂，包括其所有实施方案及其特定特征))可能对治疗通过激活amp激活的蛋白激酶(ampk)而改善的病症或病况特别有用。因此，在本发明的第四方面，提供了本发明的盐或如本文限定的包含所述盐的制剂在制备用于治疗通过激活ampk而改善的病症或病况的药物中的用途。
[0097]
类似地，提供了一种治疗通过激活ampk而改善的病症或病况的方法，包括向有需要的受试者(例如人)施用治疗有效量的本发明的盐或包含所述盐的制剂。同样，提供了本发明的盐(或包含所述盐的制剂)，其用于治疗通过激活ampk而改善的病症或病况的方法中。
[0098]
关于
‘
激活ampk'，我们是指与不存在4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺时的稳态磷酸化水平相比，ampk-α亚基的thr-172部分的稳态磷酸化水平得到提高。替代地，或另外地，我们的意思是ampk下游的任何其他蛋白质(例如乙酰coa羧化酶(acc))的磷酸化稳态水平更高。
[0099]
本领域技术人员将理解术语“通过激活ampk而改善的病症或病况”包括癌症、糖尿病、心血管疾病、高胰岛素血症和相关病况、其中纤维化起作用的病况/病症、性功能障碍、骨质疏松症和神经退行性疾病。
[0100]
本领域技术人员将理解术语“癌症”包括属于病症分类中的一种或多种疾病，该分类的特征在于细胞不受控制的分裂和这些细胞通过侵袭、增殖直接生长到邻近组织中或通过转移植入远处部位而侵入其他组织的能力。关于“增殖”，我们包括癌细胞数量和/或大小的增加。关于“转移”，我们是指癌细胞从受试者体内的原发性肿瘤部位移动或迁移(例如侵袭性)到受试者体内的一个或多个其他区域(然后细胞在此可以形成继发性肿瘤)。4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺能够抑制癌细胞的增殖和癌细胞的转移。
[0101]
因此，本发明的制剂可适用于治疗任何癌症类型，包括所有肿瘤(非实体和优选实体肿瘤，例如癌、腺瘤、腺癌、血癌，无论什么器官)。例如，癌细胞可以选自乳腺、胆管、脑、结肠、胃、生殖器官、甲状腺、造血系统、肺和气道、皮肤、胆囊、肝、鼻咽、神经细胞、肾脏、前列腺、淋巴腺和胃肠道的癌细胞。优选地，癌症选自结肠癌(包括结肠直肠腺瘤)、乳腺癌(例如绝经后乳腺癌)、子宫内膜癌、造血系统癌症(例如白血病、淋巴瘤等)、甲状腺癌、肾癌、食管腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胆囊癌、肝癌和宫颈癌。更优选地，癌症选自结肠癌、前列
腺癌，特别是乳腺癌。在癌症是非实体瘤的情况下，它优选是造血肿瘤，例如白血病(例如急性髓性白血病(aml)、慢性髓性白血病(cml)、急性淋巴细胞性白血病(all)、慢性淋巴细胞性白血病(cll))。优选地，癌细胞是乳腺癌细胞。
[0102]
本领域技术人员将理解术语“糖尿病(diabetes)”(即糖尿病(diabetes mellitus))是指1型(胰岛素依赖型)糖尿病和2型(胰岛素非依赖型)糖尿病，两者都涉及葡萄糖内稳态的功能障碍。本发明的盐及其制剂可以特别适用于治疗1型糖尿病和/或2型糖尿病。
[0103]
本领域技术人员将理解术语“高胰岛素血症或相关病症”包括高胰岛素血症、2型糖尿病、葡萄糖耐受不良、胰岛素抗性、代谢综合征、血脂异常、儿童期高胰岛素血症、高胆固醇血症、高血压、肥胖症、脂肪肝病症、糖尿病肾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变、心血管疾病、动脉粥样硬化、脑血管病症如中风、系统性红斑狼疮、神经退行性疾病如阿尔茨海默病、和多囊卵巢综合征。其他疾病状态包括进行性肾病，例如慢性肾功能衰竭。
[0104]
特别地，本发明的盐及其制剂可适用于治疗与高胰岛素血症相关的肥胖症和/或与高胰岛素血症相关的心血管疾病。
[0105]
本发明的盐及其制剂也可适用于治疗心血管疾病，例如心力衰竭，其中所述心血管疾病与高胰岛素血症无关。类似地，本发明的盐及其制剂也可适用于治疗与高胰岛素血症无关的肥胖症。为避免疑义，ampk激活可能有益的肥胖和/或心血管疾病(例如心力衰竭)的治疗包括在本发明的范围内。
[0106]
纤维化起作用的病况/病症包括(但不限于)疤痕愈合、瘢痕疙瘩、硬皮病、肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、肾源性全身性纤维化和心血管纤维化(包括心内膜心肌纤维化)、系统性硬化症、肝硬化、眼黄斑变性、视网膜和玻璃体视网膜病变、克罗恩病/炎症性肠病、术后瘢痕组织形成、放射和化疗药物诱导的纤维化和心血管纤维化。
[0107]
本发明的盐还可用于治疗性功能障碍(例如治疗勃起功能障碍)。本发明的盐还可用于治疗炎症。
[0108]
可能提到的神经退行性疾病包括阿尔茨海默病、帕金森病和亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化症、多谷氨酰胺疾病，例如脊髓和延髓肌萎缩症(sbma)、齿骨和苍白球萎缩症(drpla)，以及多种脊髓小脑共济失调(sca)。
[0109]
技术人员将理解，对特定病况的“治疗”(或类似地，“治疗”所述病况)的提及将在医学领域中具有其正常含义。具体地，所述术语可指实现与病况相关的一种或多种临床症状的发生的严重性和/或发生频率的降低，如由主治患有这类症状或易患这类症状的受试者的医生判定的。
[0110]
如本文所用，提及受试者(或多个受试者)是指正在接受治疗或接受预防性药物的活体受试者，包括哺乳动物(例如人)受试者。特别地，对受试者的提及是指人类受试者。
[0111]
技术人员将理解，这类治疗或预防将在有需要的受试者中执行。本领域技术人员可使用常规技术评估受试者对这类治疗或预防的需要。
[0112]
在本发明的上下文中，本发明的盐的“有需要的受试者”包括正在遭受通过激活ampk而改善的病症或病况的受试者。
[0113]
如本文所用，术语“疾病(disease)”和“病症(disorder)”(以及类似地，术语病况(condition)、病痛(illness)、医学问题(medical problem)等)可互换使用。
[0114]
不希望受理论束缚，认为施用本发明的盐形式的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺提高了4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺在全身循环中的生物利用度。已显示包含本发明的盐的制剂使4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺在某些情况下的生物利用度与包含游离碱形式的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的制剂相比增加约两倍。
[0115]
本发明的盐(及其制剂)可具有以下优点：它们可比现有技术中已知的其他疗法更有效、毒性更小、作用时间更长、效力更大、产生的副作用更少、更容易吸收和/或具有更好的药代动力学特征(例如，更高的口服生物利用度和/或更低的清除率)和/或具有其它有用的药理学、物理或化学性质，无论是否用于或以其它方式用于以上所描述的适应症。具体地说，本发明的制剂可具有以下优点：它们在体内更有效和/或表现出有利的特性。
附图说明
[0116]
提供以下附图以说明本发明构思的各个方面并且不旨在限制本发明的范围，除非本文具体指定。
[0117]
图1显示了使用在悬浮液和未包衣胶囊中的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺(化合物1)以及分别装在未包衣胶囊中的4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钠盐(化合物2)和4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钾盐(化合物3)的口服药代动力学研究的比较结果。
[0118]
图2显示了使用在悬浮液和肠溶包衣胶囊中的化合物1以及分别在肠溶包衣胶囊中的化合物2和化合物3的口服药代动力学研究的比较结果。
[0119]
图3和图4显示了化合物1作为悬浮液和未包衣胶囊的制剂以及化合物2和化合物3分别在未包衣胶囊中的制剂的绝对和相对c
max
结果。
[0120]
图5和图6显示了化合物1作为悬浮液和未包衣胶囊的制剂以及化合物2和化合物3分别在未包衣胶囊中的制剂的绝对和相对auc结果。
[0121]
图7和图8显示了化合物1作为悬浮液和肠溶包衣胶囊的制剂以及化合物2和化合物3分别在肠溶包衣胶囊中的制剂的绝对和相对c
max
结果。
[0122]
图9和图10显示了化合物1作为悬浮液和肠溶包衣胶囊的制剂以及化合物2和化合物3分别在肠溶包衣胶囊中的制剂的绝对和相对auc结果。
实施例
[0123]
缩略语
[0124]
auc
0-t
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
从时间零到最后可量化浓度的浓度-时间曲线下面积
[0125]
auc
0-∞
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
从时间零至无穷大的浓度-时间曲线下面积
[0126]
b.w.：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
体重
[0127]
ce：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碰撞能量
[0128]
cl：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
清除率
[0129]cmax
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
峰值血浆浓度。
[0130]
cxp：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
碰撞室出口电位
[0131]
dls：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
动态光散射
[0132]
dp：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
去簇电位
[0133]
ep：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
进入电位
[0134]
h：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
[0135]
hplc：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱法
[0136]
isd：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
内标
[0137]
k2edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸二钾
[0138]
lc：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱
[0139]
lc-ms/ms：
ꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱-(串联)质谱
[0140]
ls：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
光散射
[0141]
mrt：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
平均停留时间。
[0142]
min：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分钟
[0143]
pvp k30：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
聚乙烯吡咯烷酮k30
[0144]
rpm：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
每分钟转数
[0145]
rt：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[0146]
t
1/2
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
半衰期
[0147]
t
max
：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
达到峰值血浆浓度的时间
[0148]
v/v：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
体积/体积
[0149]
w/v：
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
重量/体积
[0150]
通过参考以下实施例将进一步描述本发明，这些实施例不旨在限制本发明的范围。
[0151]
材料
[0152]
4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺(化合物1)、4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钠盐(化合物2)和4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钾盐(化合物3)由anthem biosciences制备。
[0153]
多库酯钠、pvp k30和甘露醇由sigma-aldrich提供。
[0154]
制备1-4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钠盐(化合物2)
[0155]
方案：
[0156]
[0157]
程序：
[0158]
向4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺(100g，0.2629mol)在异丙醇(1.0l)中的悬浮液，在25
±
5℃下缓慢加入氢氧化钠(11.56g，0.2891mol)在水(100ml)中的溶液。将该物质在25
±
5℃搅拌3小时并冷却至5
±
5℃。将该物质在5
±
5℃搅拌3小时并过滤以收集固体。将固体用异丙醇(300ml)洗涤并在减压下在35
±
5℃干燥8小时。使用具有4.0kg/cm2初级压力、7.0kg/cm2次级压力和8rpm螺杆进料器的空气喷射研磨将干燥的固体微粉化两次，以将所需的钠盐分离为白色固体(50g，48％)。
[0159]
制备2-4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钾盐(化合物3)
[0160]
方案：
[0161][0162]
程序：
[0163]
向4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺(100g，0.2629mol)在异丙醇(1.0l)中的悬浮液，在25
±
5℃下缓慢加入氢氧化钾(16.22g，0.2891mol)在水(100ml)中的溶液。将该物质在25
±
5℃搅拌3小时并冷却至5
±
5℃。将该物质在5
±
5℃搅拌3小时并过滤以收集固体。将固体用异丙醇(300ml)洗涤并在减压下在35
±
5℃干燥8小时。使用具有4.0kg/cm2初级压力、7.0kg/cm2次级压力和8rpm螺杆进料器的空气喷射研磨将干燥的固体微粉化两次，以将所需的钾盐分离为白色固体(55g，50％)。
[0164]
实施例1-研磨的产品
[0165]
使用具有以下参数的空气喷射磨(设备代码：cp-ajm-01；promas engineers)，对于实施例1a到1c进行研磨：
[0166]
参数值初级压力(氩气/氮气)4.0kg/cm2次级压力(氩气/氮气)7.0kg/cm2螺杆进料器rpm8
[0167]
在所有实施例中通过使用相同参数第二次进行空气喷射研磨来重复微粉化。这使得粒径d90减小到小于10μm。
[0168]
粒度分析
[0169]
试剂
[0170]
名称等级水hplc
吐温20实验室试剂
[0171]
仪器
[0172]
天平分析天平粒度分析仪岛津sald-2300
[0173]
方法参数
[0174]
分散法带采样器的流通池测量技术折射率3.00-0.20i(几乎等于fraunhofer)分散剂吐温20泵速5.0超声处理时间10空白4滴吐温20在25ml水中
[0175]
制备
[0176]
将四滴吐温20添加到25ml水中，并将混合物超声处理3分钟以形成分散剂溶液。
[0177]
将0.05g研磨材料转移到250ml玻璃烧杯中。将25ml分散剂溶液(吐温20/水混合物)添加到烧杯中，同时连续涡旋2至3分钟。将悬浮液转移到测量单元中，一式三份进行粒度分布测量。
[0178][0179]
表1：干研磨产品的平均粒径结果
[0180]
实施例2至8-兔单剂量口服药代动力学研究
[0181]
使用未包衣和肠溶包衣胶囊在雄性新西兰白兔中进行下文详述的研究(并且称为实施例2至8)以提供化合物1以及该化合物的钠盐和钾盐的比较单剂量口服药代动力学数据。
[0182]
制剂制备
[0183]
1.胶囊
[0184]
使用即用型肠溶包衣和未包衣胶囊。胶囊获自capsulcn international co.，
ltd.。
[0185]
化合物1是使用wo 2011/004162中描述的过程制成的并如实施例1c所述研磨。未包衣的或肠溶包衣的明胶胶囊分别填充有180mg干研磨的化合物1以及所示的伴随赋形剂。两种胶囊类型均填充有化合物1以及1.8mg多库酯钠、0.18mg pvp k30和9mg甘露醇。
[0186]
相似地，化合物2，未包衣或肠溶包衣的明胶胶囊分别填充有180mg干研磨的化合物2(如在实施例1f中获得的)以及1.8mg多库酯钠、0.18mg pvp k30和9mg甘露醇。
[0187]
对于化合物3，未包衣或肠溶包衣的明胶胶囊分别填充有90mg干研磨的化合物3(如在实施例1i中获得的)以及0.90mg多库酯钠、0.09mg pvp k30和4.50mg甘露醇。
[0188]
制备后，在对动物给药之前，将胶囊储存在19至25℃的干燥器中。
[0189]
制剂的细节总结在表2中。
[0190]
2.悬浮液
[0191]
化合物1是使用描述于wo 2011/004162中的方法制备的。
[0192]
制备在4mm磷酸盐缓冲液ph 7.4中的2％w/v甲基纤维素溶液。
[0193]
将40ml 2％w/v甲基纤维素溶液与10g 2mm玻璃珠一起加入到250ml锥形瓶中，并剧烈搅拌。将化合物1(720mg)缓慢加入溶液中并连续搅拌混合物1h。将匀浆物转移到单独的烧瓶中并记录其ph值。在施用于动物之前制备悬浮液制剂。
[0194]
动物饲养
[0195]
将兔子(新西兰白兔；雄性)饲养在标准实验室条件下，环境监控的空调房间内，有足够的新鲜空气供应(每小时换气10-15次)，室温(22
±
3℃)和相对湿度30-70％，12小时光照和12小时黑暗循环。每天记录一次温度和相对湿度。
[0196]
每只动物都被安置在标准的不锈钢兔笼ss-304(尺寸：l 24”x b 18”x h 18”)中，其带有不锈钢网和用于垃圾处理的可拆卸底部托盘、用于容纳颗粒食物的食物料斗、用于饮用水瓶的支架以及虹吸管和标签架。提供清洁、消毒的玉米芯作为垫料。
[0197]
在整个适应期和实验期，用krishna valley agrotech兔饲料随意喂养动物。
[0198]
在整个适应期和实验期间随意提供水。来自aqua guard滤水器兼净化器的水经过高压灭菌并提供在带有不锈钢吸管的聚丙烯水瓶中。
[0199]
适应环境
[0200]
使动物适应设施室条件至少1周(7天)并每天观察临床体征。在接收当天、每天和随机分组当天，对所有动物进行兽医检查。
[0201]
分组
[0202]
通过体重分层和随机化的方法进行动物分组。将为研究选择的动物称重并分组到体重范围内。如果可能，将这些体重分层的兔子以相等的数量分配给所有研究组，以使所用动物的体重变化不超过平均体重的
±
20％。分组在治疗开始前一天进行。
[0203][0204]
剂量施用
[0205]
环境适应7天后，使用约2-3个月大的成年健康雄性新西兰白兔进行实验。
[0206]
1.胶囊
[0207]
为了给予填充的胶囊，使用软塑料给药管。将填充的胶囊插入给药管中，使胶囊的短端从管的尖端略微突出。将胶囊的尖端浸入矿物油中以帮助吞咽。
[0208]
在上颌骨周围用一只手牢牢抓住头部。将包含胶囊的给药管插入门牙后面。将给药管直接滑入口腔后部。通过推动给药管上的柱塞弹出胶囊。移除给药管，并关闭兔子的嘴。轻轻抚摸颈部以促进吞咽。
[0209]
2.悬浮液
[0210]
为了给予悬浮液，使用婴儿喂食管。将喂食管通过兔子的嘴插入食道和胃，并确定在给动物给药之前它没有被放置在气管中。通过喂食管施用化合物1的悬浮液。施用悬浮液后，施用约2.0-2.5ml的饮用水以冲洗喂食管中的内容物。
[0211]
采血
[0212]
将动物限制在兔子限制器中，并在给药后0.16、0.25、0.50、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、24.0、48.0和72小时通过中耳动脉收集血液样品(400-500μl/时间点)。将收集的血液样本在4℃下以4000或6000rpm离心10分钟，分离血浆样品并在-80℃下储存，直至分析。
[0213]
生物分析
[0214]
使用api 3200q-trap lc-ms/ms系统测定新西兰白兔中化合物1的分析物的浓度。
[0215]
方法概述
[0216]
在zorbax c18、50x4.6mm、5μm色谱柱上实现色谱分离，甲醇-0.1％甲酸作为流动相，梯度洗脱。流速设置为1.0ml min-1
。检测通过三重四极串联质谱仪在多反应监测(mrm)扫描中通过电喷雾电离源进行，以正模式应用。用于定量的优化质量转换离子对为化合物1的m/z 379.999
→
125.000和isd(氟哌啶醇)的m/z 376.165
→
165.00。校准曲线在11.062至20594.820ng/ml范围内呈线性。
[0217]
缓冲液(0.1％甲酸)
[0218]
向999ml 1型超纯水中加入约1.0ml甲酸以制成缓冲液。该溶液在室温下保存，并在制备之日起两天内使用。
[0219]
稀释溶剂(甲醇∶水，80∶20％v/v)
[0220]
将准确的800ml甲醇和200ml 1型超纯水添加到试剂瓶中，充分混合，然后进行超声处理。该溶液在室温下保存，并在制备之日起七天内使用。
[0221]
冲洗溶剂(甲醇∶水，50∶50％v/v)
[0222]
将准确的500ml甲醇和500ml 1型超纯水添加到试剂瓶中，充分混合，然后进行超声处理。该溶液在室温下保存，并在制备之日起三天内使用。
[0223]
化合物1储备液的制备
[0224]
称取化合物1 3.044mg，转移至5.0ml容量瓶中，用5ml甲醇溶解，得到605.756μg/ml储备液。化合物1的最终浓度根据标准品的效力和称重的实际量进行校正。
[0225]
内标储备液
[0226]
称取约2.00mg氟哌啶醇(sigma-aldrich)，转移至5.0ml容量瓶中，用甲醇溶解，得到400μg/ml内标储备液。根据标准品的效力校正氟哌啶醇的最终浓度。
[0227]
内标(氟哌啶醇)工作溶液的制备
[0228]
使用稀释溶剂(甲醇/水，80∶20)将约0.250ml的内标储备液稀释至10ml，以获得约10μg/ml的溶液。
[0229]
血浆中化合物1校准曲线的制备
[0230]
通过向空白血浆掺入水性分析物标准品，制备校准曲线标准品，其在血浆中在11.062-20594.820ng/ml的范围内(制备浓度：11.062、20.112、40.224、80.449、160.897、321.794、643.588、1287.176、2574.353、5148.705、10297.410和20594.820ng/ml)。
[0231]
通过向空白血浆中掺入合适的水性分析物标准品，为血浆中的化合物1(制备浓度：40.224、5148.705和10297.410ng/ml)制备落在校准曲线范围内的质控样品lqc、mqc和hqc。
[0232]
血浆样品的液-液萃取法
[0233]
·
将10μl isd工作溶液(约10μg/ml)添加到ria小瓶中。
[0234]
·
将50μl的兔血浆从聚丙烯盖管/小瓶中添加到ria小瓶中并涡旋30-40秒。
[0235]
·
将2.5ml tbme添加到ria小瓶中，然后使用vibramax振荡器以2000rpm的速度涡旋10分钟。
[0236]
·
将样品在4℃下以4000rpm离心10分钟。
[0237]
·
分离2ml有机层并使用涡轮蒸发器在50℃下蒸发至干，持续20分钟。
[0238]
·
用200μl的重构溶剂(甲醇)重构样品残留物。
[0239]
·
然后将重构的样品转移到自动进样器小瓶中。
[0240]
·
将10μl重构样品注入api 3200q trap lc-ms/ms系统。
[0241]
仪器条件
[0242]
lc参数
[0243][0244]
[0245]
化合物名称dpceepcxp化合物166254.516氟哌啶醇2133720.676
[0246]
数据分析
[0247]
将分析物化合物1的到各时间点的血浆浓度数据用于药代动力学分析。使用phoenix winnonlin 6.3软件的非房室分析(nca)模块进行药代动力学分析，以确定以下药代动力学参数：
[0248]
·cmax
[0249]
·
t
max
[0250]
·
auc
0-t
[0251]
·
auc
0-∞
[0252]
·
t
1/2
：
[0253]
·
mrt
[0254]
使用analyst软件1.6.1版采集的数据的色谱图通过峰面积比法处理。1/x2被用作加权因子。未知物的浓度由下式计算。
[0255]
y＝mx c
[0256]
其中，x＝药物浓度；
[0257]
m＝校准曲线的斜率；
[0258]
y＝峰面积比；和
[0259]
c＝校准曲线的截距。
[0260]
结果
[0261]
兔子的单剂量口服药代动力学研究的结果列于下表3至8中，并以图形方式显示在图1至10中。
[0262]
结果表明，与游离碱活性成分(化合物1)相比，当作为干研磨的钠盐(化合物2)施用时，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露量增加了50％到100％——比较实施例2和3，也比较实施例5和6；图3至10。与研磨的游离碱活性成分相比，干研磨的钾盐(化合物3)给出了更适度的改进——比较实施例2和4，也比较实施例5和7；图3至10。
[0263]
当与活性成分的标准悬浮液(实施例8)相比时，当活性成分以干研磨的钠盐(化合物2)在未包衣或肠溶包衣胶囊中施用时4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基)]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露出乎意料地且显著地增加(高达六倍)。
[0264]
因此，通过施用碱金属盐形式的化合物，提高了4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基)]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露。当药物以钠盐形式施用时，观察到全身暴露的最大提高。
[0265]
实施例258化合物编号111载体未包衣胶囊肠溶包衣胶囊悬浮液剂量(mg/kgb.w.)909090c
max
(μg/ml)63.70
±
3.7960.8
±
15.731.2
±
11.5
t
max
(h)32.00
±
13.8640.00
±
13.8619
±
9auc
last
(h*μg/ml)3448
±
405.12988
±
665.8952
±
175auc
inf
(h*μg/ml)7394
±
387318639
±
128081123
±
259.1auc
extrap
(％)46.71
±
19.0682.44
±
9.8414
±
9t
1/2
(h)68.17
±
43.03252.2
±
133.036
±
8mrt
last
(h)36.86
±
2.5645.17
±
2.5425
±5[0266]
表3.化合物1(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺)的平均血浆药代动力学参数
[0267][0268]
表4.化合物1(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺)的血浆浓度
[0269]
实施例36化合物编号22载体未包衣胶囊肠溶包衣胶囊剂量(mg/kg b.w.)9090c
max
(μg/ml)98.97
±
34.56101.4
±
17.04t
max
(h)32.00
±
13.8632.00
±
13.86auc
last
(h*μg/ml)5985
±
22745708
±
1142
auc
inf
(h*μg/ml)38101
±
3467355694
±
22737auc
extrap
(％)79.01
±
8.8788.81
±
3.497t
1/2
(h)226.7
±
139.9367.6
±
109.2mrt
last
(h)38.79
±
1.2042.99
±
1.59
[0270]
表5.干研磨的化合物2(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钠盐)的平均血浆药代动力学参数
[0271][0272]
表6.干研磨的化合物2(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钠盐)的血浆浓度
[0273]
实施例47化合物编号33载体未包衣胶囊肠溶包衣胶囊剂量(mg/kg b.w.)9090c
max
(μg/ml)81.90
±
10.479.47
±
5.43t
max
(h)40.00
±
13.8648.00
±
0.00auc
last
(h*μg/ml)4526
±
589.43993
±
43.27auc
inf
(h*μg/ml)9370
±
337718614
±
13840auc
extrap
(％)52.23
±
10.6369.48
±
19.80
t
1/2
(h)71.56
±
22.63188.57
±
158.39mrt
last
(h)39.563
±
3.87941.971
±
0.696
[0274]
表7.干研磨的化合物3(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钾盐)的平均血浆药代动力学参数
[0275][0276]
表8.干研磨的化合物3(4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺钾盐)的血浆浓度
[0277]
实施例9和10
[0278]
下列研究(称为实施例9和10)在雄性新西兰白兔中在存在ph调节剂(氧化镁)的情况下使用肠溶包衣胶囊提供了化合物2(化合物1的钠盐)的比较单剂量口服药代动力学数据。使用上文关于实施例2至8描述的方法进行所述研究，不同之处在下文示出。
[0279]
肠溶包衣明胶胶囊分别填充以下物质：
[0280]
实施例9：化合物2(62.5mg)、多库酯钠(6.25mg)、pvp k30(0.625mg)和氧化镁(125mg)。
[0281]
实施例10：化合物2(62.5mg)、多库酯钠(6.25mg)、pvp k30(0.625mg)和甘露醇(125mg)。
[0282]
动物以单剂量接受25mg/kg b.w.的化合物2。
[0283]
结果
[0284]
兔子的单剂量口服药代动力学研究的结果列于下表9中。
[0285]
结果表明，当化合物2与碱性赋形剂一起配制时，与不含碱性赋形剂的制剂相比，4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的全身暴露提高。
[0286]
实施例910化合物编号22载体具有mgo的肠溶包衣胶囊具有甘露醇的肠溶包衣胶囊剂量(mg/kg b.w.)2525c
max
(μg/ml)49.60
±
4.8047.43
±
7.06t
max
(h)24.00
±
0.0032.00
±
13.86auc
last
(h*μg/ml)1703.93
±
247.601472.50
±
78.72mrt
last
(h)27.67
±
0.1129.98
±
1.73
[0287]
表9.与碱性赋形剂共同配制的化合物2的平均血浆药代动力学参数
[0288]
实施例11
[0289]
下列研究是在雄性新西兰白兔中在存在ph调节剂(氧化镁)的情况下使用肠溶包衣胶囊的化合物2的单剂量口服药代动力学研究。使用上文关于实施例2至8描述的方法进行所述研究，不同之处在下文示出。
[0290]
肠溶包衣明胶胶囊分别填充有化合物2(106mg，如实施例1f中获得)、多库酯钠(10.6mg)、pvp k30(1.1mg)和氧化镁(100mg)。
[0291]
动物以单次剂量接受53mg/kg b.w.的化合物2(相当于50mg/kg化合物1)。
[0292]
结果
[0293]
兔子的单剂量口服药代动力学研究的结果列于下表10中。
[0294]
结果表明，当化合物2与碱性赋形剂一起配制时，存在4-氯-n-[2-[(4-氯苯基)甲基]-3-氧代-1，2，4-噻二唑-5-基]苯甲酰胺的显著量的全身暴露。
[0295][0296]
表10.与碱性赋形剂共同配制的化合物2的平均血浆药代动力学参数
[0297]
实施例12
[0298]
下面举例说明用于人类治疗或预防用途的含有化合物2的代表性药物片剂剂型：
[0299]
成分量(mg)量(％)
化合物2106.0630.30微晶纤维素66.1518.9乳糖一水合物132.2937.8羟基乙酸淀粉钠26.257.5胶体二氧化硅8.752.5硬脂酸镁10.503总计350100
[0300]
成分量(mg)量(％)化合物2106.0630.30微晶纤维素63.8118.23乳糖一水合物127.6336.47羟基乙酸淀粉钠26.257.5胶体二氧化硅8.752.5硬脂富马酸钠17.505总计350100
[0301]
这些制剂可以通过制药领域熟知的常规方法获得。片剂也可以通过常规方式进行肠溶包衣，例如以便提供聚甲基丙烯酸酯包衣。