用于治疗肢端肥大症的缀合物和方法与流程

用于治疗肢端肥大症的缀合物和方法
1.相关申请的交叉引用
2.本专利申请要求2019年10月24日提交的美国申请序列号62/925,659的优先权的权益，所述申请以引用的方式并入本文。


背景技术：

3.肢端肥大症是一种由生长激素(gh)分泌过多引起的疾患，其会导致骨骼、组织和器官生长异常。未经治疗的肢端肥大症会导致预期寿命缩短，其中3600-6000万病例中的绝大多数死于心血管疾病。肢端肥大症有几种治疗选择，从药物干预到手术切除触发疾病的垂体肿瘤。然而，反应率各不相同并且通常需要多种治疗方法和阴性副作用。因此，需要新的治疗性治疗选择。


技术实现要素：

4.核酸(例如，sirna)疗法是一种通过减少肝中的生长激素受体(ghr)来治疗gh分泌过多的方法，从而防止导致疾病的下游信号传导级联。本文描述了靶向ghr转录物的sirna的肝细胞特异性递送，这是一种有用的治疗选择。这种转录物和蛋白质的减少将阻止生长激素衍生的信号传导，并且因此减少胰岛素样生长因子-1(igf-1)，它是所述疾病的主要致病因子。与其他治疗选择相比，这个解决方案由于易于管理(包括效果持续时间和预期的安全特性)而赋予优势。
5.在某些实施方案中，本文提供了核酸分子(例如，治疗性双链sirna分子)，以及可用于递送此类核酸的缀合物、组合物和方法。
6.因此，一个方面提供选自由sirna 1
–
sirna 28组成的群组的双链sirna分子。
7.另一方面提供式i化合物
[0008][0009]
其中：
[0010]
r1是靶向配体；
[0011]
l1不存在或为连接基团；
[0012]
l2不存在或为连接基团；
[0013]
r2是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子；
[0014]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0015]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0016]
rb是氢、保护基团、与固体支持物的共价键或与结合到固体支持物的连接基团的键；并且
[0017]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
[0018]
或其盐。
[0019]
另一方面提供包含本文所述的sirna之一的galnac缀合物，所述缀合物不限于包含本文公开的配体-接头的缀合物。例如，一个方面提供式x的galnac缀合物：
[0020]
a-b-c
[0021]
(x)
[0022]
其中a是靶向配体；
[0023]
b是可选的接头；并且
[0024]
c是本文所述的sirna分子。
[0025]
可用于本文所述的sirna分子的其他缀合物描述于wo 2017/177326(pct/ca2017/050447)和wo 2018/191278(pct/us2018/026918)中，其公开内容均各自以引用的方式并入。
[0026]
本文所述的治疗性双链sirna以及包含此类sirna的化合物和组合物可用于治疗b型肝炎病毒和b型肝炎病毒/d型肝炎病毒。
[0027]
本文还提供可用于制备式i化合物的本文公开的合成中间体和方法。
[0028]
本领域技术人员根据以下详细说明和附图将明了其他目标、特征和优势。
[0029]
附图简述
[0030]
图1.图1绘示了phh中24种galnac缀合的人靶向ghr的候选物的剂量反应。将增加浓度的每一候选物与原代人肝细胞一起孵育48小时，其中递送具有galnac依赖性。通过qpcr分析ghr mrna。
[0031]
图2.图2绘示了单剂量的靶向ghr的候选物后的肝损伤标记。雄性大鼠接受20mg/kg或60mg/kg的指示候选物的单次皮下注射。在给药后14天分析肝损伤的血清标记。盐水显示在每张图的最左侧。sirna 25的缀合物显示为每个剂量的左侧数据集。sirna 27的缀合物显示为每个剂量的右侧数据集。
[0032]
图3.图3绘示了单次施用候选物后nhp中ghr mrna的减少。向食蟹猴皮下施用指示剂量的每一临床候选物。给药后14天，进行肝活检并通过qpcr分析ghr mrna水平。盐水显示在图的最左侧。sirna 25的缀合物显示为左侧数据集。sirna 27的缀合物显示为右侧数据集。
[0033]
图4.图4绘示了如当前申请中所述的sirna 25的缀合物(下方迹线)与来自ionis pharmaceuticals公司的galnac-aso(三触角n-乙酰半乳糖胺-反义寡核苷酸缀合物)(上方迹线)之间的比较数据。如图中所绘示，sirna 25的缀合物展示出改进的性质。
[0034]
图5.图5绘示了如当前申请中所述的sirna 27的缀合物(下方带有正方形的迹线；phh：下方带有圆圈的迹线；pmh)与来自ionis pharmaceuticals公司的galnac-aso(三触角n-乙酰半乳糖胺-反义寡核苷酸缀合物)(上方带有正方形的迹线；phh：上方带有圆圈的迹线；pmh)之间的比较数据。如图中所绘示，sirna 27的缀合物展示出改进的性质。
[0035]
图6.图6绘示了如当前申请中所述的sirna 25的缀合物(下方迹线)和sirna 27的缀合物(中间迹线)与来自ionis pharmaceuticals公司的galnac-aso(三触角n-乙酰半乳
糖胺-反义寡核苷酸缀合物)(上方迹线)之间的比较数据。如图中所绘示，sirna 25和sirna 27的缀合物展示出改进的性质。
[0036]
在本技术(包括附图、实施例和方案)中，应理解，寡核苷酸可以是如表1或表2中所述的双链sirna分子。
具体实施方式
[0037]
因此，本文提供了式(i)化合物：
[0038][0039]
其中：
[0040]
r1是靶向配体；
[0041]
l1不存在或为连接基团；
[0042]
l2不存在或为连接基团；
[0043]
r2是选自sirna 1
–
sirna 28中的任一者的sirna分子；
[0044]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0045]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0046]
rb是氢或保护基团；并且
[0047]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
[0048]
或其盐。
[0049]
在某些实施方案中，r1是
–
c(h)
(3-p)
(l
3-糖)
p
；
[0050]
其中每一l3独立地为连接基团；
[0051]
p为1、2或3；并且
[0052]
糖是单糖或二糖
[0053]
或其盐。
[0054]
在某些实施方案中，糖是：
[0055][0056]
其中：
[0057]
x是nr3，并且y选自-(c＝o)r4、-so2r5和-(c＝o)nr6r7；或x是-(c＝o)-并且y是nr8r9；
[0058]
r3是氢或(c
1-c4)烷基；
[0059]
r4、r5、r6、r7、r8和r9各自独立地选自由以下各项组成的群组：氢、(c
1-c8)烷基、(c
1-c8)卤代烷基、(c
1-c8)烷氧基和(c
3-c6)环烷基，所述(c
3-c6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0060]r10
是-oh、-nr8r9或-f；并且
[0061]r11
是-oh、-nr8r9、-f或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由卤基、羟基、羧基、氨基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0062]
或其盐。
[0063]
在某些实施方案中，糖选自由以下各项组成的群组：
[0064][0065]
或其盐。
[0066]
在某些实施方案中，糖是：
[0067][0068]
或其盐。
[0069]
在某些实施方案中，式i化合物选自由以下各项组成的群组：
[0070]
[0071]
[0072]
[0073][0074]
和其药学上可接受的盐。
[0075]
在某些实施方案中，式(i)化合物是：
[0076][0077]
或其药学上可接受的盐，其中所绘示的sirna选自sirna 1
–
sirna 28中的任一者。
[0078]
在某些实施方案中，sirna选自sirna 1
–
sirna 24中的任一者。
[0079]
在某些实施方案中，sirna选自sirna 25
–
sirna 28中的任一者。
[0080]
在某些实施方案中，sirna是sirna 25。
[0081]
在某些实施方案中，sirna是sirna 26。
[0082]
在某些实施方案中，sirna是sirna 27。
[0083]
在某些实施方案中，sirna是sirna 28。
[0084]
某些实施方案提供治疗肢端肥大症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的如本文所述的化合物。
[0085]
某些实施方案提供用于减少患者中胰岛素样生长因子-1(igf-1)的方法，所述方
pressure，hypertension)、心血管疾病(尤其是心脏扩大(心肌病))、骨关节炎、糖尿病、甲状腺肿、结肠内壁癌前生长(息肉)、睡眠呼吸暂停、腕管综合征、脊髓压迫症和视力丧失。肢端肥大症的早期治疗可防止这些并发症的发生或恶化。未经治疗的肢端肥大症和其并发症可导致过早死亡。
[0100]
目前的治疗包括尝试去除肿瘤的手术、放射治疗(例如，常规放射疗法、质子束疗法或立体定向放射外科)和药物治疗。用于降低gh产生或阻断gh作用的药物包括减少过度生长激素分泌的药物(例如，生长抑素类似物)。肢端肥大症的经典护理标准是奥曲肽(octreotide)(sandostatin)，其是一种防止垂体释放gh的生长抑素类似物(ssa)。其他几种ssa(例如帕瑞肽(pasireotide)(signifor)和兰瑞肽(lanreotide)(somatuline))也可商购获得。这些ssa都需要定期给药，并且有很大一部分人群难以治疗。此外，这些ssa具有不同但显著的耐受性问题，例如注射部位反应、腹泻和心动过缓。药物奥曲肽和兰瑞肽是合成形式的脑激素生长抑素。其可干扰垂体过度分泌gh，从而导致gh水平迅速下降。这些药物由医疗保健专业人员每月一次注射到臀部肌肉(臀肌)中。也可使用降低激素水平的药物(例如，多巴胺激动剂)。口服药物卡麦角林(cabergoline)和溴隐亭(bromocriptine)会降低一些人的gh和igf-i水平。在一些服用多巴胺激动剂的人中，肿瘤的大小可减小。有些人在服用这些药物时可发生强迫行为，例如赌博。也可使用阻断gh作用的药物(例如，生长激素拮抗剂)。药物培维索孟(pegvisomant)可阻断gh对身体组织的效应。培维索孟可对用其他形式的治疗未取得良好成功的人特别有帮助。作为每日注射给药，这种药物可使大多数肢端肥大症患者的igf-i水平正常化并缓解症状，但其不会降低gh水平或减小肿瘤大小。
[0101]
下表1和表2提供了可用于本文所述的缀合物和方法的某些sirna分子。缀合物的galnac部分在表1和表2中记为(galnac)。所用的示例性galnac在实施例部分中描述。
[0102]
表1.用于体外筛选的肢端肥大症sirna
[0103][0104][0105][0106]
表2.毒理学和/或非人类灵长类动物研究中使用的肢端肥大症sirna
[0107][0108][0109]
在某些实施方案中，sirna是sirna 1。在某些实施方案中，si rna是sirna 2。在某些实施方案中，sirna是sirna 3。在某些实施方案中，sirna是sirna 4。在某些实施方案中，sirna是sir na 5。在某些实施方案中，sirna是sirna 6。在某些实施方案中，sirna是sirna 7。在某些实施方案中，sirna是sirna 8。在某些实施方案中，sirna是sirna 9。在某些实施方案中，sirna是sir na 10。在某些实施方案中，sirna是sirna 11。在某些实施方案中，
sirna是sirna 12。在某些实施方案中，sirna是sirna 13。在某些实施方案中，sirna是sirna 14。在某些实施方案中，sirn a是sirna 15。在某些实施方案中，sirna是sirna 16。在某些实施方案中，sirna是sirna 17。在某些实施方案中，sirna是sirn a 18。在某些实施方案中，sirna是sirna 19。在某些实施方案中，sirna是sirna 20。在某些实施方案中，sirna是sirna 21。在某些实施方案中，sirna是sirna 22。在某些实施方案中，sirna是sirna 23。在某些实施方案中，sirna是sirna 24。在某些实施方案中，sirna是sirna 25。在某些实施方案中，sirna是sirna 26。在某些实施方案中，sirna是sirna 27。在某些实施方案中，sirna是sirna 28。
[0110]
在某些实施方案中，本文所述的sirna分子和缀合物可与手术治疗、放射治疗(例如，常规放射疗法、质子束疗法或立体定向放射外科)和/或其他药物组合使用。
[0111]
如本文所用，术语“缀合物”包括式(i)化合物，所述式(i)化合物包含连接到靶向配体的寡核苷酸(例如，sirna分子)。因此，术语化合物和缀合物在本文中可互换使用。
[0112]
如本文所用，术语“小干扰rna”或“sirna”是指在sirna处于与靶基因或序列相同的细胞中时，能够减少或抑制靶基因或序列的表达(例如，通过介导与sirna序列互补的mrna的降解或抑制其转译)的双链rna(即，双链体rna)。sirna可与靶基因或序列具有实质或完全同一性，或可包含错配区域(即错配基序)。在某些实施方案中，sirna的长度可为约19-25个(双链体)核苷酸，并且长度优选为约20-24、21-22或21-23个(双链体)核苷酸。sirna双链体可包含约1至约4个核苷酸或约2至约3个核苷酸的3'突出端和5'磷酸末端。sirna的实例包括但不限于由两条分开的链分子组装而成的双链多核苷酸分子，其中一条链是有义链，并且另一条是互补的反义链。
[0113]
在某些实施方案中，sirna的一条或两条链上的5'和/或3'突出端包含1-4个(例如，1、2、3或4个)修饰和/或未修饰的脱氧胸苷(t或dt)核苷酸、1-4个(例如，1、2、3或4个)修饰(例如，2'ome)和/或未修饰的尿苷(u)核糖核苷酸、和/或1-4个(例如，1、2、3或4个)与靶序列(例如，反义链中的3'突出端)或其互补链(例如，有义链中的3'突出端)互补的修饰(例如，2'ome)和/或未修饰的核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸。
[0114]
优选地，sirna是化学合成的。sirna还可通过用大肠杆菌rn a酶iii或dicer裂解较长的dsrna(例如，长度大于约25个核苷酸的dsrna)来产生。这些酶将dsrna加工成生物活性的sirna(参见例如yang等人,proc.natl.acad.sci.usa,99:9942-9947(2002)；calegari等人,proc.natl.acad.sci.usa,99:14236(2002)；byrom等人,ambion technotes,10(1):4-6(2003)；kawasaki等人,nucleic acids res.,31:981-987(2003)；knight等人,science,293:2269-2271(2001)；及robertson等人,j.biol.chem.,243:82(1968))。优选地，dsrna的长度为至少50个核苷酸至约100、200、300、400或500个核苷酸。dsrna的长度可长达1000、1500、2000、5000个核苷酸，或更长。dsrna可编码整个基因转录物或部分基因转录物。在某些情况中，可由质粒编码sirna(例如，转录为自动折叠成具有发夹环的双链体中的序列)。
[0115]
措辞“抑制靶基因的表达”是指sirna沉默、减少或抑制靶基因表达的能力。为了检查基因沉默的程度，使测试样品(例如，来自表达靶基因的感兴趣生物体的生物样品或表达靶基因的培养物中的细胞样品)与沉默、减少或抑制靶基因的表达的sirna接触。将测试样品中靶基因的表达与对照样品(例如，来自表达靶基因的感兴趣生物体的生物样品或表达
靶基因的培养物中的细胞样品)中靶基因的表达进行比较，所述对照样品未与sirna接触。对照样品(例如，表达靶基因的样品)可分配100％的值。在特定实施方案中，当测试样品相对于对照样品(例如仅缓冲液、靶向不同基因的sirna序列、乱序sirna序列等)的值是约100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或0％时，实现靶基因的表达的沉默、抑制或减少。合适的测定包括但不限于使用本领域技术人员已知的技术(例如墨点印迹、北方印迹、原位杂交、elisa、免疫沉淀、酶功能以及本领域技术人员已知的表型测定)检查蛋白质或mrna水平。
[0116]
术语“合成活化基团”是指可连接到原子以活化所述原子以使其与另一个反应性基团形成共价键的基团。应理解，合成活化基团的性质可取决于其所活化的原子。例如，当合成活化基团连接到氧原子时，合成活化基团是将活化所述氧原子以与另一个反应性基团形成键(例如酯键、氨基甲酸酯键或醚键)的基团。所述合成活化基团是已知的。可连接到氧原子的合成活化基团的实例包括但不限于乙酸盐、琥珀酸盐、三氟甲磺酸盐和甲磺酸盐。当合成活化基团连接到羧酸的氧原子时，合成活化基团可以是衍生自已知偶合试剂(例如已知酰胺偶合试剂)的基团。所述偶合试剂是已知的。此类偶合试剂的实例包括但不限于n,n
’‑
二环己基碳二亚胺(dcc)、羟基苯并三唑(hobt)、n-(3-二甲基氨基丙基)-n'-乙基碳酸酯(edc)、(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(bop)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(pybop)或o-苯并三唑-1-基-n,n,n',n'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(hbtu)。
[0117]
治疗性核酸(例如sirna)的“有效量”或“治疗有效量”是足以产生所需效果(例如，与不存在sirna下检测到的正常表达水平相比，抑制靶序列表达)的量。在特定实施方案中，当利用sirna获得的值相对于对照(例如仅缓冲液、靶向不同基因的sirna序列、乱序sirna序列等)是约100％、99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％、90％、89％、88％、87％、86％、85％、84％、83％、82％、81％、80％、79％、78％、77％、76％、75％、70％、65％、60％、55％、50％、45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％、5％或0％时，实现靶基因或靶序列的表达的抑制。用于测量靶基因或靶序列的表达的合适的测定包括但不限于使用本领域技术人员已知的技术(例如墨点印迹、北方印迹、原位杂交、elisa、免疫沉淀、酶功能以及本领域技术人员已知的表型测定)检查蛋白质或mrna水平。
[0118]
如本文所用，术语“核酸”是指含有至少两个单链或双链形式的核苷酸(即，脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸)的聚合物，并且包括dna和rna。“核苷酸”含有糖脱氧核糖(dna)或核糖(rna)、碱基和磷酸基团。核苷酸通过磷酸基团连接在一起。“碱基”包括嘌呤和嘧啶，其还包括天然化合物腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷和天然类似物；以及嘌呤和嘧啶的合成衍生物，其包括但不限于放置新的反应性基团(例如但不限于胺、醇、硫醇、羧酸盐和烷基卤化物)的修饰。核酸包括含有已知核苷酸类似物或修饰的骨架残基或连键的核酸，其是合成的、天然存在的和非天然存在的，并且其具有与参考核酸相似的结合性质。此类类似物和/或修饰的残基的实例包括但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、膦酸甲酯、手性膦酸甲酯、2'-o-甲基核糖核苷酸和肽-核酸(pna)。此外，核酸可包括一个或多个una部分。
[0119]
术语“核酸”包括任何寡核苷酸或多核苷酸，其中含有最多60个核苷酸的片段通常称为寡核苷酸，而更长片段称为多核苷酸。脱氧核寡核苷酸由称为脱氧核糖的5碳糖组成，所述5碳糖在所述糖的5'和3'碳上与磷酸盐共价连接，形成交替的无支链聚合物。dna可呈以下形式：例如反义分子、质粒dna、预先缩合的dna、pcr产物、载体、表达盒、嵌合序列、染色体dna或这些群组的衍生物和组合。核糖寡核苷酸由相似的重复结构组成，其中5碳糖是核糖。rna可呈以下形式：例如小干扰rna(sirna)、dicer-底物dsrna、小发夹rna(shrna)、不对称干扰rna(airna)、微小rna(mirna)、mrna、trna、rrna、trna、病毒rna(vrna)以及其组合。因此，术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”是指由天然存在的碱基、糖和糖间(骨架)连键组成的核苷酸单体或核苷单体的聚合物或寡聚物。术语“多核苷酸”和“寡核苷酸”还包括包含非天然存在的单体或其部分的聚合物或寡聚体，其功能相似。此类修饰或取代的寡核苷酸通常由于例如增强的细胞摄取、降低的免疫原性和在核酸酶存在下增加的稳定性等性质而优于天然形式。
[0120]
除非另外指示，否则特定核酸序列还隐含地涵盖其保守修饰的变体(例如，简并密码子取代)、等位基因、直向同源物、snp和互补序列以及明确指示的序列。具体而言，简并密码子取代可通过生成其中一个或多个选定(或所有)密码子的第三个位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(batzer等人,nucleic acid res.,19:5081(1991)；ohtsuka等人,j.biol.chem.,260:2605-2608(1985)；ross olini等人,mol.cell.probes,8:91-98(1994))。
[0121]
术语“基因”是指包含产生多肽或前体多肽所需要的部分长度或全长编码序列的核酸(例如，dna或rna)序列。
[0122]
如本文所用，“基因产物”是指基因的产物，例如rna转录物或多肽。
[0123]
如本文所用，术语“烷基”本身或作为另一取代基的部分，除非另有说明，否则意指具有指定的碳原子数的直链或支链烃基(即c
1-8
意指1至8个碳)。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”是指具有一个或多个双键的不饱和烷基。相似地，术语“炔基”是指具有一个或多个三键的不饱和烷基。此类不饱和烷基的实例包括但不限于乙烯基、2-丙烯基、丁烯基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-丙炔基和3-丙炔基、3-丁炔基以及高级同系物和异构体。
[0124]
术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的部分意指衍生自烷烃(包括直链和支链烷烃)的二价基团，如由-ch2ch2ch2ch
2-和-ch(ch3)ch2ch
2-所例示。
[0125]
术语“环烷基”、“碳环(carbocyclic)”或“碳环(carbocycle)”是指具有3至20个总环原子数的烃环系统(例如，3-20元环烷基是具有3-20个环原子的环烷基，或c
3-20
环烷基是具有3-20个碳环原子的环烷基)并且对于3-5元环烷基是完全饱和的或在环顶点之间具有不超过一个双键，并且对于6元环烷基或更大的环烷基是完全饱和的或在环顶点之间具有不超过两个双键。如本文所用，“环烷基”、“碳环(carbocyclic)”或“碳环(carbocycle)”也意在指双环、多环和螺环烃环系统，例如二环[2.2.1]庚烷、蒎烷、二环[2.2.2]辛烷、金刚烷、降冰片烯、螺环c
5-12
烷烃等。如本文所用，术语“烯基”、“炔基”、“环烷基”、“碳环(carbocycle)”和“碳环(carbocyclic)”意图包括其单卤化和多卤化变体。
[0126]
术语“杂环烷基”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环(heterocycle)”是指整体具有
3-20个环原子的饱和或部分不饱和环系统基团(例如，3-20元杂环烷基是具有3-20环原子的杂环烷基，c
2-19
杂环烷基是具有3-10个环原子的杂环烷基，其中2-19个环原子是碳)，其含有1至10个选自n、o和s的杂原子作为环原子，其中氮原子和硫原子任选地被氧化，氮原子任选地被季铵化。除非另有说明，否则“杂环烷基”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环(heterocycle)”环可以是单环、双环、螺环或多环系统。“杂环烷基”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环(heterocycle)”环的非限制性实例包括吡咯烷、哌啶、n-甲基哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、酞酰亚胺、哌啶、嘧啶-2,4(1h,3h)-二酮、1,4-二噁烷、吗啉、硫吗啉、硫吗啉-s-氧化物、硫吗啉-s,s-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环、莨菪烷、2-氮杂螺[3.3]庚烷、(1r,5s)-3-氮杂二环[3.2.1]辛烷、(1s,4s)-2-氮杂二环[2.2.2]辛烷、(1r,4r)-2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.2]辛烷等。“杂环烷基”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环(heterocycle)”基团可通过一个或多个环碳或杂原子连接到分子的其余部分。“杂环烷基”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环(heterocycle)”可包括其单卤化和多卤化变体。
[0127]
术语“烷氧基”和“烷硫基”以其常规含义使用，并且是指通过氧原子(“氧基”)或硫基连接到分子的其余部分的那些烷基，并且还包括其单卤化和多卤化变体。
[0128]
术语“卤基”或“卤素”本身或作为另一个取代基的部分，除非另有说明，否则意指氟、氯、溴或碘原子。术语“(卤代)烷基”意指包括“烷基”和“卤代烷基”取代基两者。另外，术语“卤代烷基”意指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“c
1-4
卤代烷基”意指包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基、二氟甲基等。
[0129]
术语“芳基”意指具有6-14个碳原子的碳环芳香族基团，无论是否与一个或多个基团稠合。除非另有说明，否则芳基的实例包括苯基、萘基、联苯基等。
[0130]
术语“杂芳基”是指含有1至5个选自n、o和s的杂原子的芳基环，其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可通过杂原子连接到分子的其余部分。杂芳基的实例包括吡啶基、嗒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喏啉基、喹唑啉基、啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。
[0131]
术语糖包括单糖、二糖和三糖。该术语包括葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖和核糖，以及脱氧糖(例如脱氧核糖)和氨基糖(例如半乳糖胺)。糖衍生物可方便地如国际专利申请公开号wo 96/34005和97/03995中所述制备。糖可方便地通过醚键、硫醚键(例如s-糖苷)、胺氮(例如，n-糖苷)或碳-碳键(例如c-糖苷)连接到式i化合物的其余部分。在一个实施方案中，糖可方便地通过醚键连接到式i化合物的其余部分。在一个实施方案中，术语糖包括下式的基团：
[0132][0133]
其中：
[0134]
x是nr3，并且y选自-(c＝o)r4、-so2r5和-(c＝o)nr6r7；或x是-(c＝o)-并且y是nr8r9；
[0135]
r3是氢或(c
1-c4)烷基；
[0136]
r4、r5、r6、r7、r8和r9各自独立地选自由以下各项组成的群组：氢、(c
1-c8)烷基、(c
1-c8)卤代烷基、(c
1-c8)烷氧基和(c
3-c6)环烷基，所述(c
3-c6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0137]r10
是-oh、-nr8r9或-f；并且
[0138]r11
是-oh、-nr8r9、-f或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由卤基、羟基、羧基、氨基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代。在另一个实施方案中，糖可选自由以下各项组成的群组：
[0139][0140]
在另一个实施方案中，糖可以是：
[0141][0142]
术语“动物”包括哺乳动物物种，例如人、小鼠、大鼠、狗、猫、仓鼠、豚鼠、兔、家畜等。
[0143]
术语“脂质”是指一组有机化合物，包括但不限于脂肪酸的酯，其特征在于不溶于水，但可溶于许多有机溶剂。其通常分成至少三类：(1)“简单脂质”，其包括脂肪和油以及蜡；(2)“复合脂质”，其包括磷脂和糖脂；以及(3)“衍生的脂质”，例如类固醇。
[0144]
术语“盐”包括任何阴离子和阳离子复合物，例如阳离子脂质和一种或多种阴离子之间形成的复合物。阴离子的非限制性实例包括无机和有机阴离子，例如，氢化物、氟化物、氯化物、溴化物、碘化物、草酸盐(例如，半草酸盐)、磷酸盐、膦酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐、硝酸盐、亚硝酸盐、氮化物、亚硫酸氢盐、硫化物、亚硫酸盐、硫酸氢盐(bisulfate)、硫酸盐、硫代硫酸盐、硫酸氢盐(hydrogen sulfate)、硼酸盐、甲酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、丙烯酸盐、聚丙烯酸盐、富马酸盐、马来酸盐、衣康酸盐、乙醇酸盐、葡萄糖酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、惕格酸盐(tiglate)、抗坏血酸盐、水杨酸盐、聚甲基丙烯酸盐、高氯酸盐、氯酸盐、亚氯酸盐、次氯酸盐、溴酸盐、次溴酸盐、碘酸盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、砷酸盐、亚砷酸盐、铬酸盐、重铬酸盐、氰化物、氰酸盐、硫氰酸盐、氢氧化物、过氧化物、高锰酸盐和其混合物。在特定实施方案中，本文公开的阳离子脂质的盐是结晶盐。
[0145]
术语“酰基”包括其中连接点处的碳被氧代基团取代的任何烷基、烯基或炔基，如下文所定义。以下是酰基的非限制性实例：-c(＝o)烷基、-c(＝o)烯基和-c(＝o)炔基。
[0146]
术语“成融性”是指脂质颗粒(例如snalp)与细胞膜融合的能力。膜可为质膜或包围细胞器(例如核内体、细胞核等)的膜。
[0147]
如本文所用，术语“水溶液”是指全部或部分包含水的组合物。
[0148]
如本文所用，术语“有机脂质溶液”是指全部或部分包含具有脂质的有机溶剂的组合物。
[0149]
如本文所用，“远端部位”是指物理分开的部位，其不限于相邻毛细血管床，而是包括广泛分布在整个生物体中的部位。
[0150]
与核酸-脂质颗粒(例如snalp)相关的“血清稳定的”意指颗粒在暴露于将显著降解游离dna或rna的血清或核酸酶测定之后不会显著降解。合适的测定包括(例如)标准血清测定、dna酶测定或rna酶测定。
[0151]
如本文所用，“全身递送”是指引起活性剂(例如sirna)广泛生物分布在生物体内的脂质颗粒的递送。施用的一些技术可引起某些剂的全身递送，但不会引起其他剂的全身递送。全身递送意指将有用量、优选治疗量的剂暴露于身体的大部分部位。为了获得广泛生物分布，通常需要血液寿命使得剂在到达施用部位远端的疾病部位之前不会迅速降解或清除(例如通过首过器官(肝、肺等)或通过快速的非特异性细胞结合)。脂质颗粒的全身递送可通过本领域中已知的任何方式(包括例如静脉内、皮下和腹膜内)实现。在优选的实施方案中，脂质颗粒的全身递送通过静脉内递送实现。
[0152]
如本文所用，“局部递送”是指直接向生物体内的靶部位递送活性剂(例如sirna)。例如，剂可通过直接注射到疾病部位、其他靶部位或靶器官(例如肝、心脏、胰腺、肾等)中来局部递送。
[0153]
本领域技术人员应了解，具有手性中心的化合物可以光学活性和外消旋形式存在和分离。一些化合物可展现多形性。应了解，本发明涵盖本发明化合物的具有本文所述的有用性质的任何外消旋、光学活性、多形性或立体异构形式或其混合物，本领域中熟知如何制备光学活性形式(例如，通过重结晶技术拆分外消旋形式、通过自光学活性起始材料进行合成、通过手性合成，或通过使用手性固定相进行色谱分离)。
[0154]
当本文化合物式中的键以非立体化学方式(例如扁平)绘制时，键所连接的原子包
括所有立体化学可能性。除非另有特别说明，否则当本文化合物式中的键以定义的立体化学方式(例如粗体、粗体楔形、虚线或虚线楔形)绘制时，应理解，立体化学键所连接的原子富含所绘示的绝对立体异构体。在一个实施方案中，化合物可以至少51％是所绘示的绝对立体异构体。在另一个实施方案中，化合物可以至少60％是所绘示的绝对立体异构体。在另一个实施方案中，化合物可以至少80％是所绘示的绝对立体异构体。在另一个实施方案中，化合物可以至少90％是所绘示的绝对立体异构体。在另一个实施方案中，化合物可以至少95％是所绘示的绝对立体异构体。在另一个实施方案中，化合物可以至少99％是所绘示的绝对立体异构体。
[0155]
除非本文另有说明，否则术语“约”在与值或值的范围结合使用时，意指所述值或值的范围的正或负5％。
[0156]
生成sirna分子
[0157]
sirna可以若干形式提供，包括例如呈一种或多种分离的小干扰rna(sirna)双链体、呈较长的双链rna(dsrna)或呈由dna质粒中的转录盒转录的sirna或dsrna。在一些实施方案中，sirna可通过酶促产生或通过部分/总的有机合成来产生，并且修饰的核糖核苷酸可通过体外酶促或有机合成引入。在某些情况下，每条链都是化学制备的。合成rna分子的方法是本领域已知的，例如，如verma和eckstein(1998)中所述或如本文所述的化学合成方法。
[0158]
用于分离rna、合成rna、杂交核酸、制造和筛选cdna文库以及进行pcr的方法在本领域中是熟知的(参见，例如，gubler和hoffman,gene,25:263-269(1983)；sambrook等人,同上；ausubel等人,同上)，pcr方法同样如此(参见，美国专利号4,683,195和4,683,202；pcr protocols:a guide to methods and applications(innis等人编辑,1990))。表达文库也是本领域技术人员熟知的。公开一般使用方法的另外基础文章包括sambrook等人,molecular cloning,a laboratory manual(第2版，1989)；kriegler,gene transfer and expression:a laboratory manual(1990)；以及current protocols in molecular biology(ausubel等人编辑,1994)。这些参考文献的公开内容出于所有目的以引用的方式整体并入本文。
[0159]
通常，sirna是化学合成的。包含sirna分子的寡核苷酸可使用本领域已知的多种技术中的任一者来合成，例如以下中所述的那些技术：usman等人,j.am.chem.soc.,109:7845(1987)；scaringe等人,nucl.acids res.,18:5433(1990)；wincott等人,nucl.acids res.,23:2677-2684(1995)；以及wincott等人methods mol.bio.,74:59(1997)。寡核苷酸的合成利用常见核酸保护和偶合基团，例如在5
′
端的二甲氧基三苯甲基和在3
′
端的亚磷酰胺。作为非限制性实例，小规模合成可在applied biosystems合成仪上使用0.2μmol规模方案执行。或者，0.2μmol规模的合成可在来自protogene(palo alto,ca)的96孔板合成仪上进行。然而，更大或更小规模的合成也在范围内。用于寡核苷酸合成的合适的试剂、用于rna去保护的方法和用于rna纯化的方法是本领域技术人员已知的。
[0160]
sirna分子可由两种不同的寡核苷酸组装而成，其中一种寡核苷酸包含有义链，而另一种包含sirna的反义链。例如，每条链可单独合成并在合成和/或去保护后通过杂交或连接接合在一起。
[0161]
实施方案
[0162]
另一方面提供了包含本文所述的双链sirna分子的组合物。
[0163]
在一个实施方案中，组合物是包含药学上可接受的载体的药物组合物。
[0164]
一个方面是如关于本文所述的式i化合物或其盐。
[0165]
在式i化合物的一个实施方案中，r1是靶向配体；
[0166]
l1不存在或为连接基团；
[0167]
l2不存在或为连接基团；
[0168]
r2是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子；
[0169]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0170]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb和c
1-8
烷基，所述c
1-8
烷基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0171]
rb是氢、保护基团、与固体支持物的共价键、或与结合到固体支持物的连接基团的键；并且
[0172]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
[0173]
在一个实施方案中，r1是-c(h)
(3-p)
(l
3-糖)
p
，其中每一l3独立地是连接基团；p为1、2或3；糖是单糖或二糖。
[0174]
在一个实施方案中，糖是：
[0175][0176]
其中：
[0177]
x是nr3，并且y选自-(c＝o)r4、-so2r5和-(c＝o)nr6r7；或x是-(c＝o)-并且y是nr8r9；
[0178]
r3是氢或(c
1-c4)烷基；
[0179]
r4、r5、r6、r7、r8和r9各自独立地选自由以下各项组成的群组：氢、(c
1-c8)烷基、(c
1-c8)卤代烷基、(c
1-c8)烷氧基和(c
3-c6)环烷基，所述(c
3-c6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0180]r10
是-oh、-nr8r9或-f；并且
[0181]r11
是-oh、-nr8r9、-f或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由卤基、羟基、羧基、氨基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0182]
或其盐。
[0183]
在一个实施方案中，糖选自由以下各项组成的群组：
[0184][0185]
和其盐。
[0186]
在一个实施方案中，糖是：
[0187][0188]
在一个实施方案中，每一l3独立地是具有0至50个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0189]
在一个实施方案中，每一l3独立地是具有1至20个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0190]
在一个实施方案中，l3是：
[0191][0192]
或其盐。
[0193]
在一个实施方案中，r1是：
[0194][0195]
或其盐。
[0196]
在一个实施方案中，r1是：
[0197][0198]
其中g是-nh-或-o-；
[0199]
rc是氢、(c
1-c8)烷基、(c
1-c8)卤代烷基、(c
1-c8)烷氧基、(c
1-c6)烷酰基、(c
3-c
20
)环烷基、(c
3-c
20
)杂环、芳基、杂芳基、单糖、二糖或三糖；并且其中环烷基、杂环、芳基、杂芳基和糖任选地被一个或多个独立地选自由以下各项组成的群组的基团取代：卤基、羧基、羟基、氨基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基；
[0200]
或其盐。
[0201]
在一个实施方案中，rc是：
[0202][0203]
在一个实施方案中，r1是：
[0204][0205]
在一个实施方案中，rc是：
[0206][0207]
在一个实施方案中，g是
–
nh-。在一个实施方案中，r1是：
[0208][0209]
在一个实施方案中，r1是：
[0210][0211]
其中每一rd独立地选自由以下各项组成的群组：氢、(c
1-c6)烷基、(c
9-c
20
)烷基甲硅烷基、(rw)3si-、(c
2-c6)烯基、四氢吡喃基、(c
1-c6)烷酰基、苯甲酰基、芳基(c
1-c3)烷基、tmtr(三甲氧基三苯甲基)、dmtr(二甲氧基三苯甲基)、mmtr(单甲氧基三苯甲基)和tr(三苯甲基)；并且
[0212]
每一rw独立地选自由(c
1-c4)烷基和芳基组成的群组。
[0213]
在一个实施方案中，连接基团l1和l2独立地是具有1至50个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0214]
在一个实施方案中，l1和l2独立地是具有1至20个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0215]
在一个实施方案中，l1和l2独立地是具有1至14个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0216]
在一个实施方案中，l1通过-nh-、-o-、-s-、-(c＝o)-、-(c＝o)-nh-、-nh-(c＝o)-、-(c＝o)-o-、-nh-(c＝o)-nh-或
–
nh-(so2)-与r1连接。
[0217]
在一个实施方案中，l2通过-o-与r2连接。
[0218]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0219][0220]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0221][0222]
和其盐。
[0223]
在一个实施方案中，l2是-ch
2-o-或-ch
2-ch
2-o-。
[0224]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式ia：
[0225][0226]
其中：
[0227]
每一d彼此独立地选自由和
–
n＝组成的群组；
[0228]
或其盐。
[0229]
在一个实施方案中，式ia化合物选自由以下各项组成的群组：
[0230][0231]
其中：
[0232]
q1是氢，并且q2是r2；或q1是r2并且q2是氢；
[0233]
z是-l
1-r1；
[0234]
和其盐。
[0235]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式ib：
[0236][0237]
其中：
[0238]
每一d彼此独立地选自由和
–
n＝组成的群组；
[0239]
每一m独立地为1或2；或其盐。
[0240]
在一个实施方案中，式ib化合物选自由以下各项组成的群组：
[0241][0242]
其中：
[0243]
q1是氢，并且q2是r2；或q1是r2并且q2是氢；
[0244]
z是
–
l
1-r1；
[0245]
和其盐。
[0246]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式(ic)：
[0247][0248]
其中e是-o-或-ch
2-；
[0249]
n选自由0、1、2、3和4组成的群组；并且
[0250]
n1和n2各自独立地选自由0、1、2和3组成的群组；
[0251]
或其盐。
[0252]
在某些实施方案中，式(ic)化合物选自由以下各项组成的群组：
[0253][0254]
其中z是-l
1-r1；
[0255]
和其盐。
[0256]
在一个实施方案中，-a-l
2-r2部分是：
[0257][0258]
其中：
[0259]
q1是氢，并且q2是r2；或q1是r2并且q2是氢；并且
[0260]
每一q独立地为0、1、2、3、4或5；
[0261]
或其盐。
[0262]
在一个实施方案中，式(i)化合物选自由以下各项组成的群组：
[0263][0264]
和其盐。
[0265]
在一个实施方案中，r1选自由以下各项组成的群组：
[0266][0267]
其中rs是
[0268]
n为2、3或4；
[0269]
x为1或2。
[0270]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0271]
[0272]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0273][0274]
在一个实施方案中，a不存在，为苯基、吡咯烷基或环戊基。
[0275]
在一个实施方案中，l2是任选地被羟基取代的c
1-4
亚烷基-o-。
[0276]
在一个实施方案中，l2是
–
ch2o-、-ch2ch2o-或-ch(oh)ch2o-。
[0277]
在一个实施方案中，每一ra独立地是羟基或任选地被羟基取代的c
1-8
烷基。
[0278]
在一个实施方案中，每一ra独立地选自由羟基、甲基和
–
ch2oh组成的群组。
[0279]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式(ig)：
[0280][0281]
其中b是-n-或-ch-；
[0282]
l1不存在或是-nh-；
[0283]
l2是任选地被羟基或卤基取代的c
1-4
亚烷基-o-；
[0284]
n为0、1或2；
[0285]
或其盐。
[0286]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式(ig)：
[0287]
[0288]
其中b是-n-或-ch-；
[0289]
l1不存在或是-nh-；
[0290]
l2是任选地被羟基或卤基取代的c
1-4
亚烷基-o-；
[0291]
n为0、1、2、3、4、5、6或7；
[0292]
或其盐。
[0293]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式(ig)：
[0294][0295]
其中b是-n-或-ch-；
[0296]
l1不存在或是-nh-；
[0297]
l2是任选地被羟基或卤基取代的c
1-4
亚烷基-o-；
[0298]
n为0、1、2、3或4；
[0299]
或其盐。
[0300]
在一个实施方案中，式ig化合物选自由以下各项组成的群组：
[0301][0302]
其中r'是c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基；其中c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基任选地被卤基或羟基取代；
[0303]
和其盐。
[0304]
在一个实施方案中，式i化合物选自由以下各项组成的群组：
[0305][0306]
和其盐。
[0307]
在一个实施方案中，式i化合物或其盐选自由以下各项组成的群组：
[0308]
[0309]
[0310]
[0311]
[0312][0313]
在一个实施方案中，式i化合物或其盐选自由以下各项组成的群组：
[0314]
[0315]
[0316]
[0317]
[0318][0319]
或其药学上可接受的盐，其中r2是选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子。
[0320]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0321][0322]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0323]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0324][0325]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0326]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0327][0328]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0329]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0330][0331]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0332]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0333][0334]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0335]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0336][0337]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0338]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0339][0340]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0341]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0342][0343]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0344]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0345][0346]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0347]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0348][0349]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0350]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0351][0352]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0353]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0354][0355]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0356]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0357][0358]
或其药学上可接受的盐，其中r2是双链sirna分子(例如选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子)。
[0359]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0360][0361]
其中sirna选自sirna 1-sirna 28，或其药学上可接受的盐。
[0362]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0363][0364]
其中sirna选自sirna 1-sirna 28，或其药学上可接受的盐。
[0365]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0366][0367]
其中sirna选自sirna 1-sirna 28，或其药学上可接受的盐。
[0368]
在一个实施方案中，式i化合物是：
[0369][0370]
其中sirna选自sirna 1-sirna 28，或其药学上可接受的盐。
[0371]
一个实施方案提供了式(i)化合物：
[0372][0373]
其中：
[0374]
l1不存在或为连接基团；
[0375]
l2不存在或为连接基团；
[0376]
r2是核酸；
[0377]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0378]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0379]
rb是氢、保护基团、与固体支持物的共价键、或与结合到固体支持物的连接基团的键；并且
[0380]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
[0381]
或其盐。
[0382]
一个实施方案提供了下式化合物：
[0383][0384]
其中：
[0385]
l2不存在或为连接基团；
[0386]
r2是核酸；
[0387]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0388]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0389]
rb是氢、保护基团、与固体支持物的共价键、或与结合到固体支持物的连接基团的键；并且
[0390]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
[0391]
或其盐。
[0392]
一个实施方案提供了下式化合物：
[0393][0394]
其中：
[0395]
l1不存在或为连接基团；
[0396]
l2不存在或为连接基团；
[0397]
r2是核酸；
[0398]
b是二价的并且选自由以下各项组成的群组：
[0399][0400]
其中：
[0401]
每一r'独立地是c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基；其中c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基任选地被卤基或羟基取代；
[0402]
如果l1不存在，则标有*的化合价连接到l1或连接到r1；并且
[0403]
如果l2不存在，则标有**的化合价连接到l2或连接到r2；
[0404]
或其盐。
[0405]
在一个实施方案中，l1和l2独立地是具有1至50个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个选自以下各项的取代基取代：(c1-c6)烷氧基、(c3-c6)环烷基、(c1-c6)烷酰基、(c1-c6)烷酰氧基、(c1-c6)烷氧基羰基、(c1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0406]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0407][0408]
或其盐。
[0409]
在一个实施方案中，l1通过选自由以下各项组成的群组的连键连接到b1：-o-、-s-、-(c＝o)-、-(c＝o)-nh-、-nh-(c＝o)、-(c＝o)-o-、-nh-(c＝o)-nh-或-nh-(so2)-。
[0410]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0411][0412][0413]
在一个实施方案中，l2通过-o-与r2连接。
[0414]
在一个实施方案中，l2是任选地被羟基取代的c
1-4
亚烷基-o-。
[0415]
在一个实施方案中，l2不存在。
[0416]
一个实施方案提供了一种化合物，
[0417][0418]
或其盐，其中r2是核酸。
[0419]
一个方面是包含式i化合物或其药学上可接受的载体的药物组合物。
[0420]
另一方面是将双链sirna递送到动物的肝的方法，所述方法包括向动物施用式i化合物或其药学上可接受的盐。
[0421]
另一方面是治疗动物的疾病或病症(例如肝病或病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)的方法，所述方法包括向动物施用式i化合物或其药学上可接受的盐。
[0422]
某些实施方案提供了式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学疗法中。
[0423]
某些实施方案提供了式(i)化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防性治疗或治疗性治疗动物的疾病或病症(例如肝病或病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)。
[0424]
某些实施方案提供了式(i)化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗动物的疾病或病症(例如肝病或病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)的药剂的用途。
[0425]
在某些实施方案中，动物是哺乳动物，例如人。
[0426]
在一个实施方案中，式i化合物具有下式(id)：
[0427][0428]
其中：
[0429]r1d
选自：
[0430][0431]
和
[0432][0433]
xd是c
2-10
亚烷基；
[0434]
nd为0或1；
[0435]r2d
是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子；并且
[0436]r3d
是h、保护基团、与固体支持物的共价键或与结合到固体支持物的连接基团的键。
[0437]
在一个实施方案中，r
3d
包括将式id化合物的其余部分接合到固体支持物的连接基团。连接基团的性质不是关键的，只要化合物是用于制备式id化合物的合适中间体，其中r
2d
是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子。
[0438]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头具有约20道尔顿至约1,000道尔顿的分子量。
[0439]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头具有约20道尔顿至约500道尔顿的分子量。
[0440]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头将固体支持物与式i化合物的其余部分分开约5埃至约40埃(包括端点)的长度。
[0441]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头是具有2至15个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被(-o-)或(-n(h)-)置
换，并且其中链任选地在碳上被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0442]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头是具有2至10个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被(-o-)或(-n(h)-)置换，并且其中链任选地在碳上被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0443]
在一个实施方案中，r
3d
中的接头是
–
c(＝o)ch2ch2c(＝o)n(h)-。
[0444]
在一个实施方案中，r
1d
是：
[0445][0446]
在一个实施方案中，r
1d
是：
[0447][0448]
在一个实施方案中，xd是c8亚烷基。
[0449]
在一个实施方案中，nd为0。
[0450]
在一个实施方案中，r
2d
是sirna。
[0451]
在一个实施方案中，r
3d
是h。
[0452]
在另一个实施方案中，(id)的化合物或其盐选自由以下各项组成的群组：
[0453][0454][0455]
和其盐。
[0456]
一个方面是包含式(id)化合物或其药学上可接受的载体的药物组合物。
[0457]
一个方面是将双链sirna递送到动物的肝的方法，所述方法包括向动物施用式(id)化合物或其药学上可接受的盐。
[0458]
另一方面是治疗动物的疾病或病症(例如病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)的方法，所述方法包括向动物施用式(id)化合物或其药学上可接受的盐。
[0459]
某些实施方案提供了式(id)化合物或其药学上可接受的盐，其用于医学疗法中。
[0460]
某些实施方案提供了式(id)化合物或其药学上可接受的盐，其用于预防性治疗或治疗性治疗动物的疾病或病症(例如病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)。
[0461]
某些实施方案提供了式(id)化合物或其药学上可接受的盐用于制备用于治疗动
物的疾病或病症(例如病毒感染，例如b型肝炎病毒感染)的药剂的用途。
[0462]
在某些实施方案中，动物是哺乳动物，例如人。
[0463]
还提供了制备如本文所述的式(id)化合物的方法，所述方法包括使相应的式(ie)化合物经受固相核酸合成条件以提供相应的式id化合物：
[0464][0465]
其中：
[0466]
xd是c
2-8
亚烷基；
[0467]
nd为0或1；
[0468]
pg1是h；并且
[0469]r3d
是与固体支持物的共价键或与结合到固体支持物的连接基团的键，与提供相应式id化合物的固相核酸合成条件，其中r
2d
是选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子。
[0470]
在一个实施方案中，所述方法进一步包括从固体支持物上去除化合物以提供相应的式id化合物，其中r
3d
是h。
[0471]
在一个实施方案中，化合物不是式ie化合物：
[0472][0473]
或其盐，其中：
[0474]r1d
选自：
[0475][0476]
xd是c
2-8
亚烷基；
[0477]
nd为0或1；
[0478]
pg1是h或合适的保护基团；并且
[0479]r3d
是h、保护基团、与固体支持物的共价键或与结合到固体支持物的连接基团的键。
[0480]
在一个实施方案中，r
3d
是h。
[0481]
在一个实施方案中，r
3d
是与固体支持物的共价键。
[0482]
在一个实施方案中，r
3d
是与结合到固体支持物的连接基团的键，其中连接基团是具有2至15个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被(-o-)或(-n(h)-)置换，并且其中链任选地在碳上被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0483]
在一个实施方案中，r
3d
是与结合到固体支持物的连接基团的键，其中连接基团是
具有2至10个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被(-o-)或(-n(h)-)置换，并且其中链任选地在碳上被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c
1-c6)烷氧基、(c
3-c6)环烷基、(c
1-c6)烷酰基、(c
1-c6)烷酰氧基、(c
1-c6)烷氧基羰基、(c
1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0484]
在一个实施方案中，r
3d
是与结合到固体支持物的连接基团的键，其中连接基团是
–
c(＝o)ch2ch2c(＝o)n(h)-。
[0485]
一个实施方案提供了式(i)化合物：
[0486][0487]
其中：
[0488]
r1是h或合成活化基团；
[0489]
l1不存在或为连接基团；
[0490]
l2不存在或为连接基团；
[0491]
r2是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子；
[0492]
环a不存在，为3-20元环烷基、5-20元芳基、5-20元杂芳基或3-20元杂环烷基；
[0493]
每一ra独立地选自由以下各项组成的群组：氢、羟基、cn、f、cl、br、i、-c
1-2
烷基-orb、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个独立地选自卤基、羟基和c
1-3
烷氧基的基团取代；
[0494]
rb是氢、保护基团、与固体支持物的共价键、或与结合到固体支持物的连接基团的键；并且
[0495]
n为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
[0496]
或其盐。
[0497]
一个实施方案提供了式(ig)化合物：
[0498][0499]
其中：
[0500]
b是-n-或-ch-；
[0501]
l2是任选地被羟基或卤基取代的c
1-4
亚烷基-o-；并且
[0502]
n为0、1、2、3、4、5、6或7；
[0503]
或其盐。
[0504]
一个实施方案提供了一种选自由以下各项组成的群组的化合物：
[0505][0506]
其中：
[0507]
q是
–
l
1-r1；并且
[0508]
r'是c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基；其中c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基任选地被卤基或羟基取代；
[0509]
和其盐。
[0510]
一个实施方案提供了一种选自由以下各项组成的群组的化合物：
[0511][0512]
其中：q是
–
l
1-r1；和其盐。
[0513]
在一个实施方案中，l1是具有5至20个碳原子的二价、支链或非支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nh-、-nh-c(＝o)-、-c(＝o)-nh-或
–
s-置换。
[0514]
一个实施方案提供了式(xx)化合物：
[0515][0516]
其中：
[0517]
r1是靶向配体；
[0518]
l1不存在或为连接基团；
[0519]
l2不存在或为连接基团；
[0520]
r2是选自表1和表2的双链sirna的双链sirna分子；
[0521]
b是二价的并且选自由以下各项组成的群组：
[0522][0523]
其中：
[0524]
每一r'独立地是c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基；其中c
1-9
烷基、c
2-9
烯基或c
2-9
炔基任选地被卤基或羟基取代；
[0525]
如果l1不存在，则标有*的化合价连接到l1或连接到r1；并且
[0526]
如果l2不存在，则标有**的化合价连接到l2或连接到r2；
[0527]
或其盐。
[0528]
在一个实施方案中，r1包含2-8个糖。
[0529]
在一个实施方案中，r1包含2-6个糖。
[0530]
在一个实施方案中，r1包含2-4个糖。
[0531]
在一个实施方案中，r1包含3-8个糖。
[0532]
在一个实施方案中，r1包含3-6个糖。
[0533]
在一个实施方案中，r1包含3-4个糖。
[0534]
在一个实施方案中，r1包含3个糖。
[0535]
在一个实施方案中，r1包含4个糖。
[0536]
在一个实施方案中，r1具有下式：
[0537][0538]
其中：
[0539]
b1是包含约1至约20个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0540]
b2是包含约1至约20个原子的三价基团并且与t1、t3和t4共价键合。
[0541]
b3是包含约1至约20个原子的三价基团并且与t2、t5和t6共价键合。
[0542]
t1不存在或为连接基团；
[0543]
t2不存在或为连接基团；
[0544]
t3不存在或为连接基团；
[0545]
t4不存在或为连接基团；
[0546]
t5不存在或为连接基团；并且
[0547]
t6不存在或为连接基团
[0548]
在一个实施方案中，每一糖独立地选自：
[0549][0550]
其中：
[0551]
x是nr3，并且y选自-(c＝o)r4、-so2r5和-(c＝o)nr6r7；或x是-(c＝o)-并且y是nr8r9；
[0552]
r3是氢或(c
1-c4)烷基；
[0553]
r4、r5、r6、r7、r8和r9各自独立地选自由以下各项组成的群组：氢、(c
1-c8)烷基、(c
1-c8)卤代烷基、(c
1-c8)烷氧基和(c
3-c6)环烷基，所述(c
3-c6)环烷基任选地被一个或多个独立地选自由卤基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代；
[0554]r10
是-oh、-nr8r9或-f；并且
[0555]r11
是-oh、-nr8r9、-f或5元杂环，所述5元杂环任选地被一个或多个独立地选自由卤基、羟基、羧基、氨基、(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)卤代烷基、(c
1-c4)烷氧基和(c
1-c4)卤代烷氧基组成的群组的基团取代。
[0556]
在一个实施方案中，每一糖独立地选自由以下各项组成的群组：
[0557][0558]
在一个实施方案中，每一糖独立地是：
[0559][0560]
在一个实施方案中，t1和t2中的一者不存在。
[0561]
在一个实施方案中，t1和t2二者均不存在。
[0562]
在一个实施方案中，t1、t2、t3、t4、t5和t6中的每一者独立地不存在或是具有1至50个碳原子的支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或
–
s-置换，并且其中r
x
是氢或(c1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c1-c6)烷氧基、(c3-c6)环烷基、(c1-c6)烷酰基、(c1-c6)烷酰氧基、(c1-c6)烷氧基羰基、(c1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0563]
在一个实施方案中，t1、t2、t3、t4、t5和t6中的每一者独立地不存在或是具有1至20个碳原子的支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或
–
s-置换，并且其中r
x
是氢或(c1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c1-c6)烷氧基、(c3-c6)环烷基、(c1-c6)烷酰基、(c1-c6)烷酰氧基、(c1-c6)烷氧基羰基、(c1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0564]
在一个实施方案中，t1、t2、t3、t4、t5和t6中的每一者独立地不存在或是具有1至50个碳原子的支链或无支链、饱和或不饱和烃链，或其盐，其中烃链中的一个或多个(例如1、
2、3或4个)碳原子任选地被-o-或-nr
x-置换，并且其中r
x
是氢或(c
1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代基(＝o)的取代基取代。
[0565]
在一个实施方案中，t1、t2、t3、t4、t5和t6中的每一者独立地不存在或是具有1至20个碳原子的支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被-o-置换，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代基(＝o)的取代基取代。
[0566]
在一个实施方案中，t1、t2、t3、t4、t5和t6中的每一者独立地不存在或是具有1至20个碳原子的支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被-o-置换，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自卤基、羟基和氧代基(＝o)的取代基取代。
[0567]
在一个实施方案中，t3、t4、t5和t6中的至少一者是：
[0568][0569]
其中：
[0570]
n＝1、2、3。
[0571]
在一个实施方案中，t3、t4、t5和t6中的每一者独立地选自由以下各项组成的群组：
[0572][0573]
其中：
[0574]
n＝1、2、3。
[0575]
在一个实施方案中，t1和t2中的至少一者是甘氨酸
[0576]
在一个实施方案中，t1和t2中的每一者均是甘氨酸。
[0577]
在一个实施方案中，b1是包含1至15个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0578]
在一个实施方案中，b1是包含1至10个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0579]
在一个实施方案中，b1包含(c
1-c6)烷基。
[0580]
在一个实施方案中，b1包含c
3-8
环烷基。
[0581]
在一个实施方案中，b1包含甲硅烷基。
[0582]
在一个实施方案中，b1包含d-氨基酸或l-氨基酸。
[0583]
在一个实施方案中，b1包含糖。
[0584]
在一个实施方案中，b1包含磷酸基团。
[0585]
在一个实施方案中，b1包含膦酸基团。
[0586]
在一个实施方案中，b1包含芳基。
[0587]
在一个实施方案中，b1包含苯环。
[0588]
在一个实施方案中，b1是苯环。
[0589]
在一个实施方案中，b1是ch。
[0590]
在一个实施方案中，b1包含杂芳基。
[0591]
在一个实施方案中，b1选自由以下各项组成的群组：
[0592][0593]
在一个实施方案中，b1选自由以下各项组成的群组：
[0594][0595]
在一个实施方案中，b2是包含1至15个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0596]
在一个实施方案中，b2是包含1至10个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0597]
在一个实施方案中，b2包含(c
1-c6)烷基
[0598]
在一个实施方案中，b2包含c
3-8
环烷基。
[0599]
在一个实施方案中，b2包含甲硅烷基。
[0600]
在一个实施方案中，b2包含d-氨基酸或l-氨基酸。
[0601]
在一个实施方案中，b2包含糖。
[0602]
在一个实施方案中，b2包含磷酸基团。
[0603]
在一个实施方案中，b2包含膦酸基团。
[0604]
在一个实施方案中，b2包含芳基。
[0605]
在一个实施方案中，b2包含苯环。
[0606]
在一个实施方案中，b2是苯环。
[0607]
在一个实施方案中，b2是ch。
[0608]
在一个实施方案中，b2包含杂芳基。
[0609]
在一个实施方案中，b2选自由以下各项组成的群组：
[0610][0611]
在一个实施方案中，b2选自由以下各项组成的群组：
[0612][0613]
或其盐。
[0614]
在一个实施方案中，b3是包含1至15个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0615]
在一个实施方案中，b3是包含1至10个原子的三价基团并且与l1、t1和t2共价键合。
[0616]
在一个实施方案中，b3包含(c
1-c6)烷基。
[0617]
在一个实施方案中，b3包含c
3-8
环烷基。
[0618]
在一个实施方案中，b3包含甲硅烷基。
[0619]
在一个实施方案中，b3包含d-氨基酸或l-氨基酸。
[0620]
在一个实施方案中，b3包含糖。
[0621]
在一个实施方案中，b3包含磷酸基团。
[0622]
在一个实施方案中，b3包含膦酸基团。
[0623]
在一个实施方案中，b3包含芳基。
[0624]
在一个实施方案中，b3包含苯环。
[0625]
在一个实施方案中，b3是苯环。
[0626]
在一个实施方案中，b3是ch。
[0627]
在一个实施方案中，b3包含杂芳基。
[0628]
在一个实施方案中，b3选自由以下各项组成的群组：
[0629][0630]
在一个实施方案中，b3选自由以下各项组成的群组：
[0631][0632]
或其盐。
[0633]
在一个实施方案中，l1和l2独立地是具有1至50个碳原子的二价、支链或无支链、饱和或不饱和烃链，其中烃链中的一个或多个(例如1、2、3或4个)碳原子任选地被
–
o-、-nr
x-、-nr
x-c(＝o)-、-c(＝o)-nr
x-或-s-置换，并且其中r
x
是氢或(c1-c6)烷基，并且其中烃链任选地被一个或多个(例如1、2、3或4个)选自以下各项的取代基取代：(c1-c6)烷氧基、(c3-c6)环烷基、(c1-c6)烷酰基、(c1-c6)烷酰氧基、(c1-c6)烷氧基羰基、(c1-c6)烷硫基、叠氮基、氰基、硝基、卤基、羟基、氧代基(＝o)、羧基、芳基、芳氧基、杂芳基和杂芳氧基。
[0634]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0635][0636]
或其盐。
[0637]
在一个实施方案中，l1通过选自由以下各项组成的群组的连键连接到b1：-o-、-s-、-(c＝o)-、-(c＝o)-nh-、-nh-(c＝o)、-(c＝o)-o-、-nh-(c＝o)-nh-或-nh-(so2)-。
[0638]
在一个实施方案中，l1选自由以下各项组成的群组：
[0639][0640]
在一个实施方案中，l2通过-o-与r2连接。
[0641]
在一个实施方案中，l2是任选地被羟基取代的c
1-4
亚烷基-o-。
[0642]
在一个实施方案中，l2通过-o-与r2连接。
[0643]
在一个实施方案中，l2不存在。
[0644]
一个实施方案提供了一种选自由以下各项组成的群组的化合物或盐：
[0645]
[0646]
[0647]
[0648][0649]
和其药学上可接受的盐，其中r2是选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子。
[0650]
一个实施方案提供了下式化合物：
[0651][0652]
或其盐，其中r2是核酸。
[0653]
一个实施方案提供了下式化合物：
[0654][0655]
或其盐，其中r2是核酸。
[0656]
在一个实施方案中，核酸分子(例如，sirna)通过有义链的3'端的磷酸的氧连接到化合物的其余部分。
[0657]
在一个实施方案中，化合物或盐是皮下施用的。
[0658]
当化合物包含下式的基团时：
[0659][0660]
环上可能有四种立体异构体，两种顺式和两种反式。除非另有说明，否则化合物包括关于这种环的所有四种立体异构体。在一个实施方案中，两个r'基团呈顺式构象。在一个实施方案中，两个r'基团呈反式构象。
[0661]
一个方面是包含以下的核酸-脂质颗粒：
[0662]
(a)选自表1和表2的双链sirna分子的双链sirna分子；
[0663]
(b)阳离子脂质；和
[0664]
(c)非阳离子脂质。
[0665]
实施例
[0666]
将通过具体实施例来更详细地描述本发明。下列实施例是出于说明目的而提供，且不意图以任何方式限制本发明。本领域技术人员将很容易地认识到，可改变或修改各种非关键性参数以产生基本上相同的结果。应理解，在一个实施方案中，寡核苷酸是如表1或表2中所述的双链sirna分子。
[0667]
细胞培养和直接孵育：
[0668]
将从primacyt(schwerin,germany)获得的原代人肝细胞根据制造商的说明进行解冻、铺板和培养。使细胞在37℃下在具有5％co2的气氛中在加湿孵育箱中生长。
[0669]
对于与galnac-sirna缀合物的直接孵育，原代人肝细胞通常以90,000个细胞/孔的密度接种在96孔板中，总体积为90μl平铺培养基。标准剂量反应筛选实验(例如对于galnac-hsghr sirna)是以5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125、0.0390625、
0.01953125和0.0097656525μm的最终sirna浓度进行。对照孔或者仅用培养基处理，或者直接与靶向galnac-hsapoc3的sirna一起孵育。在平板培养基中稀释寡核苷酸原液，将10μl体积的稀释的寡核苷酸加入90μl细胞悬浮液中。处理后5小时，小心去除细胞培养上清液，之后加入50μl完全生长培养基。处理后24小时再次更换培养基，之后在37℃/5％co2下在加湿孵育箱中将细胞再孵育24小时。
[0670]
分支dna测定quantigene 2.0
[0671]
48小时孵育的总时段后，去除培养基并在150μl裂解混合物(1体积的quantigene提供的裂解混合物，2体积的无核酸酶水)中裂解细胞，然后在53℃下孵育60分钟。然后将90μl工作探针组hsghr(基因靶标)、80μl工作探针组hsapoc3(通过无唾液酸糖蛋白受体摄取的阳性对照)和90μl工作探针组gapdh(内源性对照)和20μl或10μl细胞裂解物加入捕获板中，得到每孔100μl的总体积。对于所有样品，将密封捕获板在53℃下孵育(约16-20小时)。第二天，用至少300μl的1x洗涤缓冲液(无核酸酶水、缓冲液组分1和洗涤缓冲液组分2)洗涤捕获板3次。最后一次洗涤后，将板倒置并用干净的纸巾吸干。将100μl预扩增工作试剂加入hsghr和hsapoc3捕获板中，用铝箔密封并在53℃下孵育1小时。孵育1小时后，重复洗涤步骤，然后将100μl扩增工作试剂加入hsghr、hsapoc3和hsgapdh捕获板中。在53℃下孵育1小时后，重复洗涤和干燥步骤，并添加100μl label探针。捕获板在53℃下孵育1小时。然后用1x洗涤缓冲液洗涤板并干燥，然后将100μl底物加入捕获板中。在黑暗中孵育30分钟后，使用1420发光计数器(luminescence counter)(wallac victor light,perkin elmer,rodgau-j
ü
gesheim,germany)读取发光。
[0672]
bdna数据分析
[0673]
对于每一hsghr sirna或hsapoc3对照sirna或仅培养基处理，平行孵育四个孔，并从每一孔收集个别数据点。对于每一孔，将hsghr(或hsapoc3)mrna水平标准化为hsgapdh mrna水平。给定hsghr(或hsapoc3)sirna的活性表示为经处理细胞中hsghr(或hsapoc3)mrna浓度(标准化为hsgapdh mrna)相对于各对照孔间的平均hsghr(或hsapoc3)mrna浓度(标准化为hsgapdh mrna)的百分比。
[0674]
缀合物
[0675]
如本文所述，可在本发明的实践中使用各种缀合物。对于本文的实施例1-3，使用以下缀合物。可用于本文所述的sirna分子的其他缀合物描述于wo 2017/177326(pct/ca2017/050447)和wo 2018/191278(pct/us2018/026918)中，其公开内容均各自以引用的方式并入。
[0676][0677]
sirna序列
[0678]
本实施例中使用的sirna序列绘示于表1和表2中。
[0679]
实施例1.
[0680]
如图1中所绘示，评估phh中24种galnac缀合的sirna的剂量反应(sirna 1-sirna 24)。将增加浓度的每一sirna与原代人肝细胞一起孵育48小时，其中递送具有galnac依赖性。通过qpcr分析ghr mrna。
[0681]
实施例2.
[0682]
如图2中所绘示，测量单剂量的靶向ghr的候选物后的肝损伤标记。雄性大鼠接受20mg/kg或60mg/kg的指示sirna的单次皮下注射。在给药后14天分析肝损伤的血清标记。
[0683]
实施例3.
[0684]
如图3中所绘示，测量单次施用sirna后nhp中的ghr mrna减少。向食蟹猴皮下施用指示剂量的每一临床候选物。给药后14天，进行肝活检并通过qpcr分析ghr mrna水平。