一种卡拉胶寡糖涂膜结合LED复合光照与气调协同的叶菜保鲜方法与流程

一种卡拉胶寡糖涂膜结合led复合光照与气调协同的叶菜保鲜方法
技术领域
1.本发明属于果蔬保鲜技术领域，具体涉及一种卡拉胶寡糖涂膜结合led复合光照与气调协同的叶菜保鲜方法。


背景技术：

2.叶菜由于富含丰富的维生素、矿物质和抗氧化活性物，早在六千年前就开始被种植并出现在人们的餐桌上，受到广大消费者的青睐。然而，绿色叶菜往往因为其较大的叶片面积而失水迅速，出现保质期短、黄化褐变等问题。并且随着储藏时间的推移，淀粉等营养物质会逐渐分解，使果菜口感和营养价值显著降低。不利的储藏环境会加快叶菜的呼吸速率与蒸腾作用，加快叶绿素降解，提高褐变酶活性从而促使醌生成与积累，这使得储藏期间的叶菜的化学、感官和微生物等特性加速恶化，保质期大大缩短。因此，必须尽可能地探索有效的保鲜技术以维持叶菜的感官品质和营养价值。
3.谢晶等(2016)公开了“一种气调保鲜荠菜的方法”(公开号：cn 105746686a)，该方法将2～4℃预冷后的新鲜荠菜包装在10～20℃、湿度60～80％的环境中，真空包装袋中的气体按体积分配，co2比例为5～15％、o2比例为1～15％、o3比例为1～5％、n2比例为65～93％，包装后的荠菜在常温下的储藏期延长了27天，菜叶颜色与硬度依旧保持良好，但臭氧比例过低，后期会造成氧气浓度的大幅度升高从而不利于叶菜保藏。
4.宋丽丽等(公开号：cn 101243808a)在2008年公开了一种抑制净菜茭白木纤化的储藏保鲜方法，15～25℃下将采收处理后的茭白置于密封容器中用1-甲基环丙烯气体熏蒸12～24小时，再用聚乙烯袋包装在高湿度环境中储藏，35天后茭白仍能保持组织细嫩的状态，纤维素含量被抑制。但该方法熏蒸所需时间长(24h)，且有碱液的参与(naoh、koh)，叶片面积大的绿色叶菜并不适用于此法。
5.傅达奇等(2014年)公开了一种草莓的气调保鲜方法(公开号：cn 104068103a)。该方法将预冷后的草莓放入臭氧浓度80％，氧气浓度19.2％，二氧化碳浓度0.8％的气调保鲜箱中储藏18天。草莓的腐烂率显著降低，有机酸含量高于对照组。但是该方法所用臭氧浓度较高，并一直维持在固定值，成本较高且可能对人体造成损害。
6.吴健等(2015)公开了一种基于led脉冲光的蔬果保鲜方法(公开号：cn 105123892a)。该方法有四个发光步骤，涉及红光、橙光、蓝光、紫光和远红光，利用不同的闪烁频次和停顿时间形成组合光信号，维持蔬果的新鲜状态。但50～100次的时长0.01～0.03秒的光照闪烁对调制器要求较高，与低温环境的共存不一定能够实现。
7.王玲等(申请公布号：cn 112913911a)公开了一种迟菜心的保鲜包装方法，该方法采用10～30％浓度的杀菌溶液对迟菜心基部进行消毒，将预冷后的菜心用具有自发气调功能的低密度聚乙烯膜包装进行led照射，再放于泡沫箱中保存。led光照处理为430～450nm蓝光先照射10～20分钟，再用680～720nm红光照射5～10分钟，有效缓解了水分蒸腾和茎部空心品质劣变，同时在不使用化学保鲜剂的情况下实现了微生物活性的抑制。该方法所用
样品为切割特定部位的迟菜心，采用了杀菌溶液来干涉微生物生长，此外光照只是作为预处理施加在叶菜储藏过程前，20℃环境中保质期只被延长至4天。
8.李宁等人对西兰花保鲜效果的研究(“led复合光处理对西兰花低温保鲜效果的影响”)证明了400lx强度的led红蓝复合光12小时间歇照射能够减少西兰花的呼吸消耗，抑制多糖果胶等大分子物质的降解，延长西兰花储藏时间至50天。该研究中所采用的红蓝及红绿复合光是对西兰花相对有效的光源颜色，并不完全适配叶菜的保鲜。
9.谢晶等(申请公布号：cn 111520954 a)公开了一种led光照保鲜冰箱及保鲜方法，能够通过触摸显示屏选择所储蔬菜的种类，使冰箱单片机控制灯带作出相应的颜色和光照时间响应。但方法中所述灯带为单色灯带，达到的保鲜效果不及复合光照射，并且不同果蔬储藏适配的最佳光照参数相差极大，尚无足够的试验来支撑一套完备的编程算法数据。
10.时月等人研究led光照对鲜切生菜的影响(“led光照处理对鲜切生菜品质和风味的影响”)，证明了用次氯酸钠溶液浸泡后的生菜叶片，被红光照射后拥有更高的抗氧化能力和vc含量，红光、白光和绿光更好地维持了叶片的初始颜色和叶绿素含量。即使用透明聚乙烯袋进行了包装，光照仍然加速了叶菜的失水状况。


技术实现要素：

11.本发明的目的是提供一种卡拉胶寡糖涂膜联合led复合光照与气调协同的叶菜保鲜方法。本发明通过卡拉胶寡糖涂膜与红、白、琥珀色led复合照射技术联合气调包装来抑制新鲜叶菜黄化褐变和呼吸作用，并在低温高湿环境中贮藏。通过此联合技术能提升抗菌活性、延长光合作用，抑制叶菜的衰老进程和褐变有关酶类的活性效果优于单一处理，更长时间地维持营养物质及感官品质，提升抗氧化能力，延长货架期。
12.本发明的技术方案：
13.一种卡拉胶寡糖涂膜联合led复合光照与气调协同的叶菜保鲜方法，其步骤为：
14.(1)叶菜分选：选择成熟度80～90％、无萎蔫黄化、无机械损伤、无虫蛀的新鲜叶菜；
15.(2)卡拉胶寡糖溶液制备：用分子质量小于3000d的食品级卡拉胶寡糖配制卡拉胶寡糖溶液；
16.(3)涂膜：将步骤(1)挑选出的叶菜置于步骤(2)配制好的卡拉胶寡糖溶液中浸泡后取出并晾干；
17.(4)聚乙烯薄膜包装：将步骤(3)晾干后的叶菜放入聚乙烯薄膜包装袋中，进行薄膜包装；
18.(5)气调包装：对步骤(4)薄膜包装的叶菜用气调包装机充入气体后，用热封机封口；
19.(6)led光照储藏：将步骤(5)包装好的叶菜采用复合led光照射，复合led光包括红色led光、白色led光与琥珀色led光。
20.所述步骤(2)中卡拉胶寡糖溶液的浓度为10-15mg/ml。
21.所述步骤(5)中气调包装机充入气体的体积比例在前30天为o3:15％～25％、o2:1％～5％、co2:70％～84％，三者总体积比为100％；后15天重新装袋，气体比例为o2:3％～6％、co2:5％～10％、n2:84％～92％，三者总体积比为100％。
22.所述步骤(6)中复合led光采用复合led灯板实现，所述复合led灯板的红灯珠个数占比为50％～70％，白灯珠个数占比为15％～20％，琥珀色灯珠个数占比为10％～30％，红灯珠、白灯珠与琥珀色灯珠占比之和为100％。以上所述琥珀色灯珠由铟镓氮蓝色led灯珠配以琥珀色和红色荧光粉封装后所得。
23.所述步骤(6)中照射过程中储藏环境温度为4
±
1℃，相对湿度为90
±
4％rh，每天垂直照射8～12小时
24.步骤(6)中白色led光的白色光波峰为440nm和540nm，红色led光的红色光波峰为660nm，琥珀色光波峰为625-640nm，复合led光的光照强度为25～35μmol m-2
s-1
，色温为1700-2700k。
25.所述led复合光照的复合led灯板可以设置为：
26.(1)制备led灯板：led灯板尺寸为4
×
100cm，灯板上设两排灯珠，红色、白色、琥珀色灯珠均匀交替设置。每个灯板下水平放置4包叶菜，光为垂直照射；
27.(2)设置led参数：白色光波峰为440nm和540nm，红色光波峰为660nm，琥珀色光波峰为625-640nm，复合光照强度为25～35μmol m-2
s-1
。
28.所述步骤(4)中聚乙烯膜包装袋的大小为250mm
×
400mm，厚度为45-μm。
29.所述步骤(4)中聚乙烯膜包装袋的聚乙烯膜在22
±
1℃和90
±
4％相对湿度下对氧气、二氧化碳和水蒸气的渗透率为0.020-0.025ml m-2
d-1
atm-1
，0.070-0.075ml m-2
d-1
atm-1
和5.40-5.50g mm m-2
d-1
atm-1
。
30.所述步骤(4)中包装袋的密度为0.89g/cm3～0.92g/cm3。
31.所述步骤(5)中气调包装机装袋过程中先抽真空，再充入混合气体。
32.步骤(1)中叶菜指采摘后经简单清除异物、未经任何理化处理的叶菜。
33.本发明提供的叶菜保鲜方法中，气调包装中的臭氧成分起到了有效的灭菌作用，弥补了气调本身易产生厌氧菌的缺点，而卡拉胶寡糖的天然抗菌性加大了抗菌效果，使叶片从内部隔绝菌体繁殖；气调包装中恰当浓度的二氧化碳提高了卡拉胶寡糖膜的二氧化碳透过率，使得叶菜的呼吸速率相较于单一涂膜处理进一步降低；光照能够通过调控相关基因的表达，有效维持甚至提高叶绿素和抗坏血酸的含量，与气调和涂膜联合能够降低失水率，相互弥补缺点；led光照维持了植物的光合作用，能够补充可溶性糖，在涂膜和气调包装的共同作用下呼吸作用被抑制，使得可溶性糖消耗速率大大降低(短时间内甚至有积累)；琥珀色led光由蓝色led配以红色荧光粉激发形成，色温低且光成分配比适宜，红光与琥珀色光复合能够加倍提升植物的光合作用效率；涂膜有效调控了叶片的气孔开度，有效缓解了led光照造成的加速蒸腾和失重显著现象，使叶片萎蔫程度相较于单一光照处理更低。本发明采用25～35μmol m-2
s-1
光子通量的光照，能在不对植物造成光损伤的前提下使多酚氧化酶作出积极响应，抑制酶促褐变反应的发生，更好地维持叶菜的初始色泽。本发明考虑到五种光源会使成本增加且实际运用在果蔬采后保鲜中并不易操作，选择波峰为440nm和540nm的白光、660nm的红光和625-640nm的琥珀色复合光作为光源，每天照射8～12小时来保证叶菜所需的光子能量，并将led光照与气调包装联合，最大程度降低了储藏期间叶片的呼吸速率。
34.本发明选用未经任何预处理的整菜作为原料，避免机械损伤造成的保质期缩减；全过程不涉及消毒杀菌剂的使用，利用与植物生长周期类似的长时间光照来抑制微生物的
生长、维持叶菜营养物质水平，保持了安全性。提前充入特定比例的气体成分有助于维持呼吸水平在较低值，而储藏全过程中气调与光照的协作促进了呼吸作用与光合作用的制约与平衡，更好地维持叶菜的感官品质。
35.本发明将红白、琥珀色复合照射叶菜，能够更好地提高光合效率并在相同光子通量的条件下产生更少的热量，同时本方法将led光照与涂膜联合，有效避免了光照造成的过度失水问题。
36.本发明与现有技术相比的有益效果如下：
37.(1)与传统气调包装保鲜方法相比，本发明从消费者的角度出发选择整菜而非鲜切样品，避免繁冗的前处理工序，利用叶菜自身的代谢和抵抗来维持储藏阶段的生理活动。在前30天气体比例为o3:15％～25％、o2:1％～5％、co2:70％～84％，一定浓度的臭氧达到杀菌消毒的效果，后15天气体比例为o2:3％～6％、co2:5％～10％、n2:84％～92％，去除臭氧，重新充入氧气、二氧化碳和氮气，并将比例调整至恰当值。利用聚乙烯膜的透气性及涂膜的渗透性帮助叶菜的呼吸作用相对于单一处理维持在较低值，不产生无氧呼吸也不消耗过多的能量，最大限度地减缓营养品质的下降，将保质期延长至45天左右。
38.(2)卡拉胶寡糖常用于海洋生物资源开发领域，而本发明将卡拉胶寡糖用于果蔬保鲜涂膜使用时能够在表面形成一层膜，相当于增加了叶菜叶片的厚度，在一定程度堵塞气孔来减缓蒸腾作用，同时改变了叶片气孔的开度，限制膜内部气体与外界的交换，达到降低失水率和抑制呼吸作用的目的，从而减少有机物的下降速率。
39.(3)在与气调联合时，储藏前中期卡拉胶寡糖涂膜与外部臭氧氛围结合放大了叶菜在较活跃阶段的抗菌效果，保证叶菜根部等不易涂膜均匀部位处的抗菌效果并延迟乙烯产生；储藏后期脱去臭氧的气调氛围维持了膜本身的结构与生物稳定性、抗氧化能力以及膜内外侧的气体渗透压，提高二氧化碳透过率，使得叶菜更利于维持在较低的呼吸速率，避免缺氧环境造成的酒精发酵，减少储藏后期有机物的消耗，联合处理放大了对叶片失重程度的降低效果从而避免叶菜萎蔫卷曲，同时减少了厌氧有害微生物的生长繁殖，效果显著优于单一涂膜或单一气调处理。卡拉胶寡糖具有抗菌活性及调节植物免疫的活性，因此有阻挡细菌与真菌侵袭繁殖的功效。
40.(4)本发明通过led复合光照与气调、涂膜的协同作用既通过光合作用弥补了有机物的消耗、影响蛋白质结构从而改变酶活、提高抗氧化能力，又避免了单一光照造成的气孔开度过大产生的剧烈失水现象发生。弥补了单一气调处理容易形成代谢紊乱、呼吸链反应异常、滋生微生物等缺点，弥补了单一涂膜处理叶菜保鲜程度不足、成膜不均匀的缺陷，同时解决了led光照容易加快叶片失水的问题。
41.本发明提供的叶菜保鲜方法，将叶菜以原始状态储存，不添加任何化学防腐剂，采用光响应来短暂维持植物的光合作用，结合气调更适合工业化实施，能有效延长叶菜的保质期。本方法将臭氧浓度控制在15％～25％，氧气比例1％～5％，其余气体成分用二氧化碳补足，避免了臭氧浓度过高造成的副作用并将后期氧气浓度维持在较低值。
42.本发明采用卡拉胶寡糖涂膜与气调包装联合led光照的保鲜方式，通过led复合光照能够刺激抗氧化酶如超氧化物歧化酶、过氧化物酶活性升高，控制微生物含量，而卡拉胶寡糖涂膜能够通过控制气孔开度达到弥补光照加速蒸腾作用导致的失重现象加剧的目的，包装中的小比例臭氧能够达到储藏前期杀菌的目的，气调能够调节叶菜的呼吸作用。通过
储藏不同阶段使用不同的气体比例，三者协同作用能够提高叶菜的营养价值及抗氧化能力、降低呼吸速率，同时抑制褐变作用。
具体实施方式
43.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
44.本发明以下实施例中，复合led光采用复合led灯板实现，所述复合led灯板的红灯珠个数占比为50％～70％，白灯珠个数占比为15％～20％，琥珀色灯珠个数占比为10％～30％，红灯珠、白灯珠与琥珀色灯珠占比之和为100％，其中白色led光的白色光波峰为440nm和540nm，红色led光的红色光波峰为660nm，琥珀色光波峰为625-640nm，复合led光的光照强度为25～35μmol m-2
s-1
，色温为1700-2700k。
45.实施例1
46.一种卡拉胶寡糖涂膜结合led复合光照与气调协同的小青菜保鲜方法，包括以下步骤：
47.(1)选择大小适宜、颜色均匀、无萎蔫黄化、无机械损伤、无虫蛀的新鲜小青菜；
48.(2)将挑选完成的小青菜浸入配制好的10mg/ml卡拉胶寡糖溶液中5min；
49.(3)取出于室温晾干后放入聚乙烯薄膜中(250mm
×
400mm)，每个包装放置两棵；
50.(4)用气调包装机向放好小青菜的包装内充入15％o3、5％o2、80％co2后，用热封机进行封口；
51.(5)包装好的青菜放置在复合led灯板下接受垂直照射(25μmol m-2
s-1
)，led灯板中红、白、琥珀色灯珠比例为3:1:1。每块灯板下水平放置4包叶菜。照射过程中储藏环境温度为4
±
1℃，相对湿度为90
±
4％rh，每天从8时到20时照射12小时；
52.(6)储藏30天后更换气调包装，充入5％o2、5％co2、90％n2的气体。储藏结果表明，(15％o3 5％o2 80％co2) (5％o2 5％co2 90％n2)的气体比例结合复合led光照处理，到达储藏终点时各项指标的变化比率(以0天值计算)与无处理组相比，显著提高其叶绿素保留率(31.309％)、可溶性糖保留率(39.471％)和抗坏血酸保留率(44.067％)；呼吸速率下降了81.63％，菌落总数下降159.819％，失重在储藏全程未超过1.1％，感官评价未低于5分；dpph自由基清除能力提高了26.03％，过氧化物酶和多酚氧化酶活性被抑制，醌生成量显著下降(4.94od
a437 kg-1
fw)。小青菜叶片发黄褐变不明显，储藏期延长至40天以上。不同处理方式新鲜小青菜储藏终点测试指标对比见表2。
53.实施例2
54.一种卡拉胶寡糖涂膜结合led复合光照与气调协同的菠菜保鲜方法，包括以下步骤：
55.(1)选择大小适宜、颜色均匀、无萎蔫黄化、无机械损伤、无虫蛀的新鲜菠菜；
56.(2)轻轻抖落土块、异物后，将挑选完成的菠菜浸入配制好的10mg/ml卡拉胶寡糖溶液中5min；
57.(3)取出晾干后将菠菜直接放入聚乙烯薄膜中(250mm
×
400mm)，每个包装放置两棵；
58.(4)用气调包装机向放好叶菜的包装内充入20％o3，3％o2，77％co2后，用热封机进行封口；
59.(5)包装好的菠菜放置在复合led灯板下接受垂直照射(30μmol m-2
s-1
)，led灯板中红、白、琥珀色灯珠比例为5:2:3。每块灯板下水平放置4包叶菜。照射过程中储藏环境温度为4
±
1℃，相对湿度为90
±
4％rh，每天从8时到20时照射12小时；
60.(6)储藏30天后更换气调包装，充入3％o2，6％co2，91％n2的气体。储藏结果表明，(20％o3 3％o2 77％co2) (3％o2 6％co2 91％n2)的气体比例结合复合led光照处理，在到达储藏终点时各项指标的变化比率(以0天值计算)与无处理组相比，显著提高了菠菜的叶绿素保留率(74.24％)、可溶性糖保留率(36.304％)和抗坏血酸保留率(86.88％)；呼吸速率相对降低了64.60％，菌落总数下降171.73％，失重在储藏全程未超过1.2％，感官评价未低于4.7分；dpph自由基清除能力的下降值减少了30.09％，过氧化物酶和多酚氧化酶活性被抑制，醌生成量显著下降(0.77oda437 kg-1
fw)。菠菜叶片发黄褐变不明显，储藏期延长至40天以上。不同处理方式新鲜菠菜储藏终点测试指标对比见表2。
61.实施例3
62.一种卡拉胶寡糖涂膜结合led复合光照与气调协同的生菜保鲜方法，包括以下步骤：
63.(1)选择出大小适宜、颜色均匀、无萎蔫黄化、无机械损伤、无虫蛀的新鲜生菜；
64.(2)轻轻抖落土块、异物后，将挑选完成的生菜浸入配制好的10mg/ml卡拉胶寡糖溶液中5min：
65.(3)取出晾干后将生菜直接放入聚乙烯薄膜中(250mm
×
400mm)，每个包装放置两棵；
66.(4)用气调包装机向放好叶菜的包装内充入25％o3，5％o2，70％co2后，用热封机进行封口；
67.(5)包装好的生菜放置在复合led灯板下接受垂直照射(35μmol m-2
s-1
)，led灯板中红、白、琥珀色灯珠比例为13:3:4。每块灯板下水平放置4包叶菜。照射过程中储藏环境温度为4
±
1℃，相对湿度为90
±
4％rh，每天从8时到16时照射8小时；
68.(6)储藏30天后更换气调包装，充入6％o2，10％co2，84％n2的气体。储藏结果表明，(25％o3 5％o2 70％co2) (6％o2 10％co2 84％n2)的气体比例结合复合led光照处理，在到达储藏终点时各项指标的变化比率(以0天值计算)与无处理组相比，显著提高了生菜的叶绿素保留率(36.89％)、可溶性糖保留率(20.392％)和抗坏血酸保留率(102.76％)；呼吸速率下降了59.73％，菌落总数下降183.12％，失重在储藏全程未超过1.4％，感官评价未低于4.5分；dpph自由基清除能力相对提高了23.27％，过氧化物酶和多酚氧化酶活性被抑制，醌生成量显著下降(5.03od
a437 kg-1
fw)。生菜叶片发黄褐变不明显，储藏期延长至40天以上。不同处理方式新鲜菠菜储藏终点测试指标对比见表2。
69.不同处理方式新鲜叶菜不同储藏时间进行性能测试指标对比，其中进行了各样品试验的对照，表1显示的是三种实施例样品的初始值。表2中对照1为没有进行卡拉胶寡糖涂膜、没有进行复合led光照、同时也没有气调包装的小青菜，其他步骤与实施例1相同；对照2为只进行了卡拉胶寡糖涂膜、没有进行复合led光照、同时也没有气调包装的小青菜，其他步骤与实施例1相同；对照3为只进行了复合led光照、没有进行卡拉胶寡糖涂膜、也没有气
调包装的小青菜，其他步骤与实施例1相同。对照4和对照7同对照1实施办法相同，样品分别换为菠菜和生菜，对照5和对照8同对照2实施办法相同，样品分别换为菠菜和生菜，对照6和对照9同对照3实施办法相同，样品分别换为菠菜和生菜。对最终储藏的指标进行测试对比，具体如下：
70.实验方法：
71.1.叶绿素含量
72.叶绿素含量的测定采用比色法。精准称取1g样品叶片加石英砂，用7.5ml体积分数为80％的丙酮溶液磨成匀浆，暗处放置浸提10分钟后过滤至棕色25ml容量瓶，测量溶液在646nm、663nm出的吸光度，以80％丙酮溶液作参比。每棵蔬菜取相同的位置，取三棵蔬菜测量取平均值。
73.2.可溶性糖含量
74.可溶性糖含量的测定采用蒽酮法。以葡萄糖为标准品制作标准曲线。精确称取1g样品叶片加石英砂研磨成匀浆，取3ml匀浆液加入5ml蒽酮，反应后在620nm处测定吸光度的值。每棵蔬菜取相同的位置，取三棵蔬菜测量取平均值，根据标准曲线计算可溶性糖含量。
75.3.抗坏血酸含量
76.采用gb/t 6195—86《2,6—二氯靛酚法》测定。每棵蔬菜取相同的位置，取三棵蔬菜测量取平均值。
77.4.失重率
78.采用称量法进行测量。失重率(％)＝(初始样品质量-储藏结束时样品质量)/初始样品质量。
79.5.感官评价
80.感官评价的测定采用观察法。由5名专业人员组成评价小组，对贮藏期结束后的样品进行整体感官评分，结果取平均值。评分标准：9分，非常好，叶片颜色鲜艳翠绿，无萎蔫破损，硬度保持较佳；7分，较好，叶片颜色较为翠绿，有少许黄色出现，叶片少许萎蔫或卷曲，有少许叶茎质构较软；5分，品质一般，到达商品临界值，有1/3的叶片出现黄化并伴有少许褐变产生，叶片部分萎蔫卷曲，蔬菜茎硬度下降明显；3分，品质较差，有1/2的叶片出现黄化和褐变，叶片大部分萎蔫卷曲，茎秆有超过1/2开始软烂；1分，品质很差，蔬菜出现腐烂和令人不适的气味，不可食用。
81.6.dpph自由基清除能力
82.dpph自由基清除能力的测定采用比色法。称取5.0g蔬菜于研钵中研磨至匀浆状，加入25ml、体积分数95％乙醇溶液混合均匀后4℃条件中离心20min，取上清液用于测定dpph自由基清除能力。取2ml上清液与2ml dpph溶液混合摇匀后避光反应10min。在517nm波长处测定吸光度，对照组采用同体积95％乙醇溶液与dpph溶液混合，记下吸光度。
83.7.多酚氧化酶活性
84.粗酶液制备：称取5g生菜，向其中加入提前预冷的磷酸缓冲溶液(ph6.5，0.2mol/l)研磨后定容至25ml，4℃低温离心30分钟，转速为10000r，离心后得到的上清液即为粗酶液。
85.酶活性测定：取粗酶液0.2ml，向其中加入1.0ml浓度为0.05mol/l的儿茶酚底物，以等体积磷酸缓冲液作为对照组。反应体系和对照均置于37℃保温3min后，迅速加入2ml浓
度为20％三氯乙酸溶液终止反应。于420nm波长处测定吸光度变化。每棵蔬菜取相同的位置，取三棵蔬菜测量取平均值。
86.8.可溶性醌生成量
87.精确称量5.0g蔬菜样品，加入10ml80％乙醇研磨均匀后转移，4℃、10000r/min条件下离心15min，，收集上清液置于波长437nm处测量吸光值。
88.9.菌落总数
89.菌落总数采用cfu计数法进行统计。取5.0g蔬菜样品，置于质量浓度为70％的氯化钠溶液中，于拍击式均质器上匀速拍打90s。取100μl拍打后的原液，分别稀释3个梯度。吸取各稀释液100μl于无菌培养基上涂布均匀，于28℃恒温培养箱中培养48h后进行平板菌落计数。
90.10.呼吸速率
91.采用滴定法进行测定。样品置于干燥广口瓶中，用0.1mol
·
l-1
的naoh吸收样品在2小时内呼吸所释放出来的二氧化碳，再用0.1mol
·
l-1
的草酸滴定剩余的碱直至红色褪去。由滴定消耗酸的数量与空白消耗之差计算出呼吸所释放的二氧化碳的量。
92.11.二氧化碳透过率
93.根据gb/t 1038，采用透气性测试仪对二氧化碳透过率进行测定，对每个膜进行三次测定并取平均值。
94.12.气孔开度
95.取每棵样品蔬菜的由根部向上数的第3片叶子，轻轻撕下叶片表皮组织，切成5mm
×
10mm的大小，置于载玻片上后滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片，用普通光学显微镜放大100倍观察测量气孔开度，每个叶片测量9个气孔取平均值。
96.(1)储藏时间为0天时进行性能测试，具体见表1：
97.表1不同实施例(三种叶菜)储藏0天测试指标对比
[0098][0099]
(2)储藏时间为40天时进行性能测试，具体见表2：
[0100]
表2不同实施例(三种叶菜)储藏终点测试指标对比
[0101][0102][0103]
从以上表1和表2的内容可以看出，卡拉胶寡糖涂膜联合led光照结合气体氛围变化的气调包装能够显著降低叶菜的呼吸速率、抑制菌落的生长、有效控制酶活，使得储存40
天后的叶菜仍有较高含量的叶绿素、可溶性糖和抗坏血酸；联合处理组样品所覆膜的二氧化碳透过率优于单一涂膜处理，这可能是因为气调包装中适宜浓度的二氧化碳的作用；led光照维持了植物的光合作用，能够补充可溶性糖，在涂膜和气调包装的共同作用下呼吸作用被抑制，使得可溶性糖消耗速率大大降低(短时间内甚至有积累)；涂膜有效调控了叶片的气孔开度，有效缓解了led光照造成的加速蒸腾和失重显著现象，使叶片萎蔫程度相较于单一光照处理更低。