家畜的乳腺炎的检查方法及检查系统与流程

1.本发明涉及家畜的乳腺炎的一种检查方法及检查系统。


背景技术：

2.奶牛的感染性疾病之一的乳腺炎每年给日本国内带来高达800亿日元的损失。通过早期发现乳腺炎，能够减少治疗费并避免乳量减少，因此对乳腺炎的早期发现已有许多研发。
3.例如，专利文献1记载的方法通过测定乳汁的体细胞数来诊断乳腺炎。专利文献2记载的方法通过测定乳汁的导电率来诊断乳腺炎。专利文献3记载的方法使乳汁中的体细胞分解，以生成细胞因子等来激活体细胞，之后再测定体细胞数，从而诊断乳腺炎。专利文献4记载的方法通过测定离心分离后的乳汁的导电率来诊断乳腺炎。(现有技术文献)
4.(现有技术文献)
5.(专利文献)
6.专利文献1：日本国特表2002－503097号公报
7.专利文献2：日本国特开2010－230363号公报
8.专利文献3：日本国特开2010－256231号公报
9.专利文献4：日本国特开2011－33599号公报


技术实现要素：

10.(发明要解决的问题)
11.通过测定体细胞数来诊断乳腺炎的方法存在体细胞数测定装置较昂贵的问题。另外，通过显微镜观察来测定体细胞数的方法存在操作复杂的问题。通过测定乳汁的导电率来诊断乳腺炎的方法所观察的是病原体侵入后的炎症反应下的变化，所以存在不适用于乳腺炎初期诊断的问题。另外，视同一个体的不同乳分房情况或不同个体的各自情况，乳汁中包含的电解质的成分比率各异，因此乳汁的导电率测定存在再现性不理想的问题。因此，尚未实现能够简易地早期发现奶牛等家畜的乳腺炎的技术。
12.本发明的一个方面的目的是实现能够简易地早期发现奶牛等家畜的乳腺炎的检查。
13.(解决问题的手段)
14.为解决上述问题，本发明包含以下方面。
15.·
一种家畜的乳腺炎的检查方法，其包括：利用核磁共振(nmr)法，对从家畜的乳分房采集的乳汁的自旋－自旋弛豫时间进行测定的步骤。
16.·
一种家畜的乳腺炎的检查系统，其具备挤奶机及nmr测定装置，其中，在从所述挤奶机的挤奶单元到集乳器之前的指定位置上，构成有供所述nmr测定装置进行nmr的液流池。
17.(发明的效果)
18.根据本发明的一个方面，能够实现能简易地早期发现奶牛等家畜的乳腺炎的检查。
附图说明
19.图1是实施例1中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
20.图2是实施例2中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
21.图3是实施例3中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
22.图4是实施例4中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
23.图5是评价例1中添加金黄色葡萄球菌(sa-vb)的乳汁的分析结果的图表。
24.图6是评价例1中添加金黄色葡萄球菌(sa-vr)的乳汁的分析结果的图表。
25.图7是评价例2中添加乳酸菌的乳汁的分析结果的图表。
26.图8是本发明的实施方式的检查系统的一例示意图。
27.图9是本发明的实施方式的检查系统的主要部分的结构框图。
28.图10是实施例5中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
29.图11是实施例6中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
30.图12是实施例7中从各乳房采集的乳汁的分析结果的图表。
31.图13是评价例3中添加金黄色葡萄球菌的乳汁的分析结果的图表。
32.《附图标记说明》
33.100、101
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检查系统
34.200
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挤奶机
35.201
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挤奶单元
36.202
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集乳器
37.203
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液流池
38.300
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nmr装置
39.301、401、501
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通信部
40.302、402、502
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控制部
41.303、503
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测定部
42.304
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计算部
43.400
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管理终端
44.403
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存储部
45.404
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显示部
46.405
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nmr测定值比较部
47.406
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体细胞数比较部
48.407
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判定部
49.408
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异常通知部
50.500
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体细胞测定装置
具体实施方式
51.〔1.家畜的乳腺炎的检查方法〕
52.本发明的家畜的乳腺炎的检查方法(以下，也简称“本发明的检查方法”)包括：利用核磁共振(nmr)法，对从家畜的乳分房采集的乳汁(以下，也简称“样本乳汁”)的自旋－自旋弛豫时间进行测定的步骤。
53.作为家畜的例子，可举出奶牛等牛、山羊、水牛、绵羊及马等。例如，奶牛等牛具有右前乳房、右后乳房、左前乳房及左后乳房这4个独立的乳分房(乳房)。
54.本发明的检查方法中所采用的核磁共振(nmr)法只要能够测定样本乳汁的自旋－自旋弛豫时间(t2)即可，例如，可举出脉冲nmr法等。从测定装置的小型化等考虑，优选使用脉冲nmr法。
55.可以通过挤奶机等本领域技术人员通常使用的手段，从家畜的乳分房采集乳汁。通过将nmr测定装置安装至挤奶机，能够简易且无创地测定乳汁的自旋－自旋弛豫时间(t2)。另外，nmr法(尤其是脉冲nmr法)每次的测定时间为较短的数十秒。并且，通过将nmr测定装置安装至自动挤奶机，能够以一定间隔来连续测定自旋－自旋弛豫时间(t2)。另外，将nmr测定装置安装至自动挤奶机，便无需特意为了乳腺炎检查而对乳汁进行采样，从而能够减轻家畜管理者的负担，因此，本发明的检查方法可以进行实时测定(检查)。如上所述，优选将nmr测定装置安装至挤奶机并将挤奶机的一部分构成为供进行nmr测定的液流池(flow cell)，但不限定于此。
56.可将所述自旋－自旋弛豫时间与指定的基准s1进行比较，或将由该自旋－自旋弛豫时间换算得到的、所述乳汁中包含的颗粒的比表面积，与指定的基准s1进行比较。通过该比较，能够判断被采集了乳汁的乳分房是否患有乳腺炎，或患有乳腺炎的可能性是否较高。具体而言，将样本乳汁的测定数据(自旋－自旋弛豫时间或比表面积)与指定的基准s1进行比较，若样本乳汁的测定数据有意义地增加或减少，则能够判断被采集了样本乳汁的乳分房是否患有乳腺炎、或患有乳腺炎的可能性是否较高。在将样本乳汁的数据与指定的基准s1进行比较的情况下，其有意义的差异例如可通过t检测、f检测、卡方测验、或曼－惠特尼u检测等统计学方法来判断。
57.乳汁中包含的颗粒的比表面积可通过以下式(1)来求取。
58.rav＝ψpslρp(rs-rb) rb
…
(1)
59.式(1)中，rav是平均弛豫时间的倒数。ψp是乳汁中包含的颗粒的体积分率(体积浓度)。l是乳汁中包含的颗粒表面所吸附的液层的厚度(浸润厚度)。ρp是乳汁中包含的颗粒的密度。rs是乳汁中包含的颗粒表面所吸附的液体分子的弛豫时间的倒数。rb是溶剂水的弛豫时间的倒数。
60.作为所述指定的基准s1的例子，可举出：(1)在与样本乳汁的采集时间点不同的时间点，从被采集了样本乳汁的乳分房所采集(例如，预采集)了的乳汁的数据；(2)从被采集了样本乳汁的个体的其他乳分房所采集了的乳汁的数据；及(3)从与被采集了样本乳汁的个体不同的个体的乳分房所采集了的乳汁的数据；等。所述数据(1)～(3)是乳汁的自旋－自旋弛豫时间，或是由该自旋－自旋弛豫时间换算得到的、乳汁中包含的颗粒的比表面积。所述数据(2)及(3)可以是在采集样本乳汁的同时所采集的乳汁的数据，或者是在采集样本乳汁之前预采集的乳汁的数据。关于所述指定的基准s1，可对从无乳腺炎的对照乳分房采集了的乳汁的自旋－自旋弛豫时间(比表面积)进行预先测定，并基于此测定结果来定好正常范围(例如，作为阈值的基准s1)。
61.指定的基准s1例如可以是在多个时间点从被采集了样本乳汁的乳分房所获得的、在时间轴上的数据的集合。这种情况下，所评价的就是被采集了样本乳汁的乳分房的以下两种数据在时间轴上的变动情况，该两类数据为：乳汁的自旋－自旋弛豫时间；或，由该自旋－自旋弛豫时间换算得到的、乳汁中包含的颗粒的比表面积。
62.本发明的检查方法还可以包括：将样本乳汁中包含的体细胞数与指定的基准s2进行比较的步骤。在将样本乳汁的体细胞数与指定的基准s2进行比较的情况下，其有意义的差异例如可通过t检测、f检测、卡方测验、或曼－惠特尼u检测等统计学方法来判断。本说明书中，“乳汁中包含的体细胞数”是指，乳汁中包含的白血球等来自血液的细胞与乳腺上皮细胞的总数。体细胞数可通过公知的方法来测定。
63.作为所述指定的基准s2的例子，可举出：(4)在与样本乳汁的采集时间点不同的时间点，从被采集了样本乳汁的乳分房所采集(例如，预采集)了的乳汁的体细胞数；(5)从被采集了样本乳汁的个体的其他乳分房所采集了的乳汁的体细胞数；及(6)从与被采集了样本乳汁的个体不同的个体的乳分房所采集了的乳汁的体细胞数；等。所述数据(5)及(6)可以是在采集样本乳汁的同时所采集的乳汁的体细胞数，或者是在采集样本乳汁之前已预采集了的乳汁的体细胞数。关于所述指定的基准s2，可以对从无乳腺炎的对照乳分房采集了的乳汁的体细胞数进行预先测定，并基于此测定结果来定好正常范围(例如，作为阈值的基准s2)。
64.指定的基准s2例如可以是在多个时间点就被采集了样本乳汁的乳分房所获得的、在时间轴上的数据的集合。这种情况下，所评价的就是被采集了样本乳汁的乳分房的、乳汁的体细胞数在时间轴上的变动情况。
65.如实施例所示，当金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌感染引起了乳腺炎时，伴随体细胞数的增加，乳汁中包含的颗粒的比表面积会减少。认为其原因在于革兰氏阳性菌所产生的酸性物质(例如，乳酸)会致使分散在乳汁中的酪蛋白微粒凝聚。另一方面，当发生了除革兰氏阳性菌感染所引起的乳腺炎以外的乳腺炎(例如，大肠杆菌等革兰氏阴性菌感染所引起的乳腺炎、及外伤所引起的乳腺炎等)时，伴随体细胞数的增加，乳汁中包含的颗粒的比表面积也会增加。因此，在进行nmr测定的基础上还进行体细胞测定，就能推定乳腺炎的原因(是否起因于革兰氏阳性菌感染)。
66.〔2.家畜的乳腺炎的检查系统〕
67.参照图8，对本发明的家畜的乳腺炎的检查系统(以下，也简称“本发明的检查系统”)100进行说明。检查系统100具备：挤奶机200、nmr测定装置300。挤奶机200具备：挤奶单元201，其安装到乳分房并对所采集的乳汁进行回收；集乳器(汇乳罐)202，其对从各乳分房采集的乳汁进行混合；以及供进行nmr测定的液流池203。
68.挤奶机200可以使用公知的挤奶机。例如，若要对奶牛的4个乳分房同时进行检查，则也可以具备4个挤奶单元。液流池203设置在从挤奶单元201到集乳器202之前的规定位置。由此，能够对从各乳分房采集的乳汁的自旋－自旋弛豫时间进行测定。
69.nmr测定装置300能够安装到挤奶机200的液流池203即可，例如可以使用公知的nmr测定装置。从易于安装到挤奶机200及测定装置的小型化等的观点来看，nmr测定装置300优选为脉冲nmr测定装置。
70.另外，参照图9，对作为其他实施方式的本发明检查系统101进行说明。图9是检查
系统的主要部分的结构框图。检查系统101具备：挤奶机200、nmr测定装置300、管理终端(例如，智能手机等小型便携终端)400、体细胞测定装置500。
71.nmr测定装置300具备：通信部301、测定部303、计算部304、以及对测定部303及对计算部304进行控制的控制部302。通信部301与管理终端400通信。测定部303对从各乳分房采集的乳汁的自旋－自旋弛豫时间进行测定。计算部304根据自旋－自旋弛豫时间来换算出乳汁中包含的颗粒的比表面积。
72.管理终端400具备：通信部401、nmr测定值比较部405、体细胞数比较部406、判定部407、异常通知部408、存储部403、显示部404、控制部402。通信部401与nmr测定装置300及体细胞测定装置500通信。nmr测定值比较部405将样本乳汁的自旋－自旋弛豫时间或比表面积，与指定的基准s1进行比较。体细胞数比较部406将样本乳汁的体细胞数与指定的基准s2进行比较。判定部407根据nmr测定值比较部405的比较结果，判定被采集了样本乳汁的乳分房是否患有乳腺炎或患有乳腺炎的可能性是否较高。若判定部407判定为乳分房患有乳腺炎或患有乳腺炎的可能性较高，则异常通知部408通知管理终端400的用户。显示部404显示nmr测定装置300及体细胞测定装置500的测定结果、以及来自异常通知部408的通知。
73.判定部407除了根据nmr测定值比较部405的比较结果来判定外，还可以根据体细胞数比较部406的结果来推定乳腺炎的原因(是否源于革兰氏阳性菌感染)。
74.体细胞测定装置500具备：通信部501，其与管理终端400通信；测定部503，其对从各乳分房采集的乳汁的体细胞数进行测定；控制部502，其对测定部503进行控制。
75.本发明不限定为上述各实施方式，可在说明书所示的范围内进行各种变更，对不同实施方式中分别揭载的技术手段进行适当组合而得到的实施方式也包含在本发明的技术范围内。
76.本发明不限定为上述各实施方式，可在说明书所示的范围内进行各种变更，对不同实施方式中分别揭载的技术手段进行适当组合而得到的实施方式也包含在本发明的技术范围内。
77.〔3.实施方式的总结〕
78.例如，本发明的实施方式包含以下方面。
79.＜1＞一种家畜的乳腺炎的检查方法，其包括：利用核磁共振(nmr)法，对从家畜的乳分房采集的乳汁(样本乳汁)的自旋－自旋弛豫时间进行测定的步骤。
80.＜2＞根据＜1＞所述的检查方法，其中，将所述自旋－自旋弛豫时间与指定的基准s1进行比较，或将由该自旋－自旋弛豫时间换算得到的、所述乳汁中包含的颗粒的比表面积与指定的基准s1进行比较。
81.＜3＞根据＜1＞或＜2＞所述的检查方法，其还包括将所述乳汁中包含的体细胞数与指定的基准s2进行比较的步骤。
82.＜4＞根据＜1＞～＜3＞中任一项所述的检查方法，其中，家畜是奶牛。
83.＜5＞一种家畜的乳腺炎的检查系统，其具备挤奶机及nmr测定装置，其中，在从所述挤奶机的挤奶单元到集乳器之前的指定位置上，构成有供进行nmr测定的液流池。
84.＜6＞根据＜5＞所述的检查系统，其还具备体细胞测定装置。
85.＜7＞根据＜5＞或＜6＞所述的检查系统，其中，家畜是奶牛。
86.＜8＞根据＜2＞所述的检查方法，其中，通过与指定的基准s1相比较，来推定是否
发生了乳腺炎。
87.＜9＞根据＜3＞所述的检查方法，其中，通过与指定的基准s2相比较，来推定乳腺炎的原因。
88.＜10＞这里，＜1＞～＜4＞的检查方法也可以说是家畜乳腺炎检查上所需的数据的获取方法、及该数据的分析方法。
89.(实施例)
90.奶牛有4个乳房(乳分房)。各乳房是分别独立的器官。因此，从各乳房产出的乳汁的成分浓度等随乳房的健康状态而不同。另外，各乳房也会单独发生乳腺炎。所以，以下实施例中，对从奶牛的各个乳房采集的乳汁进行了分析。实施例1及2中，乳汁中包含的体细胞数为20
×
104/ml以上，则判断为被采集了乳汁的乳房发生了乳腺炎。实施例3及4中，乳汁中包含的体细胞数为50
×
104/ml以上，则判断为被采集了乳汁的乳房发生了乳腺炎。
91.〔实施例1〕分析从各乳房采集的乳汁
92.从由国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构-动物卫生研究部门饲养管理的研究用奶牛a的4个乳房(右前、右后、左前、左后)分别采集了乳汁。并且，对采集了的乳汁的体细胞数及自旋－自旋弛豫时间(t2)进行了测定。体细胞数是用细胞计数器dcc(delaval株式会社制造)测定的。将采集了的乳汁倾摇混和后，用专用检测盒吸入乳汁并将之插入到计数器主体来进行了测定。乳汁不经稀释或添加而直接被放入nmr管，使用脉冲nmr装置(xigo nanotools公司制造；装置名acorn area)，在25℃下测定了弛豫时间(t2)。t2测定模式是根据cpmg(carr-purcell meiboom-gill sequence)法来进行的。
93.根据测得的弛豫时间(t2)，使用以下式(1)计算了乳汁中包含的颗粒的比表面积(s)。
94.rav＝ψpslρp(rs-rb) rb
…
(1)
95.式(1)中，rav是平均弛豫时间的倒数。ψp是乳汁中包含的颗粒的体积分率(体积浓度)。l是乳汁中包含的颗粒表面所吸附的液层的厚度(浸润厚度)。ρp是乳汁中包含的颗粒的密度。rs是乳汁中包含的颗粒表面所吸附的液体分子的弛豫时间的倒数。rb是溶剂水的弛豫时间的倒数。
96.根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图1。图1的左纵轴代表平均每1ml中的体细胞数(104)。右纵轴代表比表面积(m2/g)。
97.如图1所示，从右后乳房及左前乳房分别采集了的乳汁的体细胞数为20
×
104/ml以下，可见是健康的。另一方面，从右前乳房及左后乳房采集了的乳汁的体细胞数分别为30
×
104/ml、182
×
104/ml，表明都发生了乳腺炎。另外，这些乳汁的细菌检查中没有发现金黄色葡萄球菌，因此判定为是由大肠杆菌或外伤所引起的乳腺炎。另外，确认到右前乳房及左后乳房的乳汁中包含的颗粒的比表面积的数值高于右后乳房及左前乳房，且确认到比表面积与体细胞数的数量有对应关系。
98.〔实施例2〕分析从各乳房采集的乳汁
99.将实施例1中被采集了乳汁后的研究用奶牛a继续饲养了2天，然后再次从各乳房采集了乳汁。并且，按照与实施例1相同的操作方式，测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图2。
100.如图2所示，从右后乳房及左前乳房分别采集了的乳汁的体细胞数为20
×
104/ml以下，与实施例1的结果一样，是健康的。与实施例1相比，右前乳房的体细胞数更接近健康。另一方面，从左后乳房采集了的乳汁的体细胞数为780
×
104/ml，表明乳腺炎尚未治愈。另外，右前乳房、右后乳房及左前乳房各自的乳汁中包含的颗粒的比表面积为较低的值，但左后乳房的乳汁中包含的颗粒的比表面积为与体细胞数相应的高数值。
101.〔实施例3〕分析从各乳房采集的乳汁
102.将奶牛变更为由国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构-动物卫生研究部门饲养管理的研究用奶牛b，除此之外，以与实施例1相同的操作方式，测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图3。
103.如图3所示，从右前乳房、右后乳房及左前乳房采集了的乳汁的体细胞数为50
×
104/ml以下，可见是健康的。另一方面，从左后乳房采集了的乳汁的体细胞数为180
×
104/ml，表明发生了乳腺炎。另外，左后乳房的乳汁的细菌检查中发现了金黄色葡萄球菌，因此判定为左后乳房发生的乳腺炎是由金黄色葡萄球菌引起的。另外，与右前乳房、右后乳房及左前乳房相比，发生了乳腺炎的左后乳房的乳汁中包含的颗粒的比表面积显著较低。原因在于金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌产生的磷壁酸质致使分散在乳汁中的微粒(酪蛋白等)凝聚，从而使比表面积减少。
104.〔实施例4〕分析从各乳房采集的乳汁
105.将奶牛变更为由国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构-动物卫生研究部门饲养管理的研究用奶牛c，除此之外，以与实施例1相同的操作方式，测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图4。
106.如图4所示，从右前乳房、右后乳房及左前乳房采集了的乳汁的体细胞数为50
×
104/ml以下，可见是健康的。另一方面，从左后乳房采集了的乳汁的体细胞数为250
×
104/ml，表明发生了乳腺炎。另外，左后乳房的乳汁的细菌检查中发现了金黄色葡萄球菌，因此判定为左后乳房发生的乳腺炎是由金黄色葡萄球菌引起的。另外，与右前乳房、右后乳房及左前乳房相比，发生了乳腺炎的左后乳房的比表面积显著较低，即得到了与实施例3相同的结果。
107.〔评价例1〕添加金黄色葡萄球菌所带来的乳汁中颗粒的比表面积变化
108.向从健康的乳房采集了的乳汁3ml中，各自添加了约30mg的2种不同体系的金黄色葡萄球菌(sa-vb及sa-vr)。所使用的金黄色葡萄球菌是保藏在国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构-动物卫生研究部门的菌，并且sa-vr比sa-vb毒性强。添加金黄色葡萄球菌后，将乳汁保温在37℃。在添加完金黄色葡萄球菌并分别经过0小时、3小时、6小时及9小时后的各时间点，以与实施例1相同的操作方式测定了乳汁的弛豫时间(t2)，计算了比表面积。另外，也测定了乳汁的ph。根据测得的ph及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图5(sa-vb)及图6(sa-vr)。
109.图5及图6中，左纵轴代表比表面积(m2/g)，右纵轴代表ph，横轴代表评价例1中使用的金黄色葡萄球菌株的序号。“乳”代表未添加金黄色葡萄球菌的对照组。关于各菌株所对应的4个图棒，从左侧起分别代表添加完金黄色葡萄球菌并经过0小时、3小时、6小时及9
小时后的乳汁的测定结果。
110.如图5及图6所示，以某些被添加了金黄色葡萄球菌的乳汁来看，其比表面积有所减少。另外，还发现比表面积的减少程度随乳汁的ph而不同。
111.〔评价例2〕乳酸发酵所带来的乳汁中颗粒的比表面积变化
112.向从健康的乳房采集了的乳汁100ml中添加了含有乳酸菌的发酵乳1g。添加了乳酸菌后，将乳汁保温在37℃。从添加乳酸菌后起每隔1小时，以与实施例1相同的操作方式测定了乳汁的弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图7。
113.图7中，左纵轴代表比表面积(m2/g)，横轴代表添加乳酸菌后的经过时间。如图7所示，在添加乳酸菌后，与评价例1的添加金黄色葡萄球菌的结果同样，观察到了比表面积的减少。这是由于乳酸发酵所生成的乳酸致使分散在乳汁中的酪蛋白微粒失去ζ电位而凝聚的缘故。对于评价例1的添加金黄色葡萄球菌后的情况，推测其比表面积的降低也是由于乳酸发酵使得酪蛋白微粒凝聚而引起的。
114.〔实施例5〕分析从各乳房采集的乳汁
115.将奶牛变更为由国立研究开发法人农业/食品产业技术综合研究机构-动物卫生研究部门饲养管理的研究用奶牛d，除此之外，以与实施例1相同的操作方式测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图10。
116.图10中，左纵轴代表比表面积(m2/g)，右纵轴代表体细胞数(104/ml)，曲折线表示的是比表面积的测定结果，图棒表示的是体细胞数的测定结果。
117.如图10所示，7月21日的测定结果中，右前乳房(rf)的体细胞数为约1000
×
104/ml，与其他乳分房的体细胞数相比，呈大幅增加。根据该结果，可知右前乳房于7月21日发生了乳腺炎。另外，在7月21日的数日前观察到了右前乳房的乳汁中包含的颗粒的比表面积有所减少，由此判定右前乳房发生的乳腺炎症状是由金黄色葡萄球菌感染引起的。另外，还在右前乳房的体细胞数呈现出大幅增加的7月28日的数日前，也观察到了右前乳房的乳汁中包含的颗粒的比表面积有所减少。认为乳汁中包含的颗粒的比表面积减少的原因在于伴随金黄色葡萄球菌增生而在乳汁中发生的ph降低及酪蛋白微团凝聚。
118.〔实施例6〕分析从各奶牛采集的乳汁
119.对使用医疗导管从由酪农学园大学饲养的2头奶牛的乳房内部直接采集了的乳汁样本，以与实施例1相同的操作方式连续测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图11。
120.图11中，左纵轴代表比表面积(m2/g)，右纵轴代表体细胞数(104/ml)，2个曲折线分别表示的是比表面积(虚线)及乳量(实线)的测定结果，图棒表示的是体细胞数的测定结果。
121.如图11所示，从奶牛no.1256的乳房采集了的乳汁的体细胞数在8月31日增加至100
×
104/ml以上。关于奶牛no.1256，在体细胞数增加前观察到了乳汁中包含的颗粒的比表面积的变动。另外，从奶牛no.1405的乳房采集了的乳汁的体细胞数在9月4日增加至100
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104/ml以上。关于奶牛no.1405，在体细胞数增加前也观察到了乳汁中包含的颗粒的比表面积的变动。
122.〔实施例7〕分析从各奶牛采集的乳汁
123.对从由学校法人八纮学园-北海道农业专门学校饲养的3头奶牛采集了的乳汁样本，以与实施例1相同的操作方式连续测定了体细胞数及弛豫时间(t2)，计算了比表面积。根据测得的体细胞数及测得的弛豫时间(t2)来计算出的比表面积的结果示于图12。乳汁的采集为每天早晨(am)与傍晚(pm)共2次。
124.图12中，左纵轴代表比表面积(m2/g)，右纵轴代表体细胞数(104/ml)。3头奶牛中，分别从名为“罗兹”的奶牛及名为“贾斯蒂斯”的奶牛的2个乳房均采集了乳汁。
125.如图12所示，3头奶牛的乳汁中包含的颗粒的比表面积均周期性地在早晨和傍晚变动。一般已知与早晨采集的乳汁相比，傍晚采集的乳汁中的钙含量更高。因此，认为比表面积周期性变动的原因在于傍晚采集的乳汁含有更多的作为钙介质的酪蛋白微团。
126.另外，与图11同样地，有体细胞数超过100
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104/ml的一些乳汁样本，但就各奶牛并没有观察到比表面积的变动。与体细胞数不增加的乳汁样本中包含的颗粒的比表面积相比较，体细胞数增加了的乳汁样本(贾斯蒂斯及米歇尔)中包含的颗粒的比表面积表现出较低的倾向。
127.〔评价例3〕在脱脂乳分散液中培养金黄色葡萄球菌
128.为了在生物体外定量观察由金黄色葡萄球菌增生所引起的酪蛋白微团的凝聚，向脱脂乳的3％水溶液中添加了金黄色葡萄球菌。并且，将各样本的细菌数调整为1.0
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10
10
cfu/ml、5.0
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109cfu/ml、2.5
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109cfu/ml、及1.25
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109cfu/ml。并且在37℃下培养了各样本。从培养开始后起每隔1小时，以与实施例1相同的操作方式测定了乳汁的弛豫时间(t2)，计算了比表面积。测定结果示于图13。
129.图13中，纵轴代表比表面积(m2/g)，横轴代表培养时间。如图13所示，样本中金黄色葡萄球菌的添加量越多，就越早确认到了比表面积的减少。另外，确认到了乳汁的ph也随着比表面积的减少而减少。
130.〔实施例的总结〕
131.根据以上结果可知，通过用nmr法对从奶牛等家畜的各乳房采集的乳汁的自旋－自旋弛豫时间(t2)进行测量，能够判定乳房是发生了乳腺炎。另外，通过同时进行体细胞测定，还能够推定乳腺炎的种类(是否由金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌感染等引起)。
132.(产业上的可利用性)
133.本发明可用于家畜的乳腺炎的检查。由此，本发明可广泛应用于食品领域及诊断医疗领域。