一种微生物除草剂及其制备方法与流程

1.本发明涉及微生物除草剂技术领域，具体涉及一种微生物除草剂及其制备方法。


背景技术：

2.微生物除草剂是利用微生物所产生的次生代谢产物即植物毒素，进行杂草防治的一种新型的微生物除草剂。微生物能产生很多的代谢产物，它们有结构和生物活性多样性及易被生物降解的特点。在这些代谢产物中有使植物感病、产生病斑或枯萎的活性物质成分，而这种活性物质成分侵入寄主植物，使其感病，破坏其细胞结构，以达到防治杂草的目的。
3.微生物代谢产物中有使植物感病、产生病斑或枯萎的活性物质成分，而这种活性物质成分侵入寄主植物，使其感病，破坏其细胞结构。这些植物毒素无论在大小或在化学结构方面都存在较大的差异，它们有的是多肽类物质、有的是萜类化合物、有的是大环酯类化合物、还有的是酚醛树脂类化合物等。这些植物毒素在宿主特异性方面也存在很大差异，有些只对单一植物种或仅对一个品种具有毒性，而这些毒素则对宿主外的一些植物也具有毒性。后者往往即便是非特异性的也具有一定的选择性，像由链霉菌属的放线菌所得的茄香霉素，它对稗草和马唐等具有除草活性是非特异性的，但对栽培作物诸如水稻等则无毒害，又具有选择性。
4.目前，微生物除草剂在使用的过程中，由于所使用的微生物作用对象单一，所以只能选择性地去除某一种杂草，使用范围较小。
5.因此，发明一种微生物除草剂及其制备方法来解决上述问题很有必要。


技术实现要素：

6.本发明的目的是提供一种微生物除草剂及其制备方法，通过添加巨大芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌具有很好的降解土壤中有机磷的功效，能够改良土壤，添加的柿子孢能够使制得的除草剂防治田间的柿属杂草，添加的木霉菌能够有效的抑制土传病原真菌，添加的禾长蠕孢菌能够有效的抑制稗草的生长，而且还通过添加的1,1
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联吡啶二溴盐扩大除草的适用范围，以解决技术中的上述不足之处。
7.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种微生物除草剂，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10-25％、巨大芽胞杆菌30-45％、柿子孢10-25％、禾长蠕孢菌15-25％、木霉菌14-30％。
8.优选的，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10％、巨大芽胞杆菌30％、柿子孢10％、禾长蠕孢菌25％、木霉菌25％。
9.优选的，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐20％、巨大芽胞杆菌40％、柿子孢10％、禾长蠕孢菌15％、木霉菌15％。
10.优选的，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐20％、巨大芽胞杆菌30％、柿子孢20％、禾长蠕孢菌10％、木霉菌20％。
11.优选的，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10％、巨大芽胞杆菌45％、柿子孢15％、禾长蠕孢菌16％、木霉菌14％。
12.本发明还包括制备微生物除草剂的方法，具体步骤如下所示：
13.步骤一、配制培养基：马铃薯20％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、蛋白胨0.5％、余量为蒸馏水；
14.步骤二、将配制的培养基进行灭菌后，在无菌环境中34℃的条件下培养3天；
15.步骤三、在无菌环境中，将培养好的部分培养基分别装在4个50ml锥形瓶中，再将另外部分培养基均分并分别装在4个500ml的锥形瓶中，然后再分别将巨大芽胞杆菌、柿子孢、禾长蠕孢菌和木霉菌转接至不同的装有培养基的50ml锥形瓶中，再将50ml锥形瓶放置在旋转培养器中，然后在32℃、130r/min的条件下培养24-32小时；
16.步骤四、将培养好的菌种接种于盛有培养基的500ml锥形瓶中，无菌操作，并在32℃、130r/min的条件下培养24-32小时；
17.步骤五、将各菌种按照质量百分配比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基的发酵罐中，加入1,1
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联吡啶二溴盐，然后调节发酵罐内部的ph，在32℃的条件下培养4-7天，使发酵液中菌数达到10-15
×
108个/ml，即可得到微生物除草剂。
18.优选的，在步骤五中发酵罐内部的ph值为7.0。
19.优选的，在步骤五中的接种量为1-5％。
20.优选的，在步骤五中的发酵培养基的成分为：葡萄糖5-8g/l、蔗糖20-80g/l、乳酪蛋白胨0.5-3g/l、琼脂1-5g/l、kh2p041-5g/l、尿素1-5g/l、k2hp045-20g/l、mgs04·
7h2o 5～20g/l、nacl 5-20g/l、(nh4)2so45-20g/l，其余为蒸馏水。
21.在上述技术方案中，本发明提供的技术效果和优点：
22.1、通过在制备的微生物除草剂中添加1,1
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联吡啶二溴盐，利用1,1
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联吡啶二溴盐可被植物绿色组织迅速吸收，还能干扰植物绿色组织光合作用的电子传递，还原状态的联吡啶化合物在光诱导下，有氧存在时很快被氧化，形成活泼的过氧化氢，产生过氧化氢，这种物质的积累使植物细胞膜破坏，受药部位枯黄，从而能够使杂草绿色组织枯死，达到除草的效果，而且能够除去多种杂草，适用范围广泛；
23.2、通过添加巨大芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌具有很好的降解土壤中有机磷的功效，能够改良土壤，而且还能够使草根腐烂，增强除草效果；
24.3、通过添加柿子孢，能够使制得的除草剂防治田间的柿属杂草，通过添加木霉菌能够有效的抑制土传病原真菌，添加的禾长蠕孢菌的孢子能够分泌毒素使稗草的叶片产生斑点、抗性下降直至整棵植株枯死，从而能够有效的抑制稗草的生长。
具体实施方式
25.为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合具体到实施例对本发明作进一步的详细介绍。
26.实施例1
27.本发明的一种微生物除草剂，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10-25％、巨大芽胞杆菌30-45％、柿子孢10-25％、禾长蠕孢菌15-25％、木霉菌14-30％；
28.具体到本实施例中，1,1
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联吡啶二溴盐10％、巨大芽胞杆菌30％、柿子孢10％、禾长蠕孢菌25％、木霉菌25％。
29.上述微生物除草剂的制备方法如下所示：
30.包括以下具体步骤：
31.步骤一、配制培养基：马铃薯20％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、蛋白胨0.5％、余量为蒸馏水；
32.步骤二、将配制的培养基进行灭菌后，在无菌环境中34℃的条件下培养3天；
33.步骤三、在无菌环境中，将培养好的部分培养基分别装在4个50ml锥形瓶中，再将另外部分培养基均分并分别装在4个500ml的锥形瓶中，然后再分别将巨大芽胞杆菌、柿子孢、禾长蠕孢菌和木霉菌转接至不同的装有培养基的50ml锥形瓶中，再将50ml锥形瓶放置在旋转培养器中，然后在32℃、130r/min的条件下培养24小时；
34.步骤四、将培养好的菌种接种于盛有培养基的500ml锥形瓶中，无菌操作，并在32℃、130r/min的条件下培养24小时；
35.步骤五、将各菌种按照质量百分配比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基(发酵培养基的成分为：葡萄糖5g/l、蔗糖20g/l、乳酪蛋白胨0.5g/l、琼脂1g/l、kh2p041g/l、尿素1g/l、k2hp045g/l、mgs04·
7h2o 5g/l、nacl 5g/l、(nh4)2so45g/l，其余为蒸馏水)的发酵罐中，加入1,1
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联吡啶二溴盐，然后调节发酵罐内部的ph为7.0，接种量为1％，在32℃的条件下培养4天，使发酵液中菌数达到10-15
×
108个/ml，即可得到微生物除草剂。
36.实施例2
37.本发明的一种微生物除草剂，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10-25％、巨大芽胞杆菌30-45％、柿子孢10-25％、禾长蠕孢菌15-25％、木霉菌14-30％；
38.具体到本实施例中，1,1
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联吡啶二溴盐20％、巨大芽胞杆菌40％、柿子孢10％、禾长蠕孢菌15％、木霉菌15％。
39.上述微生物除草剂的制备方法如下所示：
40.包括以下具体步骤：
41.步骤一、配制培养基：马铃薯20％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、蛋白胨0.5％、余量为蒸馏水；
42.步骤二、将配制的培养基进行灭菌后，在无菌环境中34℃的条件下培养3天；
43.步骤三、在无菌环境中，将培养好的部分培养基分别装在4个50ml锥形瓶中，再将另外部分培养基均分并分别装在4个500ml的锥形瓶中，然后再分别将巨大芽胞杆菌、柿子孢、禾长蠕孢菌和木霉菌转接至不同的装有培养基的50ml锥形瓶中，再将50ml锥形瓶放置在旋转培养器中，然后在32℃、130r/min的条件下培养26小时；
44.步骤四、将培养好的菌种接种于盛有培养基的500ml锥形瓶中，无菌操作，并在32℃、130r/min的条件下培养27小时；
45.步骤五、将各菌种按照质量百分配比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基(发酵培养基的成分为：葡萄糖6g/l、蔗糖40g/l、乳酪蛋白胨2g/l、琼脂3g/l、kh2p042g/l、尿素2g/l、k2hp0410g/l、mgs04·
7h2o 10g/l、nacl 10g/l、(nh4)2so410g/l，其余为蒸馏水)
的发酵罐中，加入1,1
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联吡啶二溴盐，然后调节发酵罐内部的ph为7.0，接种量为2％，在32℃的条件下培养5天，使发酵液中菌数达到10-15
×
108个/ml，即可得到微生物除草剂。
46.实施例3
47.本发明的一种微生物除草剂，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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联吡啶二溴盐10-25％、巨大芽胞杆菌30-45％、柿子孢10-25％、禾长蠕孢菌15-25％、木霉菌14-30％；
48.具体到本实施例中，1,1
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联吡啶二溴盐20％、巨大芽胞杆菌30％、柿子孢20％、禾长蠕孢菌10％、木霉菌20％。
49.上述微生物除草剂的制备方法如下所示：
50.包括以下具体步骤：
51.步骤一、配制培养基：马铃薯20％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、蛋白胨0.5％、余量为蒸馏水；
52.步骤二、将配制的培养基进行灭菌后，在无菌环境中34℃的条件下培养3天；
53.步骤三、在无菌环境中，将培养好的部分培养基分别装在4个50ml锥形瓶中，再将另外部分培养基均分并分别装在4个500ml的锥形瓶中，然后再分别将巨大芽胞杆菌、柿子孢、禾长蠕孢菌和木霉菌转接至不同的装有培养基的50ml锥形瓶中，再将50ml锥形瓶放置在旋转培养器中，然后在32℃、130r/min的条件下培养30小时；
54.步骤四、将培养好的菌种接种于盛有培养基的500ml锥形瓶中，无菌操作，并在32℃、130r/min的条件下培养31小时；
55.步骤五、将各菌种按照质量百分配比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基(发酵培养基的成分为：葡萄糖8g/l、蔗糖70g/l、乳酪蛋白胨3g/l、琼脂5g/l、kh2p045g/l、尿素5g/l、k2hp0418g/l、mgs04·
7h2o 18g/l、nacl 18g/l、(nh4)2so418g/l，其余为蒸馏水)的发酵罐中，加入1,1
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联吡啶二溴盐，然后调节发酵罐内部的ph为7.0，接种量为4％，在32℃的条件下培养7天，使发酵液中菌数达到10-15
×
108个/ml，即可得到微生物除草剂。
56.实施例4
57.本发明的一种微生物除草剂，包含以下组分且各组分的含量为1,1
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乙撑-2,2
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联吡啶二溴盐10-25％、巨大芽胞杆菌30-45％、柿子孢10-25％、禾长蠕孢菌15-25％、木霉菌14-30％；
58.具体到本实施例中，1,1
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乙撑-2,2
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联吡啶二溴盐10％、巨大芽胞杆菌45％、柿子孢15％、禾长蠕孢菌16％、木霉菌14％。
59.上述微生物除草剂的制备方法如下所示：
60.包括以下具体步骤：
61.步骤一、配制培养基：马铃薯20％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、蛋白胨0.5％、余量为蒸馏水；
62.步骤二、将配制的培养基进行灭菌后，在无菌环境中34℃的条件下培养3天；
63.步骤三、在无菌环境中，将培养好的部分培养基分别装在4个50ml锥形瓶中，再将另外部分培养基均分并分别装在4个500ml的锥形瓶中，然后再分别将巨大芽胞杆菌、柿子
孢、禾长蠕孢菌和木霉菌转接至不同的装有培养基的50ml锥形瓶中，再将50ml锥形瓶放置在旋转培养器中，然后在32℃、130r/min的条件下培养30小时；
64.步骤四、将培养好的菌种接种于盛有培养基的500ml锥形瓶中，无菌操作，并在32℃、130r/min的条件下培养31小时；
65.步骤五、将各菌种按照质量百分配比混合，将混合后的菌液接种于盛有发酵培养基(发酵培养基的成分为：葡萄糖8g/l、蔗糖80g/l、乳酪蛋白胨3g/l、琼脂5g/l、kh2p045g/l、尿素5g/l、k2hp0420g/l、mgs04·
7h2o 20g/l、nacl 20g/l、(nh4)2so420g/l，其余为蒸馏水)的发酵罐中，加入1,1
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乙撑-2,2
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联吡啶二溴盐，然后调节发酵罐内部的ph为7.0，接种量为5％，在32℃的条件下培养7天，使发酵液中菌数达到10-15
×
108个/ml，即可得到微生物除草剂。
66.选定杂草长势相同的5块田地，将上述四个实施例中制备的除草剂分别施加到选中的4块田地中，再向剩下的1块田地中施加市面上的除草剂——敌草快作为对照例，并在施药后1天、3天、5天各调查一次杂草药后表现症状，在第7天的调查同时加查杂草地上部分死亡率，共调查4次，调查结果如下表所示：
67.[0068][0069]
由上表可以看出，本发明所制备的除草剂在第3天时能够开始发挥作用，使多数杂草叶面开始变黄，而且在第5天时可以使变黄的杂草枯死并且能够使之前叶面仍为绿色的顽强性杂草开始出现枯死的症状，从而能够在第7天时去除全部的杂草。而对照组中，从第5天开始除草剂才开始发挥作用，直至第7天仍然有杂草存活，可见，本发明所制备的除草剂除草效果，无论是除草速度还是除草的种类均优于市面上已有的除草剂。
[0070]
以上只通过说明的方式描述了本发明的某些示范性实施例，毋庸置疑，对于本领域的普通技术人员，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以用各种不同的方式对所描述的实施例进行修正。因此，上述实施例和描述在本质上是说明性的，不应理解为对本发明权利要求保护范围的限制。