用于促进幼年哺乳动物改善性格的含A2-β-酪蛋白的组合物的制作方法

用于促进幼年哺乳动物改善性格的含a2-β-酪蛋白的组合物
技术领域
1.本发明涉及营养组合物，其包含与a1-β-酪蛋白相比含有更大量的a2-β-酪蛋白的成长奶(gum)，用于促进幼年哺乳动物的性格改善。


背景技术：

2.为幼年哺乳动物提供最适当的营养支持是极为重要的，尤其是在生命的最早阶段。
3.已知给予幼年哺乳动物的营养会影响许多生理参数，不仅包括生长和发育，还包括消化舒适度、在生命后期和前夕对过敏原的反应，以及一定程度的认知功能。现今，某些食物成分与幼儿易怒和情绪低落有关。这些食品成分通常属于人工色素、糖(以蔗糖和葡萄糖的形式)、某些防腐剂，当然还有食物过敏原。然而，即使在避免了这些成分的情况下，一些幼儿仍然容易出现易怒、社交性差的情况，并且在他们心烦意乱时更难安抚。这些儿童可能在全球范围内被认为是
″
性格不好
″
。
″
性格不好
″
可以定义为容易烦躁、社交性差、安抚性差。
4.例如，幼儿(包括学步儿童和年幼儿童)的
″
性格不好
″
最初会导致儿童与负责的照料者(例如父母)之间的相处不好，随后会导致关系不佳。这不仅会在短期内，而且还会在以后的生活中给孩子带来严重的情绪问题，例如，由于缺乏自信心。
5.鉴于安抚或改善幼儿性格不好可能对他(以及他的直接随行人员)在以后的生活中产生潜在的长期影响，为改善幼儿特别是婴儿和学步儿童的性格不好提供解决方案非常重要。
6.重要的是，幼儿和他们的照料者可以享受幼儿的社交性、安抚性(即自我安抚或被照料者安抚的能力)、很少和较短的烦躁期的能力。
7.需要提供可以改善幼儿，特别是学步儿童和六岁以下年幼儿童的性格的解决方案。
8.需要提供允许幼年哺乳动物，特别是学步儿童和年幼儿童自我安抚或由照料者安抚的解决方案。
9.需要提供促进幼年哺乳动物，特别是学步儿童和年幼儿童的社交性的解决方案。
10.需要提供降低幼年哺乳动物特别是学步儿童和年幼儿童中易怒发作的频率和强度的解决方案。
11.发明人已经发现特定的哺乳动物乳成分，β-酪蛋白的a2变体，可以提供上述效果。a1和a2β-酪蛋白是β-酪蛋白乳蛋白的遗传变体，它们的一个氨基酸不同。
12.因此，
″
a2乳
″
通常是指各种牛乳，其主要缺乏一种称为a1的β-酪蛋白，而主要具有a2形式。a2牛乳可从a2 milk company(auckland，new zealand)商购获得。非牛乳，包括人、绵羊、山羊、驴、牦牛、骆驼、水牛等，也主要含有a2β-酪蛋白，因此在该上下文中也使用术语
″
a2乳
″
。
13.发明人已经在临床上证明，a2乳和包含a2-β-酪蛋白的a2乳来源的产品出乎意料
地在幼儿中提供了与肠道舒适度无关的性格改善效果。特别地，观察到a2乳来源的营养组合物的效果，其中a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的50％以上，优选70％以上，更优选90％以上，甚至更优选95％或最优选100％。


技术实现要素：

14.本发明的一个目的是提供包含诸如婴儿配方食品或成长奶(gum)的营养组合物，其可以改善幼年哺乳动物，特别是人类婴儿、学步儿童或年幼儿童的性格。
15.因此，本发明的一个方面涉及用于婴儿或学步儿童的营养组合物，其包含a2-β-酪蛋白，其中所述a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的50％以上，优选70％以上，更优选90％以上，甚至更优选95％或最优选100％，用于改善幼年哺乳动物，特别是学步儿童和年幼儿童的性格。
16.根据本发明的一个实施方案，β-酪蛋白以具有降低的β-酪蛋白衍生的蛋白胨含量的乳清蛋白级分的形式提供。
17.根据本发明的一个实施方案，基于营养组合物中的总蛋白质，所述脉蛋白胨含量为至多9重量％。
18.根据本发明的一个实施方案，所述蛋白胨是pp8快、pp8慢和/或pp-5a。
19.根据本发明的一个实施方案，所述营养组合物可用于降低婴儿、学步儿童或年幼儿童的易怒性。
20.根据本发明的一个实施方案，所述营养组合物可用于提高婴儿、学步儿童或年幼儿童自我安抚或被照料者安抚的能力。
21.根据本发明的一个实施方案，所述营养组合物可用于提高婴儿、学步儿童或学步儿童的社交性。
22.根据本发明的一个实施方案，所述营养组合物还包含一种或多种益生元。
23.根据本发明的一个实施方案，所述营养组合物还包含一种或多种益生菌。
24.根据本发明的一个实施方案，所述a2-β-酪蛋白是seq id no 1。
附图说明
25.图1示出了a2 gum对肠道舒适度和性格影响的示意性调节分析。调节分析表明，a2 gum对性格的影响不受肠道舒适变量的影响(p＝0.51)。
26.图1a：c是a2对性格的总影响，包括肠道舒适度改善产生的可能残余影响。
27.图1b：c
′
(ade)是a2对性格的直接影响。acme是评估a2对性格的影响是否受肠道舒适度影响的调节变量。
具体实施方式
28.定义
29.在进一步详细讨论本发明之前，首先定义下列术语和惯例。
30.术语
″
a2β-酪蛋白
″
是指具有根据seq id no：1的氨基酸序列的牛β-酪蛋白的a2变体(蛋白质的分泌形式)。在本发明的语境中，在67位包括脯氨酸的其他变体可以包括在a2β-酪蛋白中。
31.术语
″
a1β-酪蛋白
″
是指具有根据seq id no：2的氨基酸序列的牛β-酪蛋白的a1变体(蛋白质的分泌形式)。seq id no：1和seq id no：2的区别仅在于：a1β-酪蛋白在67位包含组氨酸，而a2β-酪蛋白在67位包含脯氨酸。在本发明的语境中，在67位包括组氨酸的其他变体可以包括在a1β-酪蛋白中。
32.术语
″
完整β-酪蛋白
″
是指除了移除信号序列之外未被剪切的蛋白质，例如由seq id no：1和seq id no：2所公开的蛋白质。
33.术语
″
wpc
″
是指
″
乳清蛋白浓缩物
″
。在语境中，wpc包括根据usp定义的传统wpc以及减少了乳糖的乳清和减少了矿物质的乳清，即蛋白质水平可低至10％w/w。
34.术语
″
wpi
″
是指
″
乳清蛋白分离物
″
，并且是以干基重量计乳清蛋白含量不小于90％的乳清蛋白浓缩物。
35.术语
″
乳清蛋白级分
″
是指包含乳清蛋白(例如，wpc和/或wpi)的组合物。
36.术语
″
标准smp
″
是指
″
标准脱脂奶粉
″
，并且衍生自混合奶牛群而获得的奶，因此包含β-酪蛋白的多种变体，包括a1β-酪蛋白和a2β-酪蛋白。
37.术语
″
a2 smp
″
是指
″
a2脱脂奶粉
″
，并且仅包含a2β-酪蛋白且不包含a1β-酪蛋白。
38.术语
″
蛋白质形式
″
是指由所有组合变异来源产生的高度相关的蛋白质分子，这些组合变异来源会引起由单个基因产生的产物。这包括因遗传变异，或因拼接的rna转录物和翻译后修饰而不同的产物。
39.术语
″
蛋白胨
″
与1982年swaisgood所用的蛋白胨相同，即术语
″
蛋白胨
″
是指在95℃下加热牛乳20分钟，然后用12％的三氯乙酸将牛奶酸化至ph 4.7之后保留在溶液中的那些蛋白质/肽。
40.术语
″
β-酪蛋白衍生的蛋白胨
″
是指仅由-酪蛋白衍生的蛋白胨，诸如pp-5、pp-8快和pp-8慢。
41.术语
″
蛋白胨5
″
、
″
pp5
″
或
″
pp-5
″
是指β-酪蛋白衍生的残基1-105和1-107。
42.术语
″
蛋白胨8快
″
、
″
pp8f
″
或
″
pp8快
″
是指β-酪蛋白衍生的残基1-28。pp8快也可被称为
″
bcas4p 1-28
″
。
43.术语
″
蛋白胨8慢
″
、
″
pp8s
″
或
″
pp8慢
″
是指β-酪蛋白衍生的残基29-105和29-107。pp8慢也可被称为
″
bcas1p 29-105
″
和
″
bcas1p 29-107
″
。
44.术语
″
婴儿
″
通常是指年龄在12个月以下的儿童；在一个实施方案中，该术语的含义可扩展包括18个月及以下的任何年龄的儿童，或包括24个月及以下的任何年龄的儿童。
45.术语
″
学步儿童
″
通常是指开始走路时的年龄至约36个月的儿童。
46.术语
″
幼儿
″
是指年龄为12个月至6岁的儿童。
47.如本说明书中所用，词语
″
包括
″
、
″
包含
″
和类似词语不应理解为具有排他性或穷举性的含义。换句话讲，这些词语旨在意指
″
包括，但不限于
″
。
48.如本文所用，术语
″
营养组合物
″
包括但不限于完全营养组合物、部分或不完全营养组合物、营养补充剂、以及特定于疾病或病症的营养组合物。
49.如本文所用，术语
″
营养补充剂
″
或
″
饮食补充剂
″
是指为个体提供所述个体可能无法以其它方式足量消耗的营养物质的营养产品。
50.如本文所用，术语
″
食物产品
″
是指可供人类或动物安全食用的任何种类的产品。所述食物产品可以是固体、半固体或液体形式，并且可包含一种或多种营养物质、食物或营
养补充剂。例如，食物产品可另外包含以下营养物质和微量营养物质：蛋白质源、脂质源、碳水化合物源、维生素和矿物质。该组合物还可含有抗氧化剂、稳定剂(以固体形式提供时)或乳化剂(以液体形式提供时)。
51.如本文所用，术语
″
婴儿配方食品
″
是指替代人乳或除人乳之外施用于婴儿和学步儿的组合物。婴儿配方食品(也称为
″
配方食品
″
)由美国联邦食品、药品和化妆品法案(u.s.federal food，drug，and cosmetic act，ffdca)定义为
″
由于模拟人乳或作为人乳的完全或部分替代品的适用性而意图作为或仅针对特殊膳食使用而表示为婴儿食物的食物
″
。其还由欧洲法规(1991年5月14日关于婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的委员会指令(9 1/32 i/eec))和由食品法典委员会发布的指南
″
婴儿配方食品及特殊医用婴儿配方食品标准
″
codex stan 72-1981(2015版)来定义，
″
婴儿配方食品及特殊医用婴儿配方食品标准
″
在1981年采纳为全球标准，1983年、1985年、1987年、2011年和2015年修正，2007年修订)。
52.婴儿配方食品可含有例如牛乳乳清蛋白和酪蛋白作为蛋白质来源、植物油的共混物作为脂肪来源、乳糖作为碳水化合物来源、维生素和矿物质混合物以及其它成分，具体取决于制造商。用于对其它牛乳蛋白质过敏的婴儿的婴儿配方食品可包含大豆作为蛋白质来源来替代牛乳，或者可包含部分水解或深度水解的牛乳蛋白质。婴儿配方食品还可基于绵羊奶、山羊奶、骆驼奶或水牛奶。可特别配制婴儿配方食品以满足婴儿在出生后前六个月内(1段配方食品)或六个月以后(较大婴儿配方食品)的营养需求。早产婴儿或低出生体重婴儿if也可用于早产婴儿或低出生体重婴儿。
53.术语
″
成长乳
″
或
″
gum
″
是指已用铁或其它矿物质和维生素强化的乳(通常是牛乳)；通常旨在施用于12个月以上的婴儿，直到他们达到约36个月。
54.术语
″
营养组合物
″
是指供给个体营养物质的组合物。该营养组合物通常经口服或静脉注射摄入。其可包含脂质或脂肪源、碳水化合物源和/或蛋白质源。本发明的营养组合物可为固体形式(例如，粉末)或液体形式。
55.在一个具体实施方案中，本发明的组合物是低变应原营养组合物。表述
″
低变应原营养组合物
″
是指不大可能引起变态反应的营养组合物。
56.在一个具体实施方案中，本发明的营养组合物是
″
合成营养组合物
″
。表述
″
合成营养组合物
″
是指采用化学和/或生物方法获得的混合物，该混合物的化学性质可能与哺乳动物乳中天然存在的混合物相同(即，合成营养组合物不是母乳)。
57.″
益生菌
″
是指对宿主的健康或良好状态具有有益效果的微生物细胞制剂或微生物细胞成分。益生菌的定义由salminen s等人在1999年给出。
58.″
益生元
″
是指选择性发酵成分，其允许所述组合物和/或为宿主健康带来益处的胃肠微生物群活性产生特异性变化。roberfroid mb在2007年发表的文章中对益生元进行了讨论。
59.包含a2-β-酪蛋白的蛋白质组分
60.本发明的营养组合物通常可包含的蛋白质源的量不超过4.0、3.0或2.1g/100kcal，优选1.8至2.1g/100kcal。
61.通常优选超过50重量％的蛋白质源是乳清。
62.在一个实施方案中，蛋白质含量介于30％和80％乳清蛋白之间。因此，可使用基于
乳清、酪蛋白以及其混合物的蛋白质源，也可使用基于大豆的蛋白质源。
63.就所关注的乳清蛋白质而言，蛋白质源可基于酸乳清或甜乳清或它们的混合物，并且可包含任何所需比例的α-乳白蛋白和β-乳球蛋白。
64.在本发明的一个实施方案中，营养组合物包含为乳清蛋白和酪蛋白的混合物的蛋白质，其中乳清蛋白与酪蛋白的比例介于50∶50和80∶20之间，优选为60∶40。
65.对于酪蛋白，al/a2β-酪蛋白比例通常很重要。具体地，a2-β-酪蛋白(seq id no 1)占组合物中存在的总β-酪蛋白的50％以上，优选70％以上，更优选90％以上，甚至更优选95％或最优选100％。
66.根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的50％以上。根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的70％以上。根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的80％以上。根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总p-酪蛋白的90％以上。根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的95％以上。根据本发明的一个实施方案，a2-β-酪蛋白占总β-酪蛋白的100％。在这种情况下，组合物中不存在a1-β-酪蛋白(seq id no 1)。
67.一般来讲，蛋白质可为完整蛋白质或水解蛋白质，或为完整蛋白质和水解蛋白质的混合物。供应部分水解的蛋白质(水解程度介于2％和20％之间)可能是可取的，例如对于被认为处于发生乳变态反应的风险的婴儿而言。如果使用水解蛋白质，则可根据需要并且如本领域已知的那样进行水解过程。例如，可通过在一个或多个步骤中对乳清级分进行酶促水解来制备乳清蛋白质水解物。如果用作原料的乳清级分基本上不含乳糖，则发现该蛋白质在水解过程期间经受少得多的赖氨酸封闭(lysine blockage)。这使得能够将赖氨酸封闭的程度从约15重量％的总赖氨酸减少至小于约10重量％的赖氨酸；例如约7重量％的赖氨酸，这大大地改善蛋白质源的营养质量。
68.根据本发明的一个实施方案，营养组合物可包含具有降低的β-酪蛋白衍生的蛋白胨含量的乳清蛋白级分。由于标准生产方法，用于配制营养组合物(包括婴儿配方食品和成长奶)的可用乳清蛋白级分通常包含a1乳清和/或a1a2乳清。然而，由于a1β-酪蛋白将在乳清制备期间发生沉淀而不会成为乳清蛋白级分的一部分，因此这在之前未被当作问题看待(例如，对于a2婴儿配方食品的生产来说)。然而，在ep申请号18214628.2中已经表明，在乳清蛋白级分诸如wpc中检测到衍生自a1β-酪蛋白的蛋白胨。
69.因此，有利地，营养组合物可包含具有降低的β-酪蛋白衍生的蛋白胨含量的乳清蛋白级分。这样的乳清蛋白级分可以通过包括以下步骤的方法提供：
70.(i)提供乳清蛋白级分；
71.(ii)确定和量化如本文所述的所述乳清蛋白级分中的所述β-酪蛋白衍生的蛋白胨；以及
72.(iii)基于所述乳清蛋白级分中的总蛋白质，选择具有以重量计至多10％的β-酪蛋白衍生的蛋白胨的所述乳清蛋白级分，从而形成所选乳清蛋白级分。
73.执行这些步骤的方法在ep申请号18214628.2中有所描述。
74.根据这些方法，可以容易地检测和定量β-酪蛋白衍生的蛋白胨(包括β-酪蛋白变体和蛋白形式)的含量。因此，可将乳清蛋白级分分离成包含不同量的蛋白胨的乳清蛋白级分。因此，可选择包含以重量计占乳清蛋白级分中蛋白质总量至多10％的蛋白胨的
蛋白质级分。
75.在一个实施方案中，基于该乳清蛋白级分中的总蛋白质，所选乳清蛋白级分的β-酪蛋白衍生的蛋白胨含量诸如为至多9.5重量％的β-酪蛋白衍生的蛋白胨，诸如为至多9重量％，优选地为至多8.5重量％，诸如为至多8重量％，更优选地为至多7.5重量％，诸如为至多7重量％，进一步更优选地为至多6.5重量％，诸如为至多6重量％，仍更优选地为至多5.5重量％，诸如为至多5重量％，最优选地为至多4.5重量％，诸如为至多4重量％，为至多3.5重量％，诸如为至多3重量％，优选地为至多2.5重量％，诸如为至多2重量％，更优选地为至多1.5重量％，诸如为至多1重量％，进一步更优选地为至多0.75重量％，诸如为至多0.50重量％，仍更优选地为至多0.25重量％，诸如为至多0.10重量％，最优选地为至多0.05重量％，诸如为至多0.01重量％。
76.优选地，使用凯氏分析法(iso 8968-1：2014)测量乳清蛋白级分中蛋白质的总量。
77.在一个实施方案中，蛋白胨是pp8快、pp8慢和/或pp-5。在另一个实施方案中，蛋白胨是pp8慢和/或pp-5。
78.在一个实施方案中，基于该乳清蛋白级分中的总蛋白质，所选乳清蛋白级分的pp8慢和/或pp-5含量为至多9.5重量％，诸如为至多9重量％，优选地为至多8.5重量％，诸如为至多8重量％，更优选地为至多7.5重量％，诸如为至多7重量％，甚至更优选地为至多6.5重量％，诸如为至多6重量％，还更优选地为至多5.5重量％，诸如为至多5重量％，最优选地为至多4.5重量％，诸如为至多4重量％，为至多3.5重量％，诸如为至多3重量％，优选地为至多2.5重量％，诸如为至多2重量％，更优选地为至多1.5重量％，诸如为至多1重量％，甚至更优选地为至多0.75重量％，诸如为至多0.50重量％，还更优选地为至多0.25重量％，诸如为至多0.10重量％，最优选地为至多0.05重量％，诸如为至多0.01重量％。
79.在又一个实施方案中，蛋白胨是pp-5。
80.本发明的营养组合物可旨在用于任何哺乳动物，诸如例如人和宠物(诸如猫和狗)。在一个优选实施方案中，哺乳动物是人。在一个优选的实施方案中，人是大于12个月且小于6岁的婴儿。
81.营养组合物的示例是婴儿配方食品、成长奶和适合幼儿的乳制品。
82.在一个实施方案中，营养组合物是适合超过12个月大的婴儿的较大婴儿配方食品。
83.在一个实施方案中，营养组合物是成长奶(gum)。
84.许多含a2-β-酪蛋白的乳制品目前可商购获得，并且它们可适用于根据本发明的实施方案的用途。例如，可以引用可从wyeth(usa)获得的
″
illuma atwo 3段
″
。该产品的营养组成在以下实施例2中给出。可商购获得的含a2-β-酪蛋白的奶制品的另一个示例是可从a2 milk公司(auckland new zealand)获得的a2 学步儿童奶饮料。该产品的营养组成在以下实施例3中给出。可商购获得的含a2-β-酪蛋白的奶制品的另一个示例是可从wyeth(usa)获得的
″
illuma atwo 2段
″
。该产品的营养组成在以下实施例4中给出。
85.根据本发明的用途的营养组合物(诸如婴儿配方食品)的一般组成可可选地包含可能具有有益效果的物质，诸如益生菌、纤维、乳铁蛋白、核苷酸、核苷和/或其他物质，这些物质在即将喂食给婴儿的营养组合物中以常规用量存在。
86.益生菌可选自乳杆菌，诸如鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌和罗伊氏乳杆菌，以及双
歧杆菌，诸如乳双歧杆菌、短双歧杆菌和长双歧杆菌。
87.营养组合物(诸如较大婴儿配方食品或成长奶)还可可选地包含益生元，诸如促进肠道益生菌生长的非消化性碳水化合物。
88.在一个优选实施方案中，营养组合物(诸如较大婴儿配方食品或成长奶)包含益生元，该益生元选自低聚果糖(fos)、乐福特低聚果糖、菊粉、乐福特菊粉、乳果糖、牛乳低聚糖(cmos)和低聚半乳糖(gos)、人乳低聚糖(cmos)。
89.营养组合物还可包含被认为是日常饮食所必需的所有维生素和矿物质，这些维生素和矿物质以营养显著量存在于组合物中。
90.因此，一个优选实施方案涉及营养组合物，诸如较大婴儿配方食品或成长奶(gum)，其中还包含维生素。
91.已确定某些维生素和矿物质的最低需求。矿物质、维生素和可选地存在于营养组合物中的其他营养物质的示例包括维生素a、维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素b12、维生素e、维生素k、维生素c、维生素d、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和左旋肉碱。矿物质通常呈盐形式添加。
92.如有必要，营养组合物(诸如较大婴儿配方食品或gum)可包含乳化剂和稳定剂，诸如大豆、卵磷脂、柠檬酸甘油单酯和柠檬酸甘油二酯等。如果组合物以液体形式提供，则尤其如此。
93.另一个优选实施方案涉及营养组合物，诸如较大婴儿配方食品或gum，还包含无水乳脂肪。
94.另一个优选实施方案涉及营养组合物，诸如较大婴儿配方食品或gum，还包含lc-pufa。可添加的lc-pufa的示例是二十二碳六烯酸(dha)、花生四烯酸(ara)和epa。lc-pufa可以一定浓度添加，使得其占大于组合物中存在的总fa的0.01％。因此，含lc-pufa的油可以组合物中总脂质量的约0.2％至2％的量存在，诸如dha、epa、dpa和/或ara。
95.益生菌：
96.在一个优选的实施方案中，益生菌包含在本发明的营养组合物中。已知益生菌化合物的示例为芽孢杆菌属(bacillus)、双歧杆菌(bifidobacterium)、双歧杆菌(lactobacillus)、乳球菌(lactococcus)、肠球菌(enterococcus)、酵母(saccharomyces)、克鲁维酵母(kluyveromyces)、假丝酵母(candida)、链球菌(streptococcus)，特别地选自亚芯长双歧杆菌、乳双歧杆菌、动物双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、青春双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、唾液乳杆菌、乳酸乳杆菌(lactobacilluslactis)、罗伊氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、约氏乳杆菌、植物乳杆菌、乳酸乳球菌、嗜热链球菌、屎肠球菌、酿酒酵母、鲍氏酵母菌和尼氏大肠杆菌。特别地，是益生菌和非复制性益生菌，诸如乳杆菌属、双歧杆菌属或它们的组合，例如约氏乳杆菌(lactobacillus johnsonii)、副干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)、鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、长双歧杆菌(bifidobacterium longum)、乳双歧杆菌(bifidobacterium lactis)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)或它们的组合，以及这些细菌的应用。
97.碳水化合物：
98.一个优选实施方案涉及营养组合物，诸如较大婴儿配方食品或gum，其中至少一种
碳水化合物源选自乳糖、玉米糖浆固体、果糖、葡萄糖、麦芽糖糊精、干葡萄糖糖浆、蔗糖、海藻糖、半乳糖、麦芽糖、蜂蜜粉末、淀粉、低聚糖、乐福特菊粉或乐福特低聚果糖。
99.乳糖可构成基本上碳水化合物含量的100％。还可添加其他碳水化合物，诸如糖精、麦芽糖糊精和淀粉。然而，在一个优选的实施方案中，本发明的营养组合物可包含优选用作益生元的碳水化合物。例如，益生元优选选自2
′
岩藻糖基乳糖、乳糖二岩藻四糖、3岩藻糖基乳糖、乳糖-n-岩藻五糖i、乳糖-n-岩藻五糖ii、乳糖-n-岩藻五糖iii、乳糖-n-新四糖、乳糖-n-四糖、3
′
唾液酸乳糖、6
′
唾液酸乳糖、3
′
唾液酸乳糖-n-四糖、6
′
唾液酸乳糖-n-新四糖、菊粉、低聚果糖(fos)、短链低聚果糖(短链fos)、低聚半乳糖(gos)、低聚木糖(xos)、神经节苷脂、部分水解的瓜尔胶、阿拉伯胶、大豆胶或它们的混合物。
100.一种或多种碳水化合物可以约1g至20g或1％至80％或20％至60％组合物的日剂量存在。另选地，碳水化合物以干组合物的10％至80％存在，例如，以9g/100kcal至14g/100kcal的量存在。
101.在一个优选的实施方案中，乳糖占组合物中存在的碳水化合物的98％以上。
102.在一个实施方案中，营养组合物包含根据wo2007/090894的低聚糖的混合物(一般教导，具体地见实施例1)。它可特别地与gos结合使用。基础配方食品可提供低聚糖混合物，该混合物包含：5重量％-70重量％的至少一种n-乙酰化低聚糖，其选自包括以下的组：galnacα1，3galβ1，4glc和galβ1，6galnacα1，3galβ1，4glc；20重量％-90重量％的至少一种中性低聚糖，其选自包括以下的组：galβ1，6ga1、galβ1，6galβ1，4glcgalβ1，6galβ1，6glc、galβ1，3galβ1，3glc、galβ1，3galβ1，4glc、galβ1，6galβ1，6galβ1，4glc、galβ1，6galβ1，3galβ1，4glc galβ1，3galβ1，6galβ1，4glc和galβ1，3galβ1，3galβ1，4glc；以及5重量％-50重量％的至少一种唾液酸化低聚糖，其选自包括以下的组：neuacα2，3galβ1，4glc和neuacα2，6galβ1，4glc。
103.可将其他组分添加到营养组合物，诸如维生素和矿物质。
104.如有必要，本发明的组合物可包含乳化剂和稳定剂，诸如大豆、卵磷脂、柠檬酸甘油单酯和柠檬酸甘油二酯等。
105.组合物还可包含可能具有有益效果的其他物质，诸如乳铁蛋白、核苷酸、核苷、神经节苷脂、多胺等等。营养组合物还可包含调味剂，诸如但不限于香兰素。
106.一个特定优选实施方案涉及营养组合物，还包含低聚果糖，诸如乐福特菊粉和/或乐福特低聚果糖。
107.营养组合物(诸如较大婴儿配方食品或gum)可以是液体配方食品或在使用前待重构的粉末。一个优选实施方案是粉末状较大婴儿配方食品。
108.在一个优选实施方案中，营养组合物是通过重构粉末制备的液体组合物。
109.在一个优选实施方案中，营养组合物是液体组合物，例如液体成长奶(gum)。
110.营养组合物还可包含被认为是日常饮食中必不可少的以营养显著量存在的一切维生素和矿物质。已确定某些维生素和矿物质的最低需求。矿物质、维生素和存在于营养组合物中的其他营养物质的示例包括维生素a、维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素e、维生素k、维生素c、维生素d、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯化物、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸和左旋肉碱。矿物质通常以盐的形式添加。
111.营养组合物的制备：
112.可通过任何已知或其他合适的方式制备根据本发明的营养组合物。
113.当然，蛋白质组分是上述包含a2-β-酪蛋白的组分，其占组合物中总β酪蛋白的50％以上，优选70％以上，更优选90％以上，甚至更优选95％或最优选100％。
114.例如，成长奶可通过将合适的蛋白质源与碳水化合物源和脂质源以合适的比例共混在一起而完善。如果使用乳化剂，则可包括在此阶段。在此阶段可添加维生素和矿物质，但也可随后添加，以免热降解。然后可添加并混入水(优选经过反渗透的水或去离子水)，形成液体混合物。混合温度优选为室温，但也可更高。随后可对液体混合物进行热处理，以降低细菌载量。接着可将混合物均质化。
115.如果需要生产粉末状组合物，将均质化的混合物在合适的干燥装置(诸如喷雾干燥器或冷冻干燥器)中干燥，并将其转化成粉末。
116.用于制备婴儿和幼儿配方食品的方法基于这样的概念：产品必须是营养充足的，并且就微生物学而言可安全食用。因此，消除或限制微生物生长的步骤对于生产方法至关重要。每种特定配方食品的加工技术属制造商所有，但一般来讲，就粉末产品而言，其涉及通过脱水来保藏水包油(o/w)乳液，或就即食或浓缩液体产品而言，其涉及灭菌。粉状婴儿配方食品可通过各种方法生产，诸如对脱水成分进行干混以构成均匀配方食品，或者对常量成分(诸如脂肪、蛋白质和碳水化合物成分)的混合物进行水合和湿混，并且然后将所得混合物蒸发并喷雾干燥。可使用上述两种方法的组合，其中首先通过对所有或一些常量成分进行湿混和喷雾干燥来制备基础粉末，并且然后对其余成分(包括碳水化合物、矿物质和维生素及其他微量营养物质)进行干混，从而得到最终配方食品。液体配方食品以即食形式或作为浓缩液体提供，后者需要用水稀释，通常1∶1。用于这些产品的制造方法类似于用于制造再制乳的那些方法。
117.如果需要生产液体婴儿配方食品，将均质化的混合物装入合适的容器中，优选在无菌条件下进行。然而，还可在容器中蒸煮该液体组合物，用于进行这种填充和蒸煮的合适装置可商购获得。
118.以a2-β-酪蛋白为主的营养组合物或具有降低的蛋白胨含量的营养组合物的治疗用途
119.发明人已在临床试验中表明，幼儿在食用根据本发明的实施方案的营养组合物后具有改善的性格。实施例1描述了一项临床试验，该临床试验显示了本发明的营养组合物对幼儿性格的积极影响。
120.统计学上显著的结果表明，与对照组合物相比，施用的以a2-β-酪蛋白为主的营养组合物改善了所研究的幼儿的性格。具体地，施用以a2-β-酪蛋白为主的营养组合物降低了幼儿的易怒性。它还提高了婴儿、学步儿童或年幼儿童自我安抚或被照料者安抚的能力。施用以a2-β-酪蛋白为主的营养组合物还增加了幼儿的社交性。
121.根据特定的实施方案，幼儿的年龄介于12个月和6岁之间。
122.本文报告的临床试验旨在消除由于该组的性格差异而造成的偏倚。该研究的随机设计控制了来自两组之间性格差异的潜在偏倚。随机选择受试者参与a2 gum或非a2组。随机组之间的任何性格分布都应该相似。因此，所看到的效果可归因于所施用的gum组合物的组成差异。
123.与接受标准a1/a2 gum的儿童相比，接受a2乳制品的儿童表现出明显更好的性格。
124.分析数据以确定在幼儿中观察到的对性格的积极效果是否是由于与含a1/a2-β-酪蛋白的对照组合物相比，以a2-β-酪蛋白为主的gum可能诱导任何潜在增加的肠道舒适度。降低易怒性示出了示意图，表明性格效果与肠道舒适效果无关。
125.因此，申请人观察到的对性格的积极效果与任何潜在的肠道舒适效果无关且不同。
126.施用周期
127.本发明的营养组合物的施用周期可以是连续的或不连续的。要获得更持续的功效，连续施用是优选的。通常，营养组合物可以每天至少施用两次，优选每天施用三次。
128.然而，据推测，不连续的模式(例如，隔天每天施用三次)仍然可以对幼年哺乳动物产生积极效果。
129.一般来讲，虽然预期在施用的持续时间相对短(例如，在一周至四周期间每日施用)的情况下有积极效应，但据信较长的持续时间提供增强的效应(例如，在人类中至少三个月至六个月的持续时间，优选至少一年，以及在其他哺乳动物中的对应时间段)。
130.在本发明的一个实施方案中，营养组合物旨在供婴儿或学步儿童食用。在这种情况下，食用可从12个月开始，并且可从那时持续到任何年龄，直到约36个月。
131.在本发明的一个实施方案中，营养组合物旨在供幼儿食用。在这种情况下，食用可从三岁开始，或从4岁、或5岁、或6岁开始，或从任何年龄开始，直到约7岁。
132.现将在下面的非限制性实施例中进一步详细描述本发明。
133.实施例
134.实施例1临床研究
135.主要目的是比较在2周的研究期间食用仅含有a2-β-酪蛋白的gum(a2 gum)的12-36个月大的幼儿与食用传统非a2乳制品的幼儿之间的总体消化舒适度。
136.研究设计
137.该研究是一项多中心、非对照的上市后研究，对象为符合研究入选和排除标准的12至36个月的幼儿。本试验共有387名受试者参加(a2 gum组259名，非a2gum组128名)。受试者被分配接受a2 gum(wyeth illuma atwo成长奶，目前在中国可商购获得，参见实施例2)、对照物a2 gum(a2 学步儿童奶饮料，参见实施例3)，或继续使用非a2奶。使用先验确定的分配时间表将受试者随机分配到每个组。在研究第1天，向受试者分配指定的研究gum(对于a2 gum或对照物a2 gum组)或指示他们的孩子继续非a2奶和奶制品的习惯性喂养方案(传统非a2奶组)。每天分配三份a2 gum或对照物a2 gum，并指示照料者提供研究gum 14天。受试者和照料者在研究第1天和第15天接受2次门诊随访，并在研究第1、5-7和12-14天完成研究问卷。本研究的主要结果测量是肠道舒适度综合评分(gcs)，其源自九项幼儿肠道舒适度问卷。gcs的潜在范围为10至60，评分越高表明gi负荷越高。基线评估源自前一天的一次24小时会议，研究第7天和第14天的评估分别来自第5-7天和第12-14天连续3天的平均值。本研究的次要结果包括1)个体gi症状/行为频率和严重程度评分，2)大便频率和大便稠度评分，3)奶摄入(类型和体积)，4)奶满意度评分，5)人体测量学(体重、身高、头围和相应的人体测量z评分)，以及6)儿童性格。在结果部分中，a2 gum是指组合的a2 gum组。
138.使用幼儿行为问卷(ecbq)的简短版本通过父母报告评估幼儿和儿童的性格，该问卷已在多项研究中得到验证并在中国人群中使用。该问卷包括9个问题，涵盖了恐惧、沮丧、
冲动、社交性、安抚性、悲伤和害羞等多个行为领域。在研究第14天对所有受试者进行问卷调查。anova用于评估a2 gum与非a2奶组之间行为范围的差异。事后，还使用gcs中的每个个体测量值与个体性格测量值之间的散点图矩阵计算和显示相关性，并总体计算典型相关性。
139.研究结果-性格
140.表1：第14天的性格问卷(fas)
[0141][0142]
[0143][0144]
fas＝全分析组。使用anova分析第14天的平均性格测量值的差异。在九个性格问题中，a2 gum和非a2奶组在第14天的平均评分有4个显著差异。与非a2奶组(3个问题，在所有情况下p＜0.05)相比，a2 gum组报告的平均社交性(
″
当一个熟悉的孩子来到你家时，你的孩子找这个孩子陪伴的频率如何？
″
和
″
当一个熟悉的成年人(例如亲戚或朋友)到你家拜访时，你的孩子想与成年人互动的频率如何？
″
)和安抚性(
″
当她/他心烦意乱时，你的孩子变得容易安抚的频率如何？
″
)评分更高，但报告的平均活动水平(
″
在室内玩耍时，你的孩子跑进房子的频率如何？
″
)评分(p＝0.03)更低。
[0145]
进行了进一步的数据探索，以研究在性格中观察到的影响是否通过对肠道舒适度的积极益处来调节。通过主组分评分来总结肠道舒适度问卷和性格，主组分评分是问卷评分的加权总和，其中以最大限度地提高治疗效果的方式选择权重。图1示出了该数据分析结果的示意图。
[0146] 估计95％cip值acme-0.019-0.097，-0.0970.51ade0.7250.170，1.2760.008总效果(c)0.7060.158，1.2530.01
[0147]
表2
[0148]
如表2所示，调节分析表明，a2对性格的影响不受肠道舒适变量的影响(p＝0.51)。相反，a2 gum对性格质有直接影响，具有统计学意义(p＝0.008)。此外，在评估a2对性格的总体效果时，效果保持稳定(0.725对0.706)，进一步支持a2对性格的效果与对肠道舒适度的效果无关。
[0149]
因此，在施用a2 gum后观察到的改善的性格可能不能被描述为改善肠道舒适度的副作用。效果是不同的，并且不相关。
[0150]
实施例2
[0151]
含有a2-β-酪蛋白的a2 3段奶
[0152]
[0153][0154]
实施例3
[0155]
学步儿童奶饮料，含有a2-β-酪蛋白，购自a2奶公司(auckland，australia)。
[0156]
[0157]
[0158][0159]
实施例4
[0160]
含有a2-β-酪蛋白的a2 2段奶
[0161]
[0162][0163]
序列表
[0164]
seq id no：1(a2β-酪蛋白的氨基酸序列)：
[0165]
releelnvpg eiveslssse esitrinkki ekfqseeqqq tedelqdkih pfaqtqslvy pfpgpipnsl pqnippltqt pvvvppflqp evmgvskvke amapkhkemp fpkypvepft esqsltltdv enlhlplpll qswmhqphqp lpptvmfppq svlslsqskv lpvpqkavpy pqrdmpiqaf llyqepvlgp vrgpfpiiv
[0166]
seq id no：2(a1β-酪蛋白的氨基酸序列)：
[0167]
releelnvpg eiveslssse esitrinkki ekfqseeqqq tedelqdkih pfaqtqslvy pfpgpihnsl pqnippltqt pvvvppflqp evmgvskvke amapkhkemp fpkypvepft esqsltltdv enlhlplpll qswmhqphqp lpptvmfppq svlslsqskv lpvpqkavpy pqrdmpiqaf llyqepvlgp vrgpfpiiv