用于分析两性电解质批次变化的液相色谱法-质谱法(LC-MS)方法与流程

技术特征：
1.一种鉴定具有合适的活性的测试两性电解质组合物的方法，所述方法包括：a.使用液相色谱法-质谱法(lc-ms)鉴定至少一种测试两性电解质组合物和参考两性电解质组合物中的至少一种标志物；以及b.确定所述至少一种标志物在所述至少一种测试两性电解质组合物与所述参考两性电解质组合物之间的相似性或差异程度，其中如果所述至少一种标志物具有低协方差并且所述至少一种标志物的水平在所述至少一种测试两性电解质组合物与所述参考两性电解质组合物之间不同，则所述至少一种测试两性电解质组合物具有合适的活性，或者其中如果所述至少一种标志物具有高协方差并且所述至少一种标志物的水平在所述至少一种测试两性电解质组合物与所述参考两性电解质组合物之间相似，则所述至少一种测试两性电解质组合物具有合适的活性；由此鉴定具有合适的活性的测试两性电解质组合物。2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括：i.确定所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物的多种组分的准确质量/保留时间(amrt)和/或碰撞横截面测量结果；ii.使用s绘图绘制来自所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物的所述多种组分的所述amrt和/或碰撞横截面测量结果的协方差；以及iii.选择在所述至少一种测试两性电解质组合物与所述参考两性电解质组合物之间不同的至少一种组分，其中所述差异包括在所述s绘图中为非0的协方差；由此鉴定用于表征所述至少一种测试两性电解质组合物的合适性的至少一种标志物。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述s绘图中的所述至少一种组分的协方差小于所述s绘图中的所述多种组分的至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％或至少80％的协方差。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中如果所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物中的所述至少一种标志物的水平不同，则所述至少一种测试两性电解质组合物具有合适的活性。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述至少一种标志物的水平的差异包括相对于所述至少一种标志物的归一化水平至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的水平差异。6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)包括：i.确定所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物的多种组分的准确质量/保留时间(amrt)或碰撞横截面测量结果；ii.使用s绘图绘制来自所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物的所述多种组分的所述amrt或碰撞横截面测量结果的协方差；以及iii.选择在所述至少一种测试两性电解质组合物与所述参考两性电解质组合物之间相似的至少一种组分，其中所述相似性包括在所述s绘图中为非0的协方差；由此鉴定用于表征所述至少一种测试两性电解质组合物的合适性的至少一种标志物。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述s绘图中的所述至少一种组分的协方差大于所述s绘图中的所述多种组分的至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少
90％、至少95％或至少99％的协方差。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中如果所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物中的所述至少一种标志物的水平相似，则所述至少一种测试两性电解质组合物具有合适的活性。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述至少一种标志物的水平的相似性包括相对于所述至少一种标志物的归一化水平至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少99％相似的水平。10.根据权利要求1到9中任一项所述的方法，其中所述至少一种标志物通过质荷比(m/z)来鉴定。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种标志物的水平由质谱中的所述m/z的相对强度表征。12.根据权利要求11所述的方法，其中步骤(b)包括：i.确定所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物中的所述至少一种标志物的lc-ms质谱；ii.确定所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物的所述质谱中的所述至少一种标志物的基峰的相对强度；iii.相对于从所述至少一种测试两性电解质组合物或所述参考两性电解质组合物测得的所述基峰的最大相对强度，归一化所述至少一种标志物的所述基峰的所述相对强度；以及iv.比较所述至少一种测试两性电解质组合物和所述参考两性电解质组合物中的所述至少一种标志物的所述基峰的归一化相对强度。13.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，其中所述至少一种标志物包括1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种或16种具有不同m/z的标志物。14.根据权利要求1到12中任一项所述的方法，其中所述至少一种标志物包括16种具有不同m/z的标志物。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述16种标志物包括m/z为280、m/z为319、m/z为329、m/z为347、m/z为373、m/z为375、m/z为376、m/z为431、m/z为504、m/z为506、m/z为508、m/z为520、m/z为534、m/z为562、m/z为906和m/z为980的标志物。16.根据权利要求1到15中任一项所述的方法，其中所述质谱法包括离子迁移率四极飞行时间质谱法(ims-q-tof-ms)。17.根据权利要求1到16中任一项所述的方法，其中所述液相色谱法包括高效液相色谱法(hplc)。18.根据权利要求17所述的方法，其中所述hplc包括c4硅胶柱。19.根据权利要求1到18中任一项所述的方法，其进一步包括通过使用所述参考两性电解质组合物和所述至少一种测试两性电解质组合物产生参考蛋白的成像毛细管等电聚焦(icief)电泳图，由此产生至少一个测试电泳图和参考电泳图来验证所述至少一种测试两性电解质组合物。20.根据权利要求19所述的方法，其中如果所述至少一种测试电泳图和所述参考电泳
图相似，则验证所述测试两性电解质组合物。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述至少一个测试电泳图和所述参考电泳图的相似性由峰的数量、大小或等电点(pi)或其组合来确定。22.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述至少一个测试电泳图和所述参考电泳图的相似性包括具有相同数量的峰。23.根据权利要求20到22中任一项所述的方法，其中所述至少一个测试电泳图和所述参考电泳图的相似性包括所述参考电泳图和所述至少一个测试电泳图的p值小于0.05的区域的峰下面积的差异。24.根据权利要求23所述的方法，其中所述区域包括主参考峰、比所述主参考峰酸性更大的区域或比所述主参考峰碱性更大的区域。25.根据权利要求1到24中任一项所述的方法，其中所述合适的活性包括毛细管等电聚焦(cief)或成像毛细管等电聚焦i(cief))。26.根据权利要求25所述的方法，其中所述icief用于表征蛋白质药物产品或药物物质。

技术总结
本公开涉及使用液相色谱法-质谱法表征适合于下游应用，如毛细管等电聚焦的两性电解质组合物的方法。组合物的方法。组合物的方法。


技术研发人员：R
受保护的技术使用者：瑞泽恩制药公司
技术研发日：2020.10.09
技术公布日：2022/6/4