鸡胚胎加工品、其制备方法及其用途

1.本发明属于医药领域，具体涉及鸡胚胎加工品、其制备方法及其用途。


背景技术：

2.骨折损伤是世界上机械作业、交通及战争等造成最多的事故和伤残。世界上新鲜骨折、陈旧骨折、骨折延迟不愈和不愈合的并发病是发生最多最严重的并发症，治疗方法有药物治疗和基本的骨折复位、固定、功能锻炼、牵引治疗、夹板固定、石膏固定等方法，然而相当大的比例会发生骨不连及延迟愈合，甚至可能引起截止的结果，为患者带来终身残疾，同时也为社会增加沉重的负担。全球骨折后发生骨不愈合、感染甚至残疾引起的截止的患者据统计约为1-3％，经济损失约到10亿人民币。
3.对于骨折的药物治疗，目前主要是给予止痛片、消肿药物、钙片和维生素等，尚缺少一种对骨折的愈合具有较好的促进作用的药物。
4.鸡胚胎是受精的鸡蛋，通过人工或者鸡本身孵化培育出来的未孵化的小鸡之前的一种动物胚胎。鸡胚胎自古以来被称为“大众的补养品”，其含有丰富的蛋白质、氨基酸和多种微量元素。
5.近年来人们对鸡胚胎或鸡胚胎素多有研究，发明专利cn12266401a，申请号98100528.4，公开了一种活的胚胎龄为7-9日的鸡胚胎为原料的保健食品。中国发明专利cn1324625a，申请号为00107555.1，公开了一种鸡胚胎素的制备方法，该工艺是将鸡胚胎蒸汽提取后加中药制成液体，浓缩后得到精华素。中国发明专利cn106138101a提供了一种鸡胚胎提取物制备方法，应用70％乙醇进行渗漉，然后用70-90℃进行减压浓缩，再经过白陶土处理得到鸡胚胎的提取物，工艺复杂繁琐，制备过程中涉及高温浓缩破坏蛋白的活性。
6.上述现有技术对鸡胚胎的加工方法中存在的主要问题是：工艺步骤较多或涉及高温浓缩，使得鸡胚胎中蛋白活性的破坏和流失。


技术实现要素：

7.针对现有技术中的上述缺陷，本发明提供鸡胚胎加工品、其制备方法及其用途，其目的在于：通过简单的非高温工艺加工鸡胚胎，并将产品用于骨折的药物治疗中。
8.一种鸡胚胎组织匀浆液的制备方法，包括如下步骤：
9.(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；
10.(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入预处理液混合搅拌得到浆液，所述预处理液为去离子水、醇水溶液、氯化钠水溶液或者葡萄糖溶液中的一种或者几种；
11.(3)将步骤(2)处理后的浆液进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液。
12.优选的，步骤(1)中，所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育7-15天的鸡蛋。
13.优选的，步骤(1)中，所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育10-13天的鸡蛋。
14.优选的，步骤(2)中，所述预处理液用量为每公斤鸡胚胎加入0.5-5升预处理液。
15.优选的，步骤(2)中，所述醇水溶液为体积分数5-95％的醇水溶液；
16.和/或，所述氯化钠溶液为质量分数0.5-5％的氯化钠水溶液；
17.和/或，所述葡萄糖溶液为质量分数1-10％的葡萄糖水溶液。
18.优选的，步骤(2)中，所述醇为乙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇、异丁醇或聚乙二醇中的至少一种。
19.本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎组织匀浆液。
20.本发明还提供一种鸡胚胎冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
21.(ⅰ)按照上述方法制备得到鸡胚胎组织匀浆液；
22.(ⅱ)将步骤(ⅰ)得到的鸡胚胎组织匀浆液冷冻干燥后得到鸡胚胎冻干粉。
23.优选的，步骤(ⅱ)中，所述冷冻干燥的过程为：在超声波条件下超声处理，然后置于真空冷冻干燥机内降温至-5℃～10℃，接着快速降温至-30℃～-40℃，恒温20～50min后抽真空，真空度为15～50kpa，然后加热至25～35℃后恒温静置8～10h，再在40℃～60℃下恒温1～3h。
24.本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎冻干粉。
25.本发明还提供一种鸡胚胎提取物溶液的制备方法，包括如下步骤：
26.(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；
27.(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入预处理液混合搅拌得到浆液，所述预处理液为去离子水、醇水溶液、氯化钠水溶液或者葡萄糖溶液中的一种或者几种；；
28.(3)将步骤(2)处理后的浆液进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液；
29.(4)将步骤(3)得到的鸡胚胎组织匀浆液离心和/或过滤分离后，取清液得到鸡胚胎提取物溶液。
30.优选的，步骤(1)中，所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育7-15天的鸡蛋。
31.优选的，步骤(1)中，所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育10-13天的鸡蛋。
32.优选的，步骤(2)中，所述预处理液用量为每公斤鸡胚胎加入0.5-5升预处理液。
33.优选的，步骤(2)中，所述醇水溶液为体积分数5-95％的醇水溶液；
34.和/或，所述氯化钠溶液为质量分数0.5-5％的氯化钠水溶液；
35.和/或，所述葡萄糖溶液为质量分数1-10％的葡萄糖水溶液。
36.优选的，步骤(2)中，所述醇为乙醇、丙二醇、丙三醇、正丁醇、异丁醇或聚乙二醇中的至少一种。
37.优选的，步骤(4)中，所述分离得到鸡胚胎提取物溶液的过程为：在高速冷冻离心机中离心鸡胚胎混合浆液得上清液；上清液用0.45μm滤器微滤，去除不溶杂质，得粗提取物；粗提取物在无菌操作环境中，用o.22μm微孔滤膜过滤除菌2次,即得鸡胚胎提取物溶液。
38.本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎提取物溶液。
39.本发明还提供一种鸡胚胎提取物冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
40.(a)按照上述方法制备得到鸡胚胎提取物溶液；
41.(b)将步骤(a)得到的鸡胚胎提取物溶液冷冻干燥后得到鸡胚胎提取物冻干粉。
42.优选的，步骤(b)中，所述冷冻干燥的过程为：在超声波条件下超声处理，然后置于真空冷冻干燥机内降温至-5℃～10℃，接着快速降温至-30～-40℃，恒温20～50min后抽真空，真空度为15～50kpa，然后加热至25～35℃后恒温静置8～10h，再在40℃～60℃下恒温1～3h。
43.本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎提取物冻干粉。
44.本发明还提供鸡胚胎组织匀浆液，和/或，鸡胚胎冻干粉，和/或，鸡胚胎提取物溶液，和/或，鸡胚胎提取物冻干粉用于制备促进骨折愈合、治疗骨折延迟愈合或治疗骨折不愈合的药物。
45.本发明还提供一种药物组合物，它是由鸡胚胎组织匀浆液，和/或，鸡胚胎冻干粉，和/或，鸡胚胎提取物溶液，和/或，鸡胚胎提取物冻干粉作为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制成的。
[0046]“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
[0047]
本发明的技术方案提供的鸡胚胎加工品(鸡胚胎冻干粉、鸡胚胎提取物溶液和鸡胚胎提取物冻干粉)通过简单的工艺制备而成，且全程不采用高温，能够显著减少蛋白活性的破坏，避免营养物质和活性成分流失。本发明方法加工得到的鸡胚胎加工品能够促进骨折愈合，治疗骨折延迟愈合或不愈合。
[0048]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0049]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
[0050]
实施例1鸡胚胎组织匀浆液的制备
[0051]
一种鸡胚胎冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
[0052]
(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育11天的鸡蛋。
[0053]
(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入每公斤鸡胚胎加入1升预处理液，混合搅拌得到浆液，所述预处理液为质量比50％乙醇水溶液；
[0054]
(3)将步骤(2)处理后的浆液加入高速组织捣碎匀浆机中进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液。
[0055]
本实施例还提供上述方法制备的鸡胚胎组织匀浆液。
[0056]
实施例2鸡胚胎冻干粉的制备
[0057]
一种鸡胚胎冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
[0058]
(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育13天的鸡蛋。
[0059]
(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入每公斤鸡胚胎加入2升预处理液，混合搅拌得到浆液，所述预处理液为去离子水；；
[0060]
(3)将步骤(2)处理后的浆液加入高速组织捣碎匀浆机中进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液；
[0061]
(4)将步骤(3)得到的鸡胚胎组织匀浆液冷冻干燥后得到鸡胚胎冻干粉。，所述冷冻干燥的过程为：在超声波条件下超声处理，然后置于真空冷冻干燥机内降温至-5℃，接着
快速降温至-30℃，恒温40min后抽真空，真空度为30kpa，然后加热至30℃后恒温静置8h，再在50℃下恒温2h。
[0062]
实施例3鸡胚胎提取物溶液的制备
[0063]
鸡胚胎提取物溶液的制备方法，包括如下步骤：
[0064]
(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育11天的鸡蛋。
[0065]
(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入每公斤鸡胚胎加入2升质量比2％葡萄糖溶液，液混合搅拌得到浆液；
[0066]
(3)将步骤(2)处理后的浆液加入高速组织捣碎匀浆机中进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液；
[0067]
(4)将步骤(3)得到的鸡胚胎组织匀浆液离心和/或过滤分离后，取清液得到鸡胚胎提取物溶液。所述分离得到鸡胚胎提取物溶液的过程为：在高速冷冻离心机中离心鸡胚胎混合浆液得上清液；上清液用0.45μm滤器微滤，去除不溶杂质，得粗提取物；粗提取物在无菌操作环境中，用o.22μm微孔滤膜过滤除菌2次,即得鸡胚胎提取物溶液。
[0068]
本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎提取物溶液。
[0069]
实施例4鸡胚胎提取物冻干粉的制备
[0070]
鸡胚胎提取物冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
[0071]
(1)将受精蛋消毒后去壳得到鸡胚胎；所述受精蛋为受精后，人工或鸡孵化培育13天的鸡蛋。
[0072]
(2)将步骤(1)中得到的鸡胚胎，加入每公斤鸡胚胎加入3升的质量比0.7％氯化钠水溶液预处理液混合搅拌得到浆液；
[0073]
(3)将步骤(2)处理后的浆液加入高速组织捣碎匀浆机中进行组织匀浆，得到鸡胚胎组织匀浆液；
[0074]
(4)将步骤(3)得到的鸡胚胎组织匀浆液离心和/或过滤分离后，取清液得到鸡胚胎提取物溶液。所述分离得到鸡胚胎提取物溶液的过程为：在高速冷冻离心机中离心鸡胚胎混合浆液得上清液；上清液用0.45μm滤器微滤，去除不溶杂质，得粗提取物；粗提取物在无菌操作环境中，用o.22μm微孔滤膜过滤除菌2次,即得鸡胚胎提取物溶液。
[0075]
(5)将步骤(4)得到的鸡胚胎提取物溶液冷冻干燥后得到鸡胚胎提取物冻干粉。所述冷冻干燥的过程为：在超声波条件下超声处理，然后置于真空冷冻干燥机内降温至0℃，接着快速降温至-40℃，恒温30min后抽真空，真空度为40kpa，然后加热至25℃后恒温静置9h，再在40℃下恒温3h。
[0076]
本发明还提供上述方法制备的鸡胚胎提取物冻干粉用于制备促进骨折愈合、治疗骨折延迟愈合或治疗骨折不愈合的药物。
[0077]
实施例5鸡胚胎提取物冻干粉治疗和促进骨折愈合
[0078]
上述实例1-4的鸡胚胎加工品，以重量比3:1的医用凡士林混合搅匀，分别制备成鸡胚胎加工品糊状物。
[0079]
大鼠60只，均为雄性，鼠龄3月，体重(300
±
30)g/只。购于成都达硕实验动物有限公司，饲喂普通饲料，自然光照射，自由饮食，每组12只，自然分成a、b、c、d和e五组。
[0080]
sd大鼠在适应环境1周后开始进行实验，按照体重(300mg/kg)采用腹腔内注射麻
醉，麻醉药为水合氯醛(浓度为100g/l)。无菌条件下手术取右侧股骨外侧切口，切口长约2厘米，用咬骨剪剪断股骨中段后，选择直径为1mm克氏针进行髓内固定。术后应用青霉素钠肌注，防止感染。分笼喂养允许自由活动。实验a组为模型组，实验b、c、d和e为给药组。术后第4天开始，患肢剃毛，清水擦洗大鼠骨折处后，制备成的实例1-4鸡胚胎加工品的糊状物4-5g分别环形敷于实验b、c、d和e组骨折处，并用纱布包裹、胶带固定以防止药物在大鼠活动时脱落，以及减少药物损失。a组模型组环形外敷医用凡士林作为对照。每日敷药2次，每次敷药时间在4小时。
[0081]
在用药后2周、4周后，各组分别取6只大鼠进行麻醉处理，采用颈椎脱臼法处死并取材。
[0082]
用药后2周后，肉眼观察显示：模型组骨折处见机化组织明显增多，局部仅见少量纤维骨痂组织；实验b、c、d和e组骨折断端局部可见小的呈梭型粉红色骨痂，并与周围的软组织相连。实验b、c、d和e组骨痂较a组模型组大，骨痂触之质韧，可见大量的连接完整的纤维性骨痂。x线摄片观察显示：模型组骨折线仍然清楚，骨折断端未见明显的骨痂形成。实验b、c、d和e组骨折线均开始模糊，部分骨痂包绕在骨折断端，骨痂呈现大量形成。
[0083]
用药后4周后，肉眼观察显示：a组模型组局部出现较小的骨痂，呈梭形，部分纤维骨痂完整连接。实验b、c、d和e组骨折处骨痂2周时明显增大，局部已经出现骨性骨痂。实验b、c、d和e组骨性骨痂的连接较a组更加明显，骨痂触之质硬，有大量骨性骨痂的连接，部分已经骨化。x线摄片观察显示：a组模型组骨折线开始模糊，但是仍隐约可见，有中等量连接性骨痂形成。实验b、c、d和e组骨折线消失，骨痂局部增粗，骨性骨痂的连接形成，部分已经骨化。
[0084]
从实施例1-4可以看到，本发明能够通过简单、非高温的工艺制备得到鸡胚胎加工品。实施例5可知加工得到的鸡胚胎加工品具有促进骨折愈合、治疗骨折延迟愈合及不愈合的效果。