1.本发明涉及嗜铅乳酸菌菌的蛋白组学差异解析及其应用技术。采用二维电泳-质谱联用这一差异蛋白质组学技术解析耐铅屎肠球菌jt1菌株与非耐铅屎肠球菌m菌株的蛋白差异，获得了耐铅关键蛋白，继而对该关键差异蛋白进行生物信息学分析，并且为该菌的进一步运用于动物体内的排铅作用提供可靠的理论依据。
背景技术：
2.分离并鉴定菌株m；通过菌株吸附铅试验，比较jt1和m菌株的耐铅特性、铅吸附影响因素以及相关生长特性；对肠球菌耐铅菌株进行双向凝胶电泳，第一向为等点聚焦（ief），第二向为十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sds-page）,制备细胞质全蛋白图谱，根据嗜铅功能差异得到所有的差异蛋白，应用基质辅助的激光解吸串联飞行时间质谱仪（maldi-tof/tof-ms）对图谱上筛选的差异蛋白点进行质谱鉴定，得到19种相关蛋白。利用mascot检索软件查看该蛋白点，应用ncbi blast/uniprot等数据库对19种差异蛋白进行蛋白生物信息学分析，探究嗜铅蛋白的功能性信息。
技术实现要素：
3.屎肠球菌jt1是从肉鸡的肠道中分离筛选得到的一种抗铅耐性菌，具有产酸不产气、耐高温、耐酸、耐盐和耐胆盐等优良的性能，可以在体内顺利到达肠道，对清除人体内积累的重金属铅、治疗铅中毒有重要的现实意义。可用该菌开发新型功能性制品。
技术特征：
1.通过菌株吸附铅试验，探寻jt1相对于m菌株的耐铅特性，得到两者的吸附率分别是55.83%及11.87%，且m菌株经分子生物学鉴定为屎肠球菌，与jt1为同属革兰氏阳性细菌，菌株同源性极高，这2.菌株铅吸附的影响因素ph、温度、吸附时间以及菌株生长曲线、酸耐受试验来探究两株同属屎肠球菌jt1、m的培养特征，最适吸附ph6.5～7.5，最适温度20～30℃，吸附时间5min后基本不变，m菌株在12h生长后达到稳定期、jt1在18h生长后进入稳定期，最适生长ph为6.5。2.二维图谱共检测出92个差异蛋白表达点，其中，jt1菌株上有33个，m菌株图谱上有59个，从中筛选出的21个差异蛋白斑点成功检测出19种蛋白，对相关差异蛋白进行的蛋白质生物信息学分析可知，pb
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对jt1屎肠球菌生长代谢的很多方面都有影响，差异蛋白主要的代谢促进作用包括：渗透压胁迫蛋白和抗氧化蛋白对细胞表面膜蛋白结构进行调控，有效地减少外界刺激对其产生的影响，及时抵抗氧化带来的损伤；五种糖代谢的必需氧化还原酶保障了菌体有氧呼吸的正常进行，及时消耗菌体内多余的活性氧，确保细胞结构不受到氧化损伤；αβ结构域蛋白水解酶涉及到铁硫簇的生物合成，当细胞体受到外界刺激的时候，铁硫簇能够修复和重组相应的调节酶从而解除pb
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胁迫下对菌体细胞的活性氧化损伤；核黄素能生成黄素酶-谷胱甘肽还原酶，具有抗氧化活性，有效的解除pb
2
对菌体结构的氧化损伤；而cysteine synthase a为jt1菌株耐铅性的关键蛋白，符合半胱氨酸以及谷胱甘肽的理化性质，同时作为jt1对菌株m的上调蛋白，灰度值之比达到了0.000386，p值为0.01，是所有显著差异蛋白点中最为合理的蛋白点。3.在体外环境中屎肠球菌jt1的菌体细胞和无细胞提取物这两种样品对超氧阴离子(o2•
)、羟自由基(ho
·
)、亚铁离子(fe
2
)和dpph自由基的清除能力，屎肠球菌jt1的无细胞提取物对o2•
的清除率为6.132%；对ho
·
的清除率为72.772%；对fe
2
的螯合率95.523%%；对dpph自由基的清除率为8.281%，屎肠球菌jt1的菌体细胞对o2•
的清除率为17.246%；菌体细胞液对ho
ˑ
的清除率为25.940%；菌体细胞液对fe
2
的螯合率为50.110%；对dpph自由基的清除率为23.873%，无细胞提取物清除羟自由基(ho
ˑ
)和螯合亚铁离子(fe
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)的能力比菌体细胞的强，菌体细胞对超氧阴离子(o2•
)和dpph(1.1-二苯基苦基苯肼)的清除能力比无细胞提取物的强。
技术总结
本发明涉及肠球菌嗜铅蛋白组学分析计其应用技术。屎肠球菌JT1是一种抗铅耐性菌，具有产酸不产气、耐高温、耐酸、耐盐和耐胆盐等优良的性能，可以在体内顺利到达肠道，对清除人体内积累的重金属铅、治疗铅中毒有重要的现实意义，可用该菌开发新型功能性制品。采用二维电泳-质谱联用这一差异蛋白质组学技术解析耐铅屎肠球菌JT1菌株与非耐铅屎肠球菌M菌株的蛋白差异，制备细胞质全蛋白图谱，获得了耐铅关键蛋白，继而对该关键差异蛋白进行生物信息学分析，并且为该菌的进一步运用于动物体内的排铅作用提供可靠的理论依据。铅作用提供可靠的理论依据。
技术研发人员：赵宏坤 满兆红
受保护的技术使用者：防城港千迪慷祛铅生物技术有限公司
技术研发日：2021.12.02
技术公布日：2022/6/3
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