中药组合物及其制备方法和应用与流程

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1.本发明属于中医药技术领域，涉及一种中药组合物及其制备方法和应用，具体涉及一种中药组合物及其制备方法和在制备治疗代谢相关脂肪性肝病药物中的应用。


背景技术：

2.随着生活水平的不断提高，人们的饮食结构不断变化，以及临床检测技术的进步和广泛应用，非酒精性脂肪性肝病的患病率及检出率日益增多，现已成为我国重要的慢性肝病问题之一，严重威胁人类的健康。
3.代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease，mafld)曾用名非酒精性脂肪性肝病(non－alcoholic fatty liver disease，nafld)，原是指无过量饮酒和其他已知肝损因素存在的情况下，超过5％的肝细胞发生脂肪变性，而mafld的诊断主要基于肝脏脂肪积聚(肝细胞脂肪变性)的组织学(肝活检)、影像学及血液生物标志物证据，无需排除其他疾病，并且还可与其他肝病合并存在。mafld起病隐匿、缓慢，且早期缺乏特异性临床表现，有部分病人可出现食欲减退、全身乏力、肝区不适或右上腹隐痛。mafld可以是一个独立的原发性疾病，也可以是一些全身性疾病累及肝脏的表现。在不同原因下，蓄积在肝内的脂类可以是甘油三酯、磷脂、糖脂或胆固醇脂等。关于mafld的发生发展尚有许多未知的因素和机制尚未阐明，目前普遍认同的是以胰岛素抵抗、氧化应激和脂质过氧化为主要内容的“二次打击”学说，以及脂肪肝发病的“四步骤学说”。现代医学在mafld的治疗中，常采用胰岛素增敏剂、脂代谢调节剂、抗氧化剂、保肝药物等药物治疗，但疗效欠佳。
4.中医在治疗mafld上以其整体思维、辨证论治的独特优势，在理论研究和临床治疗中均取得了良好的效果。中医学没有mafld或是nafld这一称谓，中医学家根据其临床症状及特点如乏力、腹胀、肝区不适、食欲不振、恶心、呕吐等临床表现，将其归属为中医的“积聚”、“痰痞”、“肥气”、“胁痛”等范畴，关于该病的最早记载见于《难经》：“肝之积，名曰肥气，在左胁下，如覆杯，有头足”。中医学者大多认为该病的病因以痰浊、瘀血为首，病机以肝失疏泄，脾失健运，痰瘀互结为主，临床分型可分为多个证型，其中痰瘀互结型是mafld的主要证型，在临床辨证治疗时或以理气祛痰为主。非酒精性脂肪性肝炎起因多为过食肥甘厚味、过度肥胖或情志失调，或久病体虚。其发病机制为肝失疏泄，脾失健运，湿热内结，痰浊郁结，淤血阻滞，而最终形成痰湿淤阻互结，痹阻肝脏脉络而形成脂肪肝，病理基础与痰、瘀、湿、积有关，与肝、脾、肾三脏功能关系密切。目前西医治疗没有特效药物，中医药治疗取得了一定的疗效。治以健脾祛湿，化痰消积，活血化瘀为主。现有技术中用于治疗脂肪肝的中药组合物多由十味以上中药组成，不仅药味组成复杂，而且疗效也不好，因此，寻找一种组方简单，且疗效确切的用于制备脂肪肝的中药组合物是中药研究急需解决的问题。现有技术中未见山楂、柴胡、丹参、郁金、决明子、法半夏、泽泻组成的中药组合物用于治疗脂肪肝的报道。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一种组方简单，制备方法简便且具有明显的改善nafld脂肪变性、减轻炎症反应，用于治疗脂肪肝的中药组合物。
6.为实现这一目的，本发明通过如下技术方案实现：
7.本发明所述的中药组合物通过如下原料制备而成：
8.山楂800-1200份 柴胡200-400份 丹参500-700份 郁金200-400份 决明子300-500份 法半夏200-400份 泽泻300-500份。
9.进一步地，本发明所述的中药组合物通过如下原料制备而成：
10.山楂900-1200份 柴胡300-400份 丹参600-700份 郁金300-400份 决明子400-500份 法半夏300-400份 泽泻400-500份。
11.更进一步地，本发明所述的中药组合物通过如下原料制备而成：
12.山楂1060-1200份 柴胡320-400份 丹参640-700份 郁金320-400份 决明子426-500份 法半夏320-400份 泽泻426-500份。
13.更进一步地，所述的山楂、柴胡、丹参、郁金、决明子、法半夏、泽泻的重量比为：8-12:2-4:5-7:2-4:3-5:2-4:3-5。
14.本发明还提供了所述的中药组合物的制备方法，所述的方法包括将山楂、柴胡、丹参、郁金、决明子、法半夏、泽泻分别拣去杂质、粉尘及干燥后，分别研磨后进行混合。
15.如上各成分研磨后可以过12-40目筛，优选过12-20目筛。
16.本发明还提供了一种疏肝化滞胶囊，即将本发明的中药组合物过筛后，放入药器中混合均匀，然后制备成胶囊剂(其胶囊锁合后总长度为23.3mm，药粉容量0.4～0.5g/粒)，进而分装密封即可。
17.服用方法为：
18.疏肝化滞胶囊每日三次服用，早中晚各服一次，给药量2.5g/次，温开水送下(治疗期间禁食高脂食物和饮酒)。60天为一个疗程，服药1～2个疗程。
19.本发明还提供了所述中药组合物及其胶囊在制备治疗脂肪肝药物中的应用。
20.其中，所述的脂肪肝是指代谢功能障碍导致的脂肪肝。
21.所述的代谢功能障碍是指基于肝活检组织学或影像学，甚至血液生物标志物检查提示存在脂肪肝，同时满足以下三项条件之一：超重/肥胖、2型糖尿病、代谢功能障碍。规定存在至少两项代谢异常风险因素者为代谢功能障碍。
22.本发明提供了所述中药组合物及其胶囊在制备改善mafld脂肪变性、减轻炎症反应的药物中的应用。
23.本发明的优势：
24.本发明提供的具有改善mafld脂肪变性、减轻炎症反应的药物组合物是从中医的整体观念出发，依据中医辨证论治的思想，结合临床实际，以及现代药理学研究结果，运用中药进行合理配伍所确定的精炼组方。在治疗患者食欲不振、肝区不适、肝区疼痛等临床症状及体征的同时，患者的肝功能、血脂、血糖及b超各指标明显改善，与他汀类药物可引起横纹肌溶解与肌病、肝酶异常、腹泻恶心等副作用相比，本发明的总体临床疗效显著，且无明显副作用。
25.本发明的有益效果源于组方中七味药材的协同作用。其中山楂酸甘性微温，善于
消食化积，又入肝经血分，有行气散瘀止痛之功，柴胡味苦辛性微寒，长于条达肝气，疏肝解郁，二者同为君药；郁金味辛能行能散，性寒入肝胆经，既入血分又入气分，既能活血止痛又能疏肝行气解郁，丹参味苦性微寒，归心、心包、肝经，善活血祛瘀止痛，有着祛瘀生新而不伤正的功效，二者同为臣药；决明子味甘苦咸，性微温，归肝、大肠经，能清肝明目，润肠通便，且有宜肝阴之功，能够对柴胡劫肝阴的作用起到一定的对抗消除作用，泽泻性寒味甘，归肾、膀胱经，可淡渗利水湿，行痰饮，清泄下焦湿热，半夏性温味辛，归脾、胃、肺经，具有燥湿化痰，消痞散结之功，法半夏为其炮制制品，长于燥湿且温性较弱，三者同为佐药；七药相和，相辅相成，对降血脂、改善肝功、改善肝脂肪代谢、降低血液粘稠度具良好作用疗效，无毒副作用。
附图说明：
26.图1为实施例7中各组大鼠肝脏组织nf-κb和tlr4的western blot结果；
27.图2为实施例7中各组大鼠肝脏组织nf-κb和tlr4蛋白的表达水平；
28.图3为实施例7中各组大鼠肝脏组织nf-κb和tlr4 mrna的表达水平
29.图4为实施例7中各组大鼠肝脏外观形态；
30.图5为实施例7中各组大鼠肝脏he染色结果(200
×
)；
31.图6为实施例7中各组大鼠肝脏油红0染色结果(200
×
)。
具体实施方式：
32.通过以下具体实施例，进一步说明本发明的有益效果，但本发明的保护范围并不仅限于此；
33.实施例1：
34.山楂1060g 柴胡320g 丹参640g 郁金320g 决明子426g 法半夏320g 泽泻426g
35.制备方法：将各组分混合后研磨成细粉12目，按照传统制备中药胶囊剂的方法，将研磨好的12目药物过筛后，放入药器中混合均匀，然后制备成胶囊剂(其胶囊锁合后总长度为23.3mm，药粉容量0.4～0.5g/粒)，进而分装密封即可。
36.制备的胶囊具有活血化瘀、疏肝解郁、行气止痛的作用。能够显著改善患者胁肋胀痛不适、腹痛、乏力、纳呆等症状；降低血脂、肝功等指标。
37.该组方作为治疗药物与脂必泰胶囊作为对照组，分别对每组37例患者进行了临床观察，结果显示两组患者治疗前丙氨酸转氨酶(alt)、天冬氨酸转氨酶(ast)、血清甘油三酯(tg)和总胆固醇(tc)组间比较无统计学差异(p》0.05)，但治疗后采用实施例1配比治疗组的alt、ast、tg、tc，其降低水平要明显优于脂必泰胶囊的对照组(p》0.05)水平，结果如表1：
38.表1.实施例1的胶囊剂对alt、ast、tg、tc的降低结果治疗组与对照组的临床观察结果
[0039][0040]
实施例2：
[0041]
山楂1200g 柴胡400g 丹参600g 郁金400g 决明子400g 法半夏400g 泽泻400g
[0042]
制备方法同实施例1。
[0043]
与实施例1组方相比，组方中增加了君药的用量，组方仍然具有活血化瘀、疏肝解郁、行气止痛的作用。该组方在肝弹性指标恢复方面略有优势，在生化学和组织学方面的改善与实施例1相比略差，但无显著性差异。以该组方作为治疗药物与水飞蓟宾作为对照组，分别对每组30例患者进行了肝弹性硬度检测，观察两组患者治疗前后cap值的变化情况，结果显示两组患者治疗前肝弹性硬度cap值组间比较无统计学差异(p》0.05)，但治疗后采用实施例2配比治疗组的肝弹性硬度cap值要显著低于水飞蓟宾的对照组(p》0.05)。结果如表2所示：
[0044]
表2.治疗组与对照组肝弹性硬度cap值观察结果
[0045][0046]
实施例3：
[0047]
山楂900g 柴胡300g 丹参700g 郁金300g 决明子400g 法半夏300g 泽泻400g
[0048]
制备方法同实施例1。
[0049]
相较于实施例1，组方中增加了丹参的用量，因而增强了活血化瘀的功效，但由于同时减少了山楂、郁金、决明子、法半夏和泽泻的用量，因此虽然对肝功、血脂等生化指标的恢复与实施例1基本一致，但在临床症状的便溏、乏力症状缓解上稍差一些，但相对于实施例1无显著性差异。
[0050]
实施例4：
[0051]
山楂800g 柴胡200g 丹参500g 郁金400g 决明子500g 法半夏200g 泽泻500g
[0052]
制备方法同实施例1。
[0053]
相较于实施例1，组方中只有郁金、决明子和泽泻的用量略微增加，属于各配比中
用药量最少的组方，具有活血化瘀、疏肝解郁、行气止痛的作用。与其他实施例相比功效较低，但无显著性差异，临床症状和生化指标的改善略弱于其他实施例，但无显著性差异。
[0054]
实施例5：
[0055]
山楂1200份 柴胡400份 丹参700份 郁金400份 决明子500份 法半夏400份 泽泻500份
[0056]
相较于实施例1，组方中各组分均有不程度的增加，其组方仍具有活血化瘀、疏肝解郁、行气止痛的作用。并且能够显著缓解患者胁肋胀痛不适、腹痛、腹泻等症状；降低血脂、肝功等生化指标和肝脏弹性硬度检测结果与实施例1相当。
[0057]
实施例6：
[0058]
试验药物(疏肝化滞胶囊)：实施例1样品
[0059]
实施例7：
[0060]
(1)mafld大鼠模型的制备方法
[0061]
目前国内外常用的mafld动物模型有：营养失调性模型、药物中毒性模型、基因改良性模型、基因饮食复合性模型、中医病症结合性模型四种。药物中毒模型易导致动物死亡，且与人体的发病机制、病理生理改变相去甚远；基因改良型模型操作不易，花费较大；基因饮食复合型模型可重复性不高，建模也没有统一的标准；中医病症结合型模型大鼠的耐受度低，死亡率高，且模型不易建立与复制。营养失调性模型包括高脂饲料诱导模型和高糖饲料诱发模型，其中高糖饲料诱发模型存在与人类的自然发病机制不相符合的缺点，故本实验选用高脂饲料诱导模型。该模型具有造模方法简单易行、可重复性高、造模过程中动物死亡率低、价格相对而言较为便宜等优点，且该模型在病理、生理等方面与人体的自然发病过程极为相似，非常贴合，造模结束后病情的逆转情况极为缓慢，易于进行药物干预治疗，是研究药物治疗mafld模型大鼠的较为理想的模型。
[0062]
(2)分组与给药
[0063]
30只sd大鼠随机分为正常对照组，模型组和疏肝化滞胶囊组，每组10只。正常对照组给予普通饲料喂养；模型组和疏肝化滞胶囊组给予高脂饲料喂养，喂养8周后，疏肝化滞胶囊组给予疏肝化滞胶囊混悬液灌胃，正常对照组和模型组分别给予相同体积的生理盐水灌胃，灌胃8周。灌胃期间正常对照组继续给予正常饲料喂养，模型组和疏肝化滞胶囊组继续给予高脂饲料喂养。
[0064]
(3)疏肝化滞胶囊组灌胃混悬液的配制
[0065]
首先需要根据成人与大鼠药量的换算方式(人一天所需的生药量/70kg
×
动物重量
×
6.3)换算出大鼠一天所需用药量。疏肝化滞胶囊的药物规格为每粒0.35g，成人的用药量为一日3次，一次5粒，故而成人一天所需的生药量为0.35
×5×
3＝5.25g，因此换算出大鼠的用药量为0.4725g/kg，随后称取中药组每只大鼠的体重，计算出每只大鼠一天所需的用药量并称量，再按照灌胃体积1ml/100g大鼠体重的标准计算出中药组每只大鼠一天所需的灌胃体积，并用量筒量取后汇入足够大的烧杯中，然后将称量好的疏肝化滞胶囊组大鼠一天总的用药量倒入总灌胃体积的水中用玻璃棒搅拌使其充分溶解制备成混悬液，保存于4℃温度下，分早晚两次给大鼠灌胃。
[0066]
(4)检测指标与方法
[0067]
16周后，测量3组大鼠各自的体重及肝脏重量，并依据公式：肝脏指数＝肝脏重量/
大鼠体重计算出肝脏指数。应用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清血脂、肝功能水平；elisa法检测各组大鼠血清及肝脏白介素-1(il-1)、白介素-6(il-6)、白介素-8(il-8)、白介素-12(il-12)和肿瘤坏死因子-α(tnf-α)的水平以及各组大鼠血清、肝脏组织和盲肠内容物脂多糖(lps)的水平；western blot检测各组大鼠肝脏组织nf-κb和tlr4蛋白表达水平；rt-qpcr检测各组大鼠肝脏组织nf-κb和tlr4 mrna表达水平。在肉眼大体观察各组大鼠肝脏情况后，进一步采用he染色和油红o染色观察各组大鼠肝脏的组织学形态与脂质沉积情况。
[0068]
(5)实验结果
[0069]
①
与正常对照组相比，模型组大鼠的体重、肝脏重量、肝脏指数、tg、tc、低密度脂蛋白(ldl-c)和ast、alt水平均显著升高，高密度脂蛋白(hdl-c)水平呈现显著下降；而与模型组相比，疏肝化滞胶囊组大鼠的体重、肝脏重量、肝脏指数、血清tg、tc、ldl-c和ast、alt水平均出现明显降低，hdl-c水平明显升高；组间比较差异均具有统计学意义(p＜0.05)(表3)。
[0070]
表3.各组大鼠的基本资料、血脂及肝功水平
[0071][0072]
②
与正常对照组相比，模型组大鼠血清及肝脏的il-1、il-6、il-8、il-12和tnf-α水平均显著升高；而与模型组相比，疏肝化滞胶囊组大鼠血清及肝脏的il-1、il-6、il-8、il-12和tnf-α水平均出现显著降低；组间比较差异均具有统计学意义(p＜0.05)(表4)。
[0073]
表4.各组大鼠血清及肝脏组织的il-1、il-6、il-8、il-12和tnf-α水平
[0074][0075]
③
与正常对照组相比，模型组大鼠血清、肝脏组织及盲肠内容物的lps水平均显著升高；而与模型组相比，疏肝化滞胶囊组大鼠血清、肝脏组织及盲肠内容物的lps水平均出现显著降低；组间比较差异均具有统计学意义(p＜0.05)(表5)。
[0076]
表5.各组大鼠血清、肝脏组织及盲肠内容物的lps水平
[0077][0078]
④
无论是蛋白的表达水平还是mrna的表达水平，与正常对照组相比，模型组nf-κb和tlr4均出现显著增高，而与模型组相比，疏肝化滞胶囊组nf-κb和tlr4的表达水平均出现显著降低。其中，除nf-κb和tlr4 mrna的表达水平在正常对照组和疏肝化滞胶囊组之间差异无统计学意义以外(p＞0.05)，其他各组间比较均有统计学差异(p＜0.05)(图1,2,3)。
[0079]
⑤
正常对照组大鼠肝脏大体形态较为规则、表面光滑、质地均匀，模型组大鼠的肝脏却可见明显的脂肪沉积、颜色变白、质地变硬，而疏肝化滞胶囊组大鼠肝脏的大体形态则介于与正常对照组与模型组之间，仅表现为小部分肝脏脂肪沉积，颜色、质地均较模型组显著好转(图4)。各组大鼠肝脏he染色和油红0染色结果显示，与正常对照组相比，模型组大鼠肝细胞内可见大量大小不等的脂肪空泡，肝窦狭窄或消失，脂质沉积明显；与模型组相比，疏肝化滞胶囊组大鼠肝细胞内脂肪空泡明显减少，肝窦狭窄有所缓解，脂质沉积情况有所改善(图5,6)。
[0080]
实施例8
[0081]
临床256例mafld患者随机分为两组，即疏肝化滞胶囊组(128例)和辛伐他汀组(128例)。两组患者在性别、年龄方面无统计学差异(p＞0.05)(表4)。疏肝化滞胶囊组患者给予疏肝化滞胶囊每次2.5g(5粒)，每日三次口服；辛伐他汀组患者给予辛伐他汀片20mg，每日晚上口服一次治疗；两组患者均连续服用60天，分别于治疗前后进行血脂、肝功及肝脏
弹性硬度cap值检测。(表6)
[0082]
表6.两组mafld患者的一般资料
[0083][0084]
检查结果显示，两组患者治疗后血脂均出现显著降低，组间比较无统计学差异(p＞0.05)，疏肝化滞胶囊对肝脏细胞脂肪变的情况以及对肝功转氨酶的治疗效果明显优于辛伐他汀，两组组间比较有统计学差异(p＜0.05)，分析可能由于辛伐他汀主要用于降低外周血的血脂，且他汀类药物对肝脏功能会有不同程度的损害。疏肝化滞胶囊组患者的治愈率和好转率均明显高于辛伐他汀组(表7)，且未出现任何毒副作用。
[0085]
表7.两组mafld患者的化验检查结果
[0086][0087]
临床实验和动物实验表明，疏肝化滞胶囊能有效治疗mafld，降低mafld患者的血脂、肝功转氨酶以及肝脏弹性硬度指标，且无明显毒副反应。