一种丹参黄瓜花叶病毒病苗期注射接种的方法

技术特征：
1.一种丹参黄瓜花叶病毒苗期接种的方法，其特征在于，从感染了黄瓜花叶病毒的烟草叶片中提取浓度大于等于0.5μg/μl总rna作为接种液，采用针管注射的方式在丹参植株培养至6～8叶期的叶片背面进行注射接种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，感染了黄瓜花叶病毒的烟草叶片通过如下方法扩繁：用0.05m pb缓冲液研磨被黄瓜花叶病毒侵染的烟草叶片，将病毒汁液接种到健康的烟草叶片上扩繁毒源。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟草为本生烟nicotiana benthamiana或普通烟nicotiana tabacum。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，注射接种具体为：用注射器的针头在培育至6-8期的丹参的第三位和第四位展开叶背面戳3-5个针孔且不能戳透叶片，造成微伤口，将总rna从叶背面注入完成接种。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：注射接种时每叶片注射接种植物总rna的量为200μl以上。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：接种后丹参苗放置在人工温室培养管理，昼夜温度保持在20-22℃，3天后温度调整为昼夜25℃。

技术总结
本发明公开了一种丹参黄瓜花叶病毒苗期接种的方法，属于农业生物技术领域。该方法从感染了黄瓜花叶病毒的烟草叶片中提取总RNA，采用针管注射的方式在丹参植株培养至6～8叶期进行注射接种，成功建立黄瓜花叶病毒对丹参植株的侵染体系。为研究黄瓜花叶病毒与丹参寄主间的致病机制提供了一个理想的实验模型，对揭示该病毒与寄主植物间的互作及病毒演化具有重要的理论价值。上述方法较摩擦接种方法，接种效率大大提高，接种后两周即可对丹参幼苗进行症状观察。本发明以少量的感病材料即可完成高效接种，且病毒接种量可控，注射叶片的总RNA量少，对叶片损伤较少更接近田间发病情况。对叶片损伤较少更接近田间发病情况。对叶片损伤较少更接近田间发病情况。


技术研发人员：范慧艳 开国银 周杨
受保护的技术使用者：浙江中医药大学
技术研发日：2022.03.24
技术公布日：2022/6/1