作为STING调节剂的杂环化合物的制作方法

作为sting调节剂的杂环化合物
技术领域
1.本披露涉及可以用作sting调节剂的杂环化合物以及其衍生物。本披露还涉及合成方法以及此类化合物在治疗多种疾病(包括癌症)中的用途。发明背景
2.先天免疫系统专门针对不同危险信号进行快速作用。它通过产生可溶性生物活性分子(例如细胞因子或趋化因子)来提供针对细菌、病毒、寄生虫和其他传染性威胁的第一道防线。通过响应上述的这些损伤相关的分子模式(damp)或病原体相关的分子模式(pamp)，先天免疫系统能够提供保护，抵抗对宿主的广泛威胁。
3.最近已经证明，胞质dna的主要传感物是环状gmp-amp合酶(cgas)。cgas催化环状二核苷酸2
’‑3’‑
cgamp(可与er跨膜衔接蛋白sting(干扰素基因的刺激物)牢固结合的非典型第二信使)的生成。cgamp结合的sting经历构象变化，易位至核周区室，并诱导关键转录因子irf-3和nf-kb的激活。这导致i型干扰素的强烈诱导和促炎性细胞因子(例如il-6、tnf-α和ifn-γ)的产生。
4.i型干扰素和促炎性细胞因子可以通过增强树突状细胞和巨噬细胞摄取、加工、呈递和交叉呈递抗原至t细胞的能力，来强烈增强t细胞激活。可以诱导i型干扰素产生的化合物可在疫苗中用作佐剂，增强对抗原的特异性免疫反应。可以诱导干扰素产生的化合物在治疗人类癌症中具有潜在用途。
5.相比之下，发现在患有多种形式的自身免疫性疾病的患者中产生过量的i型干扰素。人遗传证据和来自动物模型研究的支持证实了所述假设，即抑制sting导致i型干扰素减少(其是导致自身免疫性疾病的原因)(crow yj等人,nat,genet.[自然遗传学]2006,38,917-920；stetson db等人,cell[细胞]2008,134,587-598)。因此，sting的抑制剂为患有慢性i型干扰素、以及具有与感染或复杂自身免疫性疾病相关的促炎性细胞因子产生的患者提供治疗。结合sting的化合物可以充当拮抗剂，并且可以用于治疗例如自身免疫性疾病。
[0006]
设想用激活剂或抑制剂靶向sting可能是治疗疾病和病症(其中对i型ifn途径的调节是有益的，包括炎性、过敏性和自身免疫性疾病、传染性疾病、癌症、癌症前期综合征)的有前途的方法，并且作为免疫原性组合物或疫苗佐剂。
[0007]
本发明的化合物调节sting的活性，因此可在治疗疾病、障碍和/或病症(其中sting的调节是有益的，例如对于炎症、过敏性和自身免疫性疾病、传染性疾病、癌症、癌症前期综合征)中提供治疗效果，并且作为疫苗佐剂。


技术实现要素：

[0008]
本发明的一个目的是提供用作sting调节剂的化合物以及其衍生物。
[0009]
方面1：一种具有式(i)的化合物，
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药，其中：x1和x2可以是相同的或不同的，各自独立地选自n或cra；y1和y2可以是相同的或不同的，各自独立地选自n或cra；q1、q2、r1、r2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9和r
10
可以是相同的或不同的，各自独立地选自氢、卤素、-c
1-8
烷基、-c
2-8
烯基、-c
2-8
炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-cn、-no2、-ora、-so2ra、-cora、-co2ra、-conrarb、-c(＝nra)nrbrc、-nrarb、-nracorb、-nraconrbrc、-nraco2rb、-nrasonrbrc、-nraso2nrbrc、-so2nrarb、或-nraso2rb，所述-c
1-8
烷基、-c
2-8
烯基、-c
2-8
炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基中的每一个任选地被rd取代；t和p各自独立地是0、1、2或3，l1和l3各自独立地选自由以下组成的组：单键、-o-、-s-、-s(o)-、-so
2-、-c(o)-、c(o)o-、-oc(o)-、-nr
a-、-c(o)nr
a-、-nrac(o)-、-nrac(o)o-、-nrac(o)nr
b-、-so2nr
a-、-nraso
2-、-nras(o)2nr
b-、-nras(o)nr
b-、-c(o)nraso
2-、-c(o)nraso-、-c(＝nra)nr
b-、-c
1-8
亚烷基、-c
2-8
亚烯基、-c
2-8
亚炔基、二价c
3-8
环烷基基团、二价c
6-12
芳基基团、二价杂环基基团、或二价杂芳基基团；l2选自单键、-o-、-s-、-s(o)-、-so
2-、-c(o)-、c(o)o-、-oc(o)-、-nr
a-、-c(o)nr
a-、-nrac(o)-、-nrac(o)o-、-nrac(o)nr
b-、-so2nr
a-、-nraso
2-、-nras(o)2nr
b-、-nras(o)nr
b-、-c(o)nraso
2-、-c(o)nraso-、-c(＝nra)nr
b-、-c
1-8
亚烷基-、-c
2-8
亚烯基-、-c
2-8
亚炔基、二价c
3-8
环烷基基团、二价c
6-12
芳基基团、二价杂环基基团、或二价杂芳基基团，其中所述-c
1-8
亚烷基-、-c
2-8
亚烯基-、c
2-8
亚炔基、二价c
3-8
环烷基基团、二价c
6-12
芳基基团、二价杂环基基团、或二价杂芳基基团各自独立地任选地被rd取代，ra、rb和rc各自独立地选自由以下组成的组：氢、-c
1-8
烷基或-core，其中-c
1-8
烷基任选地被-c
3-8
环烷基基团或4至7元杂环取代，所述4至7元杂环包含至少一个选自n、o和s的杂原子，其中其余环原子是碳，rd和re各自独立地选自卤素、-c
1-8
烷基、-oh、-nh2、-cn、-c
1-8
烷氧基、和-c
3-8
环烷基，其中-c
1-8
烷基、-c
1-8
烷氧基和-c
3-8
环烷基中的每一个任选地被卤素、-oh、-nh2、-cn、或氧代基团取代。
[0010]
方面2：根据方面1所述的化合物，其中
q1和q2可以是相同的或不同的，各自独立地选自氢、卤素、-c
1-8
烷基、-c
2-8
烯基、-c
2-8
炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、-cn、-no2、-ora、-so2ra、-cora、-co2ra、-conrarb、-c(＝nra)nrbrc、-nrarb、-nracorb、-nraconrbrc、-nraco2rb、-nrasonrbrc、-nraso2nrbrc、或-nraso2rb，所述-c
1-8
烷基、-c
2-8
烯基、-c
2-8
炔基、环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基中的每一个任选地被rd取代；r1、r2、r3、r6、r7和r8各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素或-c
1-8
烷基；r4和r9各自独立地选自由以下组成的组：氢、卤素、-nrarb、-cn、-c
1-8
烷基、和-ora；r5和r
10
各自独立地选自氢、卤素、-nrarb、-cn、-c
1-8
烷基、-ora、-cora、-coora、-so2nrarb、-conrarb、和-so2ra。
[0011]
方面3：根据方面1或2中任一项所述的化合物，其中x1、y1、x2和y2各自是n。
[0012]
方面4：根据方面1、2或3所述的化合物，其中q1和q2可以是相同的或不同的，各自独立地选自氢、卤素或-ora，其中ra选自氢或-c
1-8
烷基；优选地q1和q2是氢。
[0013]
方面5：根据方面1-4中任一项所述的化合物，其中r1、r2、r3、r6、r7和r8各自独立地选自由以下组成的组：氢、-c
1-6
烷基(优选地甲基或乙基)、或卤素。
[0014]
方面6：根据方面1-5中任一项所述的化合物，其中r1和r6是乙基；和/或r2和r7是甲基；和/或r3和r8是氢或卤素。
[0015]
方面7：根据方面1-6中任一项所述的化合物，其中r4和r9各自独立地是-ora，其中ra是-c
1-6
烷基，所述-c
1-6
烷基任选地被4至7元饱和杂环取代，所述4至7元饱和杂环包含1至3个选自n、o和s的杂原子(优选地吗啉基)。
[0016]
方面8：根据方面7所述的化合物，其中r4是-c
1-6
烷氧基，并且r9是被4至7元饱和杂环取代的-c
1-6
烷氧基，所述4至7元饱和杂环包含1至3个选自n、o和s的杂原子；优选地r4是甲氧基，并且r9是吗啉-4-基丙氧基。
[0017]
方面9：根据方面1-8中任一项所述的化合物，其中r5和r
10
各自选自-cn或-conrarb，其中ra和rb各自独立地选自由氢或-c
1-3
烷基组成的组。
[0018]
方面10：根据方面9所述的化合物，其中r5和r
10
各自选自-cn或-conh2；优选地-conh2。
[0019]
方面11：根据方面1-10中任一项所述的化合物，其中t和p各自是1。
[0020]
方面12：根据方面1-11中任一项所述的化合物，其中l1和l3各自独立地选自单键、亚甲基(-ch
2-)和亚乙基(-ch2ch
2-)。
[0021]
方面13：根据方面1-12中任一项所述的化合物，其中l2选自单键、-cr
2a
＝cr
2b-、-cr
2ar2b-cr
2cr2d-、-nr
a-、二价c
6-12
芳基基团(优选地亚苯基，例如1,4-亚苯基、1,2-亚苯基、或1,3-亚苯基)、二价杂环基基团(优选地二甲基亚二氧戊环基(dimethyldioxolanylene))或二价c
3-8
环烷基基团(优选地亚环己基)；ra选自氢、-c
1-8
烷基(例如甲基)、core，其中re是任选地被oh取代的-c
1-8
烷基(例如甲基)；r
2a
、r
2b
、r
2c
和r
2d
各自独立地选自氢、卤素、-c
1-8
烷基、-or
2e
、或-cor
2e
；或(r
2a
和r
2c
)或(r
2a
和r
2d
)或(r
2b
和r
2c
)或(r
2b
和r
2d
)与它们所附接的碳原子一起形成4至8元环，所述环任选地被至少一个r
2f
取代；r
2e
选自氢、卤素或-c
1-8
烷基，其中所述-c
1-8
烷基任选地被至少一个r
2g
取代；r
2f
和r2g
各自选自-c
1-8
烷基、卤素、cn、-no2、oh、或-och3。
[0022]
方面14：根据方面13所述的化合物，其中l2选自单键、选自单键、选自单键、-nh-、-n(ch3)-、-n(coch2oh)-、和
[0023]
方面15：根据方面1-14中任一项所述的化合物，其中式(i)是其中q1和q2可以是相同的或不同的，各自独立地选自氢、卤素(例如cl)或-oh；r4和r9各自独立地是-ora；r3和r8各自独立地选自氢卤素、或-c
1-8
烷基；ra选自-c
1-8
烷基，其中-c
1-8
烷基任选地被4至7元杂环取代，所述4至7元杂环包含至少一个选自n、o和s的杂原子，其中其余环原子是碳；l1和l3各自独立地选自单键、亚甲基(-ch
2-)和亚乙基(乙烷-1,2-二基、-ch2ch
2-)；l2选自单键、选自单键、-nh-、-n(ch3)-、-n
(coch2oh)-、和
[0024]
方面16：根据方面1所述的化合物，其中所述化合物是
或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
[0025]
在第二方面，本文披露的是一种药物组合物，所述药物组合物包含本文披露的化合物、或其药学上可接受的盐，以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。
[0026]
在第三方面，本文披露的是一种治疗可以受sting调节影响的疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本文披露的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药。
[0027]
所述疾病选自炎症、过敏性和自身免疫性疾病、传染性疾病、癌症、或癌症前期综合征。
[0028]
在第四方面，本文披露的是本文的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体或前药在制备用于治疗可以受sting调节影响的疾病的药物中的用途。
[0029]
所述疾病是炎症、过敏性和自身免疫性疾病、传染性疾病、癌症、或癌症前期综合征。
具体实施方式
术语
[0030]
以下术语在整个说明书中具有指示的含义：
[0031]
除非在本文件的其他地方具体定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具
有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
[0032]
以下术语在整个说明书中具有指示的含义：
[0033]
如本文使用的，包括所附权利要求，除非上下文另外明确说明，否则例如“一个/一种(a/an)”和“所述(the)”在内的词语的单数形式包括它们相应的复数指代物。
[0034]
除非上下文另外明确说明，否则术语“或”意指术语“和/或”并且可与术语“和/或”互换使用。
[0035]
术语“烷基”包括选自直链和支链的饱和烃基团的烃基团，所述烃基团包含从1至18个，例如从1至12个，进一步例如从1至10个，更进一步例如从1至8个，或从1至6个，或从1至4个碳原子。包含从1至6个碳原子的烷基基团(即c
1-6
烷基)的实例包括但不限于：甲基、乙基、1-丙基或正丙基(“n-pr”)、2-丙基或异丙基(“i-pr”)、1-丁基或正丁基(“n-bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-bu”)、1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基基团。
[0036]
术语“丙基”包括1-丙基或正丙基(“n-pr”)、2-丙基或异丙基(“i-pr”)。
[0037]
术语“丁基”包括1-丁基或正丁基(“n-bu”)、2-甲基-1-丙基或异丁基(“i-bu”)、1-甲基丙基或仲丁基(“s-bu”)、1,1-二甲基乙基或叔丁基(“t-bu”)。
[0038]
术语“戊基”包括1-戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基。
[0039]
术语“己基”包括1-己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基和3,3-二甲基-2-丁基。
[0040]
术语“亚烷基”是指通过从烷烃中去除两个氢的二价烷基基团。亚烷基包括但不限于亚甲基、亚乙基、亚丙基等。
[0041]
术语“卤素”包括氟(f)、氯(cl)、溴(br)和碘(i)。
[0042]
术语“烯基”包括选自直链和支链烃基团的烃基团，所述烃基团包含至少一个c＝c双键和从2至18个，例如从2至8个，进一步例如从2至6个碳原子。烯基基团(例如c
2-6
烯基)的实例包括但不限于：乙烯基(ethenyl或vinyl)、丙-1-烯基、丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1,3-二烯基、2-甲基丁-1,3-二烯基、己-1-烯基、己-2-烯基、己-3-烯基、己-4-烯基、和己-1,3-二烯基基团。
[0043]
术语“亚烯基”是指通过从烯烃中去除两个氢的二价烯基基团。亚烯基包括但不限于亚乙烯基、亚丁烯基等。
[0044]
术语“炔基”包括选自直链和支链烃基团的烃基团，所述烃基团包含至少一个c≡c三键和从2至18个，例如从2至8个，进一步例如从2至6个碳原子。炔基基团(例如c
2-6
炔基)的实例包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、1-丁炔基、2-丁炔基、和3-丁炔基基团。
[0045]
术语“亚炔基”是指通过从炔烃中去除两个氢的二价炔基基团。亚烯基包括但不限于亚乙炔基等。
[0046]
术语“环烷基”包括选自饱和环状烃基团的烃基团，所述烃基团包含单环和多环(例如二环和三环)基团(包括稠合的、桥接的或螺环烷基)。
[0047]
例如，环烷基基团可以包含从3至12个，例如从3至10个，进一步例如3至8个，进一步例如3至6个、3至5个或3至4个碳原子。甚至进一步例如，环烷基基团可以选自包含从3至12个，例如从3至10个，进一步例如3至8个、3至6个碳原子的单环基团。单环环烷基基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基和环十二烷基基团。特别地，饱和单环环烷基基团(例如c
3-8
环烷基)的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、和环辛基基团。在优选实施例中，环烷基是包含3至6个碳原子的单环(简写为c
3-6
环烷基)，包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、和环己基。二环环烷基基团的实例包括具有从7至12个环原子、具有稠合二环排列(选自[4,4]、[4,5]、[5,5]、[5,6]和[6,6]环系统)或具有桥接的二环排列(选自二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷、和二环[3.2.2]壬烷)的那些。二环环烷基基团的另外实例包括具有二环排列(选自[5,6]和[6,6]环系统)的那些。
[0048]
术语“螺环烷基”包括含有碳原子的环状结构，并且由至少两个共享一个原子的环形成。
[0049]
术语“稠合的环烷基”包括如本文所定义的二环环烷基基团，其是饱和的并且由两个或多个共享两个相邻原子的环形成。
[0050]
术语“桥接的环烷基”包括含有碳原子的环状结构，并且由两个共享两个彼此不相邻的原子的环形成。术语“7元至10元桥接的环烷基”包括含有7至12个碳原子的环状结构，并且由两个共享两个彼此不相邻的原子的环形成。
[0051]
稠合的环烷基、稠合的环烯基或稠合的环炔基的实例包括但不限于二环[1.1.0]丁基、二环[2.1.0]戊基、二环[3.1.0]己基、二环[4.1.0]庚基、二环[3.3.0]辛基、二环[4.2.0]辛基、萘烷以及苯并3元至8元环烷基、苯并c
4-6
环烯基、2,3-二氢-1h-茚基、1h-茚基、1,2,3,4-四氢萘基、1,4-二氢萘基等。优选的实施例是8元至9元稠合环，其是指上述实例中含有8至9个环原子的环结构。
[0052]
单独使用或与其他术语组合使用的术语“芳基”包括选自以下的基团：(a)5元和6元碳环芳香族环，例如苯基；(b)二环系统(例如7元至12元二环系统)，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如萘基和茚满基；以及，(c)三环系统(例如10元至15元三环系统)，其中至少一个环是碳环和芳香族的，例如芴基。
[0053]
术语“芳香族烃环”和“芳基”在贯穿此文的披露内容中可互换使用。在一些实施例中，单环或二环芳香族烃环具有5至10个成环碳原子(即c
5-10
芳基)。单环或二环芳香族烃环的实例包括但不限于，苯基、萘-1-基、萘-2-基、蒽基、菲基等。在一些实施例中，芳香族烃环是萘环(萘-1-基或萘-2-基)或苯基环。在一些实施例中，芳香族烃环是苯基环。
[0054]
具体地，术语“二环稠合芳基”包括如本文所定义的二环芳基环。典型的二环稠合芳基是萘。
[0055]
术语“杂芳基”包括选自以下的基团：(a)5元、6元或7元芳香族单环，其包含选自氮(n)、硫(s)、和氧(o)的至少一个杂原子(例如从1至4个、或在一些实施例中从1至3个、在一些实施例中从1至2个杂原子)，其中其余环原子是碳；
(b)7元至12元二环，其包含选自n、o和s的至少一个杂原子(例如从1至4个、或在一些实施例中从1至3个、或在其他实施例中1或2个杂原子)，其中其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的且至少一个杂原子存在于芳香族环中；以及(c)11元至14元三环，其包含选自n、o和s的至少一个杂原子(例如从1至4个、或在一些实施例中从1至3个、或在其他实施例中1或2个杂原子)，其中其余环原子是碳，并且其中至少一个环是芳香族的且至少一个杂原子存在于芳香族环中。
[0056]
当杂芳基基团中的s和o原子的总数超过1时，那些杂原子彼此不相邻。在一些实施例中，杂芳基基团中的s和o原子的总数不超过2。在一些实施例中，芳香族杂环中的s和o原子的总数不超过1。当杂芳基基团含有一个以上的杂原子环成员时，所述杂原子可以是相同的或不同的。杂芳基基团的一个或多个环中的氮原子可被氧化以形成n-氧化物。
[0057]
具体地，术语“二环稠合杂芳基”包括如本文所定义的7元至12元，优选地7元至10元，更优选地9元或10元稠合二环杂芳基环。典型地，二环稠合杂芳基是5元/5元、5元/6元、6元/6元、或6元/7元二环。基团可以通过任一环附接到分子的其余部分。
[0058]“杂环基”、“杂环”或“杂环的”是可互换的，并且包括非芳香族杂环基基团(其包含一个或多个选自氮、氧或任选地氧化的硫的杂原子作为环成员，其中其余环成员是碳)，包括单环、稠合环、桥接环、和螺环，即含有单环杂环基、桥接杂环基、螺杂环基、和稠合杂环基团。
[0059]
本文披露的术语“至少一个取代基”包括例如从1至4个、例如从1至3个、进一步如1或2个取代基，条件是满足价理论。例如，本文披露的“至少一个取代基f”包括从1至4个、例如从1至3个、进一步如1或2个取代基f。
[0060]
术语“二价”是指能够与两个其他部分形成共价键的连接基团。例如，“二价环烷基基团”是指通过从相应环烷烃中去除两个氢以形成连接基团而获得的环烷基基团。应当以相似的方式理解术语“二价芳基基团”、“二价杂环基基团”或“二价杂芳基基团”。
[0061]
本文披露的化合物可以含有不对称中心，因此可以作为对映异构体存在。“对映异构体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。当本文披露的化合物具有两个或更多个手性中心时，它们可以另外以非对映异构体存在。对映异构体和非对映异构体属于更广泛的立体异构体类别。旨在包括所有可能的立体异构体，例如基本上纯的拆分的对映异构体、其外消旋混合物以及非对映异构体的混合物。旨在包括所有本文披露的化合物和/或其药学上可接受的盐的立体异构体。除非另外具体说明，否则提及一种异构体适用于任何可能的异构体。每当未指定异构体的组成时，均包括所有可能的异构体。
[0062]
当本文披露的化合物含有烯烃双键时，除非另外说明，否则此类双键意在包括e和z几何异构体。
[0063]
当本文披露的化合物含有二取代的环系统时，在这种环系统上发现的取代基可以采用顺式和反式形成。顺式形成意指两个取代基均位于碳上2个取代基位置的上侧，而反式意指它们位于相对侧。例如，二取代的环系统可以是环己基环或环丁基环。
[0064]
将反应产物彼此分离和/或与起始材料分离可能是有利的。通过本领域的普通技术，将每个步骤或一系列步骤的所需产物分离和/或纯化(以下称为分离)至所需均匀度。典型地，此类分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱法。色谱法可以涉及许多方法，包括例如：反相和正相；尺寸排阻；离子交换；高、中、低压液相色谱方法和
装置；小规模分析；模拟移动床(“smb”)和制备型薄层或厚层色谱，以及小规模薄层和快速色谱的技术。本领域技术人员可以选择并且应用最有可能实现所需分离的技术。
[0065]“非对映异构体”是指具有两个或更多个手性中心但不是彼此的镜像的化合物的立体异构体。可根据它们的物理化学差异通过本领域技术人员公知的方法如色谱法和/或分级结晶将非对映异构体混合物分离成其单个非对映异构体。对映异构体可以如下分离：通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂，如手性醇或莫舍酸氯化物(mosher’s acid chloride))反应将对映异构体混合物转化成非对映异构体混合物，分离所述非对映异构体，并将单独的非对映异构体转化(例如，水解)成对应的纯对映异构体。还可以使用手性hplc柱分离对映异构体。
[0066]
单一立体异构体(例如基本上纯的对映异构体)可以通过使用如下方法拆分外消旋混合物而获得：例如使用光学活性拆分剂形成非对映异构体(eliel,e.和wilen,s.stereochemistry of organic compounds.[有机化合物的立体化学]newyork:john wiley&sons,inc.[纽约：约翰威利父子出版公司],1994；lochmuller,c.h.等人“chromatographic resolution of enantiomers:selective review.[对映异构体的色谱拆分：选择性综述]”j.chromatogr.[色谱法杂志],113(3)(1975):第283-302页)。本发明的手性化合物的外消旋混合物可以通过任何合适的方法分离和分开，所述方法包括：(1)与手性化合物形成离子型非对映异构体盐，并通过分级结晶或其他方法分离；(2)与手性衍生试剂形成非对映异构体化合物，分离所述非对映异构体并转化为纯立体异构体；以及(3)直接在手性条件下分离基本上纯的或富集的立体异构体。参见：wainer,irving w.编辑drug stereochemistry:analytical methods and pharmacology.[药物立体化学：分析方法和药理学]new york:marcel dekker,inc.[纽约：马塞尔德克尔公司],1993。
[0067]
本文披露的化合物中的一些可以存在氢的不同附接点，称为互变异构体。例如，包括羰基-ch2c(o)-基团(酮形式)的化合物可经历互变异构以形成羟基-ch＝c(oh)-基团(烯醇形式)。在适用的情况下，也旨在包括单独的酮和烯醇形式以及其混合物。
[0068]“前药”是指活性剂的衍生物，其需要在体内转化以将该活性剂释放。在一些实施例中，该转化是一种酶转化。前药时常是(尽管不是必需的)药理上无活性的，直到被转化为活性剂。
[0069]“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断的范围内合适用于与人和低等动物的组织接触，而没有不适当的毒性、刺激、过敏应答等，并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐可以在本文披露的化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱官能团与合适的有机酸反应而分别制备，或通过使酸性基团与合适的碱反应而分别制备。该术语还包括本发明化合物的立体异构体(例如对映异构体和/或非对映异构体)、互变异构体和前药的盐。
[0070]
另外，如果以酸加成盐获得本文披露的化合物，则可以通过碱化酸式盐的溶液来获得游离碱。相反，如果产物是游离碱，则可以按照由碱化合物制备酸加成盐的常规程序，通过将游离碱溶解在合适的有机溶剂中并用酸处理所述溶液，来生产加成盐(例如药学上可接受的加成盐)。本领域技术人员将识别可以用于制备无毒的药学上可接受的加成盐而无需过度实验的多种合成方法。
[0071]
本文中的术语“施用(administration，administering)”和“治疗(treating，
treatment)”，当应用于动物、人、实验受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，意指外源性药物的、治疗的、诊断的药剂或组合物与动物、人、受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。细胞的处理涵盖试剂与细胞的接触以及试剂与流体的接触，其中所述流体与细胞接触。术语“施用”和“治疗”还意指例如通过试剂、诊断剂、结合化合物或另一种细胞进行的细胞的体外和离体处理。本文中的术语“受试者”包括任何生物，优选动物，更优选哺乳动物(例如，大鼠、小鼠、狗、猫、和兔)，最优选人。
[0072]
术语“有效量”或“治疗有效量”是指当施用于受试者以治疗疾病、或疾病或障碍的至少一种临床症状时，足以影响这种疾病、障碍或症状的治疗的活性成分(例如化合物)的量。术语“治疗有效量”可以随化合物，疾病，障碍，和/或疾病或障碍的症状，疾病、障碍、和/或疾病或障碍的症状的严重程度，待治疗的受试者的年龄，和/或待治疗的受试者的体重而变化。在任何给定情况下的合适量对于本领域技术人员而言是显而易见的，或者可以通过常规实验确定。在一些实施例中，“治疗有效量”是本文披露的至少一种化合物和/或至少一种其立体异构体、互变异构体或前药、和/或至少一种其药学上可接受的盐如本文所定义的有效“治疗”受试者的疾病或障碍的量。在组合疗法的情况下，术语“治疗有效量”是指用于有效治疗疾病、障碍或病症的组合对象的总量。
[0073]
术语“疾病”是指任何疾病、不适、病、症状或适应症，并且可以与术语“障碍”或“病症”互换。
[0074]
在整个本说明书和随附权利要求书中，除非上下文另外要求，否则术语“包含(comprise)”以及例如“包含(comprises和comprising)”等变体旨在指定其后特征的存在，但不排除一个或多个其他特征的存在或添加。当在本文中使用时，术语“包含”可以用术语“含有(containing)”或“包括(including)”来取代，或者有时用“具有(having)”取代。
[0075]
在整个本说明书和随附权利要求书中，术语“c
n-m”指示包括端点的范围，其中n和m是整数，并且指示碳的数目。实例包括c
1-8
、c
1-6
等。
[0076]
除非在本文件的其他地方具体定义，否则本文使用的所有其他技术和科学术语具有本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义。
[0077]
通用合成
[0078]
本文披露的化合物(包括其盐)可以使用已知的有机合成技术制备并且可以根据众多可能的合成途径中的任何途径来合成。
[0079]
可以在有机合成领域的技术人员可以容易地选择的合适的溶剂中进行用于制备本文披露的化合物的反应。合适的溶剂可以在进行反应的温度(例如，范围从溶剂的沸腾温度的温度)下基本上不与起始材料、中间体或产物反应。给定反应可以在一种溶剂或多种溶剂的混合物中进行。
[0080]
适当的保护性基团的选择可以由本领域技术人员容易地确定。
[0081]
可以根据本领域中已知的任何适合的方法(例如，nmr、uv、hplc、lc-ms和tlc)监测反应。化合物可以通过多种方法(包括hplc和正相硅胶色谱法)纯化。
[0082]
将手性分析型hplc用于不同手性实例的保留时间分析，根据所用的柱、流动相和溶剂比例，将条件分为以下方法。
[0083]
方案i
[0084]
例如，具有式(i)的化合物可以如方案i所示形成。可以用接头(ii)将化合物(i)烷基化以给出化合物(iii)；可以将化合物(iii)进一步与化合物(iv)反应以给出化合物(v)[即，式(i)]。
[0085]
方案ii
[0086]
例如，具有式(ii)的化合物可以如方案ii所示形成。可以将化合物(i)还原然后乙酰化以给出化合物(ii)；可以将化合物(ii)与丙二腈反应然后用碱性甲醇处理以给出化合物(iii)；可以将化合物(iii)与醛(iv)缩合以给出化合物(v)；化合物(v)可以与pocl3反应以给出化合物(vi)；可以将化合物(vi)水解，然后任选的氢解以给出化合物(vii)以及可替代地化合物(viii)；可以用接头(ix)将化合物(vii)烷基化以给出化合物(x)；可以将化合物(x)进一步与化合物(viii)反应，然后任选的水解以给出化合物(xi)[即，式(ii)]。
[0087]
缩写nmr
ꢀꢀꢀꢀ
核磁共振dmso
ꢀꢀꢀ
二甲亚砜lc-ms
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液相色谱质谱仪hplc
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高效液相色谱法uv
ꢀꢀꢀꢀꢀ
紫外线
[0088]
实例1
[0089]
(e)-4-氯-9-(4-(4-氯-6-氰基-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代
丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0090]
步骤1：1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲酸甲酯
[0091]
向1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲酸(5.0g，32.5mmol)在甲醇(150ml)中的溶液中逐滴添加亚硫酰氯(19.3g，162.3mmol)并且然后将混合物在80℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用二氯甲烷(200ml)溶解。将混合物用饱和nahco3(100ml)和盐水(100ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以给出标题化合物(5.4g，99％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ6.64(s,1h),4.42(q,j＝7.1hz,2h),3.81(s,3h),2.18(s,3h),1.30(t,j＝7.1hz,3h)。lc-ms(m h)

＝169.0。
[0092]
步骤2：(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)甲醇
[0093]
在氮气下，在0℃下，向1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲酸甲酯(5.4g，32.1mmol)在四氢呋喃(150ml)中的溶液中添加氢化铝锂(1.2g，32.5mmol)并且将悬浮液在0℃下搅拌2h。依次添加水(1.2ml)、10％naoh水溶液(2.4ml)和水(3.6ml)将反应淬灭。在室温下搅拌1h后，将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩以给出标题化合物(4.0g，89％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ5.88(s,1h),5.17(t,j＝5.5hz,1h),4.42(d,j＝5.5hz,2h),4.00(q,j＝7.2hz,2h),2.09(s,3h),1.28(t,j＝7.2hz,3h)。lc-ms(m h)

＝141.1。
[0094]
步骤3：1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲醛
[0095]
将(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)甲醇(4.0g，28.4mmol)和2-碘酰苯甲酸(11.9g，42.6mmol)在二甲亚砜(40ml)中的悬浮液在室温下搅拌过夜。将混合物用水(300ml)和乙酸乙酯(150ml)稀释，并且然后将固体滤出。将有机层分离并且将水层用乙酸
乙酯(80mlx2)萃取。将合并的有机层用水(100ml)和盐水(100ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化以给出标题化合物(2.9g，74％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.83(d,j＝0.9hz,1h),6.84(s,1h),4.41(t,j＝7.2,2h),2.22(s,3h),1.30(d,j＝7.1,3h)。lc-ms(m h)

＝139.0。
[0096]
步骤4：3-甲氧基-4-硝基苯甲酰胺
[0097]
将3-甲氧基-4-硝基苯甲酸甲酯(11.0g，52.1mmol)在氨水(25％，90ml)中的悬浮液在50℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并且通过过滤收集沉淀物，用水(15mlx3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(8.3g，81％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.23(s,1h),7.95(d,j＝8.3hz,1h),7.75(d,j＝1.4hz,1h),7.70(s,1h),7.57(dd,j＝8.3,1.5hz,1h),3.98(s,3h)。lc-ms(m h)

＝196.9。
[0098]
步骤5：3-羟基-4-硝基苯甲酰胺
[0099]
在氮气下，在0℃下，向3-甲氧基-4-硝基苯甲酰胺(4.65g，23.9mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中逐滴添加三溴化硼在二氯甲烷中的溶液(1m，60ml，60mmol)，并且然后将混合物在40℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温并倒入冰(300ml)中，并且将混合物在室温下搅拌2h。通过过滤收集沉淀物，用水(15mlx3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(3.0g，69％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.18(s,1h),8.14(s,1h),7.92(d,j＝8.6hz,1h),7.61(s,1h),7.56(s,1h),7.40(d,j＝8.6hz,1h)。lc-ms(m h)

＝182.9。
[0100]
步骤6：3-(3-吗啉代丙氧基)-4-硝基苯甲酰胺
[0101]
在氮气下，在0℃下，向3-羟基-4-硝基苯甲酰胺(3.0g，16.5mmol)、3-吗啉代丙-1-醇(3.6g，24.7mmol)和三苯基膦(6.5g，24.7mmol)在二氯甲烷(150ml)中的溶液中添加偶氮二甲酸二异丙酯(5.0g，24.7mmol)并将混合物在室温下搅拌4h。完成后，用饱和nh4cl(200ml)将反应淬灭并将混合物用二氯甲烷(80mlx3)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝100/1至30/1，含有0.1％氨水)纯化以给出标题化合物(2.7g，53％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.22(s,1h),7.93(d,j＝8.3hz,1h),7.74(s,1h),7.69(s,1h),7.55(d,j＝8.5hz,1h),4.26(t,j＝6.0hz,2h),3.56(s,4h),2.41(t,j＝6.8hz,2h),2.35(s,4h),1.94-1.85(m,2h)。lc-ms(m h)

＝309.9。
[0102]
步骤7：4-(n-羟基乙酰胺基)-3-(3-吗啉代丙氧基)苯甲酰胺
[0103]
在氮气下，向3-(3-吗啉代丙氧基)-4-硝基苯甲酰胺(2.7g，8.74mmol)在乙醇(90ml)和1,2-二氯乙烷(90ml)中的溶液中添加雷尼镍(270mg，10w％)，然后在0℃下添加水合肼(655mg，13.1mmol)。将混合物在0℃下搅拌4h，并且然后在10℃下搅拌4h。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于四氢呋喃(150ml)中，并且然后添加饱和nahco3(10ml)。添加乙酰氯(760mg，9.61mmol)并将混合物在室温下搅拌2h。将混合物在真空中浓缩并将残余物溶解于甲醇(100ml)中。将沉淀物滤出并将滤液在真空中浓缩以给出粗标题化合物(3.6g)，将其不经进一步纯化而用于步骤8。lc-ms(m h)

＝337.9。
[0104]
步骤8：2-氨基-7-(3-吗啉代丙氧基)-1h-吲哚-3,5-二甲酰胺
[0105]
向4-(n-羟基乙酰胺基)-3-(3-吗啉代丙氧基)苯甲酰胺(3.6g，粗品)和丙二腈(576mg，8.74mmol)在二氯甲烷(80ml)中的溶液中添加三乙胺(883mg，8.74mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩，并将残余物重新溶解于甲醇(100ml)。添加在甲醇中的甲醇钠(5.4m，1.6ml，8.74mmol)。将混合物加热至回流并搅拌4h，冷却至室温并且然后在真空中浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝30/1至17/1，含有0.1％氨水)纯化以给出标题化合物(930mg，对于两个步骤29％)。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.73(s,1h),7.86(s,1h),7.68(s,1h),7.12(s,2h),6.62(s,2h),6.54(s,2h),4.15(t,j＝6.2hz,2h),3.58(s,4h),2.47(s,2h),2.38(s,4h),2.01-1.90(m,2h)。lc-ms(m h)

＝361.9。
[0106]
步骤9：2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0107]
将2-氨基-7-(3-吗啉代丙氧基)-1h-吲哚-3,5-二甲酰胺(930mg，2.58mmol)和1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲醛(711mg，5.15mmol)在乙酸(10ml)中的溶液加热至回流过夜。将混合物冷却至室温，并且然后倒入水(100ml)中。通过过滤收集沉淀物，用水(15mlx3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(840mg，68％)。lc-ms(m h)

＝479.9。
[0108]
步骤10：4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲腈
[0109]
将2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(840mg，1.75mmol)、三乙胺盐酸盐(480mg，3.5mmol)和三氯氧磷(5ml)的混合物在110℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物倒入冰水(50ml)中，并用饱和nahco3中和。通过过滤收集沉淀物，用水(10mlx 3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(680mg，81％)。lc-ms(m h)

＝479.9,481.8。
[0110]
步骤11：4-(n-羟基乙酰胺基)-3-甲氧基苯甲酰胺
[0111]
在氮气下，向3-甲氧基-4-硝基苯甲酰胺(3.2g，16.3mmol)在乙醇(50ml)和1,2-二氯乙烷(50ml)中的溶液中添加雷尼镍(320mg，10w％)，然后在0℃下添加水合肼(1.2g，24.5mmol)。将混合物在0℃下搅拌5h。将固体滤出并将滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于四氢呋喃(150ml)，然后添加饱和nahco3(20ml)和乙酰氯(1.42g，18.0mmol)。将混合物在室温下搅拌2h，并且然后在真空中浓缩。将残余物用甲醇(150ml)溶解。将所得混合物过滤并将滤液在真空中浓缩以给出标题化合物(3.3g)，将其不经进一步纯化而用于步骤12。lc-ms(m h)

＝224.9。
[0112]
步骤12：2-氨基-7-甲氧基-1h-吲哚-3,5-二甲酰胺
[0113]
向4-(n-羟基乙酰胺基)-3-甲氧基苯甲酰胺(3.3g，粗品)和丙二腈(1.1g，16.3mmol)在二氯甲烷(100ml)中的溶液中添加三乙胺(1.65g，16.3mmol)在二氯甲烷(20ml)中的溶液，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在真空中浓缩并将残余物溶解于甲醇(100ml)中。添加甲醇钠在甲醇中的溶液(5.4m，3ml，16.3mmol)。将混合物加热至回流4h，并且然后在真空中浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝30/1至10/1，含有0.1％氨水)纯化以给出标题化合物(1.5g，对于两个步骤37％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.91(s,1h),7.88(s,1h),7.72(s,1h),7.14(d,j＝6.9hz,2h),6.65(s,2h),6.55(s,2h),3.91(s,3h)。lc-ms(m h)

＝248.9。
[0114]
步骤13：2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0115]
将2-氨基-7-甲氧基-1h-吲哚-3,5-二甲酰胺(1.4g，5.65mmol)和1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-甲醛(860mg，6.2mmol)在乙酸(15ml)中的混合物回流过夜。将混合物冷却至室温，并且然后倒入水(100ml)中。通过过滤收集沉淀物，用水(15mlx3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(830mg，40％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.64(s,1h),12.36(s,1h),8.22(s,1h),8.07(s,1h),7.47(s,1h),7.22(s,1h),7.02(s,1h),4.72-4.60(m,2h),4.02(s,3h),2.22(s,3h),1.38(t,j＝7.1hz,3h)。lc-ms(m h)

＝366.9。
[0116]
步骤14：4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲腈
[0117]
将2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(700mg，1.91mmol)、三乙胺盐酸盐(528mg，3.83mmol)和三氯氧磷(10ml)的混合物在110℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，并且倒入水(100ml)中。将混合物用饱和nahco3中和。通过过滤收集沉淀物，用水(10mlx 3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(670mg，95％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.50(s,1h),8.25(s,1h),7.63(s,1h),6.83(s,1h),4.73(q,j＝6.9hz,2h),4.08(s,3h),2.23(s,3h),1.40(t,j＝7.1hz,3h)。lc-ms(m h)

＝366.8。
[0118]
步骤15：4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0119]
向4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲腈(670mg，1.83mmol)和k2co3(253mg，1.83mmol)在二甲亚砜(8ml)中的混合物中逐滴添加过氧化氢溶液(30％，1ml，9.15mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物倒入水(50ml)中。通过过滤收集沉淀物，用水(10mlx 3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(480mg，68％)。lc-ms(m h)

＝384.8。
[0120]
步骤16：(e)-9-(4-溴代丁-2-烯-1-基)-4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0121]
在氮气下，将4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(40mg，0.10mmol)、(e)-1,4-二溴代丁-2-烯(44mg，0.21mmol)和k2co3(29mg，0.21mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物在50℃下搅拌1h。将混合物冷却至室温，倒入水(15ml)中，并将沉淀物过滤以给出标题化合物(40mg，77％)。lc-ms(m h)

＝516.7,518.7。
[0122]
步骤17：(e)-4-氯-9-(4-(4-氯-6-氰基-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0123]
将(e)-9-(4-溴代丁-2-烯-1-基)-4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(40mg，0.077mmol)、4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲腈(30mg，0.062mmol)和k2co3(16mg，0.116mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物在室温下搅拌1h。将混合物倒入水(5ml)中，并通过过滤收集沉淀物。将粗产物通过制备型tlc(二氯甲烷/甲醇＝15/1，含有0.1％氨水)纯化以给出实例1(10mg，18％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.45(s,1h),8.26-8.15(m,2h),7.67(s,1h),7.49(s,1h),7.42(s,1h),6.79(s,1h),6.66(s,1h),5.78-5.65(m,2h),5.20(br s,4h),4.62-4.57(m,2h),4.48-4.42(m,2h),3.84(br s,2h),3.79(s,3h),3.45(br s,4h),2.20(s,3h),2.18(s,3h),2.11(s,4h),1.50-1.41(m,2h),1.29(t,j＝6.8hz,3h),1.16(t,j＝6.9hz,3h)。lc-ms(m h)

＝916.9。
[0124]
实例2
[0125]
(e)-9-(4-(6-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-4-羟基-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺；三氟乙酸
甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺；甲酸
[0132]
步骤1：4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0133]
将4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲腈(150mg，0.31mmol)在甲磺酸(1.5ml)中的溶液在50℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，并倒入水(50ml)中，并用饱和nahco3中和。通过过滤收集沉淀物，用水(10mlx3)洗涤并在真空中干燥以给出标题化合物(80mg，51％)。lc-ms(m h)

＝497.8。
[0134]
步骤2：2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0135]
将4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(80mg，0.16mmol)和pd/c(10mg)在甲醇(10ml)中的悬浮液在氢气气氛下、在50℃下搅拌4h。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩以给出标题化合物(65mg，87％)。lc-ms(m h)

＝463.9。
[0136]
步骤3：2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0137]
将4-氯-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(130mg，0.34mmol)和pd/c(15mg)在甲醇(10ml)中的悬浮液在氢气气氛下、在50℃
下搅拌4h。将混合物过滤并将滤液在真空中浓缩以给出标题化合物(50mg，42％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.82(s,1h),9.53(s,1h),8.44(s,1h),8.07(s,1h),7.67(s,1h),7.37(s,1h),6.82(s,1h),4.78(q,j＝7.0hz,2h),4.05(s,3h),2.23(s,3h),1.39(t,j＝7.1hz,3h)。lc-ms(m h)

＝350.9。
[0138]
步骤4：(e)-9-(4-溴代丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺
[0139]
将2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(50mg，0.14mmol)、(e)-1,4-二溴代丁-2-烯(46mg，0.21mmol)和k2co3(29mg，0.21mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物在氮气下在室温下搅拌5h。将混合物倒入水(5ml)中并通过过滤收集沉淀物，用水(5mlx3)冲洗，在真空中干燥以给出粗产物(40mg，56％)。lc-ms(m h)

＝482.8,484.8。
[0140]
步骤5：(e)-9-(4-(6-氨基甲酰基-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-9-基)丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺；甲酸
[0141]
将(e)-9-(4-溴代丁-2-烯-1-基)-2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-甲氧基-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(40mg，0.083mmol)、2-(1-乙基-3-甲基-1h-吡唑-5-基)-8-(3-吗啉代丙氧基)-9h-嘧啶并[4,5-b]吲哚-6-甲酰胺(46mg，0.099mmol)和k2co3(17mg，0.124mmol)在n,n-二甲基甲酰胺(2ml)中的混合物在氮气下在室温下搅拌2h。将混合物倒入水(5ml)中，并通过过滤收集沉淀物。将固体通过c18柱色谱法(乙腈/0.1％甲酸水溶液＝0％至50％)纯化以给出实例4(3.85mg，5％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.48(s,2h),8.45(s,1h),8.41(s,1h),8.22(s,1h),8.12-8.01(m,2h),7.59(s,1h),7.52(s,1h),7.45-7.33(m,2h),6.78(s,1h),6.73(s,1h),5.79(br s,2h),5.25-5.15(m,4h),4.61(q,j＝6.4hz,2h),4.52(q,j＝6.4hz,2h),3.93(t,j＝5.9hz,2h),3.75(s,3h),3.48-3.41(m,4h),2.25-2.15(m,8h),2.11(br s,4h),1.59-1.51(m,2h),1.29-1.25(m,3h),1.15(t,j＝7.1hz,3h)。
lc-ms(m h)

＝866.9。生物学活性
[0142]
在thp1-dual
tm
细胞中的sting细胞测定
[0143]
材料
[0144]
thp1-dual
tm
细胞通过两种诱导型报道构建体的稳定整合而衍生自人thp-1单核细胞细胞系。thp1-dual
tm
细胞的特征是在isg54(干扰素刺激基因)最小启动子联合五个干扰素(ifn)刺激的应答元件的控制下的lucia萤光素酶基因(一种新型的分泌型萤光素酶报道基因)。thp1-dual
tm
细胞还表达由ifn-β最小启动子驱动的分泌型胚胎碱性磷酸酶(seap)报道基因，所述启动子与五个拷贝的nf-κb共有转录应答元件和三个拷贝的c-rel结合位点融合。因此，thp1-dual
tm
细胞可以同时通过监测seap的活性以研究nf-κb信号通路，以及通过评估lucia萤光素酶的活性以研究干扰素调节因子(irf)信号通路。当使用quanti-blue
tm
(seap检测试剂)和quanti-luc
tm
(lucia萤光素酶检测试剂)时，两种报道蛋白均易于在细胞培养上清液中测量。
[0145]
已经鉴定出影响cdn识别和信号转导的人sting(hsting)的不同变体：
·
r232(r71-g230-r232-r293)：在人群中最普遍(约60％)。称为“野生型”或232r-rgr等位基因2。
·
haq(h71-a230-r232-q293)：含有三个非同义的单核苷酸取代；r71h、g230a和r293q。此等位基因(在约20％的人群中发现)对cdn的敏感性不如“野生型”等位基因2。
[0146]
细胞维持
[0147]
生长培养基：rpmi 1640、2mm l-谷氨酰胺、25mm hepes、10％热灭活胎牛血清(在56℃下30min)、100μg/ml normocin
tm
、pen-strep(100u/ml-100μg/ml)1.回收细胞(至少传代一次后)以后，在生长培养基中维持细胞并传代培养。(为维持选择压力，每隔一次传代将10μg/ml杀稻瘟素和100μg/ml zeocin
tm
添加至生长培养基中。)2.每3天通过接种7x105个细胞/ml使细胞传代。不允许细胞浓度超过2x106个细胞/ml。
[0148]
实验程序1.在平底96孔板(costar 3599)的每孔中添加180μl细胞悬液(约100,000个细胞)。2.然后以0.1％dmso/生长培养基中1nm-10μm的最终浓度范围、经10点连续稀释来添加化合物。3.在37℃、5％co2下，孵育所述平板24h。4.使用以下参数设置bmg pherastar fsx仪器：注射50μl，终点测量，起始时间为4秒，且读数时间为0.1秒。5.将每孔10μl thp1-dual
tm
细胞培养基吸移至96孔白色不透明板(corning 3903)中。6.向每个孔中添加50μl quanti-luc测定溶液，并轻轻敲打板数次以进行混合。立即进行测量。
[0149]
表1.本文披露的化合物的细胞活性ec
50
(nm)
[0150]
应理解，如果本文引用任何现有技术出版物；这样的引用并不构成承认出版物形成任何国家的本领域公知常识的一部分。
[0151]
在此通过确认引用而引用的所有出版物、专利、专利申请和公开的专利申请的披露内容均通过引用以其整体并入本文。
[0152]
虽然出于清楚理解的目的，已经通过说明以及实例的方式相当详细地描述了前述发明，本领域普通技术人员将清楚的是，可以实施某些微小修改或修饰。因此，说明和实例不应当被解释为限制本发明的范围。