放射性标记的MGLPET配体的制作方法

放射性标记的mgl pet配体
技术领域
1.本发明涉及一种新型选择性化合物，其具有单酰基甘油脂肪酶 (mgl)亲和力，并且在一个实施方案中含有发射正电子的放射性配体，以实现正电子发射断层扫描(pet)；一种包含该化合物的药物组合物，使用该化合物评估mgl受体表达、分布和酶占用，以及诊断受试者特别是人中与mgl受体活性相关的疾病、障碍或病症。


背景技术：

2.自从民间医药用于治疗目的以来，一直在使用大麻和δ
9-四氢大麻酚的类似物。内源性大麻素系统由两种g蛋白偶联受体，即1型大麻素受体 (cb1)(matsuda等人，nature，1990，346，561-4)和2型大麻素受体 (cb2)(munro等人，nature，1993，365，61-5)组成。cb1受体是大脑中表达的最丰富的g蛋白偶联受体之一(herkenam等人，proc.nat.acad. sci.，1990，87(5)，1932-1936)。cb1也在肝脏、胃肠道、胰腺、脂肪组织和骨骼肌中在外周表达(di marzo等人，curr opin lipidol，2007，18，129
‑ꢀ
140)。cb2主要在免疫细胞诸如单核细胞中表达(pacher等人，amer jphysiol，2008，294，h1133-h1134)并且在某些条件(炎症)下在大脑中 (benito等人，brit j pharmacol，2008，153，277-285)以及在骨骼肌 (cavuoto等人，biochem biophys res commun，2007，364，105-110)和心肌 (hajrasouliha等人，eur jpharmacol，2008，579，246-252)中表达。
3.在1992年，发现n-花生四烯酰乙醇胺(aea或花生四烯乙醇胺)是大麻素受体的内源性配体(devane等人，science，1992，258，1946-9)。随后，2-花生四烯酰甘油(2-ag)也被鉴定为大麻素受体的额外内源性配体 (mechoulam等人，biochem pharmacol，1995，50，83-90；sugiura等人， biochem biophys res commun，1995，215，89-97)。据报道，2-ag的浓度为大鼠脑中花生四烯乙醇胺的浓度的至少100倍(buczynski和parsons，britj pharmacol，2010，160(3)，423-42)。因此，相比于花生四烯乙醇胺，2-ag 在大脑内源性大麻素系统中可能发挥更重要的生理作用(sugiura等人， prostaglandins leukot essent fatty acids.，2002年2月-3月，66(2-3)：173
‑ꢀ
92)。内源性大麻素2-ag是cb1和cb2受体的完全激动剂，而花生四烯乙醇胺是这两种受体的部分激动剂(suguira等人，prog lipid res，2006， 45(5)：405-46)。与许多经典的神经递质不同，内源性大麻素通过逆行机制发出信号。它们根据需要在突触后神经元中合成，并且然后在与突触前大麻素受体结合后快速降解(ahn等人，chem rev.2008，108(5)：1687-707)。单酰基甘油脂肪酶(mgll，也称为mag脂肪酶和mgl)是负责2-ag 在中枢神经系统(mechoulam等人，biochem pharmacol，1995，50，83-90； sugiura等人，biochem biophys res commun，1995，215，89-97；long等人， nat chem biol.，2009年1月，5(1)：37-44；schlosburg等人，natneurosci.，2010年9月，13(9)：1113-9)和外周组织(long等人，chembiol.，2009年7月31日，16(7)：744-53)中降解为花生四烯酸和甘油的丝氨酸水解酶。花生四烯乙醇胺被脂肪酸酰胺水解酶(faah)水解(piomelli， nat rev neurosci，2003，4，873-884)。mgl既以可溶性形式存在又以膜结合形式存在(dinh等人，proc natl acad sci u s a.，2002年8月6日， 99(16)：10819-24)。在大
脑中，mgl位于与高cb1受体密度相关的区域内的突触前神经元(straiker等人，mol pharmacol.，2009年12月， 76(6)：1220-7)和星形胶质细胞(walter等人，j neurosci.，2004年9月15 日，24(37)：8068-74)中。与野生型对照相比，mgl表达的基因消融引起大脑2-ag水平增加10倍而不影响花生四烯乙醇胺浓度(schlosburg等人， nat neurosci.，2010年9月，13(9)：1113-9)。
4.因此，mgl调节提供了一个令人关注的用于增强大麻素系统的策略。该方法的主要优点是，将只调节有效产生内源性大麻素的大脑区域，从而潜在地最大程度减少与外源性cb1激动剂相关的副作用。在动物中通过共价抑制剂所致mgl的药理学失活增加了大脑和外周组织中的2-ag含量，并且已发现会产生依赖于cb1和/或cb2受体的镇痛、抗焦虑和抗炎效果 (long等人，nat chem biol.，2009年1月，5(1)：37-44；ghosh等人，life sci.，2013年3月19日，92(8-9)：498-505；bedse等人，biol psychiatry.，2017年10月1日，82(7)：488-499；bernal-chico等人，glia.，2015年1 月，63(1)：163-76；patel等人，neurosci biobehav rev.，2017年5月，76(pt a)：56-66；betse等人，transl psychiatry.，2018年4月26日，8(1)：92)。除了mgl在终止2-ag信号传导方面的作用之外，mgl调节(包括mgl 抑制)还促进对神经炎症的cb1/2非依赖性效应(nomura等人， science.，2011年11月11日，334(6057)：809-13)。mgl调节(包括mgl 抑制)导致患有以下疾病的动物模型中促炎性前列腺素信号传导减少：创伤性脑损伤(katz等人，j neurotrauma.，2015年3月1日，32(5)：297
‑ꢀ
306；zhang等人，j cereb blood flow metab.，2015年3月31日， 35(4)：706)，神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病(piro等人，cell rep.， 2012年6月28日，1(6)：617-23；wenzel等人，life sci.，2018年8月15 日，207：314-322；chen等人，cell rep.，2012年11月29日，2(5)：1329
‑ꢀ
39)、帕金森氏病(nomura等人，science，2011年11月11日， 334(6057)，809-13；pasquarelli等人，neurochem int.，2017年11月， 110：14-24)、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(pasquarelli等人， neuropharmacology，2017年9月15日，124：157-169)、多发性硬化症 (hernadez-torres等人，angew chem int ed engl.，2014年12月8日， 53(50)：13765-70；bernal-chico等人，glia.，2015年1月，63(1)：163-76)、亨廷顿氏舞蹈病(covey等人，neuropsychopharmacology，2018，43，2056
‑ꢀ
2063)、图雷特综合症和癫痫持续状态(terrone等人，epilepsia.，2018年 1月，59(1)，79-91；von ruden等人，neurobiol dis.，2015年5月，77：238
‑ꢀ
45。
5.因此，通过增强大麻素系统并减弱促炎级联反应，mgl调节(包括 mgl抑制)为一大批复杂疾病的治疗提供了引人注目的治疗方法。重要的是，动物中的mgl调节(包括mgl抑制)不产生用δ
9-四氢大麻酚和其他cb1激动剂观察到的全面神经行为效应(tuo等人，j med chem.，2017 年1月12日，60(1)，4-46；mulvihill等人，life sci.，2013年3月19日， 92(8-9)，492-7)。
6.内源性大麻素低活性是治疗抑郁症、焦虑症和创伤后应激障碍的风险因素。人类使用大麻的数千年历史，以及人类用内源性大麻素拮抗剂利莫那班治疗的短暂时期为该假设提供了支持。患有重度抑郁症的个体中2-ag 水平有所降低(hill等人，pharmacopsychiatry.，2008年3月，41(2)：48
‑ꢀ
53；hill等人，psychoneuroendocrinology.，2009年9月，34(8)：1257
‑ꢀ
1262.)。低循环2-ag水平预测抑郁发病率(hauer等人，rev neurosci.， 2012，23(5-6)：681-90)。已在患有创伤后应激障碍
(ptsd)的患者中发现循环2-ag减少(hill等人，psychoneuroendocrinology，2013，38(12)，2952
‑ꢀ
2961)。暴露于长期应激源的健康志愿者表现出循环2-ag水平逐渐降低，这与正面情绪量度开始减少相关联(yi等人，progress in neuro
‑ꢀ
psychopharmacology and biological psychiatry，2016，67(3)，92-97)。cb1受体反向激动剂/拮抗剂利莫那班由于严重抑郁症和自杀意念的高发生率已从市场上召回(christensen等人，the lancet，2007，370，1706-1713)。因此， mgl调节剂潜在地可用于治疗心境障碍、焦虑症和ptsd。
7.大麻素受体激动剂在临床上用于治疗疼痛、痉挛、呕吐和厌食症(dimarzo等人，annu rev med.，2006，57：553-74；ligresti等人，curr opinchem biol.，2009年6月，13(3)：321-31)。因此，mgl调节剂(包括 mgl抑制剂)也可潜在地用于这些适应症。mgl在有毒化学品疼痛、炎性疼痛、热疼痛和神经性疼痛的动物模型中发挥cb1依赖性镇痛效应 (guindon等人，br j pharmacol.，2011年8月，163(7)：1464-78；kinsey等人，j pharmacol exp ther.，2009年9月，330(3)：902-10；long等人，natchem biol.，2009年1月，5(1)：37-44)。mgl阻断减少了经受慢性压迫性坐骨神经损伤的小鼠中的机械性和丙酮诱导的冷触诱发痛(kinsey等人，jpharmacol exp ther.，2009年9月，330(3)：902-10)。mgl抑制产生耐受性、便秘和拟大麻素副作用减弱的阿片节约事件(wilkerson等人，jpharmacol exp ther.，2016年4月，357(1)：145-56)。mgl阻断在炎性肠病模型中是保护性的(alhouayek等人，faseb j.，2011年8月， 25(8)：2711-21)。mgl抑制还逆转化学疗法诱发的神经病变的小鼠模型中由紫杉醇诱发的伤害性感受行为和促炎标志物(curry等人，j pharmacolexp ther.，2018年7月，366(1)：169-18)。
8.对2-ag水解的抑制产生抗增殖活性并降低前列腺癌细胞侵入性 (nithipatikom等人，cancer res.，2004年12月15日，64(24)：8826-30； nithipatikom等人，biochem biophys res commun.，2005年7月15日， 332(4)：1028-33；nithipatikom等人，prostaglandins other lipid mediat.，2011年2月，94(1-2)：34-43)。mgl在攻击性人癌细胞和原发性肿瘤中上调，其中mgl具有提供游离脂肪酸的脂解来源以用于合成促进癌症攻击性的致癌信号传导脂质的独特作用。因此，除了mgl在介导的内源性大麻素信号传导中的生理作用之外，癌症中的mgl在调节用于在恶性人癌细胞中合成原致癌基因信号传导脂质的脂肪酸前体池方面起到独特的作用。
9.mgl阻断显示鼩精呕吐的氯化锂模型中的止吐和抗恶心效果(sticht 等人，br j pharmacol.，2012年4月，165(8)：2425-35)。
10.mgl调节剂(包括mgl抑制剂)可在调节对阿片类药物的药物依赖性方面具有效用。mgl阻断降低小鼠中纳络酮催促的吗啡戒断症状的强度。mgl阻断还减弱吗啡依赖性小鼠中的自然戒断体征(ramesh等人，jpharmacol exp ther.，2011年10月，339(1)：173-85)。
11.mgl调节剂也潜在地可用于治疗眼部病症，包括但不限于青光眼和由于眼内压升高引起的疾病状态(miller等人，pharmaceuticals，2018，11， 50)。
12.正电子发射断层扫描(pet)是一种非侵入式成像技术，其提供所有核成像技术的最高空间和时间分辨率，并且具有以下额外的优点：其可以允许对组织中的示踪剂浓度进行真实定量。它使用正电子发射放射性核素，诸如例如
15
o、
13
n、
11
c和
18
f进行检测。需要提供用于评估mgl的表达、分布和被其抑制剂的占用的正电子发射断层扫描放射性示踪剂。成像剂在这种研究中并且在靶向mgl的治疗性候选物的开发中起关键作用。


技术实现要素：

13.本发明涉及一种具有式(i)的化合物
[0014][0015]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。在一个实施方案中，式(i)的化合物具有至少一个为放射性的原子。
[0016]
在一个具体实施方案中，式(i)的化合物为式(ia)的化合物，
[0017][0018]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0019]
本发明还涉及一种药物组合物，其包含式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载剂或稀释剂。在一个具体实施方案中，所述药物组合物特别适合于诊断，并且因此可以被称为诊断药物组合物。特别地，所述药物组合物是无菌溶液。因此，本发明的示例是一种包含本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)的无菌溶液。
[0020]
本发明还涉及式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)作为成像剂的用途。因此，举例说明，本发明是如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)用于对组织、细胞或哺乳动物进行体外或体内成像的用途或者对组织、细胞或哺乳动物进行体外或体内成像的方法。特别地，本发明涉及一种如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)，其用作用于对组织、细胞或哺乳动物进行体外、离体或体内成像的造影剂。本发明还涉及一种包含式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)的组合物，其用作用于对组织、细胞或哺乳动物进行体外、离体或体内成像的造影剂。
[0021]
本发明还涉及一种用于对组织、细胞或哺乳动物进行成像的方法，其包括使组织、细胞或哺乳动物与可检测量的如本文所述的标记的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)接触或者向组织、细胞或哺乳动物提供或施用可检测量的如本文所述的标记的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)，以及检测式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)。
[0022]
进一步举例说明，本发明是一种对组织、细胞或哺乳动物进行成像的方法，其包括使组织、细胞或哺乳动物与如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)接触或者向组织、细胞或哺乳动物提供或施用如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)，以及用正电子发射断层扫描成像系统对组织、细胞或哺乳动物进行成像。
[0023]
本发明还涉及一种标记的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)，其用于在诊断
方法中使用，该诊断方法在人体或动物体上执行。在一个实施方案中，该诊断方法还包括对组织、细胞或哺乳动物进行成像，该方法包括使组织、细胞或哺乳动物与可检测量的如本文所述的...接触或者向组织、细胞或哺乳动物提供或施用可检测量的如本文所述的...，以及检测式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)。在一个实施方案中，该诊断方法还包括对组织、细胞或哺乳动物进行成像，其包括使组织、细胞或哺乳动物与如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)接触或者向组织、细胞或哺乳动物提供或施用如本文所述的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)，以及用正电子发射断层扫描成像系统对组织、细胞或哺乳动物进行成像。
附图说明
[0024]
图1.呈彩色的正常大鼠脑切片(矢状视图)上mgl的免疫组织化学 (ihc)染色(大鼠矢状脑切片上的单酰基甘油脂肪酶(mgl)ihc。 1
°
ab：来自novus biologicals的单酰基甘油脂肪酶抗体，目录号nbp2
‑ꢀ
19389。宿主：兔子，与以下对象反应：小鼠、大鼠和人。工作溶液：1∶100 稀释。使用alexa fluor
tm 488 tyramide superboost
tm
试剂盒。)
[0025]
图2.正常大鼠脑切片上的实施例3的化合物的放射自显影(arg)，该切片邻近用于呈彩色的图1(矢状视图)中的ihc染色的切片而切割。大鼠脑切片是：皮层、纹状体、海马体、丘脑、小脑和脑干。
[0026]
图3.呈黑白色的正常大鼠脑切片(矢状视图)上mgl的免疫组织化学(ihc)染色(大鼠矢状脑切片上的单酰基甘油脂肪酶(mgl)ihc。 1
°
ab：来自novus biologicals的单酰基甘油脂肪酶抗体，目录号nbp2
‑ꢀ
19389。宿主：兔子，与以下对象反应：小鼠、大鼠和人。工作溶液：1∶100 稀释。使用alexa fluor
tm 488 tyramide superboost
tm
试剂盒。)
[0027]
图4.正常大鼠脑切片上的实施例3的化合物的放射自显影(arg)，该切片邻近用于呈黑白色的图1(矢状视图)中的ihc染色的切片而切割。大鼠脑切片是：皮层、纹状体、海马体、丘脑、小脑和脑干。
具体实施方式
[0028]
本发明涉及如本文前面所定义的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)及其药学上可接受的盐。本发明还涉及用于合成式(ia)的化合物的式 (ib)的前体化合物。
[0029]
在本发明的一个实施方案中，是式(i)的化合物：
[0030][0031]
或其药学上可接受的盐、同位素或溶剂化物。
[0032]
在本发明的一个实施方案中，是式(ia)的化合物：
[0033][0034]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0035]
在另一个实施方案中，如先前所述的式(i)的化合物选自由以下项组成的组：
[0036]
(s)-(2-氯-6-氟苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢-6h
‑ꢀ
吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮；以及
[0037]
(s)-(2-氯-6-(18f)氟苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢
‑ꢀ
6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮；
[0038]
以及其药学上可接受的盐。
[0039]
如已经提到的，式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)和包含式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)的组合物可用于对组织、细胞或宿主进行体外或体内成像。特别地，本发明涉及一种在体外或体内对组织、细胞或宿主中的mgl表达、分布和被其抑制剂的占用进行成像或定量的方法。细胞和组织优选地是中枢神经系统细胞和其中mgl酶丰富的组织。
[0040]
当方法在体内进行时，宿主是哺乳动物。在此类特定情况下，式(ia) 的化合物例如通过用注射器注射或借助于外周静脉内管线(诸如短导管) 静脉内施用。
[0041]
当宿主是人时，式(ia)的化合物或包含式(ia)的化合物的无菌溶液可以特别地通过在手臂中，向任何可识别的静脉中，特别是在手背中，或在肘的肘正中静脉中静脉内施用而施用。
[0042]
因此，在一个具体实施方案中，本发明涉及一种对哺乳动物中的组织或细胞进行成像的方法，其包括向哺乳动物静脉内施用如本文所定义的式 (ia)的化合物或包含式(ia)的化合物的组合物，以及用正电子发射断层扫描成像系统对组织或细胞进行成像。
[0043]
因此，在另一个具体实施方案中，本发明涉及一种对人中的组织或细胞进行成像的方法，其包括向人静脉内施用如本文所定义的式(ia)的化合物或包含式(ia)的化合物的无菌制剂，以及用正电子发射断层扫描成像系统对组织或细胞进行成像。
[0044]
在另一个实施方案中，本发明涉及一种对哺乳动物中的mgl表达进行成像或定量的方法，其包括向哺乳动物静脉内施用式(ia)的化合物或包含式(ia)的化合物的组合物，以及用正电子发射断层扫描成像系统进行成像。
[0045]
在另一个实施方案中，本发明涉及式(ia)的化合物用于对组织、细胞或宿主进行体外或体内成像的用途，或者本发明涉及一种式(ia)的化合物，其用于在使用正电子发射断层扫描对组织、细胞或宿主进行体外或体内成像中使用。
[0046]
在另一个实施方案中，本发明涉及一种式(ia)的化合物，其用于在对组织、细胞或宿主进行体外或体内成像的诊断方法中使用。在另一个实施方案中，本发明涉及一种式(ia)的化合物，其用于在使用正电子发射断层扫描对组织、细胞或宿主进行体外或体内成像的诊断方法中使用。
[0047]
定义
[0048]
如本文所用，术语
″
组合物
″
旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及通过组合指定量的指定成分而直接或间接得到的任何产品。
[0049]
根据式(i)的化合物和式(ia)的化合物的加成盐也可以形成立体异构形式，并且也旨在涵盖在本发明的范围内。
[0050]
术语
″
含有正电子发射断层扫描(
″
pet
″
)示踪剂放射性核素的 mgl抑制剂
″
意指mgl抑制剂的一个或多个原子被pet示踪剂放射性核素替代。在一些实施方案中，mgl抑制剂的氟原子被
18
f替代。在一些实施方案中，mgl抑制剂的碳原子被
11
c替代。在一些实施方案中，mgl抑制剂的氮原子被
13
n替代。在一些实施方案中，mgl抑制剂的氮原子被
15
o替代。
[0051]
″
药学上可接受的盐
″
旨在表示由式(i)(以及式(ia))表示的化合物的酸或碱的盐，该盐是无毒的、生物学上可耐受的或换句话讲在生物学上适于施用给受试者。一般参见以下文献：s.m.berge等人，
″
pharmaceutical salts
″
，j.pharm.sci.，1977，66：1-19；和《handbook ofpharmaceutical salts，properties，selection，and use》，stahl和wermuth编辑，wiley-vch和vhca，zurich，2002。优选的药学上可接受的盐是那些药理学有效且适于与患者组织接触而不会有不当毒性、刺激或过敏反应的盐。
[0052]
式(i)(以及式(ia))的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或同时具有这两种类型的官能团，并且因此可与多种无机碱或有机碱以及无机酸和有机酸反应，以形成药学上可接受的盐。
[0053]
药学上可接受的盐的示例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2
‑ꢀ
磺酸盐和扁桃酸盐。
[0054]
式(i)(以及式(ia))的化合物可以包含至少一个具有碱性的氮，因此期望的药学上可接受的盐可通过本领域可用的任何合适方法来制备，例如用以下酸处理游离碱：无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、硼酸、磷酸等；或者有机酸，诸如乙酸、苯乙酸、丙酸、硬脂酸、乳酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、羟乙磺酸、琥珀酸、戊酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、油酸、棕榈酸、月桂酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟基酸 (诸如扁桃酸、柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(诸如苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、萘甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如月桂基磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸)、酸诸如本文作为示例给出的那些酸的任何相容混合物，以及视为等同物的任何其他酸以及它们的混合物。
[0055]
式(i)(以及式(ia))的化合物可以含有羧酸部分，期望的药学上可接受的盐可通过任何合适的方法来制备，例如用诸如以下的无机碱或有机碱处理游离酸：胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物、碱诸如本文作为示例给出的那些碱的任何相容混合物，以及本领域普通技术人员视为等同物或可接受替代物的任何其他碱以及它们的混合物。合适的盐的例示性示例包括衍生自下述物质的有机盐：氨基酸(诸如甘氨酸和精
氨酸)、氨、碳酸盐、碳酸氢盐、伯胺、仲胺、叔胺和环胺 (诸如苄胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、哌嗪、n-甲基葡糖胺和氨基丁三醇)，以及衍生自下列物质的无机盐：钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。
[0056]
本发明的化合物，包括本发明的其药学上可接受的盐，无论是单独的还是组合的(统称为
″
活性剂
″
)可用作本发明方法中的mgl调节剂。用于调节mgl的此类方法包括使用治疗有效量的本发明的至少一种化学化合物。
[0057]
此外，本发明的一些化合物可与水形成溶剂化物(即水合物)或与常用有机溶剂形成溶剂化物，并且此类溶剂化物也旨在涵盖在本发明的范围内。
[0058]
术语
″
宿主
″
是指哺乳动物，特别是指人、小鼠、狗和大鼠。
[0059]
术语
″
细胞
″
是指表达或包含mgl酶的细胞。
[0060]
术语
″
组织
″
是指表达或包含mgl酶的组织。
[0061]
本文给定的任何式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有由本文给出的式描绘的结构，不同的是一个或多个原子被呈富集形式的具有选定的原子质量或质量数的原子替代。可以超过天然丰度的形式掺入本发明的化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟、氯和碘的同位素，诸如分别为2h(或化学符号 d)、3h(或化学符号t)、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
o、
17
o、
31
p、
32
p、
35
s、
18
f、
36
cl和
125
i。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(优选用
14
c)、反应动力学研究(例如用2h或3h)、检测或成像技术[如正电子发射断层扫描术(pet)或单光子发射电子计算机断层扫描术(spect)]，包括药物或底物的组织分布测定法，或者可用于患者的放射治疗。特别地，
18
f或
11
c标记的化合物可特别优选用于pet或spect研究。此外，用较重的同位素诸如氘(即2h或d)进行置换可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治疗优势，例如体内半衰期延长或需要的剂量减少。同位素标记的本发明的化合物通常可以通过用容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂以执行下文描述的
″
方案
″
中或
″
实施例和制备
″
中所公开的程序来制备。
[0062]
本发明的化合物的名称使用advanced chemical development，inc.软件 (acd/名称产品版本10.01；build 15494，2006年12月1日)根据由化学文摘服务社(cas)商定的命名规则产生。
[0063]
现在将参考示例性合成方案来描述可用于本发明的方法中的示例性化合物，以用于下文的它们的一般性制备和后面的具体实施例。本领域技术人员将认识到，为获得本文的多种化合物，可适当地选择原料，使得在根据需要进行保护或不保护的情况下，在整个反应方案中将携带最终期望的取代基，以得到期望的产物。另选地，可能需要或者期望采用合适的基团代替最终期望的取代基，所述合适的基团可经历整个反应方案，并且在适当情况下用期望的取代基替代。反应可在溶剂的熔点和回流温度之间进行，并且优选在介于0℃和溶剂的回流温度之间进行。可采用常规加热或微波加热来加热反应。反应还可在密闭压力容器中在高于溶剂的正常回流温度下进行。
[0064]
本文所用的缩写和首字母缩略词包括以下：
[0065]
表1：
[0066]
[0067][0068]
制备例
[0069]
现在将参考示例性合成方案来描述可用于本发明的方法中的示例性化合物，以用于下文的它们的一般性制备和后面的具体实施例。
[0070]
方案1
[0071][0072]
根据方案1，式(iii)的酮-酯化合物(其中pg为合适的保护基团诸如 boc(叔丁氧羰基))由可商购获得的或可合成获得的式(ii)的化合物制备。例如，通过在合适的溶剂诸如四氢呋喃(thf)等中，在约-78℃的温度下用强碱诸如双(三甲基硅基)氨基锂(lhmds)处理30分钟，随后在
‑ꢀ
78℃下用氰基甲酸乙酯处理约2小时的时间段，将式(ii)的化合物(其中 pg是boc)转化成化合物(iii)。
[0073]
在合适的溶剂诸如甲苯中，在约110℃的温度下，使式(iii)的化合物与可商购获得的或可合成获得的甲基肼反应，以提供式(iv)的吡唑啉酮化合物。通过在合适的溶剂诸如dcm等中，与三氟甲磺酰化剂(诸如三氟甲磺酸酐(tf2o))、碱(诸如三乙胺(tea)、吡啶、n-乙基二异丙胺 (diea、dipea)等)反应，来实现用基于磺酸根的离去基团(诸如三氟甲磺酰基(三氟甲磺酸根))将式(iv)的吡唑啉酮化合物衍生化。在合适的溶剂诸如dcm等中，使用更温和的三氟甲磺酰化剂诸如n-苯基双(三氟甲磺酰亚胺)(tf2nph)、碱(诸如tea、diea等)实现更好的选择性，以提供式(v)的化合物。采用本领域技术人员已知的方法，对式(v)的化合物的混合物进行手性分离，提供式(vi)的化合物。
[0074]
方案2
[0075][0076]
根据方案2，式(vi)的化合物在金属介导的交叉偶联反应中与硼酸诸如 (3，5-二氟苯基)硼酸在钯催化剂诸如[1，1
′‑
双(二叔丁基膦基)二茂铁]二氯化钯 (ii)(pdcl2(dtbpf))、四(三苯基膦)钯(0)(pd(pph3)4)、[1，1
′‑
双(二苯基膦基) 二茂铁]二氯化钯(ii)(pdcl2(dppf))、双(三苯基膦)二氯化钯(ii) (pd(pph3)2cl2)、xphos-pd-g2预催化剂(氯(2-二环己基膦基-2
′
，4
′
，6
′‑
三异丙基-1，1
′‑
联苯基)[2-(2
′‑
氨基-1，1
′‑
联苯基)]钯(ii))等，碱诸如k3po4、aq. na2co3、na2co3、cs2co3等的存在下，在合适的溶剂诸如1，2-二甲氧基乙烷、1，4-二烷、dmf、水或它们的混合物中，在60℃至180℃范围内的温度下(采用微波或常规加热)偶联约30分钟至16小时的时间段。
[0077]
根据本领域技术人员已知的程序并采用已确立的方法(诸如t.w. greene和p.g.m.wuts，
″
protective groups in organic synthesis
″
，第3 版，john wiley&sons，1999中所述的那些方法)来实现boc保护基团的裂解。例如，在酸性条件(诸如tfa/ch2cl2、hcl/二完等)下，提供式 (vii)的化合物。
[0078]
式(i)的化合物通过常规的酰胺键形成技术诸如本领域技术人员熟知的偶联反应(诸如hatu(1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b] 吡啶3-氧化物六氟磷酸盐)、bop(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基) 六氟磷酸盐)，或酸转变为酰基氯)制备。例如，式(vii)的化合物与可商购获得的或可合成获得的2-氯-6-氟苯甲酸的反应，其中酸的活化用适当的活化试剂例如碳二亚胺诸如n，n
′‑
二环己基碳二亚胺(dcc)或1-乙基-3
‑ꢀ
(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(edc、edac或edci)任选地在羟基苯并三唑(hobt)和/或催化剂诸如4-二甲基氨基吡啶(dmap)；卤代三氨基盐诸如(苯并三唑-1-基氧基)三(二甲基氨基)六氟磷酸盐(bop)或三吡咯烷基溴化六氟磷酸盐合适的吡啶盐诸如2-氯-1-甲基吡啶氯化物；或另一种合适的偶联剂(诸如n，n，n
′
，n
′‑
四甲基-o-(1h-苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(hbtu)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1h-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸盐(hatu)、2，4，6-三丙基-1，3，5，2，4，6
‑ꢀ
三氧杂三磷杂环己烷-2，4，6-三氧化物等)的存在下进行。在约0℃至室温范围内的温度下，任选地在叔胺诸如n-甲基吗啉、n-乙基二异丙基胺(diea、dipea)或三乙胺(tea)的存在下，在合适的溶剂诸如 dcm、thf、dmf等中进行偶联反应，以提供式(i)的化合物。
[0079]
通过在合适的溶剂诸如dmc等和催化量的二甲基甲酰胺(dmf)中与草酰氯反应将
2-氯-6-碘苯甲酸转化为2-氯-6-碘苯甲酰氯。式(viii)的化合物由常规的酰胺键形成技术制备，诸如与2-氯-6-碘苯甲酰氯、合适的碱诸如三乙胺(tea)在合适的溶剂诸如二氯甲烷(dcm)等中在室温下进行12-24小时时间段的偶联反应。
[0080]
方案3
[0081][0082]
根据方案23，使(s)-(1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯和甲基肼在合适的溶剂诸如thf中缩合，得到(s，e)-(1-(2-甲基肼亚基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。在催化量的合适碱诸如哌啶的存在下，在合适的溶剂诸如甲苯中，在 110℃的温度下用2-(2-硝基乙基)-1，3-二氧杂环戊烷处理3，5-二氟苯甲醛，以提供(e)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-2-硝基烯丙基)-1，3-二氧杂环戊烷。
[0083]
(s)-n-(1-(4-((1，3-二氧杂环戊-2-基)甲基)-5-(3，5-二氟苯基)-1-甲基-1h-吡唑-3-基)乙基)-1-(11-甲基)-1-(11-氧烷基)硼胺通过(s，e)-(1-(2-甲基肼亚基)丙
‑ꢀ
2一基)氨基甲酸叔丁酯和(e)-2-(3-(3，5-二氟苯基)-2-硝基烯丙基)-1，3-二氧杂环戊烷在40℃的温度下的[3 2]环加成而制备。随后通过在55℃下用三氟乙酸和三乙基硅烷处理进行全面去保护和环化，得到式(vii)的化合物。在获得外消旋混合物的情况下，可采用通过手性sfc纯化的单一对映异构体。
[0084]
方案4
[0085][0086]
根据方案4，将式(viii)的碘芳烃化合物用氯过氧苯甲酸(m-cpba) 在布朗斯台德酸诸如对甲苯磺酸或三氟磺酸优选地三氟磺酸和作为定向基团的富电子苯甲醚的存在下在合适的溶剂诸如dcm等中氧化，以提供式 (ib)的二芳基碘盐化合物。
[0087]
标记反应在溶剂诸如乙腈(ch3cn)、水(h2o)、n，n-二甲基甲酰胺(dmf)或二甲亚砜(dmso)或它们的混合物中在相变催化诸如 kryptofix
2.2.2.
/碳酸钾(k
2.2.2.
/k2co3)的存在下进行。因为二芳基碘盐前体由于其自身在加热或碱性条件下的自由基产生而不稳定，所以在自由基清除剂2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧基(tempo)的存在下反应。在优选的方法中，通过使式(ib)的化合物在kryptofix
2.2.2.
/碳酸钾(k
2.2.2.
/k2co3)的存在下在2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧基(tempo)下在乙腈(acn)中反应来获得最佳结果。
[0088]
可以使用本领域普通技术人员已知的方法将式(i)的化合物(以及式(ia) 的化合物)转化成其相应的盐。例如，在溶剂诸如乙醚(et2o)、 ch2cl2、thf、甲醇、氯仿或异丙醇中，用三氟乙酸、hcl或柠檬酸处理式 (i)的胺(以及式(ia)的化合物)，以提供相应的盐形式。
[0089]
另选地，通过反相hplc纯化条件，获得三氟乙酸或甲酸盐。通过用极性溶剂(包括极性溶剂的混合物和极性溶剂的水性混合物)或用非极性溶剂(包括非极性溶剂的混合物)进行重结晶可以获得结晶形式的式(i)的化合物(以及式(ia)的化合物)的药学上可接受的盐的结晶形式。
[0090]
如果根据本发明的化合物具有至少一个手性中心，则它们可以对映体形式相应地存在。如果化合物具有两个或更多个手性中心，则它们另外可以非对映体形式存在。应当理解，所有的此类异构体及其混合物涵盖在本发明的范围内。
[0091]
根据上述方案制备的化合物可以通过形式特异性合成或者通过拆分来作为单一形式，诸如单一对映体获得。另选地，根据上述方案制备的化合物可作为各种形式的混合物，诸如外消旋混合物(1∶1)或非外消旋混合物 (非1∶1)获得。在获得对映体的外消旋混合物和非外消旋混合物的情况中，可以使用本领域普通技术人员已知的常规分离方法如手性层析、重结晶、非对映体盐形成法、衍生成非对映体加合物、生物转化或酶促转化来分离单一对映体。在获得区域异构体混合物或非对映体混合物的情下，如适用，可以使用常规方法如层析法或结晶来分离单一异构体。
[0092]
提供如下具体实施例来进一步说明本发明和各种优选实施方案。
[0093]
实施例
[0094]
在获得下文实施例中描述的化合物和相应的分析数据时，除非另外指明，否则遵循以下实验和分析方案。
[0095]
除非另外指明，否则反应混合物均在室温(rt)和氮气氛围下进行磁力搅拌。在将溶液
″
干燥
″
的情况下，它们通常是经诸如na2so4或mgso4之类的干燥剂进行干燥。在将混合物、溶液和提取物
″
浓缩
″
的情况下，它们通常是在旋转蒸发仪上进行减压浓缩。微波照射条件下的反应是在 biotage initiator或cem(微波反应器)discover仪中进行的。
[0096]
将制备型反相高效液相色谱法(rp-hplc)用于使用以下方法来纯化放射性同位素标记的化合物：与synthra rnplus模块(synthra gmbh， germany)连接的内部hplc，其配备有waters xbridge c18柱(5um， 10mm
×
250mm)、流速为4ml/min的10mm nh4oac和mecn(50∶50 v/v)的流动相、254nm的uv检测、内部辐射γ检测器。
[0097]
将分析型rp-hplc用作放射性同位素标记的化合物的质量控制。使用以下方法：将具有agilent eclipse xdb-c
18
柱(5μm，4.6mm
×
150mm)的 synthra(synthra gmbh，germany)hplc以5％acn/水(添加0.05％ tfa)的流动相保持1分钟，然后以5％-95％can梯度洗脱10分钟，再以95％can洗脱4分钟，流速为1ml/min。在254nm下进行uv检测。将内部γ检测器用于辐射测量。
[0098]
在agilent 1260 infinity系列系统上获得质谱(ms)。除非另有说明，否则电喷雾离子化(esi)为正模式。计算的质量(calcd.)对应于精确质量。
[0099]
核磁共振(nmr)谱是在bruker drx型光谱仪上获得。多重度的定义如下：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br＝宽峰。将理解，对于包含可交换质子的化合物而言，所述质子在nmr光谱中可能可见或可能不可见，这取决于用于进行nmr光谱的溶剂的选择以及溶液中化合物的浓度。
[0100]
使用chemdraw ultra 12.0，chemdraw ultra 14.0(cambridgesoftcorp.，cambridge，ma)或acd/name 10.01版(advanced chemistry)，生成化学名称。
[0101]
中间体1：(s)-3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶盐酸盐。
[0102][0103]
方法a：
[0104]
步骤a：2-甲基-3-氧代哌啶-1，4-二甲酸1-(叔丁基)-4-乙酯。在10分钟的时间段内，向2-甲基-3-氧代哌啶-1-甲酸叔丁酯(5g，23.4mmol)在thf (35ml)中的冷却的(-78℃)溶液中滴加双(三甲基硅基)氨基锂(1.0m的 thf溶液，28.1ml，28.1mmol)。将搅拌在-78℃下保持30分钟，并且然后在-78℃下，在10分钟的时间段内滴加氰基甲酸乙酯(3.0ml， 30.4mmol)在thf(15ml)中的溶液。添加后，然后使反应混合物在相同温度(-78℃)下搅拌2h。将反应混合物用饱和nh4cl水溶液淬灭并用乙酸乙酯(etoac)(2
×
100ml)萃取。将合并的有机萃取物经na2so4干燥并真空浓缩。通过快速色谱法(硅胶；0至30％etoac-己烷)纯化所得残余物，得到呈油状物的标题化合物(3.5g，收率52％)。1h nmr(500mhz，氯仿-d)：δ：4.26-4.10(m，2h)，2.79(s，1h)，2.34-2.14(m，2h)，1.47(d，j＝ 27.0hz，2h)，1.40(s，9h)，1.36(s，1h)，1.29(d，j＝6.9hz，3h)，1.23(t，j＝ 7.1hz，3h)。
[0105]
步骤b：2，7-二甲基-3-氧代-1，2，3，4，5，7-六氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯。向2-甲基-3-氧代哌啶-1，4-二甲酸1-(叔丁基)4-乙酯(3.5g， 12.1mmol)在甲苯(40.0ml)中的溶液中添加甲基肼(0.96ml， 18.1mmol)，并将所得混合物在110℃下加热3小时。冷却至室温后，真空浓缩溶剂；通过快速色谱法(硅胶：0至10％meoh-dcm)纯化粗残余物，得到呈油状物的标题化合物(2.7g，收率83％)。
[0106]
步骤c：2，7-二甲基-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2，4，5，7-四氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯。在室温下向2，7-二甲基-3-氧代-1，2，3，4，5，7-六氢
ꢀ‑
6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯(2.7g，10.1mmol)在dcm (45.0ml)中的溶液中添加n，n-二异丙基乙胺(diea)(1.9ml， 11.1mmol)。接着添加1，1，1-三氟-n-苯基-n-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(4.0g，11.1mmol)。将反应混合物在室温下搅拌5小时。真空除去溶剂；通过快速色谱法(硅胶；0-20％etoac-己烷)纯化粗残余物，得到呈油状物的化合物4(3.8g，86％收率)。
[0107]
经由手性sfc进一步纯化所得的外消旋混合物以获得期望的
′s′
对映异构体((s)-2，7-二甲基-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2，4，5，7-四氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯)(1.84g，收率46％)。手性分离的程序描述于以下部分中。1h nmr(500mhz，氯仿-d)δ：5.23(s，1h)，4.25(s，1h)，3.70 (s，3h)，2.85(s，1h)，2.47(dtd，j＝30.7，15.4，4.0hz，2h)，1.41(s，9h)，1.34(d，j ＝6.8hz，3h)。
[0108]
步骤d：(s)-3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶盐酸盐。向(s)-2，7-二甲基-3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-2，4，5，7-四氢-6h
‑ꢀ
吡唑并[3，4-c]吡啶-6-甲酸叔丁酯乙酯(540mg，1.35mmol)的溶液中添加 (3，5-二氟苯基)硼酸(256mg，1.62mmol)、xphos-pd-g2(106mg， 0.135mmol)、碳酸钠(1m水溶液，4ml，4mmol)和1，
6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮。
[0115][0116]
将2-氯-6-氟苯甲酸(20mg，0.12mmol)和(s)-3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶盐酸盐(中间体1，20mg， 0.076mmol)在hatu(43.6mg，0.12mmol)于dmf(0.6ml)中的溶液中混合。向混合物中滴加三乙胺(32μl，0.23mmol)。将溶液在室温下搅拌0.5小时。将混合物用etoac(15ml)稀释，用nahco3(水溶液， 15ml)和盐水(15ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并减压浓缩。纯化 (fcc，sio2，etoac/己烷，10％至70％)，得到呈膜状油状物的标题化合物(30mg，94％)。ms(esi)：c
21h17
clf3n3o的质量计算值，419.1；m/z 实测值，420.1[m h]

。1h nmr(cdcl3)：δ7.34-7.18(m，2h)，7.12-6.98(m， 1h)，6.90-6.84(m，3h)，5.95-5.91和5.01-4.98(m，1h)，4.76-4.69和3.57-3.50 (m，1h)，3.86和3.80(s，3h)，3.39-3.30和3.11-3.03(m，1h)，2.86-2.73和2.69
‑ꢀ
2.63(m，1h)，2.53-2.49和2.39-2.35(m，1h)，1.63-1.56，1.49和1.45(m，3h)。
[0117]
实施例2：(s)-(3-氯-2-(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-羰基)苯基)(4-甲氧基苯基)碘三氟甲磺酸盐。
[0118][0119]
步骤a：2-氯-6-碘苯甲酰氯。在室温下向2-氯-6-碘苯甲酸(687mg， 2.43mmol)在dcm(5ml)中的悬浮液中添加草酰氯(550mg， 4.33mmol)。向反应混合物中添加1滴dmf以加速反应。在室温下搅拌0.5小时后检查反应混合物。将混合物在真空下浓缩成黄色油状物，并且不经进一步纯化即用于下一步骤。
[0120]
步骤b：(s)-(2-氯-6-碘苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮。将2-氯-6-碘苯甲酰氯(来自步骤a)与 (s)-3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶盐酸盐 (540mg，1.801mmol)在dcm(10ml)中的溶液及三乙胺(626μl， 4.5mmol)混合。将反应混合物搅拌并使之在室温下过夜。将混合物进一步用dcm(30ml)稀释，用盐水(30ml)洗涤。将有机层干燥，过滤并减压浓缩。纯化(fcc，sio2，etoac/己烷，15％至60％)，得到呈浅黄色油状物的标题化合物(586mg，62％)。ms(esi)：c
21h17
clf2in3o的质量计算值，527.0；m/z实测值，528.0[m h] 。1h nmr(cdcl3)：δ7.81-7.67(m， 1h)，7.44-7.32(m，1h)，6.97-6.92(m，1h)，6.83-6.77(m，3h)，5.87-5.80(m，1h)， 3.79(s，3h)，3.43-3.36(m，1h)，3.33-3.24(m，1h)，2.91-2.70(m，1h)，
2.32-2.26 (m，1h)，1.61和1.57(d，j＝6.8hz，3h)。
[0121]
步骤c：(s)-(3-氯-2-(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-羰基)苯基)(4-甲氧基苯基)碘三氟甲磺酸盐。在不干扰温度的情况下向(s)-(2-氯-6-碘苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢
‑ꢀ
6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮(140mg，0.265mmol)在dcm(无水， 1ml)中的冷却溶液(在氯化钠-冰浴中-15～20℃)中滴加三氟磺酸 (94μl，1.06mmol)。10分钟后，将间氯过氧苯甲酸(m-cpba)(最大 77％，148mg，0.663mmol)在dcm(0.7ml)中的悬浮液缓慢添加到溶液中。将反应混合物在-20℃下再搅拌30分钟，然后撤去冷却，并将温度升至室温。将反应混合物在室温下搅拌16。将反应混合物在冰浴中冷却。向反应混合物中添加水(10μl，0.53mmol)，然后添加苯甲醚(43mg， 0.398mmol)。移除冰浴，并将反应混合物在室温下再搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩。将乙醚(5ml)添加到粗浓缩反应混合物中，并将所得混合物超声处理并过滤。固体粗产物在干燥过夜后作为灰黄色蜡状物 (～200mg)而收集。纯化(fcc，氧化铝柱(用dcm吹扫)，用dcm然后用10％meoh/dcm小心洗脱)，得到呈灰白色固体的标题化合物。将标题化合物再溶解于乙腈(20mg/ml)中并通过0.45μm注射器式滤器过滤，并将所得溶液减压浓缩。将乙醚添加到所得标题化合物中以沉淀标题化合物(140mg，67％)。ms(esi)：c
29h24
clf5in3o5s的质量计算值， 783.0；m/z实测值，633.9[m-otf]

。1h nmr(dmso-d6)：δ8.58(m，1h)， 8.13-8.07(m，2h)，7.90-7.86(m，1h)，7.67-7.58(m，1h)，7.38-7.17(m，3h)，7.10 (m，1h)，7.02(m，1h)，5.73-5.58(m，1h)，3.87-3.74(m，6h)，3.45-3.19(m，2h)， 2.92-2.63(m，1h)，2.43-2.29(m，1h)，1.63-1.51(m，3h)。
[0122]
实施例3：(s)-(2-氯-6-(
18
f)氟-)苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮。
[0123][0124]
在典型的程序中，将运输小瓶(从回旋加速器设备获得)中的[18f]氟化物转移到离子交换柱上并捕获在离子交换柱上。然后将其用碳酸钾 (0.75mg，5.4umol)和kryptofix 222(7.2mg，19.2umol)的乙腈/水 (0.8ml，6/2，v/v)溶液洗脱到synthra模块的反应容器(rv1) 中。在85℃和真空下在氮气流下蒸发溶剂后，添加无水ch3cn (0.5ml)，重复该过程，并将温度升至110℃保持3.5分钟。然后将反应小瓶冷却至70℃，再向反应容器中添加(s)-(3-氯-2-(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-4，5，6，7-四氢-2h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-羰基)苯基)(4-甲氧基苯基)碘三氟甲磺酸盐(实施例2，15.0mg，19.1umol)和tempo(4.4mg， 28.1umol)在无水乙腈(0.7ml)中的溶液。将反应混合物在125℃下加热 10分钟。将反应器冷却至40℃并用水(4.3ml)稀释，并将内容物转移至 hplc进样环中用于纯化。
[0125]
使用半制备型eclipse xdb-c18柱(5μm，9.4mm
×
250mm)，用 10mm nh4oac和mecn
(50∶50v/v)的混合物以4ml/min的流速在254nm 下进行uv检测，通过hplc进行纯化。将纯化的放射性示踪剂溶液用 30ml水稀释，并通过seppak light c-18柱。在使用0.5ml etoh洗脱示踪剂之前，用10ml水进一步洗涤c-18柱。用4.5ml盐水进一步稀释示踪剂溶液。最终制剂含有10％的乙醇浓度，适用于静脉内注射(i.v.)。
[0126]
质量控制测试包括通过使用eclipse xdb c18(5μm， 4.6mm
×
250mm)柱的hplc进行鉴定、化学和放射化学纯度分析，该柱用 0.05％tfa溶液和mecn的混合物以1ml/min的流速洗脱，配备有串联的 uv(254nm)和γ检测。
[0127]
生物学数据
[0128]
用于测量mgl体外活性的测定改编自用于另一种丝氨酸水解酶 (faah)的测定，该测定描述于：wilson等人，2003(
″
a high
‑ꢀ
throughput-compatible assay for determining the activity of fatty acid amidehydrolase
″
。wilson sj、lovenberg tw、barbier aj.，anal biochem.，2003 年7月15日；318(2)：270-5.)。该测定包括将来自hela细胞的内源性表达的mgl与测试化合物混合，加入[甘油-1，3-3
h]-油基甘油，孵育一小时，并且然后测量通过活性炭过滤器的裂解[1，3-3
h]-甘油的量。通过碳过滤器的裂解的氚化甘油的量与特定孔/测试条件下mgl酶的活性成比例。
[0129]
该测定的标准条件是将300nm[甘油-1，3-3
h]-油基甘油与来自hela细胞的人mgl和测试化合物混合一小时，然后将反应物通过活性炭过滤，并测量通过流中的氚。筛选模式中的测试化合物浓度为10μm，而ic
50
测定中的最高化合物浓度根据经验确定。mgl是hela细胞/细胞匀浆中的主要水解酶。根据实施例1制备的化合物的测试结果列于下表2中：
[0130]
表2.
[0131][0132]
nt是指未测试。
[0133]
实施例4：(s)-(2-氯-6-(18f)氟-)苯基)(3-(3，5-二氟苯基)-2，7-二甲基-2，4，5，7-四氢-6h-吡唑并[3，4-c]吡啶-6-基)甲酮(实施例3)的放射自显影和与使用相邻大鼠脑切片的mgl的ihc染色的比较。
[0134]
在冷冻的正常大鼠脑切片(矢状切面，厚度为20um)上进行使用实施例3的化合物的体外arg。从冰箱中取出15分钟后，向大鼠脑切片添加 250ul含有浓度为400uci/ml的实施例3的化合物的缓冲溶液(50mm tris
‑ꢀ
hcl ph＝7.4)。将脑切片用孵育缓冲液在室温下孵育30分钟，然后用空白新鲜缓冲溶液洗涤5分钟，重复3次。将脑切片风干，在暗环境的盒中暴露于荧光屏18小时。然后用typhoon
tm
fla 7000图像分析仪(ge)扫描屏幕，以产生实施例3的化合物在大鼠脑切片上的放射自显影(图2，图 4)。发现arg信号在海马体、皮层、小脑和丘脑区域中高，而在脑干中低。分布模式与下面描述的ihc染色模式匹配。
[0135]
对冷冻的正常大鼠脑切片(矢状切面，厚度为10um)进行ihc染色，该切片与上述
arg中使用的脑切片相邻。从冰箱中取出15分钟后，向大鼠脑切片添加4％多聚甲醛并在室温下固定20分钟。然后用新鲜的磷酸盐缓冲溶液(pbs，0.01m，ph＝7.4)洗涤切片5分钟，重复3次，然后在室温下用过氧化氢溶液(3％，在pbs中)处理20分钟。将在pbs中的10％山羊血清(simga#g-9023)添加到切片中以阻断非特异性结合。添加在pbs中的一抗mgl抗体(novus biologicals，目录号nbp2-19389) (1∶100稀释)，在湿度箱中在4℃下孵育过夜。第二天，用pbs洗涤大鼠脑切片10分钟，重复3次。将二抗山羊抗兔igg(h l)抗体(thermofisher #a-11008)添加在pbs(1∶500稀释)中并在室温下孵育1小时。将切片进一步用pbs洗涤10分钟，重复3次，用具有封固剂的载玻片覆盖并在荧光显微镜下观察。使用荧光显微镜(zeiss，axio，imager m2)拍摄照片 (图1，图3)。ihc染色指示mgl在海马体、皮层和小脑中分布高，该模式与上述放射自显影信号匹配。