一种马来酸甲麦角新碱原料中成盐率的测定方法与流程

1.本发明属于药物分析检测领域，具体是一种马来酸甲麦角新碱原料中成 盐率的测定方法。


背景技术：

2.麦角生物碱是一类天然生物碱及其系列衍生物，基本结构是麦角酸，可 以作用于5-羟色胺、去甲肾上腺素以及多巴胺等受体，具有兴奋子宫、收缩 血管、阻断α受体等药理作用，临床上可用于治疗子宫出血、产后子宫复原、 偏头痛、抑制中枢、心脑血管等多种疾病。
3.目前，国际(who)公认的“金标准”——麦角生物碱，作用机理不受 生理因素的影响，是孕产妇预防和治疗产后出血的首选药。我省企业承担国 家重大新药创制课题，率先对麦角生物碱类药品的原料及其制剂进行开发， 首次仿制出马来酸麦角新碱原料，填补了我国在治疗产后出血领域多年来缺 乏新的治疗手段的空白，对我国具有非常重要的临床意义。
4.马来酸甲麦角新碱是生物发酵类生物碱，是甲麦角新碱的马来酸盐，发 酵液中含有较多杂质，生产工艺中采用结晶方式分离、纯化，成盐后性质稳 定，易于储存。
5.查阅文献，英国药典(bp2020)、欧洲药典(ep10.0)及日本药局方(jp17) 收载该本品种原料药质量标准，美国药典(usp44)收载了原料药及片剂和注 射剂质量标准，对比发现，现行质量标准项目设置无法全面体现生产过程中 的产品质量。美国药典和日本药局方收载了马来酸甲麦角新碱的含量测定方 法分别是高效液相色谱法(hplc)和紫外吸光光谱法(uv)，其原理均为 检测有紫外吸收官能团的甲麦角新碱响应值，却无法区分是成盐型还是游离 型，
6.当马来酸甲麦角新碱完全成盐时，马来酸与甲麦角新碱的摩尔比应为1:1； 当甲麦角新碱成盐过剩的时候，游离的马来酸受热后会脱超纯水成成顺丁烯 二酸酐，有实验表明，该降解杂质会导致肾小管损伤；当甲麦角新碱成盐不 完全的时候，游离的生物碱特异结合血浆蛋白，延长药物起效时间；同时， 成盐率对制剂的酸碱性、颜色及有关物质都有影响。
[0007][0008]
本研究，建立了离子色谱-电导检测器法测定马来酸甲麦角新碱原料中马 来酸的含量，同时按照美国药典(usp43)收载的马来酸甲麦角新碱的含量测 定方法，测定马来酸甲麦角新碱的含量，通过计算马来酸与马来酸甲麦角新 碱的摩尔比，得出马来酸麦角新碱
原料中马来酸成盐率，为后续研究提供准 确有效的数据，也为生产企业在工艺中控制工业投料稳定性，保障后续产品 质量稳定提供技术支持。


技术实现要素：

[0009]
本发明的目的是针对以上问题，提供了一种马来酸甲麦角新碱原料中成 盐率的测定方法，包括以下步骤：
[0010]
分别将系统适用性溶液、空白溶液、对照品溶液和供试品溶液加注入到 离子色谱仪中，记录色谱图，按外标法以峰面积计算马来酸甲麦角新碱原料 药中马来酸的含量，代入公式(1)计算得出马来酸甲麦角新碱原料成盐率；
[0011]
a＝(b/116.0722)/(c/445.5)
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
(1)
[0012]
其中，a为马来酸甲麦角新碱原料成盐率，b为马来酸的含量，c为原料 中马来酸甲麦角新碱的含量；
[0013]
离子色谱条件为：
[0014]
色谱柱：dionex ionpac as19(250mm
×
4mm，5μm)；
[0015]
保护柱：dionex ionpac ag19(50mm
×
4mm，5μm)；
[0016]
淋洗液：100mmol/l氢氧化钠溶液；
[0017]
洗脱方式：梯度洗脱；
[0018]
淋洗液流速：1.0ml/min；
[0019]
色谱柱温度：30℃；
[0020]
检测池温度：35℃；
[0021]
进样量：20μl；
[0022]
检测器：电导检测器；
[0023]
抑制器：阴离子抑制器(asrs-4mm)，抑制电流：50ma；
[0024]
氮气压力27.6kpa。
[0025]
优选的，所述空白溶液为超纯超纯水。
[0026]
优选的，所述对照品溶液的制备：
[0027]
(1)精密称取马来酸对照品50.12mg，置50ml量瓶中，用超纯水稀释至 刻度，摇匀，制成每1ml含马来酸1000μg溶液，作为对照品贮备液；
[0028]
(2)精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用超纯水稀释至刻 度，摇匀，制成每1ml含马来酸10μg溶液，作为对照品溶液。
[0029]
优选的，置250ml量瓶中，加超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供 试品溶液。
[0030]
优选的，系统适用性溶液的制备：取供试品溶液和对照品溶液1:1混合。
[0031]
优选的，梯度洗脱时：0～15分钟，淋洗液浓度20mmol/l；15～22分钟， 淋洗液浓度250mmol/l；22～30分钟，淋洗液浓度20mmol/l。
[0032]
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
[0033]
本发明采用电导检测-离子色谱法，按外标法，以峰面积计算，测定马来 酸甲麦角新碱原料药中马来酸的含量，并计算成盐率。本发明建立了离子色 谱-电导检测器法测定马来酸甲麦角新碱中马来酸的含量，方法专属性强，灵 敏度高，操作简单，结果准确。
附图说明
[0034]
图1为系统适用性典型图谱；
[0035]
图2为对照品溶液色谱图；
[0036]
图3为供试品溶液色谱图；
[0037]
图4为马来酸线性关系图。
具体实施方式
[0038]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行 清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而 不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做 出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0039]
1、仪器与试药
[0040]
仪器：dionex ics 3000离子色谱仪(美国thermo公司)；
[0041]
asrs-4mm抑制器(美国thermo公司)；
[0042]
milli-q超纯超纯水系统(18.2m
′
ω/cm3，25℃，美国millipore公司)；
[0043]
mettler toledo xs 205型电子分析天平(瑞士mettler公司)。
[0044]
试剂：氢氧化钠溶液，购买自fluka sigma-aldrich公司，
[0045]
纯度级别：离子色谱专用，浓度：50％～52％；
[0046]
超纯超纯水为实验室自制。
[0047]
对照品：马来酸对照品，购买自中国食品药品检定研究院，
[0048]
批号：190015-202003，含量：99.6％。
[0049]
供试品：马来酸甲麦角新碱原料，征集自河北某药厂，
[0050]
批号：190826、200424、180322。
[0051]
2、方法
[0052]
2.1色谱条件
[0053]
色谱柱：dionex ionpac as19(250mm
×
4mm，5μm)；
[0054]
保护柱：dionex ionpac ag19(50mm
×
4mm，5μm)；
[0055]
淋洗液：100mmol/l氢氧化钠溶液；
[0056]
洗脱方式：梯度洗脱(见下表)；
[0057]
淋洗液流速：1.0ml/min；
[0058]
色谱柱温度：30℃；
[0059]
检测池温度：35℃；
[0060]
进样量：20μl；
[0061]
检测器：电导检测器；
[0062]
抑制器：阴离子抑制器(asrs-4mm)，抑制电流：50ma；
[0063]
氮气压力27.6kpa。
[0064]
表1淋洗液梯度洗脱表
[0065][0066]
2.2溶液的配制
[0067]
空白溶液的配制：超纯超纯水；
[0068]
对照品贮备液的配制：精密称取马来酸对照品50.12mg，置50ml量瓶中， 用超纯水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含马来酸1000μg溶液，作为对照 品贮备液；
[0069]
对照品溶液的配制：精密量取对照品贮备液1ml，置100ml量瓶中，用超 纯水稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含马来酸10μg溶液，作为对照品溶液；
[0070]
供试品溶液的配制：称取马来酸甲麦角新碱原料10mg，精密称定，置250ml 量瓶中，加超纯水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
[0071]
系统适用性溶液的配制：取供试品溶液和对照品溶液1:1混合。
[0072]
3、方法学验证
[0073]
3.1专属性实验
[0074]
取系统适用性溶液、空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各分别注入离 子色谱仪，记录色谱图，结果如附图1-4所示。
[0075]
结果表明，在该色谱条件下，溶剂不干扰样品测定，马来酸离子峰与前 后杂质峰均能达到基线分离。
[0076]
3.2定量限和检出限
[0077]
定量限溶液的配制：逐级稀释对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱 图，至信噪比s/n约10。
[0078]
照拟建立方法，连续测定6次定量限溶液，记录色谱图。
[0079]
表2定量限试验
[0080][0081]
精密量取对照品溶液，逐级稀释，注入液相色谱仪，记录色谱图(附图2) 直至信噪比s/n约3，即为检出限溶液。
[0082]
由上述试验结果可知：马来酸定量限6次测定结果的峰面积rsd为1.5％， 定量限分别为18.107μg；检出限为6.036μg。
[0083]
3.3线性和范围
[0084]
线性溶液贮备液的制备：精密量取对照品贮备液5.0ml，置于50ml量 瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，制成线性溶液贮备液。
[0085]
系列线性溶液的制备：精密量取线性溶液贮备液各0.1ml，1.0ml，2.5ml， 5.0ml，10.0ml，15.0ml，分别置于50ml量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇 匀，制成系列对照品溶液。按上述色谱条件进样测定，记录峰面积。
[0086]
表3马来酸线性关系试验结果
[0087][0088]
以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标进行线性回归，线性关系图如附图4 所示：
[0089]
马来酸在0.2μg/ml～30μg/ml范围内，线性方程为y＝0.045x 0.0078， 相关系数r2＝0.9998，峰面积a与浓度c(μg/ml)呈显著线性关系。
[0090]
3.4准确度试验
[0091]
标准加入溶液的配制：精密量取对照品贮备液8.0ml、10.0ml、12.0ml 置1000ml量瓶中，加超纯水稀释至刻度，摇匀，即得标准加入液(1)8μg/ml、 (2)10μg/ml、(3)12μg/ml；
[0092]
供试品溶液的配制：精密称取本品(批号：200424)约10mg，共9份， 分3组，置250ml量瓶中，分别加入上述混合对照溶液溶解并稀释至刻度， 摇匀。取上述溶液注入离子色谱仪，记录色谱图；测得量与加入量的比值即 为回收率。
[0093]
表4回收率试验
[0094][0095]
由以上试验结果可知：马来酸回收率范围为96.30％～101.15％(rsd％＝ 1.92)，回符合验证要求，本法准确性良好。
[0096]
3.5精密度试验
[0097]
3.5.1进样精密度
[0098]
取对照品溶液注入离子色谱仪，重复进样6次，记录色谱图，计算rsd， 考察本法的仪器精密度。
[0099]
表5进样精密度试验
[0100][0101][0102]
由试验结果可知：马来酸保留时间rsd为0.1％，马来酸峰面积rsd为1.7％， 本方法进样精密度良好。
[0103]
3.5.2重复性实验
[0104]
取马来酸甲麦角新碱原料1批(批号：200424)和对照品溶液，照拟定 方法，平行制备6份，分别注入离子色谱仪，记录色谱图。考察本法的重复 性。
[0105]
表6重复性试验结果
[0106][0107]
结论：同一实验人员重复测定6次，6次测定结果马来酸的检出量基本一 致。方法重复性良好。
[0108]
3.5.3中间精密度试验
[0109]
不同实验人员按对照品溶液和供试品溶液操作，配制对照品溶液6份和 供试品(批号：200424)溶液6份。分别注入离子色谱仪，记录色谱图。
[0110]
表7中间精密度试验结果
[0111][0112][0113]
结论：不同实验人员重复测定6次，6次测定结果比较，马来酸检出量一 致。方法重复性良好。
[0114]
3.6耐用性试验
[0115]
分别考察了淋洗液流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min；淋洗液浓度 18mmol/l、20mmol/l、22mmol/l和色谱柱温度25℃、30℃、35℃，条件下主 峰与其相邻杂质峰色谱保留行为。结果表明，在各色谱条件小幅度改变情况 下马来酸离子主峰出峰稳定，与其相邻杂质峰均可达到基线分离，本方法色 谱条件耐用性良好。
[0116]
3.7稳定性试验
[0117]
按对照品溶液配制方法制备，于室温放置0、1、2、3、4、5、6小时， 取不同放置时间的上述溶液注入离子色谱仪，记录色谱图。
[0118]
表8溶液稳定性试验结果
[0119][0120]
由试验结果可知：室温放置6小时，对照品溶液面积rsd为1.2％(n＝6)， 对照品溶液在6小时内稳定。
[0121]
4、样品测定
[0122]
取原料3批，批号：190826、200424、180322，每份10mg，按拟定方法 进样测定，记录峰面积并计算马来酸含量。结果见下表。
[0123]
表9样品测定结果
[0124][0125]
讨论
[0126]
5.1淋洗液流速的确认
[0127]
分别考察了淋洗液流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min条件下主峰 与其相邻杂质峰色谱保留行为。结果表明，在各色谱条件小幅度改变情况下 马来酸离子主峰出峰稳定，与其相邻杂质峰均可达到基线分离，最终选择淋 洗液流速为1.0ml/min。
[0128]
表10淋洗液流速考察试验结果
[0129][0130]
5.2淋洗液浓度的确认
[0131]
分别考察了淋洗液浓度为18mmol/l、20mmol/l、22mmol/l条件下主峰与 其相邻杂质峰色谱保留行为。结果表明，在各色谱条件小幅度改变情况下马 来酸离子主峰出峰稳定，与其相邻杂质峰均可达到基线分离，最终选择淋洗 液浓度为20mmol/l。
[0132]
表11淋洗液浓度考察试验结果
[0133][0134]
5.3色谱柱温度的确认
[0135]
分别考察了色谱柱温度25℃、30℃、35℃，条件下主峰与其相邻杂质峰 色谱保留行为。结果表明，在各色谱条件小幅度改变情况下马来酸离子主峰 出峰稳定，与其相邻杂质峰均可达到基线分离，最终选择色谱柱温度为30℃。
[0136]
表12色谱柱温度考察试验结果
[0137][0138]
6结论
[0139]
6.1马来酸限度确定
[0140]
已知甲麦角新碱分子式c
20h25
n3o2，相对分子量为：339.4278，马来酸分子 式：c4h4o4，相对分子量为：116.0722，可以计算得到马来酸甲麦角新碱中含 有1分子马来酸酸时的理论马来酸含量为25.48％。参照《中国药典》2020年 版四部9003药品杂质检查指导原则，将马来酸甲麦角新碱的马来酸含量控制 在理论值的80.0％～120.0％，则马来酸的含量限度应为20.4％～30.6％。
[0141]
6.2成盐率考察
[0142]
照usp43中hplc法测定马来酸甲麦角新碱活性成分含量，由于对照品是 按照c20h25n3o2
·
c4h4o4计，因此测得的含量结果即为马来酸甲麦角新碱含 量。用摩尔浓度计算成盐率，以马来酸含量除以马来酸相对分子量与马来酸 甲麦角新碱含量除以马来酸甲麦角新碱相对分子量的比值，公式：马来酸成 盐率＝(马来酸％/116.0722)/(马来酸甲麦角新碱％/445.5)[9]。
[0143]
表13马来酸甲麦角新碱成盐率
[0144][0145]
6.2产品质量评价
[0146]
对比各国药典，对于成盐药物中盐的检查，通常只有化学鉴别，很少有 专属性强的成盐离子定量检查[10]，本研究建立了离子色谱-电导检测器法测 定马来酸甲麦角新碱中马来酸的含量，方法专属性强，灵敏度高，操作简单， 结果准确。
[0147]
应用建立的方法对征集到的3批样品进行检测，马来酸的含量在 25.18％～25.33％之间，平均含量为25.24％，成盐率0.97，符合限度要求，提 示国内该生产企业生产工艺稳定，产品中没有过多游离的马来酸，质量安全、 可控。
[0148]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来 将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示 这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、
ꢀ“
包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系 列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明 确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有 的要素。
[0149]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而 言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行 多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限 定。