新型昆虫抑制性蛋白的制作方法

技术特征：
1.一种重组核酸分子，其包含与编码杀虫蛋白或其片段的多核苷酸区段可操作地连接的异源启动子，其中：a.所述杀虫蛋白包含选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列；或b.所述杀虫蛋白包含与选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列具有至少62％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或c.所述多核苷酸区段与具有选自seq id no:32或seq id no:48的核苷酸序列的多核苷酸杂交；或d.所述重组核酸分子与载体可操作地连接，并且所述载体选自质粒、噬菌粒、杆粒、粘粒和细菌或酵母人工染色体。2.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述重组核酸分子：a.包含起到在植物中表达杀虫蛋白的功能的序列；或b.在植物细胞中表达以产生杀虫有效量的杀虫蛋白。3.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其进一步特征在于所述重组核酸分子存在于宿主细胞中，其中所述宿主细胞选自细菌和植物细胞。4.根据权利要求3所述的重组核酸分子，其中所述细菌宿主细胞来自于选自由以下组成的组的细菌的属：农杆菌属、根瘤菌属、芽孢杆菌属、短芽孢杆菌属、埃希氏杆菌属、假单胞菌属、克雷白氏杆菌属和欧文氏菌属；并且其中所述芽孢杆菌属的种是蜡样芽孢杆菌或苏云金芽孢杆菌，所述短芽孢杆菌属是侧孢短芽孢杆菌，并且所述埃希氏杆菌属是大肠杆菌。5.根据权利要求3所述的重组核酸分子，其中所述植物细胞是双子叶或单子叶植物细胞。6.根据权利要求5所述的重组核酸分子，其中所述植物宿主细胞选自由以下组成的组：苜蓿、香蕉、大麦、豆、西兰花、卷心菜、芸苔、胡萝卜、木薯、蓖麻、花椰菜、芹菜、鹰嘴豆、大白菜、柑橘、椰子、咖啡、玉米、三叶草、棉花、葫芦、黄瓜、花旗松、茄子、桉树、亚麻、大蒜、葡萄、啤酒花、韭菜、莴苣、火炬松、粟、甜瓜、坚果、燕麦、橄榄、洋葱、观赏植物、棕榈、牧草、豌豆、花生、胡椒、木豆、松树、马铃薯、杨树、南瓜、辐射松、萝卜、油菜籽、水稻、砧木、黑麦、红花、灌木、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜属蔬菜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甜玉米、香枫、甘薯、柳枝稷、茶、烟草、西红柿、黑小麦、草坪草、西瓜和小麦植物细胞。7.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述杀虫蛋白对鞘翅目的昆虫种表现出活性。8.根据权利要求7所述的重组核酸分子，其中所述昆虫种是西方玉米根虫、南方玉米根虫、北方玉米根虫、墨西哥玉米根虫、巴西玉米根虫或由diabrotica viridula和南美叶甲组成的巴西玉米根虫复合群。9.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述杀虫蛋白对鳞翅目的昆虫种表现出活性。10.根据权利要求9所述的重组核酸分子，其中所述昆虫种是藜豆认蛾、甘蔗螟、小玉米螟、棉铃虫、烟草夜蛾、大豆夜蛾、黑粘虫、南方粘虫、草地粘虫、甜菜粘虫、旧大陆棉铃虫、东方叶虫、棉红铃虫、小地老虎、西南玉米螟和欧洲玉米螟。
11.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述杀虫蛋白对半翅目的昆虫种表现出活性。12.根据权利要求11所述的重组核酸分子，其中所述昆虫种是南部绿臭蝽、新热带区褐臭蝽、西部牧草盲蝽和牧草盲蝽。13.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述杀虫蛋白对缨翅目的昆虫种表现出活性。14.根据权利要求13所述的重组核酸分子，其中所述昆虫种是烟草蓟马、花蓟马、西花蓟马和大豆蓟马。15.一种包含重组核酸分子的植物，所述重组核酸分子包含与编码杀虫蛋白或其片段的多核苷酸区段可操作地连接的异源启动子，其中：a.所述杀虫蛋白包含选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列；或b.所述杀虫蛋白包含与选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列具有至少62％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或约100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列；或c.所述多核苷酸区段在严格杂交条件下与seq id no:48的核苷酸序列的互补序列杂交；或d.所述植物表现出可检测量的所述杀虫蛋白，其中所述杀虫蛋白选自seq id no:33或seq id no:49。16.根据权利要求15所述的植物，其中所述植物是单子叶植物或双子叶植物。17.根据权利要求15所述的植物，其中所述植物选自由以下组成的组：苜蓿、香蕉、大麦、豆、西兰花、卷心菜、芸苔、胡萝卜、木薯、蓖麻、花椰菜、芹菜、鹰嘴豆、大白菜、柑橘、椰子、咖啡、玉米、三叶草、棉花、葫芦、黄瓜、花旗松、茄子、桉树、亚麻、大蒜、葡萄、啤酒花、韭菜、莴苣、火炬松、粟、甜瓜、坚果、燕麦、橄榄、洋葱、观赏植物、棕榈、牧草、豌豆、花生、胡椒、木豆、松树、马铃薯、杨树、南瓜、辐射松、萝卜、油菜籽、水稻、砧木、黑麦、红花、灌木、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜属蔬菜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甜玉米、香枫、甘薯、柳枝稷、茶、烟草、西红柿、黑小麦、草坪草、西瓜和小麦。18.一种来自于根据权利要求15所述的植物的种子，其中所述种子包含所述重组核酸分子。19.一种昆虫抑制性组合物，其包含根据权利要求1所述的重组核酸分子。20.根据权利要求19所述的昆虫抑制性组合物，其还包含编码至少一种不同于所述杀虫蛋白的其它杀虫剂的核苷酸序列。21.根据权利要求20所述的昆虫抑制性组合物，其中所述至少一种其它杀虫剂选自由以下组成的组：昆虫抑制性蛋白、昆虫抑制性dsrna分子和辅助蛋白。22.根据权利要求20所述的昆虫抑制性组合物，其中所述至少一种其它杀虫剂对所述鳞翅目、鞘翅目或半翅目的一个或多个昆虫种表现出活性。23.根据权利要求22所述的昆虫抑制性组合物，其中所述至少一种其它杀虫蛋白选自由以下组成的组：cry1a、cry1ab、cry1ac、cry1a.105、cry1ae、cry1b、cry1c、cry1c变体、cry1d、cry1e、cry1f、cry1a/f嵌合体、cry1g、cry1h、cry1i、cry1j、cry1k、cry1l、cry2a、cry2ab、cry2ae、cry3、cry3a变体、cry3b、cry4b、cry6、cry7、cry8、cry9、cry15、cry34、
cry35、cry43a、cry43b、cry51aa1、et29、et33、et34、et35、et66、et70、tic400、tic407、tic417、tic431、tic800、tic807、tic834、tic853、tic900、tic901、tic1201、tic1415、tic3131、vip3a、vip3b、vip3ab、axmi-axmi-、axmi-88、axmi-97、axmi-102、axmi-112、axmi-117、axmi-100、axmi-115、axmi-113和axmi-005、axmi134、axmi-150、axmi-171、axmi-184、axmi-196、axmi-204、axmi-207、axmi-209、axmi-205、axmi-218、axmi-220、axmi-221z、axmi-222z、axmi-223z、axmi-224z和axmi-225z、axmi-238、axmi-270、axmi-279、axmi-345、axmi-r1及其变体、ip3及其变体、dig-3、dig-5、dig-10和dig-11蛋白。24.一种商品，其由根据权利要求3所述的宿主细胞产生，所述商品包含可检测量的所述重组核酸分子或杀虫蛋白。25.根据权利要求24所述的商品，其中所述商品选自由以下组成的组：谷物处理者装袋的商品玉米、玉米片、玉米饼、玉米粉、玉米面、玉米糖浆、玉米油、玉米青贮、玉米淀粉、玉米谷物等、整粒或加工的棉籽、棉籽油、棉绒、加工用于饲料或食品的种子和植物部分、纤维、纸、生物质和燃料产品，如源自棉籽油的燃料或源自轧棉机废弃物的团粒，整粒或加工的大豆种子、大豆油、大豆蛋白、豆粕、大豆粉、大豆坯片、大豆糠、豆奶、大豆干酪、大豆酒、包含大豆的动物饲料、包含大豆的纸、包含大豆的奶油、大豆生物质和使用大豆植物和大豆植物部分生产的燃料产品。26.一种产生包含根据权利要求1所述的重组核酸分子的种子的方法，所述方法包括：a.种植根据权利要求13所述的至少一种种子；b.由所述种子长成植物；并且c.从所述植物收获种子，其中所述收获的种子包含根据权利要求1所述的重组核酸分子。27.一种对昆虫侵染有抗性的植物，其中所述植物的细胞包含：a.编码杀昆虫有效量的杀虫蛋白的重组核酸分子，其中所述蛋白选自seq id no:33或seq id no:49；或b.杀昆虫有效量的杀虫蛋白，所述杀虫蛋白包含与选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列具有至少62％，或65％，或70％，或75％，或80％，或85％，或90％，或95％，或约100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。28.一种用于防治鞘翅目或鳞翅目或半翅目的种的有害生物，和防治鞘翅目或鳞翅目或半翅目的种侵染植物的方法，所述方法包括：a.使所述有害生物与杀昆虫有效量的杀虫蛋白接触，其中所述蛋白选自seq id no:33或seq id no:49；或b.使所述有害生物与杀昆虫有效量的一种或多种杀虫蛋白接触，所述杀虫蛋白包含与选自seq id no:33或seq id no:49的氨基酸序列具有至少62％、或65％、或70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％、或100％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。

技术总结
公开了对鞘翅目、鳞翅目、半翅目和缨翅目有害生物物种表现出毒活性的杀虫蛋白，并且包括但不限于TIC6280、TIC6281、TIC6282、TIC6283、TIC8808、TIC9480、TIC9257、TIC7106、TIC7017、TIC7107、TIC7108、TIC7109、TIC7110、TIC7111、TIC7589、TIC9258和TIC9259。提供了DNA构建体，其含有编码所提供的所述杀虫蛋白的重组核酸序列。提供了对鳞翅目、鞘翅目、半翅目和缨翅目侵染具有抗性的转基因植物、植物细胞、种子和植物部分，其含有编码所公开的杀虫蛋白的重组核酸序列。还提供了用于检测生物样品中本发明的所述重组核酸序列或所述蛋白的存在的方法，以及使用所公开的杀虫蛋白防治鞘翅目、鳞翅目、半翅目和缨翅目有害生物物种的方法。方法。


技术研发人员：D
受保护的技术使用者：孟山都技术公司
技术研发日：2017.12.18
技术公布日：2022/5/25