白介素-2制剂及其用途
1.相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年7月26日提交的美国临时申请号62/879,137和2020年2月28日提交的美国临时申请号62/983,061的权益。上述申请的内容通过引用的方式全文纳入本文。
3.序列表
4.本技术包含序列表，该序列表已经以ascii格式电子提交，并且其全部内容通过引用并入本文。在2020年7月20日创建的所述ascii拷贝被命名为p2029-7028wo_sl.txt，大小为1,728,528字节。
背景技术：
5.白介素2(il-2)是一种调节免疫系统活动的细胞因子。它由白细胞(如t细胞、自然杀伤(nk)细胞、树突细胞和巨噬细胞)响应抗原或有丝分裂刺激而产生。il-2对t细胞增殖、b细胞刺激和与免疫和耐受相关的其它活动很重要。它是身体适应性免疫反应的一部分，可以区分外来抗原和宿主抗原。il-2通过与il-2受体结合来介导其作用，从而活化下游信号转导事件。
6.人il-2是fda批准的用于治疗转移性肾癌和黑色素瘤等疾病的药物。归因于与il-2治疗相关的严重毒性，在符合条件的患者中使用il-2有时会受限，并且只有一小部分符合条件的患者能真正接受治疗。与il-2治疗相关的毒性可能包括严重发烧、恶心、呕吐、血管渗漏和严重的低血压。然而，尽管有这些毒性，il-2通常对其批准的适应症有效。
7.对于患有适合用il-2治疗的各种疾病和病症的患者，仍然需要具有足以开发安全有效治疗剂的特征的新型的基于il-2的药物。
技术实现要素：
8.本公开至少部分地提供了il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白、il-2复合物和il-2偶联物)，其包含il-2中的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)，并且包含本文公开的一种或多种结构或功能性质。在一个实施方式中，还提供了编码所述il-2制剂的核酸分子、表达载体、宿主细胞、组合物(例如药物组合物)、试剂盒、容器和制备所述il-2制剂的方法。本文公开的il-2制剂可用于(单独或与其它制剂或治疗方式组合)治疗、预防和/或诊断疾病，例如本文公开的疾病和病症。
9.本公开至少部分基于以下发现：使蛋白质稳定、降低其对cd122(例如cd122/cd132异二聚体)的亲和性和/或使其对cd25的亲和性降低或不多于最小作用的il-2中突变的组合，可用于通过il-2通路选择性地增强调节性t细胞(treg)活性，从而在治疗疾病和病症(例如自身免疫性疾病)方面取得有利的治疗作用。包含此类突变的il-2制剂适用于治疗由异常免疫反应引起的病症，例如自身免疫疾病。
10.因此，在一些方面，本公开提供了一种il-2制剂，例如，具有以下性质a)-x)中的一项或多项(例如，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，或
全部)的il-2制剂：
11.a)在体外和/或体内以更高或增加的水平表达，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过蛋白质浓度测定；
12.b)在体外和/或体内以较低或降低的水平聚集，例如降低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或降低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过解链温度分析(例如，使用荧光测定法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定；
13.c)在体外和/或体内具有增强或增加的稳定性，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过酵母表面展示中的表达、哺乳动物细胞中的表达、色谱法、圆二色性测定或相关的光谱技术和/或解链温度分析(例如，使用荧光法)；
14.d)在体外和/或体内具有增强或增加的半衰期，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或大于约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定；
15.e)在体内具有较低、降低或减低的周转和/或清除率或水平，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如如通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定；
16.f)对cd25(例如人cd25)的结合亲和力降低或减低或基本不变，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约
45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多(例如，约1％至约20％，约2％至约15％，或约5％至约10％)，或减低或增加不多于约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，或约50％，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，或减低或增加不多于约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，或约5倍，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过酵母表面展示、生物层干涉测量法(例如octet结合)，和/或表面等离子共振(例如biacore)测定；
17.g)以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如以约5-500pm的解离常数(kd)，例如，约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，或例如约10pm至约490pm，约20pm至约480pm，约30pm至约470pm，约40pm至约460pm，约50pm至约450pm，约60pm至约440pm，约70pm至约430pm，约80pm至约420pm，约90pm至约410pm，约100pm至约400pm，约110pm至约390pm，约120pm至约380pm，约130pm至约370pm，约140pm至约360pm，约150pm至约350pm，约160pm至约340pm，约170pm至约330pm，约180pm至约320pm，约190pm至约310pm，约200pm至约300pm，约210pm至约290pm，约220pm至约280pm，约230pm至约270pm，约240pm至约260pm，或例如约5pm至约450pm，约5pm至约400pm，约5pm至约350pm，约5pm至约300pm，约5pm至约250pm，约5pm至约200pm，约5pm至约150pm，约5pm至约100pm，约5pm至约50pm，或例如约10pm至约500pm，约20pm至约500pm，约50pm至约500pm，约100pm至约500pm，约150pm至约500pm，约200pm至约500pm，约250pm至约500pm，约300pm至约500pm，约350pm至约500pm，约400pm至约500pm，约450pm至约500pm，或例如大于约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，例如由酵母表面展示确定；
18.h)以低亲和性结合至cd25(例如人cd25)，例如以约0.1-10nm的解离常数(kd)，例如约0.1，约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.5，约2，约2.5，约3，约3.5，约4，约4.5，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，或例如约0.1至约9nm，约0.1至约8nm，约0.1至约7nm，或约0.1至约6nm，例如约0.1至约5nm，约0.1至约4nm，约0.1至约3nm，约0.1至约2nm，约0.1至约1nm，或约0.1至约0.5nm，或例如约0.1至约10nm，约0.5至约10nm，约1至约10nm，约1.5至约10nm，约2至约10nm，约2.5至约10nm，约3至约10nm，约3.5至约10nm，约4至约10nm，约4.5至约10nm，约5至约10nm，约5.5至约10nm，约6至约10nm，约6.5至约10nm，约7至约10nm，约7.5至约10nm，约8至约10nm，约8.5至约10nm，约9至约10nm，或约9.5至约10nm，或例如约0.1至约9.5nm，约0.5至约9nm，约1至约8.5nm，约1.5至约8nm，约2至约7.5nm，约2.5至约7nm，约3至约6.5nm，约3.5至约6nm，约4至约5.5nm，或约4.5至约5nm，或例如大于约0.1，约0.2.约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，例如通过生物层干涉测量法(例如，octet结合)和/或表面等离子体共振(例如，biacore)所测定；
19.i)对cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)具有降低或减低的结合亲和性，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多(例如约1％至约50％，约2％至约40％，约3％至约30％，约4％至约20％，或约5％至约10％，约1％至约40％，约1％至约30％，约1％至约20％，约1％至约10％，约40％至约50％，约30％至约50％，约20％至约50％，约10％至约50％，约10％至约20％，约20％至约30％，约30％至约40％，约10％至约30％，或20％至约40％)，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多(例如，约0.5倍至约5倍，约1倍至约4倍，或约2倍至约3倍)，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如通过酵母表面展示、生物层干涉测量法(例如octet结合)和/或表面等离子共振(例如biacore)所测定；
20.j)以低亲和性结合至cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-20nm，例如约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4，约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，或例如，约0.2至约19nm，约0.2至约18nm，约0.2至约17nm，或约0.2至约16nm，例如，约0.2至约15nm，约0.1至约4nm，约0.1至约3nm，约0.1至约2nm，约0.1至约1nm，或约0.1至约0.5nm，或例如，约0.1至约10nm，约0.5至约10nm，约1至约10nm，约1.5至约10nm，约2至约10nm，约2.5至约10nm，约3至约10nm，约3.5至约10nm，约4至约10nm，约4.5至约10nm，约5至约10nm，约5.5至约10nm，约6至约10nm，约6.5至约10nm，约7至约10nm，约7.5至约10nm，约8至约10nm，约8.5至约10nm，约9至约10nm，或约9.5至约10nm，或例如，约0.1至约9.5nm，约0.5至约9nm，约1至约8.5nm，约1.5至约8nm，约2至约7.5nm，约2.5至约7nm，约3至约6.5nm，约3.5至约6nm，约4至约5.5nm，或约4.5至约5nm，或例如，大于约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4，约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，例如，如酵母表面展示所测定；
21.k)以低亲和力结合cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-300nm，例如，约0.2nm，约0.5nm，约1nm，约2nm，约5nm，约10nm，约15nm，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或约300nm，或例如，约0.2至约280nm，约0.2至约260nm，约0.2至约240nm，约0.2至约220nm，约0.2至约200nm，约0.2至约180nm，约0.2至约160nm，约0.2至约140nm，约0.2至约120nm，约0.2至约100nm，约0.2至约80nm，约0.2至约60nm，约0.2至约40nm，约0.2至约20nm，或例如，约0.5至约300nm，约1至约300nm，约5至约300nm，约10至约300nm，约20至约300nm，约40至约300nm，约60至约300nm，约80至约300nm，约100至约300nm，约120至约300nm，约140至约300nm，约160至约300nm，约180至约300nm，约200至约300nm，约220至约300nm，约240至约300nm，约260至约300nm，约280至约300nm，或例如，约0.5至约280nm，约1至约260nm，约5至约240nm，约10至约220nm，约20至约200nm，约40至约180nm，约60至约160nm，约80至约
140mm，约100至约120nm，或例如，大于约0.2，约0.5，约1，约2，约5，约10，约15，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或大于约300nm，例如通过生物层干涉测量法(例如octet结合)和/或表面等离子共振(例如biacore)测定；
22.l)在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的t辅助ec
50
/treg ec
50
比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，约19，约20，约21，约22，约23，约24，约25，约26，约27，约28，约29，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，约500，约600，约700，约800，约900，约1000，约1500，约2000，约2500，或约3000，或更多，或例如大于1和约1至2，约2至3，约3至4，约4至5，大于1和约1至10，大于1和约1至20，大于1和约1至30，大于1和约1至40，大于1和约1至50，约2至10，约2至20，约2至30，约2至40，2至50，约5至10，约5至20，约5至30，约5至40，约5至50，约10至20，约10至30，约10至40约10至50，约20至40，约20至50，约50至100，约100至200，约200至500，约500至1000，约1000至2000，或约1000至3000，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如由流式细胞术测定；
23.m)在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的nk细胞ec
50
/treg ec
50
比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，约19，约20，约21，约22，约23，约24，约25，约26，约27，约28，约29，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，约500，约600，约700，约800，约900，约1000，约1500，约2000，约2500，或约3000，或更多，或例如大于1和约1至2，约2至3，约3至4，约4至5，大于1和约1至10，大于1和约1至20，大于1和约1至30，大于1和约1至40，大于1和约1至50，约2至10，约2至20，约2至30，约2至40，2至50，约5至10，约5至20，约5至30，约5至40，约5至50，约10至20，约10至30，约10至40约10至50，约20至40，约20至50，约50至100，约100至200，约200至500，约500至1000，约1000至2000，或约1000至3000，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如由流式细胞术测定；
24.n)(i)诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力增强或增加，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如由流式细胞术、体外或体内t调节细胞增殖或扩增试验和/或t细胞抑制试验测定；
25.(ii)诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力降低或减低，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要高约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约
45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，约50倍，约100倍，约200倍，约500倍，约1000倍，约2000倍，约5000倍，约10,000倍，约15,000倍，约20,000倍或更多，例如由流式细胞术、体外或体内t调节细胞增殖或扩增试验和/或t细胞抑制试验测定；
26.o)在体外、离体或体内调节(例如，降低(例如，抑制、阻断或中和)或增加(例如，活化、起始或增强)t细胞(例如，treg)的一种或多种生物活性；
27.p)显示与本文所述的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者；
28.q)与包含本文所述的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)变化(例如，替换)的il-2制剂显示相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者；
29.r)显示与包含本文所述氨基酸序列的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者；
30.s)显示与包含由本文所述核苷酸序列编码的氨基酸序列的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者；
31.t)抑制，例如，竞争性地抑制第二il-2制剂与il-2受体的结合，其中第二il-2制剂是本文所述的il-2制剂，
32.u)与第二il-2制剂竞争结合il-2受体，其中第二il-2制剂是本文所述的il-2制剂；
33.v)具有本文所述的il-2制剂的一种或多种生物学性质；
34.w)具有本文所述的il-2制剂的一种或多种结构性质；或
35.x)具有本文所述的il-2制剂的一种或多种药代动力学性质。
36.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内以更高或增加的水平表达，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过蛋白质浓度测定。在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内以较低或降低的水平聚集，例如降低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或降低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过解链温度分析(例如，使用荧光测定法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定。
37.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内具有增强或增加的稳定性，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约
90％，约95％，约100％，或更多，或增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过酵母表面展示中的表达、哺乳动物细胞中的表达、色谱法、圆二色性测定或相关的光谱技术和/或解链温度分析(例如，使用荧光法)。
38.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内具有增强或增加的半衰期，例如增加约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或大于约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
39.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体内具有较低、降低或减低的周转和/或清除率或水平，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如如通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
40.在一个实施方式中，所述il-2制剂对cd25(例如人cd25)的结合亲和力降低或减低或基本不变，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多(例如，约1％至约20％，约2％至约15％，或约5％至约10％)，或减低或增加不多于约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，或约50％，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，或减低或增加不多于约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，或约5倍，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过酵母表面展示、生物层干涉测量法(例如octet结合)，和/或表面等离子共振(例如biacore)测定。在一个实施方式中，对于cd25的结合亲和性的减少或减低为至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，或80％低于对于cd25的结合亲和性的减少或减低。在一个实施方式中，对cd25的结合亲和性没有显著降低或减低。
41.在一个实施方式中，所述il-2制剂以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如以约5-500pm的解离常数(kd)，例如，约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，或例如，约10pm至约490pm，约20pm至约480pm，约30pm至约470pm，约40pm至约460pm，约50pm至约450pm，约60pm至约440pm，约70pm至约430pm，约80pm至约420pm，约90pm至约
410pm，约100pm至约400pm，约110pm至约390pm，约120pm至约380pm，约130pm至约370pm，约140pm至约360pm，约150pm至约350pm，约160pm至约340pm，约170pm至约330pm，约180pm至约320pm，约190pm至约310pm，约200pm至约300pm，约210pm至约290pm，约220pm至约280pm，约230pm至约270pm，约240pm至约260pm，或例如，约5pm至约450pm，约5pm至约400pm，约5pm至约350pm，约5pm至约300pm，约5pm至约250pm，约5pm至约200pm，约5pm至约150pm，约5pm至约100pm，约5pm至约50pm，或例如，约10pm至约500pm，约20pm至约500pm，约50pm至约500pm，约100pm至约500pm，约150pm至约500pm，约200pm至约500pm，约250pm至约500pm，约300pm至约500pm，约350pm至约500pm，约400pm至约500pm，约450pm至约500pm，或例如，大于约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，例如由酵母表面展示测定。
42.在一个实施方式中，所述il-2制剂以低亲和性结合至cd25(例如人cd25)，例如以约0.1-10nm的解离常数(kd)，例如约0.1，约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.5，约2，约2.5，约3，约3.5，约4，约4.5，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，或例如约0.1至约9nm，约0.1至约8nm，约0.1至约7nm，或约0.1至约6nm，例如约0.1至约5nm，约0.1至约4nm，约0.1至约3nm，约0.1至约2nm，约0.1至约1nm，或约0.1至约0.5nm，或例如约0.1至约10nm，约0.5至约10nm，约1至约10nm，约1.5至约10nm，约2至约10nm，约2.5至约10nm，约3至约10nm，约3.5至约10nm，约4至约10nm，约4.5至约10nm，约5至约10nm，约5.5至约10nm，约6至约10nm，约6.5至约10nm，约7至约10nm，约7.5至约10nm，约8至约10nm，约8.5至约10nm，约9至约10nm，或约9.5至约10nm，或例如约0.1至约9.5nm，约0.5至约9nm，约1至约8.5nm，约1.5至约8nm，约2至约7.5nm，约2.5至约7nm，约3至约6.5nm，约3.5至约6nm，约4至约5.5nm，或约4.5至约5nm，或例如大于约0.1，约0.2.约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，例如通过生物层干涉法(例如，octet结合)和/或表面等离子体共振(例如，biacore)所测定。
43.在一个实施方式中，所述il-2制剂对cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)具有降低或减低的结合亲和性，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多(例如约1％至约50％，约2％至约40％，约3％至约30％，约4％至约20％，或约5％至约10％，约1％至约40％，约1％至约30％，约1％至约20％，约1％至约10％，约40％至约50％，约30％至约50％，约20％至约50％，约10％至约50％，约10％至约20％，约20％至约30％，约30％至约40％，约10％至约30％，或20％至约40％)，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多(例如，约0.5倍至约5倍，约1倍至约4倍，或约2倍至约3倍)，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如通过酵母表面展示、生物层干涉测量法(例如octet结合)和/或表面等离子共振(例如biacore)所测定。在一个实施方式中，对cd122/cd132异二聚体的结合亲和性的降低或减低是至少1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5倍高于对cd25的结合亲和性的降低或减低。在一个实施方式中，对cd25的结合亲和性没有显著降低或减低。
44.在一个实施方式中，所述il-2制剂以低亲和性结合至cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-20nm，例如约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4，约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，或例如，约0.2至约19nm，约0.2至约18nm，约0.2至约17nm，或约0.2至约16nm，例如，约0.2至约15nm，约0.1至约4nm，约0.1至约3nm，约0.1至约2nm，约0.1至约1nm，或约0.1至约0.5nm，或例如，约0.1至约10nm，约0.5至约10nm，约1至约10nm，约1.5至约10nm，约2至约10nm，约2.5至约10nm，约3至约10nm，约3.5至约10nm，约4至约10nm，约4.5至约10nm，约5至约10nm，约5.5至约10nm，约6至约10nm，约6.5至约10nm，约7至约10nm，约7.5至约10nm，约8至约10nm，约8.5至约10nm，约9至约10nm，或约9.5至约10nm，或例如，约0.1至约9.5nm，约0.5至约9nm，约1至约8.5nm，约1.5至约8nm，约2至约7.5nm，约2.5至约7nm，约3至约6.5nm，约3.5至约6nm，约4至约5.5nm，或约4.5至约5nm，或例如，大于约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4，约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，例如，如酵母表面展示所测定。
45.在一个实施方式中，所述il-2制剂以低亲和力结合cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-300nm，例如，约0.2nm，约0.5nm，约1nm，约2nm，约5nm，约10nm，约15nm，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或约300nm，或例如，约0.2至约280nm，约0.2至约260nm，约0.2至约240nm，约0.2至约220nm，约0.2至约200nm，约0.2至约180nm，约0.2至约160nm，约0.2至约140nm，约0.2至约120nm，约0.2至约100nm，约0.2至约80nm，约0.2至约60nm，约0.2至约40nm，约0.2至约20nm，或例如，约0.5至约300nm，约1至约300nm，约5至约300nm，约10至约300nm，约20至约300nm，约40至约300nm，约60至约300nm，约80至约300nm，约100至约300nm，约120至约300nm，约140至约300nm，约160至约300nm，约180至约300nm，约200至约300nm，约220至约300nm，约240至约300nm，约260至约300nm，约280至约300nm，或例如，约0.5至约280nm，约1至约260nm，约5至约240nm，约10至约220nm，约20至约200nm，约40至约180nm，约60至约160nm，约80至约140mm，约100至约120nm，或例如，大于约0.2，约0.5，约1，约2，约5，约10，约15，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或大于约300nm，例如通过生物层干涉测量法(例如octet结合)和/或表面等离子共振(例如biacore)测定。
46.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的t辅助ec
50
/treg ec
50
比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，约19，约20，约21，约22，约23，约24，约25，约26，约27，约28，约29，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约
450，约500，约600，约700，约800，约900，约1000，约1500，约2000，约2500，或约3000，或更多，或例如大于1和约1至2，约2至3，约3至4，约4至5，大于1和约1至10，大于1和约1至20，大于1和约1至30，大于1和约1至40，大于1和约1至50，约2至10，约2至20，约2至30，约2至40，2至50，约5至10，约5至20，约5至30，约5至40，约5至50，约10至20，约10至30，约10至40约10至50，约20至40，约20至50，约50至100，约100至200，约200至500，约500至1000，约1000至2000，或约1000至3000，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如由流式细胞术测定。在一个实施方式中，t辅助细胞是cd45 cd3 cd4 foxp3-细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，treg是cd45 cd3 cd4 foxp3 细胞，例如，通过流式细胞术测定。
47.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的nk细胞ec
50
/treg ec
50
比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，约19，约20，约21，约22，约23，约24，约25，约26，约27，约28，约29，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，约500，约600，约700，约800，约900，约1000，约1500，约2000，约2500，或约3000，或更多，或例如大于1和约1至2，约2至3，约3至4，约4至5，大于1和约1至10，大于1和约1至20，大于1和约1至30，大于1和约1至40，大于1和约1至50，约2至10，约2至20，约2至30，约2至40，2至50，约5至10，约5至20，约5至30，约5至40，约5至50，约10至20，约10至30，约10至40约10至50，约20至40，约20至50，约50至100，约100至200，约200至500，约500至1000，约1000至2000，或约1000至3000，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如由流式细胞术测定。在一个实施方式中，nk细胞是cd45 cd3-细胞，其为cd56 和/或cd16 ，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，nk细胞是cd45 cd3-cd56 细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，treg是cd45 cd3 cd4 foxp3 细胞，例如，通过流式细胞术测定。
48.在一个实施方式中，所述il-2制剂的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力增强或增加，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如由流式细胞术、体外或体内t调节细胞增殖或扩增试验和/或t细胞抑制试验测定。
49.在一个实施方式中，所述il-2制剂的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力降低或减低，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要高约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，约50倍，约100倍，约200倍，约500倍，约1000倍，约
2000倍，约5000倍，约10,000倍，约15,000倍，约20,000倍或更多，例如由流式细胞术、体外或体内t调节细胞增殖或扩增试验和/或t细胞抑制试验测定。在一个实施方式中，所述il-2制剂的诱导或促进t调节性细胞活性的功效和/或能力降低或减低，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要高约100倍或更多(例如，如由流式细胞术、体外或体内t调节细胞增殖或扩增试验和/或t细胞抑制试验测定)，并且不活化或不显著活化nk细胞。
50.在一个实施方式中，所述il-2制剂在体外、离体或体内调节(例如，降低(例如，抑制、阻断或中和)或增加(例如，活化、起始或增强)t细胞(例如，treg)的一种或多种生物活性。
51.在一个实施方式中，il-2制剂显示与本文所述的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者。
52.在一个实施方式中，所述il-2制剂与包含本文所述的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)变化(例如，取代)的il-2制剂显示相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者。
53.在一个实施方式中，il-2制剂显示与包含本文所述的氨基酸序列的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者。
54.在一个实施方式中，il-2制剂显示与包含由本文所述的核苷酸序列编码的氨基酸序列的il-2制剂相同或相似的结合亲和性或特异性，或两者。
55.在一个实施方式中，所述il-2制剂抑制，例如，竞争性地抑制第二il-2制剂与il-2受体的结合，其中第二il-2制剂是本文所述的il-2制剂。
56.在一个实施方式中，所述il-2制剂与第二il-2制剂竞争结合il-2受体，其中第二il-2制剂是本文所述的il-2制剂。
57.在一个实施方式中，il-2制剂具有本文所述的il-2制剂的一种或多种生物学性质。
58.在一个实施方式中，il-2制剂具有本文所述的il-2制剂的一种或多种结构性质。
59.在一个实施方式中，il-2制剂具有本文所述的il-2制剂的一种或多种药代动力学性质。
60.在一个实施方式中，白介素-2(il-2)制剂包含人il-2变体，其在选自例如对应于野生型人il-2的以下的一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个或全部)位置处包含氨基酸变化(例如，取代)：t3、h16、i28、k35、r38、f42、e68、v69、q74、d84、s87、n88、i92、c125、q126或其组合。在另一个实施方式中，所述il-2制剂在位置v69、q74或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2制剂在位置v69和q74处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代q74p。在一个实施方式中，il-2制剂在位置h16、i92、d84或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂在位置h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是h16n、h16l或h16d。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l。在一个实施方式中，il-2制剂在位置i92处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是i92s。在一个实施方式中，il-2制剂在位置d84处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选
地其中氨基酸取代是d84v。在一个实施方式中，il-2制剂在位置k35、r38、f42、e68或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂在位置k35处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是k35e。在一个实施方式中，il-2制剂在位置r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是r38e、r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代r38n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代r38q。在一个实施方式中，il-2制剂在位置f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是f42k或f42q。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代f42q。
61.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)-(v)中的一项或多项(例如，两项、三项、四项或全部)：
62.(i)一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个、六个或七个)氨基酸变化(例如，取代)，其降低或被鉴定为降低其对cd122(例如，cd122/cd132异二聚体)的亲和性，例如，位置h16处的变化(例如取代)(例如，h16l、h16n或h16d)、位置i28处的变化(例如取代)(例如，i28t或i28f)、位置d84处的变化(例如取代)(例如，d84v)、位置s87处的变化(例如取代)(例如，s87r)、位置n88处的变化(例如取代)(例如，n88s、n88l或n88d)、位置i92处的变化(例如取代)(例如，i92s)和/或位置q126处的变化(例如取代)(例如，q126t、q126k或q126r)；
63.(ii)一个或多个(例如，两个)氨基酸变化(例如，取代)，其增加或被鉴定为增加il-2制剂的稳定性，例如，位置v69处的变化(例如，取代)(例如，v69a)和/或在q74处的变化(例如，取代)(例如，q74p)；
64.(iii)一个或多个(例如，两个、三个或四个)氨基酸变化(例如，取代)，其降低或被鉴定为降低其对cd25的亲和性，例如，位置k35处的变化(例如，取代)(例如k35e)、位置r38处的变化(例如，取代)(例如r38e、r38n或r38q)、位置f42处的变化(例如，取代)(例如f42k或f42q)和/或位置e68处的变化(例如，取代)(例如e68q或e68n)；或
65.(iv)一个或多个氨基酸变化(例如，取代)，其减少或被鉴定为减少il-2制剂的o-糖基化，例如，位置t3处的变化(例如，取代)(例如，t3a)；或
66.(v)一个或多个氨基酸变化(例如，取代)，其减少或被鉴定为减少il-2制剂的不正确的二硫键配对和/或聚集(例如，以提高稳定性)，例如，位置c125处的变化(例如，取代)(例如，c125s)。
67.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(v)。
68.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)和(ii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iv)和(v)。
69.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(iii)和(v)。
在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)、(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)、(iv)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(iii)、(iv)和(v)。
70.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)、(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(iii)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂包含(ii)、(iii)、(iv)和(v)。
71.在一个实施方式中，il-2制剂包含(i)、(ii)、(iii)、(iv)和(v)。
72.在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(v)。
73.在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)和(ii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iv)和(v)。
74.在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)和(iii)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)、(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)、(iv)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(iii)、(iv)和(v)。
75.在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)、(iii)和(iv)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)、(iii)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(iii)、(iv)和(v)。在一个实施方式中，il-2制剂不包含(ii)、(iii)、(iv)和(v)。
76.在一个实施方式中，il-2制剂不包含(i)、(ii)、(iii)、(iv)和(v)。
77.在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸变化(例如，取代)：
78.(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
79.(ii)在位置h16、i92或d84处；并且任选地
80.(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
81.在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸变化(例如，取代)：
82.(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
83.(ii)在位置h16、i92或d84处；和
84.(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
85.在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸变化(例如，取代)：
86.(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
87.(ii)在位置h16、i92或d84处；或
88.(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
89.在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸变化(例如，取代)：
90.(i)在位置v69和q74处；和/或在位置k35处；和
91.(ii)在位置h16、i92、d84或其组合处，和
92.(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
93.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和h16n或h16l，任选地其中氨基酸取代是v69a、q74p和h16l。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和h16l。
94.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和i92处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和i92s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和i92s。
95.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和d84处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和d84v。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和d84v。
96.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38q。
97.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和f42q。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和f42q。
98.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和r38n。
99.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38e。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和r38e。
100.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74、k35和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p、k35e和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p、k35e和h16n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代是v69a、q74p、k35e和h16l。
101.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74、k35、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。
102.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、h16n或h16l，以及r38n或r38q，任选地其中氨基酸取代是v69a、q74p、h16n或h16l和r38q。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p、h16l和r38q。
103.在一个实施方式中，il-2制剂在位置i28、e68、s87、n88、q126或其组合处包含氨基
酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂在位置i28处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是i28t或i28f。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代i28t。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代i28f。
104.在一个实施方式中，il-2制剂在位置e68处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是e68q或e68n。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代e68q。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代e68n。
105.在一个实施方式中，il-2制剂在位置s87处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是s87r。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代s87r。
106.在一个实施方式中，il-2制剂在位置n88处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是n88r、n88s、n88l或n88d。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代n88r。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代n88s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代n88l。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代n88d。
107.在一个实施方式中，il-2制剂在位置q126处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代q126t。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代q126k。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代q126r。
108.在一个实施方式中，il-2制剂在位置c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代c125s。
109.在一个实施方式中，il-2制剂在位置t3处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是t3a。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a。
110.在一个实施方式中，il-2制剂在位置v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代v69a、q74p和c125s。
111.在一个实施方式中，il-2制剂在位置t3、h16、i92或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、h16n和i92s。
112.在一个实施方式中，il-2制剂在位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。
113.在一个实施方式中，il-2制剂在位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。各种技术效果与包含上述氨基酸变化组合的il-2制剂相关联。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s的il-2制剂可具有至少一种或多种以下有利性质：(i)与其它t细胞类型相比，对cd122和/或cd132的结合亲和性降低，这增加了il-2制剂对调节性t细胞(treg)的功效和选择性；(ii)显著稳定，例如，归因于稳定化v69a和q74p突变的存在；(iii)具有减少或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性(或对其影响不超过最小幅度)，可延长il-2制剂的寿命；(iv)在体外和/或体内基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤(nk)细胞的扩增、活化、存活和/或增殖；和/或(v)减少不正确的二硫键配对并提高稳定性，例如，归因于c125s突变的存在。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变
的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s的il-2制剂，特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病和病症，例如自身免疫性疾病。
114.因此，在一个实施方式中，相对于野生型il-2或不包含以下氨基酸取代的参考il-2变体，包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s的il-2制剂尤其具有以下一项或多项(例如，2、3、4、5、6、7项或全部)性质：(i)体外或体内稳定性增强或增加；(ii)体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iii)体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iv)il-2变体在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚(即人cd122/cd132异二聚体)il-2受体的亲和性降低或减低；(v)体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性降低或减低(例如，中度降低或减低)；(vi)选择性结合至调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；或(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
115.在一个实施方式中，il-2制剂在位置h16、v69、q74、i92和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。
116.在一个实施方式中，il-2制剂在位置t3、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p和c125s。
117.在一个实施方式中，il-2制剂在位置t3、h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、h16n或h16l、v69a、q74p，和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a、h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a、h16l、v69a、q74p和c125s。
118.在一个实施方式中，il-2制剂在位置t3、v69、q74、i92和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。
119.在一个实施方式中，il-2制剂包含人il-2变体，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或其功能性片段，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
120.在一个实施方式中，相对于不包含氨基酸变化(例如，取代)的参考il-2制剂，氨基
酸变化(例如，取代)为il-2制剂提供以下性质中的至少一项或多项(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11项或全部)：
121.(i)增强或增加的il-2制剂的表达；
122.(ii)抑制或减少的il-2制剂的聚集；
123.(iii)增强或增加的il-2制剂的稳定性；
124.(iv)延长或增加的il-2制剂的半衰期；
125.(v)抑制或减少的il-2制剂的周转和/或清除；
126.(vi)抑制或减少(例如，中度抑制或减少)或基本不变的il-2制剂与人cd25的结合；
127.(vii)抑制或减低的il-2制剂对人cd122的亲和性；
128.(viii)抑制或减低的il-2制剂对人cd132的亲和性；或
129.(ix)抑制或减低的il-2制剂对由人cd122和人cd132构成的二聚il-2受体的亲和性；
130.(x)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3 t细胞)；
131.(xi)treg中il-2信号转导通路的选择性活化；或
132.(xii)增强或增加的，或减少或减低的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
133.在一个实施方式中，il-2制剂包含人il-2变体，其包含选自h16d、h16n、h16l、i28t、k35e、r38q、r38n、r38e、f42k、f42q、v69a、q74p、d84v、s87r、n88l、n88s、i92s、c125s中的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)；本文所述的多肽接头；和，本文所述的非il-2部分；其中氨基酸变化(例如取代)使il-2制剂相对于不包含所述氨基酸变化(例如，取代)的参考il-2制剂具有以下性质中的至少一项或多项：
134.(i)增强或增加的il-2制剂的表达；
135.(ii)抑制或减少的il-2制剂的聚集；
136.(iii)增强或增加的il-2制剂的稳定性；
137.(iv)延长或增加的il-2制剂的半衰期；
138.(v)抑制或减少的il-2制剂的周转和/或清除；
139.(vi)抑制或减少(例如，中度抑制或减少)或基本不变的il-2制剂与人cd25的结合；
140.(vii)抑制或减低的il-2制剂对人cd122的亲和性；
141.(viii)抑制或减低的il-2制剂对人cd132的亲和性；
142.(ix)抑制或减低的il-2制剂对由人cd122和人cd132构成的二聚il-2受体的亲和性；
143.(x)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3 t细胞)；
144.(xi)treg中il-2信号转导通路的选择性活化；和/或
145.(xii)增强或增加、或减少或减低的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
146.在一个实施方式中，人il-2变体包含氨基酸变化(例如，取代)：
147.(i)c125s；
148.(ii)v69a，q74p和c125s；
149.(iii)h16d，v69a，q74p和c125s；
150.(iv)h16n，v69a，q74p和c125s；
151.(v)h16l，v69a，q74p和c125s；
152.(vi)i28t，v69a，q74p和c125s；
153.(vii)v69a，q74p，d84v和c125s；
154.(viii)v69a，q74p，s87r和c125s；
155.(ix)v69a，q74p，n88l和c125s；
156.(x)v69a，q74p，n88s和c125s；
157.(xi)v69a，q74p，i92s和c125s；
158.(xii)k35e，v69a，q74p和c125s；
159.(xiii)k35e，h16n，v69a，q74p和c125s；
160.(xiv)k35e，h16l，v69a，q74p和c125s；
161.(xv)k35e，d84v，v69a，q74p和c125s；
162.(xvi)k35e，i92s，v69a，q74p和c125s；
163.(xvii)r38q，v69a，q74p和c125s；
164.(xviii)r38q，h16n，v69a，q74p和c125s；
165.(xix)r38q，h16l，v69a，q74p和c125s；
166.(xx)r38q，d84v，v69a，q74p和c125s；
167.(xxi)r38q，i92s，q74p和c125s；
168.(xxii)r38n，v69a，q74p和c125s；
169.(xxiii)r38n，h16n，v69a，q74p和c125s；
170.(xxiv)r38n，h16l，v69a，q74p和c125s；
171.(xxv)r38n，d84v，v69a，q74p和c125s；
172.(xxvi)r38n，i92s，q74p和c125s；
173.(xxvii)r38e，v69a，q74p和c125s；
174.(xxviii)f42k，v69a，q74p和c125s；
175.(xxix)f42q，v69a，q74p和c125s；
176.(xxx)f42a，y45a，l72g，n88d，v69a，q74p和c125s；
177.(xxxi)r38n，s87r，v69a，q74p和c125s；
178.(xxxii)r38e，h16n，v69a，q74p和c125s；
179.(xxxiii)r38e，d84v，v69a，q74p和c125s；
180.(xxxiv)r38e，s87r，v69a，q74p和c125s；
181.(xxxv)r38e，i92s，v69a，q74p和c125s；
182.(xxxvi)f42q，h16n，v69a，q74p和c125s；
183.(xxxvii)f42q，i92s，v69a，q74p和c125s；或
184.(xxxviii)k35e，r38n，h16n，v69a，q74p和c125s。
185.(xxxix)t3a，h16n，v69a，q74p和c125s；
186.(xl)t3a，h16l，v69a，q74p和c125s；或
no:5的氨基酸序列的il-2制剂，特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病和病症，例如自身免疫性疾病。
202.因此，在一个实施方式中，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2变体，包含seq id no:5的氨基酸序列的il-2制剂尤其具有以下一项或多项(例如，2、3、4、5、6、7项或全部)性质：(i)体外或体内稳定性增强或增加；(ii)体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iii)体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iv)il-2变体在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚(即人cd122/cd132异二聚体)il-2受体的亲和性降低或减低；(v)体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性降低或减低(例如，中度降低或减低)；(vi)选择性结合至调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；或(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
203.在一个实施方式中，参考il-2制剂包含seq id no:1031、seq id no:1或seq id no:2的氨基酸序列，或其功能性片段。在一个实施方式中，参照il-2制剂包含seq id no:1031的氨基酸序列。在一个实施方式中，参照il-2制剂包含seq id no:1的氨基酸序列。在一个实施方式中，参照il-2制剂包含seq id no:2的氨基酸序列。
204.在一个实施方式中，il-2制剂包含通过接头与本文所述的非il-2部分融合的本文所述的人il-2变体，其中所述接头是多肽接头，任选地其中所述多肽接头是柔性接头、刚性接头或可裂解接头。在一个实施方式中，多肽接头是gly-ser接头(例如，(g4s)n接头，其中n＝1、2、3、4、5、6或更大(seq id no:1020))、富含脯氨酸的延伸接头(例如，v1 gpc、v2、gpgc、v3 gcgcp、纤维素酶接头4、纤维素酶接头4)、刚性接头(例如，a(eaaak)na，其中n＝2、3、4、5或更大(seq id no:1021)；repr_12)，非gs接头(例如，(gggsa)n，其中n＝1、2、3、4、5或更大(seq id no:1022))，或免疫球蛋白铰链区或其部分。在一个实施方式中，多肽接头是gly-ser接头，其包含(g4s)1(seq id no:1023)、(g4s)2(seq id no:1024)、(g4s)3(seq id no:1025)，(g4s)4(seq id no:48)、(g4s)5(seq id no:1026)或(g4s)6(seq id no:1027)。在一个实施方式中，多肽接头是包含(g4s)4(seq id no:48)的gly-ser接头。在一个实施方式中，多肽接头包含选自seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:54，或seq id no:55的氨基酸序列。在一个实施方式中，多肽接头包含seq id no:48的氨基酸序列。
205.在一个实施方式中，非il-2部分是免疫球蛋白fc区，或其片段或部分(例如，功能性片段)。在一个实施方式中，免疫球蛋白fc区包含igg fc区、igd fc区、iga fc区、igm fc区或ige fc区，或其片段或部分。在一个实施方式中，igg fc区包含野生型人igg1 fc区(例如，igg1 m3同种异型)、野生型igg2 fc区、或野生型人igg4 fc区或其片段或部分。
206.在一个实施方式中，igg fc区包含突变igg1或突变igg4 fc区，或其片段或部分。在一个实施方式中，igg fc区包含一个或多个(例如两个、三个、四个或五个)突变，例如一个或多个(例如两个、三个、四个或五个)本文所述的突变。
207.在一个实施方式中，igg fc区包含突变的igg4 fc区，或其片段或部分，其中突变的igg4 fc区是人的。
208.在一个实施方式中，突变igg4 fc区或其片段或部分包含根据eu编号法编号的
id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，或seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，或seq id no:1002，或其功能性片段；其中il-2制剂包含gly-ser接头，任选地其中所述gly-ser接头包含(g4s)4(seq id no:48)，并且其中所述il-2变体通过所述gly-ser接头融合至包含选自以下的氨基酸序列的igg fc区：seq id no:39，seq id no:40，seq id no:41，seq id no:42，seq id no:43，seq id no:44，seq id no:45，seq id no:46，seq id no:47，或seq id no:1003。
219.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:56，seq id no:57，seq id no:58，seq id no:59，seq id no:60，seq id no:61，seq id no:62，seq id no:63，seq id no:64，seq id no:65，seq id no:66，seq id no:67，seq id no:68，seq id no:69，seq id no:70，seq id no:71，seq id no:72，seq id no:73，seq id no:74，seq id no:75，seq id no:76，seq id no:77，seq id no:78，seq id no:79，seq id no:80，seq id no:81，seq id no:82，seq id no:83，seq id no:84，seq id no:85，seq id no:86，seq id no:87，seq id no:88，seq id no:89，seq id no:90，seq id no:91，seq id no:92，seq id no:93，seq id no:1004，seq id no:1005，seq id no:1006，seq id no:1007，seq id no:1008，或seq id no:1009，或其功能性片段。
220.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:94，seq id no:95，seq id no:96，seq id no:97，seq id no:98，seq id no:99，seq id no:100，seq id no:101，seq id no:102，seq id no:103，seq id no:104，seq id no:105，seq id no:106，seq id no:107，seq id no:108，seq id no:109，seq id no:110，seq id no:111，seq id no:112，seq id no:113，seq id no:114，seq id no:115，seq id no:116，seq id no:117，seq id no:118，seq id no:119，seq id no:120，seq id no:121，seq id no:122，seq id no:123，seq id no:124，seq id no:125，seq id no:126，seq id no:127，seq id no:128，seq id no:129，seq id no:130，或seq id no:131，或其功能性片段。
221.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:132，seq id no:133，seq id no:134，seq id no:135，seq id no:136，seq id no:137，seq id no:138，seq id no:139，seq id no:140，seq id no:141，seq id no:142，seq id no:143，seq id no:144，seq id no:145，seq id no:146，seq id no:147，seq id no:148，seq id no:149，seq id no:150，seq id no:151，seq id no:152，seq id no:153，seq id no:154，seq id no:155，seq id no:156，seq id no:157，seq id no:158，seq id no:159，seq id no:160，seq id no:161，seq id no:162，seq id no:163，seq id no:164，seq id no:165，seq id no:166，seq id no:167，seq id no:168，或seq id no:169，或其功能性片段。
222.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:170，seq id no:171，seq id no:172，seq id no:173，seq id no:174，seq id no:175，seq id no:176，seq id no:177，seq id no:178，seq id no:179，seq id no:180，seq id no:181，seq id no:182，seq id no:183，seq id no:184，seq id no:185，seq id no:186，seq id no:
187，seq id no:188，seq id no:189，seq id no:190，seq id no:191，seq id no:192，seq id no:193，seq id no:194，seq id no:195，seq id no:196，seq id no:197，seq id no:198，seq id no:199，seq id no:200，seq id no:201，seq id no:202，seq id no:203，seq id no:204，seq id no:205，seq id no:206，或seq id no:207，或其功能性片段。
223.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:208，seq id no:209，seq id no:210，seq id no:211，seq id no:212，seq id no:213，seq id no:214，seq id no:215，seq id no:216，seq id no:217，seq id no:218，seq id no:219，seq id no:220，seq id no:221，seq id no:222，seq id no:223，seq id no:224，seq id no:225，seq id no:226，seq id no:227，seq id no:228，seq id no:229，seq id no:230，seq id no:231，seq id no:232，seq id no:233，seq id no:234，seq id no:235，seq id no:236，seq id no:237，seq id no:238，seq id no:239，seq id no:240，seq id no:241，seq id no:242，seq id no:243，seq id no:244，或seq id no:245，或其功能性片段。
224.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:246，seq id no:247，seq id no:248，seq id no:249，seq id no:250，seq id no:251，seq id no:252，seq id no:253，seq id no:254，seq id no:255，seq id no:256，seq id no:257，seq id no:258，seq id no:259，seq id no:260，seq id no:261，seq id no:262，seq id no:263，seq id no:264，seq id no:265，seq id no:266，seq id no:267，seq id no:268，seq id no:269，seq id no:270，seq id no:271，seq id no:272，seq id no:273，seq id no:274，seq id no:275，seq id no:276，seq id no:277，seq id no:278，seq id no:279，seq id no:280，seq id no:281，seq id no:282，或seq id no:283，或其功能性片段。
225.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:284，seq id no:285，seq id no:286，seq id no:287，seq id no:288，seq id no:289，seq id no:290，seq id no:291，seq id no:292，seq id no:293，seq id no:294，seq id no:295，seq id no:296，seq id no:297，seq id no:298，seq id no:299，seq id no:300，seq id no:301，seq id no:302，seq id no:303，seq id no:304，seq id no:305，seq id no:306，seq id no:307，seq id no:308，seq id no:309，seq id no:310，seq id no:311，seq id no:312，seq id no:313，seq id no:314，seq id no:315，seq id no:316，seq id no:317，seq id no:318，seq id no:319，seq id no:320，或seq id no:321，或其功能性片段。
226.在一个实施方式中，il-2制剂包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:322，seq id no:323，seq id no:324，seq id no:325，seq id no:326，seq id no:327，seq id no:328，seq id no:329，seq id no:330，seq id no:331，seq id no:332，seq id no:333，seq id no:334，seq id no:335，seq id no:336，seq id no:337，seq id no:338，seq id no:339，seq id no:340，seq id no:341，seq id no:342，seq id no:343，seq id no:344，seq id no:345，seq id no:346，seq id no:347，seq id no:348，seq id no:349，seq id no:350，seq id no:351，seq id no:352，seq id no:353，seq id no:354，seq id no:355，seq id no:356，seq id no:357，seq id no:358，或seq id no:359，或其功能性片段。
227.在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:59的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:97的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:135的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式
中，il-2制剂包含seq id no:173的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:211的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:249的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:287的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:325的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:66的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:104的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:142的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:180的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:218的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:256的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:294的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:332的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:60的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:98的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:136的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:174的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:212的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:250的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:288的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:326的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:69的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:107的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:145的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:183的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:221的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:259的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:297的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:335的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1004的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1005的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1006的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1007的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1008的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1009的氨基酸序列或其功能性片段。
228.多种技术效果与包含seq id no:1008的氨基酸序列的il-2制剂相关联。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含seq id no:1008的氨基酸序列的il-2制剂可具有至少一种或多种以下有利性质：(i)与其它t细胞类型相比，对cd122和/或cd132的结合亲和性降低，这增加了il-2制剂对调节性t细胞(treg)的功效和选择性；(ii)显著稳定，例如，归因于稳定化v69a和q74p突变的存在；(iii)具有减少或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性(或对其影响不超过最小幅度)，可延长il-2制剂的寿命；(iv)在体外和/或体内基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤(nk)细胞的扩增、活化、存活和/或增殖；和/或(v)具有
减少的不正确的二硫键配对和提高的稳定性，例如，归因于c125s突变的存在。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使包含seq id no:1008的氨基酸序列的il-2变体il-2制剂特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病和病症，例如自身免疫性疾病。
229.因此，在一个实施方式中，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2变体，包含seq id no:5的氨基酸序列的il-2制剂尤其具有以下一项或多项(例如，2、3、4、1008、6、7项或全部)性质：(i)体外或体内稳定性增强或增加；(ii)体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iii)体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性降低或减低；(iv)il-2变体在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚(即人cd122/cd132异二聚体)il-2受体的亲和性降低或减低；(v)体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性降低或减低(例如，中度降低或减低)；(vi)选择性结合至调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
230.在一个实施方式中，il-2制剂形成二聚体(例如，同型二聚体或异型二聚体)。
231.在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2融合蛋白。在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2制剂/抗il-2抗体复合物。在一个实施方式中，il-2制剂包含偶联物。
232.在一些方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含所述的il-2制剂和药学上可接受的运载体。在一些方面，本公开提供了编码本文所述的il-2制剂的核酸。在一些方面，本公开提供了包含编码本文所述il-2制剂的核酸的载体(例如，表达载体)。在一些方面，本公开提供了包含编码本文所述的il-2制剂的核酸的细胞(例如，分离的细胞)或包含编码本文所述的il-2制剂的核酸的载体(例如，表达载体)。
233.在一些方面，本公开提供了产生il-2制剂的方法，包括在允许il-2制剂表达的条件下培养(例如，维持)包含编码本文所述il-2制剂的核酸的细胞或包含编码本文所述il-2制剂的核酸的载体(例如，表达载体)的细胞。在一个实施方式中，该方法还包括获得il-2制剂。在一个实施方式中，该方法还包括纯化il-2制剂。
234.在一些方面，本公开提供了增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，包括使treg细胞或treg细胞群(例如，体外、离体或体内)与有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物接触，或给予有此需要的对象有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
235.在一些方面，本公开提供选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，包括使treg细胞或treg细胞群(例如，体外、离体或体内)与有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物接触，或给予有此需要的对象有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
236.在一些方面，本公开提供了一种诱导有需要的对象的免疫耐受的方法，包括给予有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
237.在一些方面，本公开提供一种治疗患有疾病(例如本文所述的疾病，例如自身免疫性疾病、狼疮性肾炎、自身免疫性肝炎、肾病综合征或癌症)的对象的方法，包括向所述对象给予有效量的本文所述的il-2制剂或包含所述il-2制剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
238.在一些方面，本公开提供一种il-2制剂或组合物，其用于治疗患有疾病(例如本文所述的疾病，例如自身免疫性疾病、狼疮性肾炎、自身免疫性肝炎、肾病综合征或癌症)的对象的方法中，该方法包括向所述对象给予本文所述的il-2剂或包含所述il-2剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
239.在一些方面，本公开提供一种il-2制剂或组合物在制备用于治疗患有疾病(例如本文所述的疾病，例如自身免疫性疾病、狼疮性肾炎、自身免疫性肝炎、肾病综合征或癌症)的对象的方法中的药物中的用途，所述方法包括向所述对象给予本文所述的il-2剂或包含所述il-2剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
240.在一些方面，本公开提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含本文所述的il-2制剂或含有所述il-2制剂的药物组合物，以及使用说明。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
241.在一些方面，本公开提供了容器，所述容器包含本文所述的il-2制剂或含有所述il-2制剂的药物组合物。il-2制剂可以例如包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s，或氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2制剂包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
附图说明
242.图1a提供的示意图说明本文提供的il-2制剂的示例性、非限制性实施方式的结构域结构。如图所示，il-2制剂包含il-2部分或变体(本文也称为“突变蛋白(mutein)”)、肽接头、含铰链序列的fc和抗体的ch2和ch3结构域。图1b提供了人il-2的氨基酸序列(seq id no:1030)的描述，显示了示例性的非限制性位置，这些位置在突变时会导致体外和体内对il-2受体结合和il-2介导的信号转导活性的作用。
243.图2的示意图说明利用酵母表面展示产生il-2变体文库并从这些文库中选择稳定和活性克隆的基于细胞的方法。通过dna合成或易错pcr产生il-2突变或由初始克隆表达的il-2变体并转化到酵母细胞中。酵母细胞用抗myc抗体和荧光二抗染色以确定il-2表达(x轴)，并用重组cd25、抗6xhis抗体(“6xhis”公开为seq id no:1028)和荧光二抗染色测量结
合的cd25(y轴)。在一些形式的实验中，除了myc-标签之外或作为myc-标签的代替使用ha-标签。荧光活化细胞分选用于富集显示高表达和高结合活性的il-2变体。
244.图3a提供的图表说明了使用il-2受体滴定以确定酵母表面上展示的il-2突变蛋白的亲和性和结合能力的方法的结果。将表达所示il-2突变蛋白的酵母克隆与一系列浓度的用带6xhis标签的cd25胞外结构域(“6xhis”公开为seq id no:1028)一起孵育。通过用抗6xhis抗体(“6xhis”公开为seq id no:1028)和荧光二抗染色来测量结合的cd25。显示了几个示例性的il-2突变蛋白。曲线拟合用于确定结合亲和性(kd)和最大结合信号(数据未显示)。图3b提供的图表说明了所选il-2突变蛋白的相对结合能力(最大结合信号针对il-2表达水平进行标准化)。
245.图4a提供的图表说明了如通过sypro橙色荧光测定的所选il-2制剂(il-2-fc融合蛋白)的热变性(熔解曲线)。天然il-2-fc融合体在低温下显示最大信号，表明存在未折叠蛋白，而v69a/q74p突变蛋白随着温度升高显示展开事件。图4b提供了hplc尺寸排阻色谱图，显示大部分天然il-2-fc融合体很早就从柱中洗脱(》670kda)，表明未折叠蛋白质聚集。相比之下，v69a/q74p il-2-fc在84kda蛋白质的预期时间以单峰形式洗脱。
246.图5a-5b提供的散点图显示了酵母细胞分选操作的结果，该操作用于鉴定影响与cd122和/或cd132 il-2受体相互作用的突变。用指定浓度的cd122/cd132 fc异二聚体对在其表面表达il-2变体文库的酵母进行染色，并使用荧光抗人fc二抗检测结合的受体。用抗myc抗体和荧光二抗检测表面il-2表达。对指示的门(框)内的细胞进行分类和回收，并通过桑格测序和下一代测序的组合确定这些群体中富集的il-2突变蛋白。
247.图6a提供的图表显示在用指定浓度的cd122/cd132 fc异二聚体滴定后确定在其表面上表达指定il-2突变蛋白的酵母的分数饱和度的方法的结果。除了所示的突变外，描述的所有突变蛋白都包含v69a/q74p。使用抗人fc荧光二抗标记结合的cd122/cd132，并使用accuri c6流式细胞仪进行测量。通过将每条曲线拟合到4参数剂量响应以估计每条曲线的最大结合信号来计算分数饱和度，然后进行标准化，以使估计的最大值被定义为1。图6b提供的图表显示除了选择的突变蛋白与带6xhis标签(“6xhis”公开为seq id no:1028)的重组cd25胞外域孵育，且结合的cd25用抗6xhis抗体检测(“6xhis”公开为seq id no:1028)之外与图6a相同的方法的结果。
248.图7提供的一系列图表说明包含不同il-2变体的il-2-fc融合蛋白(如图所示)对cd122/cd132 fc异二聚体和cd25胞外结构域的亲和性，于octet生物层干涉仪上测量。il-2变体包含v69a/q74p以及指定的突变。il-2-fc融合蛋白被固定在抗人fc捕获尖端上，然后与一定浓度范围的指示il-2受体孵育。用于估计结合亲和性的结合和解离相动力学。过量的无关抗体用于防止尖端对cd122/cd132 fc蛋白的非特异性结合或捕获。
249.图8提供的示意图说明用于从人pbmc中鉴定il-2敏感细胞群的门控策略和相应的流式细胞术数据。基于前向和侧向散射鉴定的单线态淋巴细胞。群体定义为：t调节细胞(cd4 cd25
高
foxp3 )、cd25
高
t辅助细胞(cd4 cd25
高
foxp3-)和自然杀伤细胞(cd3-cd56 )。
250.图9a-9d提供的图表说明了在用含有降低cd122/cd132二聚体亲和性的突变的il-2-fc融合体处理后，人pbmc中的il-2敏感细胞群中的il-2信号转导反应(图9a，treg；图9b，cd25 (高)t辅助细胞；图9c，nk细胞；图9d，cd8 细胞毒性t细胞)，由stat5磷酸化程度确定。指示浓度的细胞用含有v69a/q74突变和指定突变的il-2-fc融合蛋白或用与非结合抗体的
c端融合的il-2n88d突变蛋白(c端n88d)处理30分钟。失活的il-2-fc融合蛋白含有几个突变以降低其il-2信号转导活性(f42a、y45a、l72g、n88d、v69a、q74p)。处理后，用甲醛固定细胞，用冷甲醇透化并针对表面标志物和在tyr694处(pstat5)磷酸化的stat5转录因子染色。各群体基于图8所述的门控来识别。还评估了选定的突变蛋白对cd8 细胞毒性t细胞的信号转导活性。这些细胞如图8中进行门控，不同之处在于使用cd8表面标志物代替cd4。显示了在各细胞群中测试的各浓度的il-2-fc融合蛋白的中值pstat5水平(中值荧光强度，mfi)。曲线拟合使用graphpad prism v5.03进行，4参数拟合log(激动剂)与响应。
251.图10a-10c提供的图表描绘在用包含能减少对于cd25的亲和性的突变的il-2-fc融合体处理后，人pbmc中il-2敏感细胞群(图10a，treg；图10b，cd25 (高)t辅助细胞；图10c，nk细胞)中的il-2信号转导反应。人pbmc的处理和分析如图9所示。显示了各人群中各治疗的中位pstat5水平(mfi)。为了突出对ec
50
的作用，在il-2-fc处理的浓度范围内，将各突变蛋白内的信号从0到1进行标准化。
252.图11a-11c提供的图表描绘在用包含能减少对于cd25和cd122/cd132二聚体的亲和性的成对突变的il-2-fc融合体处理后，人pbmc中il-2敏感细胞群(图11a，treg；图11b，cd25 (高)t辅助细胞；图11c，nk细胞)中的il-2信号转导反应。人pbmc的处理和分析如图9所示。如图所示，为清楚起见，将包含各种il-2突变蛋白的il-2-fc融合蛋白分为上下分图。显示了各人群中各处理的中位pstat5水平(mfi)。
253.图12a-12c提供的图表说明在用il-2-fc h16n(图12a)或c-末端n88d(图12b)处理的tg32小鼠中，treg的体内扩增，测量为总cd3 t细胞的百分比。通过尾静脉注射向纯合tg32小鼠给予指定量的各il-2fc融合蛋白(剂量水平大约为等摩尔)。在指定的时间点，对淋巴细胞群进行分析，将treg定义为cd45 cd3 cd4 cd25
高
cd127细胞。图12a和图12b中的数据是各处理组三只小鼠的平均值。图12c显示在测试的各il-2-fc融合蛋白的最高剂量下来自个体小鼠的数据。
254.图13a-13c提供的图表说明了用il-2-fc h16n(图13a)或c-末端n88d(图13b)处理的tg32小鼠中，cd4 t辅助细胞水平的变化，测量为总cd3 t细胞的百分比。小鼠按图12进行给药。cd4 t辅助细胞被定义为cd45 cd3 cd4 细胞而不是cd25
高
cd127-。图13a和图13b中的数据是各处理组三只小鼠的平均值。图13c显示测试的各il-2-fc融合蛋白的最高剂量下的个体小鼠的数据。
255.图14a-14c提供的图表说明了用il-2-fc h16n(图14a)或c-末端n88d(图14b)处理的tg32小鼠中，cd8 细胞毒性t细胞水平的变化，测量为总cd3 t细胞的百分比。小鼠按图12进行给药。细胞毒性t细胞定义为cd45 cd3 cd8 细胞。图14a和图14b中的数据是各处理组三只小鼠的平均值。图14c显示测试的各il-2-fc融合蛋白的最高剂量下的个体小鼠的数据。
256.图15a-15c提供的图表说明了在用il-2-fc h16n(图15a)或c-末端n88d(图15b)处理的tg32小鼠中，nk细胞水平的变化，测量为总cd45 淋巴细胞的百分比。小鼠按图12进行给药。nk细胞定义为cd45 cd3-cd56 细胞。图15a和图15b中的数据是各处理组三只小鼠的平均值。在各情况下，将各小鼠内的nk细胞百分比标准化，从而使得预处理值为1。图15c显示测试的各il-2-fc融合蛋白的最高剂量下的个体小鼠的数据。
257.图16a-16b提供的图表说明了一定浓度范围内的cd122/cd132fc异二聚体或cd25
胞外结构域与仅含有v69a/q74p突变(野生型；图16a)或含有失活突变(42a、y45a、l72g、n88d、v69a、q74p；失活；图16b)(锚着至抗人fc octet尖端)的il-2-fc融合蛋白的结合动力学。结合动力学用于估计各相互作用的kd。
258.图17a-17d提供的图表说明il-2fc融合蛋白在小鼠中的清除动力学。从如图12所示用不同剂量的含有v69a/q74p/h16n突变或c端n88d的il-2-fc融合蛋白(图17a-17b)或含有失活突变(42a、y45a、l72g、n88d、v69a、q74p；失活；图17c-17d)的il-2-fc融合蛋白处理的小鼠采集血清。使用elisa测定法，用抗il-2捕获抗体(r&d systems，af-202)和偶联至辣根过氧化物酶的抗人fc二抗(jackson immuno research 109-035-008)测量各时间点呈现的il-2-fc或c末端n88d的量。100％的起始材料定义为注射后1小时在血浆中可检测到的量。注意，x轴是分类的(categorical)，而不是按时间缩放的。
259.图18a-18d描绘了人源化小鼠中给予示例性il-2fc融合蛋白后免疫细胞在体内的扩增。图18a展示的实验设计的示意图显示了从被给予il-2fc融合多肽和对照多肽的人源化小鼠抽取血液的不同时间点。流式细胞术用于测量各指定时间点的各种淋巴细胞群。图18b在y轴上呈现各il-2fc融合多肽的t调节细胞的倍数扩增，并且在x轴上说明其对应的剂量(低或高)。图18c在y轴上呈现各il-2fc融合多肽的t辅助细胞的倍数扩增，并且在x轴上说明其对应的剂量(低或高)。图18d在y轴上呈现各il-2fc融合多肽的nk细胞的倍数扩增，并且在x轴上说明其对应的剂量(低或高)。在研的il-2fc融合多肽，如图18b-18d的x轴上从左到右如下所示：对照单克隆抗体(莫塔维珠单抗(motavizumab))、失活il-2、包含n88d突变的il-2突变蛋白、野生型il-2、包含突变h16n/v69a/q74p/c125s的il-2突变蛋白(seq id no:1007)，和包含突变h16l/v69a/q74p/c125s(seq id no:1008)的il-2突变蛋白。
260.图19a-19b描绘了示例性il-2融合蛋白在tg32小鼠中的持久性和有效半衰期。图19a在y轴上呈现小鼠血液中具有指示的突变组合的il-2融合蛋白的浓度，在x轴上呈现给药后取样的天数。图19b呈现了在fc区中有或没有其它突变的具有指示的il-2部分中的突变组合的il-2融合蛋白的半衰期的比较，。y轴上呈现血液中指示的il-2融合蛋白的浓度，x轴上呈现给药后天数。
261.图20描述了示例性il-2-fc融合蛋白(包含突变h16l/v69a/q74p/c125s(seq id no:1008)(与igg1 fc n297g同种异型m3融合的il2-118))在食蟹猴中的药代动力学概况。在四只猴子(编号为3501、3502、3503和3504)每周注射100μg/kg il-2-fc融合蛋白后，随时间推移测量血清中il-2-fc融合蛋白水平。
262.图21a-21b描述了示例性il-2-fc融合蛋白(包含突变h16l/v69a/q74p/c125s(seq id no:1008)(il2-118融合到igg1 fc n297g同种异型m3))对食蟹猴中调节性t细胞的扩增和增殖的作用。图21a呈现了在每周四次注射100μg/kg的il-2-fc融合蛋白后，t调节细胞的扩增随时间推移的变化，以相对于基线(基线＝给药前)的倍数变化表示。图21b显示了在每周四次注射100μg/kg il-2-fc融合蛋白后，随着时间推移的ki67
t调节细胞的百分比(增殖的t调节细胞的量度)，针对总t调节细胞进行标准化。
263.图22a-22d说明了每周四次注射100μg/kg il-2-fc融合蛋白后，示例性il-2-fc融合蛋白(包含突变h16l/v69a/q74p/c125s(seq id no:1008)(与igg1fc n297g同种异型m3融合的il2-118))对食蟹猴中的循环免疫细胞的作用。图22a呈现il-2-fc融合蛋白随时间推移对nk细胞数量的作用，图22b呈现随时间推移对细胞毒性t细胞的作用，图22c呈现随时
间推移对t辅助细胞的作用，而图22d呈现随时间推移对总t细胞的作用。对于各细胞类型，数据显示为基线(基线＝给药前)的倍数变化。
264.图23a-23c说明了本文描述的示例性il-2-fc融合蛋白对具有类似于狼疮肾炎的肾脏受累的系统性红斑狼疮的鼠模型中的疾病进展的作用。图23a呈现了在用40μg/kg的示例性il-2-fc融合蛋白或pbs载剂对照处理后，每周在小鼠中测量的蛋白尿评分，其从3周龄开始每3天给予一次并持续到18周龄。蛋白尿评分显示在y轴上，小鼠周龄显示在x轴上。图23b呈现的一系列图表在y轴上说明用载剂对照或示例性il-2-fc融合蛋白(如x轴所示)处理的个体小鼠中的蛋白尿评分。从左到右，第一个分图描述了11周龄时的蛋白尿评分，中间分图描述了12周龄时的评分，最后一张分图描述了13周龄时的评分。图23c在y轴上呈现了研究结束时(当小鼠达到18周龄时)，在用载剂对照或示例性il-2-fc融合蛋白(如x轴所示)处理的个体小鼠中的量化的肾小球损伤。
265.发明详述
266.本文公开了具有本文所述的一种或多种结构和/或功能性质的il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白、il-2复合物或il-2偶联物)。有利地，与包含野生型il-2的il-2制剂相比，本文所述的几种il-2制剂具有一种或多种改进的或期望的性质。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂通过il-2途径选择性地增强调节性t细胞(treg)活性。还提供了编码所述il-2制剂的核酸分子、表达载体、宿主细胞、组合物(例如药物组合物)、试剂盒、容器和制备所述il-2制剂的方法。本文公开的il-2制剂和药物组合物可(单独或与其它制剂或治疗方式组合)用以治疗、预防和/或诊断疾病和病症，例如与t细胞活性相关的疾病和病症，例如，本文所述的疾病或病症(例如，本文所述的自身免疫病症)。
267.免疫反应通常受特定外源或自身抗原的识别、先天性和适应性免疫途径之间的交流、b细胞和t细胞之间的串扰以及其它因素的控制。一些自身免疫性疾病的特点是广泛识别自身抗原。这些疾病可以通过广泛增强保护自身抗原免受免疫系统攻击的过程的疗法来治疗。treg是一种识别自身抗原的t细胞。作为对抗原刺激的反应，它们会释放免疫抑制细胞因子，并通过细胞间接触直接抑制其它t细胞。treg活性受损会导致多种自身免疫性疾病(例如，细胞过少或活性较低的细胞)。il-2是一种细胞因子，可导致许多细胞类型的扩增和活化，但treg通常对il-2比其它细胞类型更敏感。显示低剂量il-2的给予与很大一部分患者中优先、持续的treg细胞体内扩增和慢性移植物抗宿主病(gvhd)的表现的改善相关联(koreth等,n engl j med.2011；365(22):2055-2066)。在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂为许多病症(例如，自身免疫适应症)提供了长效免疫调节剂(例如，免疫抑制剂)。
268.本公开至少部分基于以下发现：包含具有本文所述的氨基酸取代的特定组合的人il-2多肽的il-2制剂可以具有有利的技术效果，例如，增加il-2制剂的稳定性和/或提供调节性t细胞的选择性活化。本文所述的il-2制剂通常需要cd25才能通过il-2受体进行高效信号转导，使其对treg具有高度选择性。il-2信号转导促进treg抑制功能并驱动增殖。不希望受理论束缚，据信由本文所述的il-2制剂活化的treg可通过多种机制抑制自身免疫活性。
269.在一个实施方式中，发现本文所述的il-2制剂选择性地结合并活化调节性t细胞，同时对其它免疫细胞类型(例如，cd25
高
t细胞和nk细胞)缺乏作用。不希望受理论束缚，据信
在一个实施方式中，本文所述的氨基酸取代能促进il-2制剂维持活性构象和调节il-2制剂对包含il-2rβ(cd122)和il-2rγ(cd132)的二聚体受体和包含il-2rα(cd25)以及cd122和cd132的三聚体受体的结合亲和性的能力。在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂具有在调节性t细胞中选择性结合和活化il-2信号转导的最佳亲和性，导致体外和体内的选择性调节性t细胞活化和扩增。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，il-2与il-2受体的结合是体内清除il-2的主要途径。例如，本文所述的对二聚体和三聚体il-2受体亲和性降低的il-2制剂显示出延长的半衰期，这表明降低对il-2受体的亲和性会降低il-2制剂的体内清除率。本文所述的il-2制剂，例如具有增加稳定性和降低对il-2受体的亲和性的氨基酸取代的那些，可以选择性地活化调节性t细胞并表现出增加的体内半衰期。本文所述的il-2制剂，例如具有阻止cd25结合的突变的那些，可以具有改善的体内半衰期。在一个实施方式中，il-2制剂在体外和/或体内不促进或基本上不促进t效应细胞和/或nk细胞的扩增、活化、存活和/或增殖。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂可具有比低剂量il-2更大的治疗窗。
270.存在与本文所述的特定突变组的存在相关联的各种技术效果，例如，一组突变包含位置h16处的氨基酸取代，联合位置v69、q74和c125处的氨基酸取代(例如、h16l、v69a、q74p和c125s)。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含h16l、v69a、q74p和c125s的il-2制剂(例如，il-2变体或il-2融合蛋白)是显著稳定的，例如，由于存在稳定化v69a和q74p突变。例如，意外地发现v69a和q74p取代不会显著增加(或显著降低)il-2制剂对cd25的结合亲和性，而是将il-2制剂稳定在足以结合至cd25的活性构象中。不希望受理论束缚，还认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2制剂具有降低的对cd122和/或cd132的结合亲和性，这增加了il-2制剂对于调节性t细胞(treg)的功效和选择性(相比其它t细胞类型)。因此，包含这些突变的il-2制剂通常是稳定的并选择性地活化调节性t细胞(treg)。不希望受理论束缚，进一步认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2制剂具有降低或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性，这改善了il-2制剂的寿命。不希望受理论束缚，还认为在一个实施方式中，包含这些突变的il-2制剂基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤细胞(nk)的体外和/或体内扩增、活化、存活和/或增殖。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使得包含上述突变的il-2制剂特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病或病症，例如自身免疫疾病。
271.因此，在一个实施方式中，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2制剂，包含位置h16处的氨基酸取代与位置v69、q74和c125处的氨基酸取代的组合(例如，h16l、v69a、q74p和c125s)的il-2制剂(例如，il-2变体或il-2融合蛋白)具有(尤其)以下性质中的一项或多项(例如，2、3、4、5、6、7项或全部)：
272.(i)体外或体内增强或增加的稳定性；
273.(ii)体外和/或体内降低或减低的对人cd122的结合能力和/或结合亲和性；
274.(iii)体外和/或体内降低或减低的对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；
275.(iv)il-2制剂在体外和/或体内降低或减低的对由人cd122和人cd132构成的异二聚体(即人cd122/cd132异二聚体)il-2受体的亲和性；
276.(v)体外和/或体内降低或减低(例如，中度降低或减低)的对人cd25的结合能力
和/或结合亲和性；
277.(vi)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3
t细胞)；
278.(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；或
279.(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
280.定义
281.本文使用冠词“一个”和“一种”表示一个/种或一个/种以上的(即至少一个/种)该冠词语法上的宾语。
282.除非上下文明确作出不同指示，本文所用术语“或/或者”是指“和/或”，并可与其互换使用。
[0283]“约”和“近似”应通常表示在考虑测量的性质或精度的情况下测得量的可接受的误差度。示例性误差程度在给定值范围或值的20％内，通常在10％内，更通常在5％内。当在一系列数字或范围之前存在“约”或“近似”时，应理解“约”或“近似”可修饰该系列或范围中的每个数字。类似地，当在一系列数字或范围之前出现“至少”，“大于”，“不大于”，“小于”，“不小于”或“在
……
之内”时，应理解为“至少”，“大于”，“不大于”，“小于”，“不小于”或“在
……
之内”可修饰该系列或范围内的每个数字。如本文所用，范围包括上限和下限。
[0284]
本文所述的组合物和方法包括具有指定序列的多肽和核酸，或具有与指定序列基本相同或与其相似(例如与指定序列至少85％、90％、95％或更高相同性)的序列的多肽和核酸。
[0285]
在描述氨基酸序列的情况下，用于本文的术语“基本相同”是指第一氨基酸含有足够或最少数量的如下氨基酸残基：i)与第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基相同，或ii)第二氨基酸序列中的比对氨基酸残基的保守取代，从而第一和第二氨基酸序列可具有共有的结构域和/或共同的功能活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的共有结构域的氨基酸序列。
[0286]
在描述核苷酸序列的情况下，本文所用术语“基本相同”是指第一核酸序列包含足够或最少数量的与第二核酸序列中的比对核苷酸相同的核苷酸，从而第一和第二核苷酸序列编码具有相同功能活性的多肽、或编码相同结构多肽结构域或相同功能性多肽活性。例如，包含与参比序列(例如本文所提供的序列)具有至少约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的核苷酸序列。
[0287]
术语“功能性变体”是指与天然序列具有基本相同氨基酸序列或由基本相同的核苷酸序列编码、且能够具有天然序列一种或多种活性的多肽。
[0288]
序列间的同源性或序列相同性(这些术语在本文中可互换使用)的计算如下进行。
[0289]
为了确定两条氨基酸序列或两条核酸序列的百分比相同性，可以为了最佳比较目的而对序列进行比对(例如，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列的之一或两条中引入缺口以达到最佳对齐，并且出于比较目的可以不考虑非同源序列)。在一个典型的实施方式中，用于比较目的比对的参比序列长度为该参比序列长度的至少30％，例如至少40％、50％、60％，例如至少70％、80％、90％、100％。然后比较对应氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中某位置上占据的氨基酸残基或核苷酸与第二序列中相应位置上的相同时，则这些分子在该位置是相同的。
[0290]
考虑到用于两个序列的最佳比对而需要引入的缺口数和每个缺口的长度，两条序列之间的百分比相同性与序列共有相同位置的数目相关。
[0291]
序列的比较和两个序列之间百分比同一性的确定可以使用数学算法来完成。在一个实施方式中，两条氨基酸序列之间的百分比相同性可以使用needleman和wunsch(j.mol.biol.(48):444-453(1970))算法确定，该算法已经结合到gcg软件包中的gap程序中(可从http://www.gcg.com获得)，使用blossum 62矩阵或pam250矩阵，缺口权重为16、14、12、10、8、6或4，长度权重为1、2、3、4、5或6。在某些实施方式中，两条核苷酸序列之间的相同性百分比使用gcg软件包中的gap程序(可从http://www.gcg.com获得)，采用nwsgapdna.cmp矩阵和缺口权重40、50、60、70或80，长度权重1、2、3、4、5或6进行计算。一组合适的参数(以及除非另有说明而应采用的参数组)为blossum 62评分矩阵，其缺口罚分为12，缺口延伸罚分为4，译码缺口罚分为5。
[0292]
两条氨基酸或核苷酸序列之间的相同性百分比也可以使用e.meyers和w.miller(cabios,4:11-17(1989))的算法确定，该算法已被并入align程序(版本2.0)，使用pam120权重残基表，缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
[0293]
本文公开的核酸和蛋白质序列还可以用作“查询序列”来对公共数据库进行搜索，以例如鉴定其他家族组成部分或相关序列。这类搜索可使用altschul等，1990，j.mol.biol.，215:403-10的nblast和xblast程序(2.0版本)来运行。可以使用nblast程序进行blast核苷酸搜索，评分＝100，字长＝12，以获得与本文所述核酸同源的核苷酸序列。可利用xblast程序进行blast蛋白质搜索，评分＝50，字长＝3，以获得与本文所述蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了获得出于比较目的的缺口比对结果，可如altschul等，1997，nucleic acids res.，25:3389-3402所述利用缺口blast。利用blast和缺口blast程序时，可使用各程序(例如xblast和nblast)的默认参数。参见www.ncbi.nlm.nih.gov。
[0294]
如本文所用，术语“在低严格、中等严格、高严格或极高严格条件下杂交”是指杂交和洗涤的条件。进行杂交反应的指导可见于current protocols in molecular biology(《新编分子生物学实验指南》，约翰威利父子出版公司(john wiley&sons),纽约州(1989),6.3.1-6.3.6)，纳入本文作为参考。该参考文献中描述了水性和非水性方法，可采用这两种方法中的任一种。本文涉及的特定杂交条件如下：1)低严格杂交条件，在约45℃的6x氯化钠/柠檬酸钠(ssc)中，然后在0.2x ssc、0.1％sds中至少50℃下进行两次洗涤(洗涤温度可提高至55℃适用于低严格条件)；2)中等严格杂交条件，在约45℃左右的6x-ssc中，然后在0.2x ssc、0.1％sds(60℃)中进行一次或多次洗涤；3)高严格杂交条件，在约45℃左右的6x-ssc中，然后在0.2x ssc、0.1％sds(65℃)中进行一次或多次洗涤，和优选4)极高严格杂交条件是0.5m磷酸钠，7％sds，65℃，然后在0.2x ssc、1％sds(65℃)中进行一次或多次洗涤。极高严格条件4)是合适的条件，且为应采用的条件(除非另有说明)。
[0295]
应理解，本文所述分子可具有其它保守或非必需的氨基酸取代，其不对分子功能产生实质性影响。
[0296]
术语“氨基酸”涵盖了包含氨基官能团和酸官能团且能够被包含于天然存在氨基酸形成的聚合物的所有分子，不论其为天然或合成分子。示例性氨基酸包括天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；以及前述中任意的所有立体异构体。如本文所用，术语“氨基酸”包括d-和l-镜像异构体和模拟肽。
[0297]“保守性氨基酸取代”是其中一个氨基酸残基被具有相似侧链的另一个氨基酸残基替代的情况。本领域已定义具有带相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电极性侧链的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-分支侧链的氨基酸(如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
[0298]
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”(若为单链)在本文中可互换使用，指任何长度的氨基酸的聚合物。聚合物可以是线性或支化聚合物，可以包含经修饰的氨基酸，并且可间插有非氨基酸。该术语也包括修饰的氨基酸聚合物；例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
[0299]
如本领域技术人员所认识到的，蛋白质片段、功能性蛋白质结构域和同源蛋白质也被认为在本发明的范围内。例如，本文提供了参考蛋白质的任何蛋白质片段(意指比参考多肽序列短至少一个氨基酸残基但其它方面相同的多肽序列)，其长度为5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80、90、100或大于100个氨基酸。在另一个示例中，本发明可使用包含与本文所述的任何序列具有约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约98％或约100％相同性的约20，约30，约40，约50或约100个氨基酸的序列段(stretch)的任何蛋白质。在一个实施方式中，根据本公开内容使用的蛋白质序列包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个突变，如本文提供或引用的任何序列中所示。
[0300]
术语“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“多核苷酸序列”和“多核苷酸”在本文中可互换使用。它们指任何长度的核苷酸聚合形式，不论是脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或它们的类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可被进一步修饰，如通过与标记性组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组、cdna、半合成或合成来源的多核苷酸，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
[0301]
本文所用术语“分离的”指，某一物质是从其原生或天然环境(例如，若其是天然产生的，则从天然环境)脱离。例如，活体动物中存在的天然多核苷酸或多肽不是分离的，但与天然系统中的某些或所有共存物质分离的该多核苷酸或多肽则是分离的。此类多核苷酸可为载体的部分和/或此类多核苷酸或多肽可为组合物的部分，但其仍为分离的，这是因为该载体或组合物不是该多核苷酸或多肽天然存在环境的一部分。
[0302]
如本文所用，术语“治疗”病症(例如骨髓瘤)是指，在一个实施方式中，具有病症(例如骨髓瘤)和/或经历了病症(例如骨髓瘤)症状的对象(例如人类)在接受了抗体分子的情况下将比未曾接受该抗体分子的情况经受更轻的严重程度的症状和/或恢复得更快。在一个实施方式中，当治疗骨髓瘤时，在对骨髓瘤进行有效治疗之后，骨髓活检将显示较少的克隆浆细胞。例如，在给予本文所述的抗体分子以有效治疗骨髓瘤后，诊断测定法将在对象的生物样品中检测到较少的克隆浆细胞。其它测定法，尿液检查或血液检查也可用于监测患者的治疗，或在治疗骨髓瘤后检测对象中骨髓瘤症状的存在情况，例如存在减少(或不存
在)。在一个实施方式中，当治疗骨髓瘤时，在有效治疗骨髓瘤之后，血清或尿液中β2微球蛋白(β2m)的水平将降低。治疗可为例如部分或完全减轻、改善、缓解、抑制或降低病症的严重性和/或减少发病率，以及可任选地延迟病症(例如骨髓瘤)的一种或多种后果或症状、特征和/或病因的显现或发作。在一个实施方式中，对于不显示病症(例如骨髓瘤)的某些迹象的对象和/或仅显示病症的早期迹象(例如肾病)的对象进行治疗。在一个实施方式中，治疗针对具有病症(例如骨髓瘤)的一种或多种已确定迹象的对象进行。在一个实施方式中，治疗被诊断为患有疾病(例如骨髓瘤)的对象。
[0303]
如本文所用，术语预防摂疾病(例如骨髓瘤)是指如果对象(例如人)接受抗体分子，则该对象(例如人)不太可能患上该疾病(例如骨髓瘤)。
[0304]
下文中进一步详细描述了本文所述组合物和方法的各个方面。在整个说明书中提供了其他定义。
[0305]
il-2制剂
[0306]
本公开提供了il-2制剂，包括但不限于il-2变体、il-2融合蛋白、il-2复合物和il-2偶联物。例如，本文所述的il-2制剂可具有本文所述的一种或多种结构和/或功能性质。在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2变体，该变体包含本文所述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2变体，该变体包含表9中描述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2变体，该变体包含表9中描述的氨基酸序列，或其部分。在一个实施方式中，il-2制剂或其部分由包含本文(例如表10)描述的核苷酸序列的核酸编码。单独或组合的一种或多种氨基酸变化(例如取代)可提供本文所述的一种或多种期望的生物学性质。在一个实施方式中，il-2制剂可以调节(例如增加)treg增殖、存活、活化和/或功能。在一个实施肤色中，调节对treg是选择性的或特异性的。例如，il-2制剂能够调节treg中的活性，但在非调节性t细胞中促进活性的能力有限或缺乏。在一个实施方式中，il-2制剂包含多肽(本文有时称为“il-2多肽试剂”)。
[0307]
il-2变体
[0308]
在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2变体，例如本文所述的il-2变体。
[0309]
在一个实施方式中，il-2变体包含本文所述的il-2多肽(例如人il-2多肽)或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含表9中描述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体包含或由表9中描述的氨基酸序列或其功能性片段组成。在一个实施方式中，il-2变体由包含本文例如表10中描述的核苷酸序列的核酸编码。
[0310]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，相对于野生型人il-2或参考il-2变体，本文所述的il-2变体具有降低的人cd25和/或降低的人cd122/cd132结合亲和性，相比野生型il-2或其它il-2变体可具有改善的结合并活化调节性t细胞(treg)的功效和/或选择性。本文所述的il-2变体可以被鉴定，例如，通过筛选突变的il-2多肽文库以在所需范围内鉴定具有对人cd25和/或人cd122/cd132的结合亲和性的il-2变体。
[0311]
在一个实施方式中，il-2变体具有本文所述的一种或多种(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多种)性质，例如，相对于野生型il-2或参考il-2变体不同和/或改善的性质。在一个实施方式中，il-2变体包含一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，或更多种)氨基酸变化(例如，取代)，所述氨基酸变化提供相对于野生型il-2或参考il-2变体的不同和/或改善性质。在一个实施方式中，il-2变体具有相对于野生型il-2或参考il-2变体的以
下不同和/或改善的性质(例如，通过本文所述的测定确定)中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，或全部)：
[0312]
i)改变的体外和/或体内表达(例如，增强或增加)；
[0313]
ii)变化的(例如，减少或减低的)体外和/或体内聚集；
[0314]
iii)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内稳定性；
[0315]
iv)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内半衰期；
[0316]
v)改变的(例如，减少或减低的)体内周转率和/或清除率；
[0317]
vi)改变的(例如降低或减低的)体外和/或体内对蛋白水解的敏感性；
[0318]
vii)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内对蛋白水解的抗性；
[0319]
viii)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性；
[0320]
ix)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；
[0321]
x)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对包含人cd122和人cd132的二聚体il-2受体的结合能力和/或结合亲和性；
[0322]
xi)变化的(例如，增强、增加、减少、减低和/或选择性的)体外和/或体内与treg的结合；
[0323]
xii)变化的(例如，增强、增加、减少、减低和/或选择性的)体外和/或体内treg中il-2信号转导通路的活化；
[0324]
xiii)变化的(例如，增强、增加、降低、减低和/或选择性的)体外和/或体内诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0325]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)表达。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，所述il-2变体具有增强或增加的表达(例如，在细菌或哺乳动物细胞中)。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，所述il-2变体具有增强或增加的表达(例如，在细菌或哺乳动物细胞中)。在一个实施方式中，所述il-2变体的表达增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2变体的表达增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，il-2变体在体外和/或体内以更高或增加的水平表达，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，由蛋白质浓度测定确定。在一个实施方式中，所述il-2变体以更高或增加的水平表达，例如增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如由蛋白质浓度测定确定。
[0326]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)聚集。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型
il-2具有减少或减低的聚集。在一个实施方式中，il-2变体相对于参考il-2变体具有减少或减低的聚集。在一个实施方式中，所述il-2变体的聚集减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2变体的聚集减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，包含本文所述il-2变体的il-2制剂在体外和/或体内以较低或减低的水平聚集，例如减低约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如通过解链温度分析(例如，使用荧光法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定。在一个实施方式中，包含本文所述il-2变体的il-2制剂以较低或减低的水平聚集，例如减低约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如通过解链温度分析(例如，使用荧光法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定。
[0327]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)稳定性。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型il-2具有增强或增加的稳定性。在一个实施方式中，所述il-2变体相对于参考il-2变体具有增强或增加的稳定性。在一个实施方式中，所述il-2变体的稳定性增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2变体的稳定性增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，包含本文所述的il-2变体的il-2制剂在体外和/或体内具有增强或增加的稳定性，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，增加约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，如通过酵母表面展示、圆二色性或相关光谱技术和/或解链温度分析(例如，使用荧光法)测定。
[0328]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)半衰期。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型il-2具有增强或增加的半衰期。在一个实施方式中，所述il-2变体相对于参考il-2变体具有增强或增加的半衰期。在一个实施方式中，所述il-2变体的半衰期增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2变体的半衰期增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，包含本文所述的il-2变体的il-2制剂在体外和/或体内具有增强或增加的半衰期，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，大于约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7
倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
[0329]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)周转(turnover)。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型il-2具有减少或减低的周转。在一个实施方式中，il-2变体相对于参考il-2变体具有减少或减低的周转。在一个实施方式中，所述il-2变体的周转减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2变体的周转减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，包含本文所述的il-2变体的il-2制剂在体内具有较低、减少或减低的周转率或周转水平和/或清除率，例如减低约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，减低约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
[0330]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2在体外和/或体内对蛋白水解具有变化的(例如，降低或减低的)敏感性。在一个实施方式中，相对于il-2(例如，野生型人il-2)，il-2变体对蛋白水解的敏感性降低或减低。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，il-2变体对蛋白水解的敏感性降低或减低。在一个实施方式中，所述il-2变体对蛋白水解的敏感性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述il-2变体对蛋白水解的敏感性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0331]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)对蛋白水解的抗性。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型il-2具有增强或增加的对蛋白水解的抗性。在一个实施方式中，il-2变体相对于参考il-2变体具有增强或增加的对蛋白水解的抗性。在一个实施方式中，所述il-2变体对蛋白水解的抗性增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述il-2变体对蛋白水解的抗性增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0332]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)对人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于野生型人il-2，所述il-2变体具有降低或减低的对人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于参考人il-2变体，所述il-2变体具有降低或减低的对人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，所述il-2变体对人cd25的结合能力和/或结合亲和性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，所述il-2变体对人cd25的结合能力和/或结合亲和性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一
个实施方式中，包含本文所述的il-2变体的il-2制剂对cd25(例如人cd25)的结合亲和性降低或减低，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如通过酵母表面展示、表面等离子体共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)测定。
[0333]
在一个实施方式中，il-2变体以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如，解离常数(kd)为约5-500pm，例如，约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，或例如，约10-约400pm，约20-约300pm，约50-约200pm，约100-约150pm，约5-约10pm，例如，约10-约20pm，约20-约30pm，或约30-约40pm，例如，约40-约50pm，约50-约60pm，约60-约70pm，约70-约80pm，约80-约90pm，约90-约100pm，约100-约110pm，约110-约120pm，约120-约130pm，约130-约140pm约140-约150pm，约150-约200pm，约200-约250pm，约250-约300pm，约300-约350pm，约350-约400pm，约400-约500pm，或例如，大于约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，例如通过酵母表面展示、表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)确定。
[0334]
在一个实施方式中，il-2变体以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如，解离常数(kd)为约0.1-10nm，例如，约0.1，约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.5，约2，约2.5，约3，约3.5，约4，约4.5，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，或例如，约0.2-约5nm，约0.5-约2nm，约1-1.5nm，约0.1-约0.2nm，例如，约0.2-约0.3nm，约0.3-约0.4nm，或约0.4-约0.5nm，例如，约0.5-约0.6nm，约0.6-约0.7nm，约0.7-约0.8nm，约0.8-约0.9nm，约0.9-约1nm，约1-约1.5nm，约1.5-约2nm，约2.5-约3nm，约3.5-约4nm，约4-约4.5nm，约4.5-约5nm，约5-约6nm，约6-约7nm，约7-约8nm，约8-约9nm，或约9-约10nm，或例如，大于约0.1，约0.2.约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，例如，通过表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如，octet结合)测定。
[0335]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)对人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，所述il-2变体具有降低或减低的对人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于参考人il-2变体，所述il-2变体具有降低或减低的对人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，所述il-2变体对人cd132的结合能力和/或结合亲和性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，所述il-2变体对人cd132的结合能力和/或结合亲和性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍
约15nm，约15nm-约20nm，约20nm-约25nm，约25-约30nm，约30nm-约40nm，约40nm-约50nm，约50-约60nm，约60-约70nm，约70nm-约80nm，约80nm-约90nm，约90nm-约100nm，约100nm-约110nm，约110nm-约120nm，约120nm-约130nm，约130nm-约140nm，约140nm-约150nm，约150nm-约160nm，约160nm-约170nm，约170nm-约180nm，约180nm-约190nm，约190nm-约200nm，约200nm-约210nm，约210nm-约220nm，约220nm-约230nm，约230nm-约240nm，约240nm-约250nm，约250nm-约260nm，约260nm-约270nm，约270nm-约280nm，约280nm-约290nm，或约290nm-约300nm，或例如，大于约0.2，约0.5，约1，约2，约5，约10，约15，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或大于约300nm，例如，由表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)测定。
[0340]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强、增加和/或选择性的)对treg的结合。在一个实施方式中，il-2变体相对于野生型il-2具有增强或增加的对treg的结合。在一个实施方式中，相对于il-2(例如，野生型人il-2)，il-2变体具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，il-2变体相对于参考il-2变体具有增强或增加的对treg的结合。在一个实施方式中，il-2变体相对于参考il-2变体具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0341]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强、增加和/或选择性的)treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，il-2变体具有增强或增加的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，il-2变体具有对treg中il-2信号转导通路的选择性活化。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，所述il-2变体具有增强或增加的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，所述il-2变体具有对treg中il-2信号转导通路的选择性活化。在一个实施方式中，所述对treg中il-2信号转导通路的活化增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述对treg中il-2信号转导通路的活化增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0342]
在一个实施方式中，il-2变体在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的t辅助ec50/treg ec50比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，150，200，250，300，350，400，450，500，600，700，800，900，1000，1500，2000，2500，或约3000或更大，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，由流式细胞术确定。
[0343]
在一个实施方式中，il-2变体在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的nk细胞ec50/treg ec50比率：大于例如约1，约2，约3，约4，约5，6，
7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，150，200，250，300，350，400，450，500，600，700，800，900，1000，1500，2000，2500，或约3000或更大，或例如，大于1和约1-2，约2-3，约3-4，约4-5，大于1和约1-10，大于1和约1-20，大于1和约1-30，大于1和约1-40，大于1和约1-50，约2-10，约2-20，约2-30，约2-40，2-50，约5-10，约5-20，约5-30，约5-40，约5-50，约10-20，约10-30，约10-40约10-50，约20-40，约20-50，约50-100，约100-200，约200-500，约500-1000，约1000-2000，或约1000-3000，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，例如，由流式细胞术测定。
[0344]
在一个实施方式中，相对于野生型il-2或参考il-2变体，所述il-2变体在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的、增加的和/或选择性的)诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，il-2变体具有增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于野生型il-2，il-2变体具有选择性诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，il-2变体具有增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于参考il-2变体，il-2变体具有选择性诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0345]
在一个实施方式中，所述il-2变体的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力增强或增加，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如由流式细胞术测定。
[0346]
在一个实施方式中，所述il-2变体的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力降低或减低，例如，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对于treg的ec
50
要高约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，约50倍，约100倍，约200倍，约500倍，约1000倍，约2000倍，约5000倍，约10,000倍，约15,000倍，或约20,000倍或更多，例如由流式细胞术测定。
[0347]
在一个实施方式中，本文所述的t辅助细胞是cd45 cd3 cd4 foxp3-细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的treg是cd45 cd3 cd4 foxp3 细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的nk细胞是cd45 cd3-细胞，其为cd56 和/或cd16 ，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的nk细胞是
cd45 cd3-cd56 细胞，例如，通过流式细胞术测定。
[0348]
在一个实施方式中，il-2变体具有与野生型il-2或参考il-2变体相同或基本相同的结构和/或功能性质中的一种或多种。
[0349]
在一个实施方式中，参考il-2变体包含与本文所述的il-2变体具有约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列。在一个实施方式中，参考il-2变体包含seq id no:1(il-2c125s)的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含与seq id no:1的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或98％相同性的氨基酸序列并且包含一个或多个(2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)本文所述的氨基酸变化(例如，取代)。
[0350]
为了本公开的目的，il-2变体位置编号从示例性野生型(wt)人il-2多肽的信号肽之后的第一个氨基酸开始：
[0351]
myrmqllscialslalvtns/a1/p2/t3/s4/s5/s6/t7/k8/k9/t10/q11/l12/q13/l14/e15/h16/l17/l18/l19/d20/l21/q22/m23/i24/l25/n26/g27/i28/n29/n30/y31/k32/n33/p34/k35/l36/t37/r38/m39/l40/t41/f42/k43/f44/y45/m46/p47/k48/k49/a50/t51/e52/l53/k54/h55/l56/q57/c58/l59/e60/e61/e62/l63/k64/p65/l66/e67/e68/v69/l70/n71/l72/a73/q74/s75/k76/n77/f78/h79/l80/r81/p82/r83/d84/l85/i86/s87/n88/i89/n90/v91/i92/v93/l94/e95/l96/k97/g98/s99/e100/t101/t102/f103/m104/c105/e106/y107/a108/d109/e110/t111/a112/t113/i114/v115/e116/f117/l118/n119/r120/w121/i122/t123/f124/c125/q126/s127/i128/i129/s130/t131/l132/t133(seq id no:360；uniprot p60568；信号肽带下划线)。相应的不含信号肽的氨基酸序列如seq id no:1031所示。
[0352]
在一个实施方式中，il-2制剂在对应于人il-2(例如，包含seq id no:1031的氨基酸序列)的一个或多个位置处包含一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。
[0353]
在一个实施方式中，所述il-2变体包含氨基酸序列：a1/p2/x3/s4/s5/s6/t7/k8/k9/t10/q11/l12/q13/l14/e15/x16/l17/l18/l19/d20/l21/q22/m23/i24/l25/n26/g27/x28/n29/n30/y31/k32/n33/p34/x35/l36/t37/x38/m39/l40/t41/x42/k43/f44/y45/m46/p47/k48/k49/a50/t51/e52/l53/k54/h55/l56/q57/c58/l59/e60/e61/e62/l63/k64/p65/l66/e67/x68/x69/l70/n71/l72/a73/x74/s75/k76/n77/f78/h79/l80/r81/p82/r83/x84/l85/i86/x87/x88/i89/n90/v91/x92/v93/l94/e95/l96/k97/g98/s99/e100/t101/t102/f103/m104/c105/e106/y107/a108/d109/e110/t111/a112/t113/i114/v115/e116/f117/l118/n119/r120/w121/i122/t123/f124/x125/x126/s127/i128/i129/s130/t131/l132/t133(seq id no:1032),
[0354]
其中，x3是t或a；x16是h，l或n；x28是i，t或f；x35是k或e；x38是r，e，n或q；x42是f，a，k或q；x68是e，q或n；x69是v或a；x74是q或p；x84是d或v；x87是s或r；x88是n，d，l或s；x92是i或s；x125是c或s；且x126是q，k，r或t，前提条件是il-2变体不包含seq id no:1或1031的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含或由以下组成：本文所述的il-2变体氨基酸序列。
[0355]
在一个实施方式中，il-2变体在本文所述的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个或全部)位置包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在选自t3、h16、i28、k35、r38、f42、e68、v69、q74、d84、s87、n88、i92、c125或q126的一个或
多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个或全部)位置处包含氨基酸改变(例如，取代)。
[0356]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置h16处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置i28处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置k35处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置r38处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置f42处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置e68处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置v69处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置q74处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置d84处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置s87处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置n88处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置i92处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置c125处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置q126处包含氨基酸变化(例如，取代)。
[0357]
在一个实施方式中，所述il-2变体在位置v69、q74或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2变体在位置v69和q74处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2变体包含氨基酸取代v69a。在一个实施方式中，所述il-2变体包含氨基酸取代q74p。
[0358]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、i92、d84或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是h16n、h16l或h16d。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16d。
[0359]
在一个实施方式中，il-2变体在位置i92处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是i92s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代i92s。
[0360]
在一个实施方式中，il-2变体在位置d84处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是d84v。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代d84v。
[0361]
在一个实施方式中，il-2变体在位置k35、r38、f42、e68或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2变体在位置k35处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是k35e。在一个实施方式中，所述il-2变体包含氨基酸取代k35e。
[0362]
在一个实施方式中，il-2变体在位置r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是r38e、r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代r38n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代r38q。
[0363]
在一个实施方式中，il-2变体在位置f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是f42k或f42q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代f42k。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代f42q。
[0364]
在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸变化(例如，取代)：(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在位置h16、i92或d84处中的
一个、两个或全部。在一个实施方式中，il-2变体还包含在位置r38、f42或e68的一个、两个或全部处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0365]
在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸变化(例如，取代)：(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在(a)位置h16、i92或d84的一个、两个或全部处；或(b)位置r38、f42或e68中的一个、两个或全部处。
[0366]
在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸变化(例如，取代)：(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在(a)位置h16、i92或d84的一个、两个或全部处；和(b)位置r38、f42或e68中的一个、两个或全部处。
[0367]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和h16n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和h16l。
[0368]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和i92处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和i92s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和i92s。
[0369]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和d84处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和d84v。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和d84v。
[0370]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和r38q。
[0371]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和f42q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和f42q。
[0372]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和r38n。
[0373]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38e。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和r38e。
[0374]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74、k35和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e和h16n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p、k35e和h16n。
[0375]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74、k35、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。
[0376]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、h16n和r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2变体包
含氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38q。
[0377]
在一个实施方式中，il-2变体在位置i28、e68、s87、n88、q126或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。
[0378]
在一个实施方式中，il-2变体在位置i28处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是i28t或i28f。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代i28t。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代i28f。
[0379]
在一个实施方式中，il-2变体在位置e68处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是e68q或e68n。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代e68q。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代e68n。
[0380]
在一个实施方式中，il-2变体在位置s87处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是s87r。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代s87r。
[0381]
在一个实施方式中，il-2变体在位置n88处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是n88s、n88l或n88d。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代n88s、n88l或n88d。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代n88s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代n88l。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代n88d。
[0382]
在一个实施方式中，il-2变体在位置q126处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代q126t。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代q126k。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代q126r。
[0383]
在一个实施方式中，il-2变体在位置c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代c125s。
[0384]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是t3a。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a。
[0385]
在一个实施方式中，il-2变体在位置v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代v69a、q74p和c125s。
[0386]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3、h16、i92或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、h16n和i92s。
[0387]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。
[0388]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
[0389]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、v69、q74、i92和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。
[0390]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p和c125s。
[0391]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3、h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、h16n或h16l、v69a、q74p，和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a、h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a、h16l、v69a、q74p和c125s。
[0392]
在一个实施方式中，il-2变体在位置t3、v69、q74、i92和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代t3a、v69a、q74p、i92s和c125s。
[0393]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、k35、v69和q74处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、k35e、v69a和q74p。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l、k35e、v69a和q74p。
[0394]
在一个实施方式中，il-2变体在位置h16、r38、v69a和q74p处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是h16l、r38q、v69a和q74p。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l、r38q、v69a和q74p。
[0395]
在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2变体包含氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。
[0396]
存在与本文所述的特定突变组的存在相关联的各种技术效果，例如，一组突变包含位置h16处的氨基酸取代，联合位置v69、q74和c125处的氨基酸取代(例如、h16l、v69a、q74p和c125s)。不希望受理论束缚，认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2变体具有降低的对cd122和/或cd132的结合亲和性，这增加了il-2变体对于调节性t细胞(treg)的功效和选择性(相比其它t细胞类型)。不希望受理论束缚，还认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2变体是显著稳定的，例如，归因于存在稳定化v69a和q74p突变。例如，意外地发现v69a和q74p取代不会显著增加il-2变体对cd25的结合亲和性，而是将il-2变体稳定在足以结合至cd25的活性构象中。因此，包含这些突变的il-2变体能选择性地活化调节性t细胞(treg)并显著稳定。不希望受理论束缚，进一步认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2变体具有降低或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性，这改善了il-2变体的寿命。不希望受理论束缚，还认为在一个实施方式中，包含这些突变的il-2变体基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤细胞(nk)的体外和/或体内扩增、活化、存活和/或增殖。不希望受理论束缚，还认为在一个实施方式中，包含上述突变的il-2变体具有减少的不正确二硫键配对和改进的稳定性，例如，归因于c125s突变的存在。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使得包含这些突变的il-2变体特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病或病症，例如自身免疫疾病。
[0397]
因此，在一个实施方式中，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2变体，包含位置h16处的氨基酸取代与位置v69、q74和c125处的氨基酸取代的组合(例如，h16l、v69a、q74p和c125s)的il-2变体(例如，il-2变体或il-2融合蛋白)具有(尤其)以下性
质中的一项或多项(例如，2、3、4、5、6、7项或全部)：(i)增强或增加的体外或体内稳定性；(ii)降低或减低的体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性；(iii)降低或减低的体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；(iv)降低或减低的il-2变体在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚il-2受体(即人cd122/cd132异二聚体)的亲和性；(v)降低或减低的体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性；(vi)选择性结合至调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；或(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0398]
在一个实施方式中，il-2变体包含或由选自以下的氨基酸序列组成：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0399]
在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:4的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:5的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:11的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1000的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1001的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1002的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序
列。
[0400]
在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:4、5、11、1000、1001或1002中任一个的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:4或5的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:4的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:5的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:11的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1000的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1001的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:1002的氨基酸序列或其功能性片段。
[0401]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含seq id no:5的氨基酸序列或其功能性片段或由其组成的il-2变体可具有至少一种或多种以下有利性质：(i)与其它t细胞类型相比，对cd122和/或cd132的结合亲和性降低，这增加了il-2制剂对调节性t细胞(treg)的功效和选择性；(ii)显著稳定，例如，归因于稳定化v69a和q74p突变的存在；(iii)具有减少或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性，可延长il-2制剂的寿命；(iv)在体外和/或体内基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤(nk)细胞的扩增、活化、存活和/或增殖；和/或(v)具有减少的不正确的二硫键配对和提高的稳定性，例如，归因于c125s突变的存在。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使包含seq id no:5的氨基酸序列或由其组成的il-2变体，特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病和病症，例如自身免疫性疾病。
[0402]
因此，在一个实施方式中，包含或由以下组成氨基酸序列组成的il-2变体：氨基酸序列seq id no:5或其功能性片段，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2变体，尤其具有以下性质中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7种或全部)：(i)增强或增加的体外或体内稳定性；(ii)降低或减低的体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性；(iii)降低或减低的体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；(iv)降低或减低的il-2变体在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚体il-2受体(即人cd122/cd132异二聚体)的亲和性；(v)降低或减低或基本不变的体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性；(vi)选择性结合调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；或(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0403]
如本文进一步描述的，本公开提供了包含本文描述的il-2变体的il-2融合蛋白、il-2复合物和il-2偶联物。在一个实施方式中，归因于本文所述il-2变体的一种或多种不同和/或改善的性质被维持、转移或赋予il-2融合蛋白、il-2复合物或il-2。出于本公开的
目的，术语“il-2变体”和“il-2突变蛋白”在本文中可以互换使用。
[0404]
在一个实施方式中，il-2变体包含多肽(本文有时称为“il-2变体多肽”)。本公开提供了编码本文描述的il-2变体的分离的核酸分子，及其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于rna、基因组dna和cdna。
[0405]
il-2融合蛋白
[0406]
在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2融合蛋白，例如本文所述的il-2融合蛋白。
[0407]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2变体，例如本文所述的il-2变体。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含表9中描述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含表9中描述的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2变体由包含本文例如表10中描述的核苷酸序列的核酸编码。
[0408]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，相对于包含野生型人il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白具有减少的人cd25和/或减少的人cd122/cd132结合亲和性的本文所述的il-2融合蛋白对于结合至和活化调节性t细胞(treg)可具有改善的功效和/或选择性，相比于包含野生型人il-2的il-2融合蛋白或其它il-2融合蛋白。
[0409]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含本文所述的一种或多种(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种)性质，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白的不同和/或改善的性质。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含能够提供相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白的不同和/或改善的性质的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)氨基酸改变(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白具有相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白的以下不同和/或改善的性质(例如，如本文所述的试验所测定)中的一种或多种(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12种或全部)：
[0410]
i)改变的体外和/或体内表达(例如，增强或增加)；
[0411]
ii)变化的(例如，减少或减低的)体外和/或体内聚集；
[0412]
iii)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内稳定性；
[0413]
iv)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内半衰期；
[0414]
v)改变的(例如，减少或减低的)体内周转率和/或清除率；
[0415]
vi)改变的(例如降低或减低的)体外和/或体内对蛋白水解的敏感性；
[0416]
vii)变化的(例如，增强或增加的)体外和/或体内对蛋白水解的抗性；
[0417]
viii)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性；
[0418]
ix)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；
[0419]
x)变化的(例如，降低或减低的)体外和/或体内对包含人cd122和人cd132的二聚体il-2受体的结合能力和/或结合亲和性；
[0420]
xi)变化的(例如，增强、增加、减少、减低和/或选择性的)体外和/或体内与treg的结合；
[0421]
xii)变化的(例如，增强、增加、减少、减低和/或选择性的)体外和/或体内treg中il-2信号转导通路的活化；或
[0422]
xiii)变化的(例如，增强、增加、降低、减低和/或选择性的)体外和/或体内诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0423]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)表达。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的表达(例如，在细菌或哺乳动物细胞中)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白相对于参考il-2融合蛋白具有增强或增加的表达(例如，在细菌或哺乳动物细胞中)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的表达增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白的表达增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白在体外和/或体内以更高或增加的水平表达，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，由蛋白质浓度测定确定。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白以更高或增加的水平表达，例如增加约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，由蛋白质浓度测定确定。
[0424]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)聚集。在一个实施方式中，il-2融合蛋白相对于野生型il-2具有减少或减低的聚集。在一个实施方式中，il-2融合蛋白相对于参考il-2融合蛋白具有减少或减低的聚集。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的聚集减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白的聚集减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内以较低或减低的水平聚集，例如减低约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，如通过解链温度分析(例如，使用荧光法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白以较低或减低的水平聚集，例如减低约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，如通过解链温度分析(例如，使用荧光法)、动态光散射和/或尺寸排阻色谱法测定。
[0425]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)稳定性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的稳定性。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或
增加的稳定性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的稳定性增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白的稳定性增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有增强或增加的稳定性，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，增加约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，如通过酵母表面展示、圆二色性或相关光谱技术和/或解链温度分析(例如，使用荧光法)测定。
[0426]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)半衰期。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的半衰期。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的半衰期。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的半衰期增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白的半衰期增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有增强或增加的半衰期，例如增加约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，大于约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
[0427]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)周转。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有减少或减低的周转。在一个实施方式中，il-2融合蛋白相对于参考il-2融合蛋白具有减少或减低的周转。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的周转减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，il-2融合蛋白的周转减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在体内具有较低、减少或减低的周转率或周转水平和/或体内清除率，例如减低约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约100％或更多，或例如，减低约0.5倍、约1倍、约1.5倍、约2倍、约2.5倍、约3倍、约3.5倍、约4倍、约4.5倍、约5倍、约5.5倍、约6倍、约6.5倍、约7倍、约7.5倍、约8倍、约8.5倍、约9倍、约9.5倍、约10倍或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，通过elisa、流式细胞术和/或质谱测定。
[0428]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，本公开提供的il-2融合蛋白包含在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)蛋白水解敏感性的性质。在一个实施方式中，相对于il-2(例如，野生型人il-2)，il-2融合蛋白对蛋白水解的敏感性降低或减低。在一个实施方式中，il-2融合蛋白相对于参考il-2融合蛋白具有减少或减低的蛋白水解敏感性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对蛋白水解的敏感性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对蛋白水解的敏感性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0429]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的或增加的)蛋白水解抗性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的蛋白水解抗性。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的蛋白水解抗性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对蛋白水解的抗性增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对蛋白水解的抗性增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0430]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)对于人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于野生型人il-2，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对人cd25的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对人cd25的结合能力和/或结合亲和性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对人cd25的结合能力和/或结合亲和性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对cd25(例如人cd25)的结合亲和性降低或减低，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如通过酵母表面展示、表面等离子体共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)测定。
[0431]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如，解离常数(kd)为约5-500pm，例如，约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，或例如，约10-约400pm，约20-约300pm，约50-约200pm，约100-约150pm，约5-约10pm，例如，约10-约20pm，约20-约30pm，或约30-约40pm，例如，约40-约50pm，约50-约60pm，约60-约70pm，约70-约80pm，约80-约90pm，约90-约100pm，约100-约110pm，约110-约120pm，约
120-约130pm，约130-约140pm约140-约150pm，约150-约200pm，约200-约250pm，约250-约300pm，约300-约350pm，约350-约400pm，约400-约500pm，或例如，大于约5，约10，约15，约20，约25，约30，约35，约40，约45，约50，约55，约60，约65，约70，约75，约80，约85，约90，约95，约100，约105，约110，约115，约120，约125，约130，约135，约140，约145，约150，约200，约250，约300，约350，约400，约450，或约500pm，例如通过酵母表面展示、表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)确定。
[0432]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白以低亲和性结合cd25(例如人cd25)，例如，解离常数(kd)为约0.1-10nm，例如，约0.1，约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.5，约2，约2.5，约3，约3.5，约4，约4.5，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，或例如，约0.2-约5nm，约0.5-约2nm，约1-1.5nm，约0.1-约0.2nm，例如，约0.2-约0.3nm，约0.3-约0.4nm，或约0.4-约0.5nm，例如，约0.5-约0.6nm，约0.6-约0.7nm，约0.7-约0.8nm，约0.8-约0.9nm，约0.9-约1nm，约1-约1.5nm，约1.5-约2nm，约2.5-约3nm，约3.5-约4nm，约4-约4.5nm，约4.5-约5nm，约5-约6nm，约6-约7nm，约7-约8nm，约8-约9nm，或约9-约10nm，或例如，大于约0.1，约0.2.约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，或约10nm，例如，通过表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如，octet结合)测定。
[0433]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)对于人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对人cd132的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对人cd132的结合能力和/或结合亲和性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对人cd132的结合能力和/或结合亲和性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0434]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，减少或减低的)对于包含人cd122和人cd132的人二聚il-2受体的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对包含人cd122和人cd132的人二聚il-2受体的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有降低或减低的对包含人cd122和人cd132的人二聚il-2受体的结合能力和/或结合亲和性。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对包含人cd122和人cd132的人二聚il-2受体的结合能力和/或结合亲和性减低约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对包含人cd122和人cd132的人二聚il-2受体的结合能力和/或结合亲和性减低约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0435]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的、增加的和或选择性的)与treg的结合。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合
蛋白具有增强或增加的与treg的结合。在一个实施方式中，相对于il-2(例如，野生型人il-2)，所述il-2融合蛋白具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的对treg的结合。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0436]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白对cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)的结合亲和性降低或减低，例如减低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％，或更多，或减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，或更多，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如通过酵母表面展示、表面等离子体共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)测定。
[0437]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白以低亲和性结合cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-20nm，例如，约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4.约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，或例如，约0.5-约15nm，约1-约10nm，约2-约5nm，约0.2-约0.3nm，约0.3-约0.4nm，约0.4-约0.5nm，约0.5-约0.6nm，约0.6-约0.7nm，约0.7-约0.8nm，约0.8-约0.9nm，约0.9-约1nm，约1-约1.1nm，约1.1-约1.2nm，约1.2-约1.3nm，约1.3-约1.4nm，约1.4-约1.5nm，约1.5-约2nm，约2-约3nm，约3-约4nm，约4-约5nm，约5-约6nm，约6-约7nm，约7-约8nm，约8-约9nm，约9-约10nm，约10-约11nm，约11-约12nm，约12-约13nm，约13-约14nm，约14-约15nm，约15-约16nm，约16-约17nm，约17-约18nm，约18-约19nm，或约19-约20nm，或例如，大于约0.2，约0.3，约0.4，约0.5，约0.6，约0.7，约0.8，约0.9，约1，约1.1，约1.2，约1.3，约1.4.约1.5，约2，约3，约4，约5，约6，约7，约8，约9，约10，约11，约12，约13，约14，约15，约16，约17，约18，或约20nm，例如，通过酵母表面展示测定。
[0438]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白以低亲和性结合cd122/cd132异二聚体(例如人cd122/cd132异二聚体)，例如，解离常数(kd)为约0.2-300nm，例如，约0.2nm，约0.5nm，约1nm，约2nm，约5nm，约10nm，约15nm，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或约300nm，或例如，约0.5-约15nm，约1-约10nm，约2-约5nm，约0.2nm-约0.5nm，约0.5nm-约1nm，约1-约2nm，约2nm-约5nm，约5nm-约10nm，约10nm-约15nm，约15nm-约20nm，约20nm-约25nm，约25-约30nm，约30nm-约40nm，约40nm-约50nm，约50-约60nm，约60-约70nm，约70nm-约80nm，约80nm-约90nm，约90nm-约100nm，约100nm-约110nm，约110nm-约120nm，约120nm-约130nm，约130nm-约140nm，约140nm-约150nm，约150nm-约160nm，约160nm-约170nm，约170nm-约180nm，约180nm-约190nm，约190nm-约
200nm，约200nm-约210nm，约210nm-约220nm，约220nm-约230nm，约230nm-约240nm，约240nm-约250nm，约250nm-约260nm，约260nm-约270nm，约270nm-约280nm，约280nm-约290nm，或约290nm-约300nm，或例如，大于约0.2，约0.5，约1，约2，约5，约10，约15，约20nm，约25nm，约30nm，约40nm，约50nm，约60nm，约70nm，约80nm，约90nm，约100nm，约110nm，约120nm，约130nm，约140nm，约150nm，约160nm，约170nm，约180nm，约190nm，约200nm，约210nm，约220nm，约230nm，约240nm，约250nm，约260nm，约270nm，约280nm，约290nm，或大于约300nm，例如，由表面等离子共振(例如biacore)和/或生物层干涉测量法(例如octet结合)测定。
[0439]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的、增加的和或选择性的)与treg的结合。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的与treg的结合。在一个实施方式中，相对于il-2(例如，野生型人il-2)，所述il-2融合蛋白具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的对treg的结合。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有选择性的对treg的结合。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述对treg的结合增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0440]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的、增加的和或选择性的)treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，il-2融合蛋白具有增强或增加的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，il-2融合蛋白具有选择性的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有选择性的treg中il-2信号转导通路的活化。在一个实施方式中，所述对treg中il-2信号转导通路的活化增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％，或约100％，或更多。在一个实施方式中，所述对treg中il-2信号转导通路的活化增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0441]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的t辅助ec50/treg ec50比率：大于约1，约2，约3，约4，约5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，150，200，250，300，350，400，450，500，600，700，800，900，1000，1500，2000，2500，或约3000或更大，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，由流式细胞术确定。
[0442]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在体外和/或体内选择性活化t调节细胞中的il-2信号转导，例如，具有以下的nk细胞ec50/treg ec50比率：大于例如约1，约2，约3，约4，约5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，
35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95，100，150，200，250，300，350，400，450，500，600，700，800，900，1000，1500，2000，2500，或约3000或更大，或例如，大于1和约1-2，约2-3，约3-4，约4-5，大于1和约1-10，大于1和约1-20，大于1和约1-30，大于1和约1-40，大于1和约1-50，约2-10，约2-20，约2-30，约2-40，2-50，约5-10，约5-20，约5-30，约5-40，约5-50，约10-20，约10-30，约10-40约10-50，约20-40，约20-50，约50-100，约100-200，约200-500，约500-1000，约1000-2000，或约1000-3000，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，例如，由流式细胞术测定。
[0443]
在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白在体外和/或体内具有变化的(例如，增强的、增加的和/或选择性的)诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有选择性的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，相对于参考il-2融合蛋白，所述il-2融合蛋白具有选择性的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。在一个实施方式中，诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力增加约1％、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或约100％或更多。在一个实施方式中，诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力增加约0.5倍、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或约10倍或更多。
[0444]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力增强或增加，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，对于treg的ec
50
要低约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍或更多，例如由流式细胞术测定。
[0445]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白的诱导或促进t调节细胞活性的功效和/或能力降低或减低，例如，相对于包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白，对于treg的ec
50
要高约1％，约2％，约3％，约4％，约5％，约10％，约15％，约20％，约25％，约30％，约35％，约40％，约45％，约50％，约55％，约60％，约65％，约70％，约75％，约80％，约85％，约90％，约95％，约100％或更多，或例如，减低约0.5倍，约1倍，约1.5倍，约2倍，约2.5倍，约3倍，约3.5倍，约4倍，约4.5倍，约5倍，约5.5倍，约6倍，约6.5倍，约7倍，约7.5倍，约8倍，约8.5倍，约9倍，约9.5倍，约10倍，约50倍，约100倍，约200倍，约500倍，约1000倍，约2000倍，约5000倍，约10,000倍，约15,000倍，或约20,000倍或更多，例如由流式细胞术测定。
[0446]
在一个实施方式中，本文所述的t辅助细胞是cd45 cd3 cd4 foxp3-细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的treg是cd45 cd3 cd4 foxp3 细胞，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的nk细胞是cd45 cd3-细胞，其为
cd56 和/或cd16 ，例如，通过流式细胞术测定。在一个实施方式中，本文所述的nk细胞是cd45 cd3-cd56 细胞，例如，通过流式细胞术测定。
[0447]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白具有与包含野生型il-2的il-2融合蛋白或参考il-2融合蛋白相同或基本相同的结构和/或功能性质中的一种或多种。
[0448]
在一个实施方式中，参考il-2融合蛋白包含与本文所述的il-2融合蛋白具有约75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列。在一个实施方式中，参考il-2融合蛋白包含il-2变体，所述变体包含seq id no:57的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含与seq id no:57的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％或98％相同性的氨基酸序列并且包含一个或多个(2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个)本文所述的氨基酸变化(例如，取代)。
[0449]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含本文所述的il-2多肽(例如，人il-2多肽)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白由包含本文所述核苷酸序列的核酸编码。
[0450]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在本文所述的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个或全部)il-2中的位置包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白在选自il-2中的t3、h16、i28、k35、r38、f42、e68、v69、q74、d84、s87、n88、i92、c125或q126的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14个或全部)位置处包含氨基酸改变(例如，取代)。
[0451]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置t3处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置h16处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置i28处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置k35处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置r38处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置f42处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置e68处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置v69处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置q74处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置d84处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置s87处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置n88处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置i92处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置c125处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置q126处包含氨基酸变化(例如，取代)。
[0452]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74或两者处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白在il-2中的位置v69和q74处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q74p。
[0453]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置h16、i92、d84或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置h16处包含氨
基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是h16n、h16l或h16d。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16l。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16d。
[0454]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置i92处包含氨基酸变化(例如取代)，任选地其中氨基酸取代是i92s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代i92s。
[0455]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置d84处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是d84v。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代为d84v。
[0456]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置k35、r38、f42、e68或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置k35处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是k35e。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代k35e。
[0457]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置r38处包含氨基酸变化(例如取代)，任选地其中氨基酸取代是r38e、r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代r38n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代r38q。
[0458]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是f42k或f42q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代f42k。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代f42q。
[0459]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸变化(例如，取代)：il-2中的(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在位置h16、i92或d84中的一个、两个或全部处。在一个实施方式中，il-2融合蛋白还包含在il-2中的位置r38、f42或e68的一个、两个或全部处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0460]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸变化(例如，取代)：il-2中的(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在(a)位置h16、i92或d84的一个、两个或全部处；或(b)位置r38、f42或e68中的一个、两个或全部处。
[0461]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸变化(例如，取代)：il-2中的(i)在(a)位置v69和q74处，(b)位置k35处，或(c)位置v69、q74和k35处；(ii)在(a)h16、i92或d84位置的一个、两个或全部处；和(b)位置r38、f42或e68中的一个、两个或全部处。
[0462]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和h16n或h16l。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和h16n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和h16l。
[0463]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和i92处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和i92s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和i92s。
[0464]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和d84处包含氨基酸变
化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和d84v。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和d84v。
[0465]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和r38q。
[0466]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和f42处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和f42q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和f42q。
[0467]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和r38n。
[0468]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38e。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和r38e。
[0469]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74、k35和h16处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e和h16n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p、k35e和h16n。
[0470]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74、k35、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。
[0471]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74、h16和r38处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p、h16n和r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38n或r38q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2的氨基酸取代v69a、q74p、h16n和r38q。
[0472]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置i28、e68、s87、n88、q126或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)。
[0473]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置i28处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是i28t或i28f。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代i28t。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代i28f。
[0474]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置e68处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是e68q或e68n。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代e68q。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代e68n。
[0475]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置s87处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是s87r。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代s87r。
[0476]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置n88处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是n88s、n88l或n88d。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代n88s、n88l或n88d。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨
基酸取代n88s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代n88l。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代n88d。
[0477]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置q126处包含氨基酸变化(例如取代)，任选地其中氨基酸取代是q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q126t、q126k或q126r。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q126t。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q126k。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代q126r。
[0478]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代c125s。
[0479]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置t3处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代是t3a。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代t3a。
[0480]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代v69a、q74p和c125s。
[0481]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置t3、h16、i92或其组合处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的t3a、h16n和i92s。
[0482]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16n、v69a、q74p和c125s。
[0483]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的h16l、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16l、v69a、q74p和c125s。
[0484]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置h16、v69、q74、i92和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。
[0485]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置t3、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的t3a、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代t3a、v69a、q74p和c125s。
[0486]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的位置t3、h16、v69、q74和c125处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的t3a、h16n或h16l、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含氨基酸取代t3a、h16n、v69a、q74p和c125s。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2中的氨基酸取代t3a、h16l、v69a、q74p和c125s。
[0487]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白在il-2中的t3、v69、q74、i92和c125位置包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是il-2中的t3a、v69a、q74p、i92s和
no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0494]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含il-2变体，所述il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:4的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含il-2变体，所述il-2变体包含以下氨基酸序列或由其组成：seq id no:5的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:11的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1000的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1001的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1002的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0495]
在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:4、5、11、1000、1001或1002中任一个的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:4或5的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:4的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:5的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:11的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:1000的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:1001的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含seq id no:1002的氨基酸序列或其功能性片段。
[0496]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，包含seq id no:5的氨基酸序列或其功能性片段的il-2融合蛋白可具有至少一种或多种以下有利性质：(i)与其它t细胞类型相比，对cd122和/或cd132的结合亲和性降低，这增加了il-2制剂对调节性t细胞(treg)的功效和选择性；(ii)显著稳定，例如，归因于稳定化v69a和q74p突变的存在；(iii)具有减少或
no:62，seq id no:63，seq id no:64，seq id no:65，seq id no:66，seq id no:67，seq id no:68，seq id no:69，seq id no:70，seq id no:71，seq id no:72，seq id no:73，seq id no:74，seq id no:75，seq id no:76，seq id no:77，seq id no:78，seq id no:79，seq id no:80，seq id no:81，seq id no:82，seq id no:83，seq id no:84，seq id no:85，seq id no:86，seq id no:87，seq id no:88，seq id no:89，seq id no:90，seq id no:91，seq id no:92，seq id no:93，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0502]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:94，seq id no:95，seq id no:96，seq id no:97，seq id no:98，seq id no:99，seq id no:100，seq id no:101，seq id no:102，seq id no:103，seq id no:104，seq id no:105，seq id no:106，seq id no:107，seq id no:108，seq id no:109，seq id no:110，seq id no:111，seq id no:112，seq id no:113，seq id no:114，seq id no:115，seq id no:116，seq id no:117，seq id no:118，seq id no:119，seq id no:120，seq id no:121，seq id no:122，seq id no:123，seq id no:124，seq id no:125，seq id no:126，seq id no:127，seq id no:128，seq id no:129，seq id no:130，或seq id no:131，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0503]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:132，seq id no:133，seq id no:134，seq id no:135，seq id no:136，seq id no:137，seq id no:138，seq id no:139，seq id no:140，seq id no:141，seq id no:142，seq id no:143，seq id no:144，seq id no:145，seq id no:146，seq id no:147，seq id no:148，seq id no:149，seq id no:150，seq id no:151，seq id no:152，seq id no:153，seq id no:154，seq id no:155，seq id no:156，seq id no:157，seq id no:158，seq id no:159，seq id no:160，seq id no:161，seq id no:162，seq id no:163，seq id no:164，seq id no:165，seq id no:166，seq id no:167，seq id no:168，或seq id no:169，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0504]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:170，seq id no:171，seq id no:172，seq id no:173，seq id no:174，seq id no:175，seq id no:176，seq id no:177，seq id no:178，seq id no:179，seq id no:180，seq id no:181，seq id no:182，seq id no:183，seq id no:184，seq id no:185，seq id no:186，seq id no:187，seq id no:188，seq id no:189，seq id no:190，seq id no:191，seq id no:192，seq id no:193，seq id no:194，seq id no:195，seq id no:196，seq id no:197，seq id no:198，seq id no:199，seq id no:200，seq id no:201，seq id no:202，seq id no:203，seq id no:204，seq id no:205，seq id no:206，或seq id no:207，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的
id no:339，seq id no:340，seq id no:341，seq id no:342，seq id no:343，seq id no:344，seq id no:345，seq id no:346，seq id no:347，seq id no:348，seq id no:349，seq id no:350，seq id no:351，seq id no:352，seq id no:353，seq id no:354，seq id no:355，seq id no:356，seq id no:357，seq id no:358，或seq id no:359，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0509]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白包含选自以下的氨基酸序列：1004，seq id no:1005，seq id no:1006，seq id no:1007，seq id no:1008，seq id no:1009，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1004的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1005的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1006的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1007的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。在一个实施方式中，il-2融合蛋白包含以下氨基酸序列：seq id no:1008的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0510]
在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1004-1009中任一个的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1007或1008的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1004的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1005的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1006的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1007的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1008的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，il-2制剂包含seq id no:1009的氨基酸序列或其功能性片段。
[0511]
不希望受理论束缚，还据信在一个实施方式中，包含seq id no:1008的氨基酸序列或其功能性片段的il-2融合蛋白可具有至少一种或多种以下有利性质：(i)与其它t细胞
类型相比，对cd122和/或cd132的结合亲和性降低，这增加了il-2制剂对调节性t细胞(treg)的功效和选择性；(ii)显著稳定，例如，归因于稳定化v69a和q74p突变的存在；(iii)具有减少或减低的对cd25的结合能力和/或结合亲和性，可延长il-2制剂的寿命；(iv)在体外和/或体内基本上不促进t效应细胞和/或自然杀伤(nk)细胞的扩增、活化、存活和/或增殖；(v)具有减少的不正确的二硫键配对和提高的稳定性，例如，归因于c125s突变的存在；和/或(vi)具有减少的效应物功能，例如，通过fc区中的n297g突变导致的减少的fc糖基化。在一个实施方式中，与包含其它h16突变的il-2制剂相比，包含h16l突变的il-2制剂对cd122和/或cd132的结合亲和性降低和/或对treg的功效和选择性高于其它t细胞类型。这些性质使包含seq id no:1008的氨基酸序列的il-2融合蛋白，特别适用于治疗由异常免疫反应引起的疾病和病症，例如自身免疫性疾病。
[0512]
因此，在一个实施方式中，包含以下氨基酸序列的il-2融合蛋白：氨基酸序列seq id no:1008或其功能性片段，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，30，35，40，45或50个氨基酸的氨基酸序列，相对于野生型il-2或不包含所述氨基酸取代的参考il-2融合蛋白，尤其具有以下性质中的一种或多种(例如，2，3，4，5，6，7，8种或全部)：(i)增强或增加的体外或体内稳定性；(ii)降低或减低的体外和/或体内对人cd122的结合能力和/或结合亲和性；(iii)降低或减低的体外和/或体内对人cd132的结合能力和/或结合亲和性；(iv)降低或减低的il-2融合蛋白在体外和/或体内对由人cd122和人cd132构成的异二聚体il-2受体(即人cd122/cd132异二聚体)的亲和性；(v)降低或减低或基本不变的体外和/或体内对人cd25的结合能力和/或结合亲和性；(vi)选择性结合调节性t细胞(例如foxp3
t细胞)；(vii)在体外或体内选择性活化t调节细胞(treg)中的il-2信号转导通路；(viii)增强或增加的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力；或(ix)减少或减低的效应物功能。
[0513]
在一个实施方式中，所述il-2融合蛋白从n端到c端包含本文所述的il-2变体和fc区(例如本文所述的fc区)。在一个实施方式中，融合蛋白还包含il-2变体和fc区之间的接头(例如，本文所述的接头)。在一个实施方式中，il-2融合体形成二聚体，例如同型二聚体。
[0514]
在一个实施方式中，融合蛋白包含一个或多个糖基化位点，或者经糖基化。在另一个实施方式中，融合蛋白不具有糖基化位点，或未经糖基化。
[0515]
在一个实施方式中，融合蛋白中仅有的氨基酸是经典氨基酸。在一个实施方式中，融合蛋白包含天然产生的氨基酸；其类似物、衍生物和同系物；具有变体侧链的氨基酸类似物；和/或任何上述物质的所有立体异构体。融合蛋白可以包含氨基酸的d-或l-光学异构体和肽模拟物。
[0516]
在一个方面，本公开提供了一种制备本文公开的il-2融合蛋白的方法。本文所述的il-2融合蛋白可以通过任何合适的重组dna技术产生。在一个实施方式中，该方法包括在允许产生融合蛋白的条件下培养含有编码il-2融合蛋白的核酸的细胞。在另一个实施方式中，该方法还包括分离或纯化il-2融合蛋白。在又一个实施方式中，该方法还包括在基于细胞的测定或动物模型中评估il-2融合蛋白的功效。在又一个实施方式中，该方法还包括将il-2融合蛋白给予于对象，例如人。
[0517]
本公开提供了编码本文所述的il-2融合蛋白的分离的核酸分子，及其载体和宿主
细胞。核酸分子包括但不限于rna、基因组dna和cdna。
[0518]
il-2复合物
[0519]
在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2复合物，例如本文所述的il-2复合物。在一个实施方式中，il-2复合物是il-2/抗il-2抗体免疫复合物(il-2ic)。
[0520]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，il-2复合物，例如il-2/抗il-2抗体免疫复合物，可以增强il-2的体内生物活性。例如，可以通过将il-2与特异性结合il-2的不同mab复合来调节il-2对细胞(例如treg)的作用。该机制可以包括例如循环中细胞因子半衰期的延长。根据il-2抗体的克隆，il-2ic能选择性地刺激例如cd25
高
细胞(例如，il-2/jes6-1免疫复合物)，或cd122
高
细胞(例如，il-2/s4b6免疫复合物))。例如，il-2/jes6-1免疫复合物高度选择性地刺激调节性t细胞，它们可用于移植和治疗自身免疫性疾病。再如，il-2/s4b6免疫复合物对nk细胞和记忆cd8 t细胞具有高刺活性并且它们可替代癌症免疫治疗中的常规il-2。
[0521]
在一个实施方式中，il-2复合物包含本文所述的il-2变体。在一个实施方式中，il-2复合物包含表9中描述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2复合物包含表9中描述的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，所述il-2复合物包含抗il-2抗体分子。在一个实施方式中，所述il-2复合物包含本文所述的il-2变体和抗il-2抗体分子。在一个实施方式中，所述抗il-2抗体分子能结合il-2变体。在一个实施方式中，所述抗il-2抗体分子能够结合il-2变体和野生型il-2。在一个实施方式中，il-2变体包含本文所述的一个或多个突变。在一个实施方式中，所述一个或多个突变不减少或基本上不减少il-2变体与抗il-2抗体分子的结合。
[0522]
在一个实施方式中，所述il-2复合物包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0523]
在一个实施方式中，il-2复合物调节(例如，刺激)t细胞的一种或多种活性。在一个实施方式中，il-2复合物刺激cd25
高
细胞。在一个实施方式中，il-2复合物刺激treg。在一个实施方式中，il-2复合物刺激cd122
高
细胞。在一个实施方式中，il-2复合物刺激nk细胞和/或记忆cd8 t细胞。在一个实施方式中，il-2复合物选择性地刺激cd25
高
细胞，相比cd122
高
细胞。在一个实施方式中，il-2复合物选择性地刺激cd122
高
细胞，相比cd25
高
细胞。在一个实施方式中，il-2复合物选择性地刺激treg，相比nk细胞和/或记忆cd8 t细胞。在一个实施方式中，il-2复合物选择性地刺激nk细胞和/或记忆cd8 t细胞，相比treg。
[0524]
适用于使用的示例性抗il-2抗体分子描述于例如国际申请公开号wo2016/164937中，其通过引用其全文方式纳入本文。
[0525]
如本文所用术语“抗体分子”是指包含至少一种免疫球蛋白可变结构域序列的蛋白质，例如免疫球蛋白链或其片段。术语“抗体分子”包括例如全长、成熟抗体以及抗体的抗原结合片段。例如，抗体分子可包含重(h)链可变区序列(本文中缩写为vh)和轻(l)链可变区序列(本文中缩写为vl)。在另一个实例中，抗体分子包两条重(h)链可变结构域序列和两条轻(l)链可变结构域序列，从而形成两个抗原结合位点，如fab、fab’、f(ab’)2、fc、fd、fd’、fv、单链抗体(如scfv)、单可变结构域抗体、双抗体(dab)(二价且双特异性)以及嵌合(如人源化)抗体，且可通过修饰完整抗体或采用重组dna技术从头合成的那些产生。这些功能性抗体片段保留了选择性结合其相应抗原或受体的能力。抗体和抗体片段可来自任何抗体类型(包括但不限于igg、iga、igm、igd和ige)，并来自任何抗体亚型(例如igg1、igg2、igg3和igg4)。抗体分子可以是单克隆或多克隆的。抗体分子还可为人、人源化、cdr移植或体外产生的抗体。抗体分子可具有选自igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区。抗体分子还可具有选自κ或λ的轻链。术语“免疫球蛋白(ig)”与本文中的术语“抗体”可互换使用。
[0526]
抗原结合片段的例子包括：(i)fab片段，由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫桥联接的两个fab片段的二价片段；(iii)fd片段，其由vh和ch1结构域组成；(iv)fv片段，其由抗体单臂的vl和vh结构域组成；(v)双抗体(diabody，dab)片段，其由vh结构域组成；(vi)骆驼或骆驼源化可变结构域；(vii)单链fv(scfv)，参见例如bird等，(1988)science 242:423-426；以及huston等，(1988)proc.natl.acad.sci.usa85:5879-5883)；(viii)单域抗体。这些抗体片段可通过任何合适的方法(包括本领域普通技术人员所知的多种常规技术)获得，并且筛选与完整抗体具有相同应用的片段。
[0527]
术语“抗体”包括完整分子及其功能性片段。可改变(例如突变)抗体恒定区以修饰该抗体的性能，例如增加或提高或减少或降低如下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能或补体功能。
[0528]
抗体分子可为单链抗体。可对单链抗体(scfv)进行工程化改造(参见例如colcher,d.等，(1999)ann n y acad sci 880:263-80；以及reiter,y.(1996)clin cancer res 2:245-52)。单链抗体可二聚化或多聚化以产生对相同靶蛋白上不同表位具有特异性的多价抗体。
[0529]
本文所述的抗体分子还可为单域抗体。单域抗体可包括其互补决定区为单域多肽一部分的抗体。实例包括但不限于：重链抗体、天然缺失轻链的抗体、衍生自常规4链抗体的单域抗体、工程改造的抗体和非衍生自抗体的单结构域骨架。单域抗体可为本领域中任何单域抗体或任何未来的单域抗体。单域抗体可衍生自任何物种，包括但不限于：小鼠、人、骆驼、大羊驼、鱼、鲨鱼、羊、兔和牛。根据有些方面，单域抗体是已知为缺失轻链的重链抗体的天然存在单域抗体。此类单域抗体公开于例如wo94/04678。清楚起见，衍生自天然缺失轻链的重链抗体的该可变结构域在本文中称为vhh或纳米抗体以区别于四链免疫球蛋白的常规vh。该vhh分子可衍生自骆驼科(camelidae)物种中生长的抗体，例如衍生自骆驼、大羊驼、单峰驼、羊驼和驮马。除了骆驼科，其他物种也可产生天然缺失轻链的重链抗体；本文也包括了这些vhh。
[0530]
vh和vl区可进一步细分为超变区，称为“互补决定区(cdr)”，其间间插更保守的被称为“框架区(fr或fw)”的区。本文所用术语“互补决定区”和“cdr”是指抗体可变区内赋予
抗原特异性和结合亲和性的氨基酸序列。本文所用术语“框架”，“fw”和“fr”可以互换使用。
[0531]
已采用多种方法精确来划定框架区和cdr的范围(参见kabat,e.a.,等，(1991)sequences of proteins of immunological interest(《热门免疫学蛋白质序列》，第5版，美国公共卫生署，国立卫生研究院，公开号91-3242；chothia,c.等，(1987)j.mol.biol.196:901-917；以及采用牛津分子abm抗体造模软件(oxford molecular’s abm antibody modeling software)所用的abm定义。总体上参见例如《抗体工程化改造实验室手册》(“antibody engineering lab manual”，duebel,s.和kontermann,r.编，springer-verlag公司，海德堡)中的“抗体可变结构域的蛋白质序列和结构分析”(“protein sequence and structure analysis of antibody variable domains”)。在一个实施方式中，使用以下定义：重链可变结构域cdr1的abm定义以及对其他cdr的kabat定义。在一个实施方式中，将kabat定义用于所有cdr。此外，用kabat或abm cdr描述的实施方式也可采用chothia超变环来实施。每一vh和vl通常包括三个cdr和四个fr，其从氨基端到羧基端按照以下顺序排列：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3和fr4。
[0532]
如本文所用，免疫球蛋白可变结构域序列摂是指能形成免疫球蛋白可变结构域结构的氨基酸序列。例如，该序列可包括天然存在可变结构域氨基酸序列的全部或部分。例如，该序列可包含或不包含一个、两个或更多个n-或c-末端氨基酸，或可包含与蛋白质结构形成相容的其他改变。
[0533]
术语“抗原结合区”是指包含形成与抗原或其表位结合界面的决定簇的抗体分子部分。就蛋白质(或蛋白质模拟物)而言，抗原结合区通常包含形成抗原结合界面的一个或多个环(例如至少4个氨基酸或氨基酸模拟物的环)。通常，抗体分子的抗原结合区包含至少一个或两个cdr和/或超变环，或更通常为至少三个、四个、五个或六个cdr和/或超变环。
[0534]
术语“竞争”或“交叉竞争”在本文中可互换使用，是指抗体分子干扰另一抗体分子与目标结合的能力。对结合的干扰可以是直接的或间接的(例如通过抗体分子或目标的变构调控)。抗体分子干扰其他抗体分子与目标结合的程度且由此其是否能被称为竞争，可采用竞争性结合测试(例如facs测试、elisa或biacore测试)确定。在一个实施方式中，竞争性结合测试是定量竞争性测试。在一个实施方式中，在竞争性结合测试(例如本文所述的竞争性测试)中，第一抗体分子与目标的结合有如下减少时，认为该第一抗体分子与第二抗体分子竞争性结合所述目标：减少10％或更多，例如20％或更多，30％或更多，40％或更多，50％或更多，55％或更多，60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，95％或更多，98％或更多，99％或更多。
[0535]
本文所用术语“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”是指具有单一分子组成的抗体分子制备物。单克隆抗体组合物针对具体表位显示单一的结合特异性和亲和性。单克隆抗体的制备可采用杂交瘤技术或不采用杂交瘤技术的方法(例如重组法)。
[0536]“有效/效果上的人(effectively human)”蛋白是不引发中和性抗体应答(例如人抗鼠抗体(hama)应答)的蛋白质。hama在许多情况下(例如若抗体分子在例如治疗慢性或复发性疾病症状时被反复施用的情况下)会造成问题。hama应答可造成反复给予抗体因血清抗体清除率提高(参见例如saleh等，cancer immunol.immunother.32:180-190(1990))以及潜在的过敏反应(参见例如lobuglio等，hybridoma,5:5117-5123(1986))而可能失去效果。
[0537]
抗体分子可为多克隆或单克隆抗体。在一个实施方式中，可重组产生抗体，例如通过任何合适的噬菌体展示或重组方法来产生。
[0538]
各种用于生成抗体的噬菌体展示和组合方法是本领域已知的(如下所述，例如，ladner等，美国专利号5,223,409；kang等，国际公开号wo 92/18619；dower等，国际公开号wo 91/17271；winter等，国际公开号wo 92/20791；markland等，国际公开号wo 92/15679；breitling等，国际公开号wo 93/01288；mccafferty等，国际公开号wo 92/01047；garrard等，国际公开号wo 92/09690；ladner等，国际公开号wo 90/02809；fuchs等，(1991)bio/technology 9:1370 1372；hay等，(1992)hum antibod hybridomas 3:81-85；huse等，(1989)science 246:1275-1281；griffths等，(1993)同上；hawkins等，(1992)j mol biol 226:889；clackson等，(1991)nature 352:624；gram等，(1992)pnas 89:3576-3580；garrad等，(1991)bio/technology 9:1373 1377；hoogenboom等，(1991)nuc acid res 19:4133-4137；和barbas等，(1991)pnas 88:7978-7982，其内容在此全部引入以供参考)。
[0539]
在一个实施方式中，抗体分子是完全人抗体(例如由小鼠产生的抗体，该小鼠在已通过基因工程化改造以产生源自人免疫球蛋白序列的抗体)、或非人抗体，例如啮齿类(小鼠或大鼠)、羊、灵长类(例如猴)、骆驼抗体。在一个实施方式中，非人抗体是啮齿类抗体(小鼠或大鼠抗体)。制备啮齿类抗体的方法是本领域已知的。
[0540]
人单克隆抗体可采用携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠而不是小鼠体系产生。来自用感兴趣抗原免疫的这些转基因小鼠的脾细胞被用于产生分泌人mab的杂交瘤，这些人mab对来自人蛋白质的表位具有结合特异性(参见例如，wood等，国际申请号wo 91/00906,kucherlapati等，pct公开号wo 91/10741；lonberg等，国际申请号wo 92/03918；kay等，国际申请号92/03917；lonberg,n.等，1994nature 368:856-859；green,l.l.等，1994nature genet.7:13-21；morrison,s.l.等，1994proc.natl.acad.sci.usa 81:6851-6855；bruggeman等，1993year immunol 7:33-40；tuaillon等，1993pnas 90:3720-3724；bruggeman等，1991eur j immunol 21:1323-1326)。
[0541]
抗体可为其中的可变区或其部分(例如cdr)在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生的抗体。嵌合、cdr移植以及人源化抗体均包含在本发明中。本发明包括在非人生物(例如大鼠或小鼠)中产生并随后(例如在可变框架或恒定区中)进行修饰以降低人体内抗原性的抗体。
[0542]
可采用任何合适的重组dna技术产生嵌合抗体。本领域中已知多种方法(参见robinson等，国际专利公开号pct/us86/02269；akira,等，欧洲专利申请184,187；taniguchi,m.,欧洲专利申请171,496；morrison等，欧洲专利申请173,494；neuberger等，国际申请wo 86/01533；cabilly等，美国专利号4,816,567；cabilly等，欧洲专利申请125,023；better等，(1988science 240:1041-1043)；liu等，(1987)pnas 84:3439-3443；liu等，1987,j.immunol.139:3521-3526；sun等，(1987)pnas 84:214-218；nishimura等，1987,canc.res.47:999-1005；wood等，(1985)nature 314:446-449；和shaw等，1988,j.natl cancer inst.80:1553-1559)。
[0543]
人源化或cdr移植抗体中(免疫球蛋白重链或轻链的)至少一个或两个但通常为全部三个受者cdr被供者cdr替代。抗体可用至少部分非人cdr进行替换，或仅一些cdr可用非人cdr替换。仅需要替换人源化抗体结合脂多糖所需的cdr数。在一个实施方式中，供者可为
啮齿类抗体，例如大鼠或小鼠抗体，而受者可为人框架或人共有框架。通常，提供cdr的免疫球蛋白被称“供者”，而提供框架区的免疫球蛋白被称作“受者”。在一个实施方式中，供体免疫球蛋白是非人的(例如，啮齿类)。受者框架通常为天然存在(例如人)的框架或共有框架，或与其约85％或更高例如90％、95％、99％或更高相同性的序列。
[0544]
如本文所用，术语“共有序列”是指由相关序列家族中最高频存在氨基酸(或核苷酸)组成的序列(参见例如，winnaker,从基因到克隆(from genes to clones)，verlagsgesellschaft出版公司，德国威因海姆(weinheim,germany)，1987)。在某一蛋白家族中，共有序列中的各位置上是该家族中该位置处出现频率最高的氨基酸。如果两种氨基酸出现频率相同，可将其中任一种包含于共有序列中。“共有框架”是指共有免疫球蛋白序列中的框架区。
[0545]
可采用任何合适的方法将抗体人源化，本领域中已知许多此类方法(参见例如，morrison,s.l.,1985,science 229:1202-1207,oi等，1986,biotechniques 4:214,以及queen等，us 5,585,089、us 5,693,761和us 5,693,762，其全部内容作为参考纳入本文)。
[0546]
可采用cdr移植或cdr取代来产生人源化或cdr移植抗体，可替换免疫球蛋白链中的一个、两个或全部cdr。参见例如美国专利号5,225,539；jones等，1986nature 321:552-525；verhoeyan等，1988science 239:1534；beidler等，1988j.immunol.141:4053-4060；winter us 5,225,539，其全部内容作为参考纳入本文。winter描述了可用于制备人源化抗体的cdr移植方法(英国专利申请gb 2188638a，提交于1987年3月26日；winter us 5,225,539)，其全部内容作为参考纳入本文。
[0547]
还提供了其中特定氨基酸被取代、缺失或插入的人源化抗体。从供者中选择氨基酸的标准描述于例如us 5,585,089，例如us 5,585,089的第12-16栏，其内容通过参考纳入本文。使抗体人源化的其他技术描述于padlan等ep519596 a1(公开于1992年12月23日)。
[0548]
在一个实施方式中，抗体分子所具有的重链恒定区选自例如：igg1、igg2(例如igg2a)、igg3、igg4、igm、iga1、iga2、igd和ige的重链恒定区；具体而言，选自例如igg1、igg2、igg3和igg4的(例如人的)重链恒定区。在另一个实施方式中，抗体分子所具有的轻链恒定区选自例如κ或λ(例如人的)轻链恒定区。可改变(例如突变)恒定区以修饰该抗体分子的性能(例如以增加或减少如下一项或多项：fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基数、效应细胞功能和/或补体功能)。在一个实施方式中，抗体分子具有效应功能且能够固定补体。在另一个实施方式中，抗体分子不募集效应细胞或固定补体。在某些实施方式中，抗体分子结合fc受体的能力降低或不具备该能力。例如，抗体可以是不支持与fc受体结合的同种型或亚型、片段或其他突变体，例如其具有经诱变的fc受体结合区或缺失fc受体结合区。
[0549]
在一个实施方式中，抗体分子的恒定区被改变。改变抗体恒定区的方法是本领域中已知的。具有改变的功能(例如对效应体配体(如细胞上的fcr)或补体的c1成分的亲和力改变)的抗体分子可通过将该抗体恒定部分中的至少一个氨基酸残基替换为不同的残基来产生(参见例如ep388,151a1、美国专利号5,624,821和美国专利号5,648,260，其全部内容通过引用纳入本文)。还包括了使抗体结构稳定的氨基酸突变，例如人igg4中的s228p(eu命名法，kabat命名法中的s241p)。可描述相似类型的改变，其若应用于鼠或其他物种免疫球蛋白将减弱或消除这些功能。
[0550]
在一个实施方式中，抗体分子中的氨基酸仅为标准氨基酸。在一个实施方式中，抗
体分子包含天然存在的氨基酸；其类似物、衍生物及同类物；具有变体侧链的氨基酸类似物；和/或前述中任意的所有立体异构体。抗体分子可包含肽模拟物和氨基酸的d-或l-光学异构体。
[0551]
本文所述抗体分子的多肽可为线性或分支型，其可包含经修饰的氨基酸，且可间插有非氨基酸。还可修饰抗体分子；例如，通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作，如与标记组分偶联来修饰。多肽可从天然来源分离，可采用重组技术由原核或真核宿主产生，或者可为合成方法的产品。
[0552]
本文所述的抗体分子可以非偶联形式单独使用，或可与某些物质结合，所述物质为例如毒素或部分(例如治疗药物；发出辐射的化合物；植物、真菌或细菌源性分子；或生物蛋白(例如蛋白毒素)或颗粒(例如重组病毒颗粒(例如通过病毒包被蛋白))。例如，抗体分子可与放射性同位素(如α-、β-或γ-放射物或β-和γ-放射物)偶合。
[0553]
抗体分子可衍生化为或联接其他功能性分子(例如另一肽或蛋白质)。如本文所用，“衍生化”抗体分子是已被修饰的抗体分子。衍生化的方法包括但不限于：添加荧光部分、放射性核苷酸、毒素、酶或亲和配体(如生物素)。因此，抗体分子包括本文所述抗体的衍生化和其他修饰形式，包括免疫粘附分子。例如，抗体分子可与一个或多个其他分子实体功能性联接(通过化学偶联、遗传融合、非共价关联或其他)，所述其他分子实体为例如另一抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、检测剂、毒素、药剂和/或能介导该抗体或抗体部分与其他分子(如链霉亲和素核心区或多聚组氨酸标签)关联的蛋白质或肽。
[0554]
某些类型的衍生化抗体分子可通过交联两个或多个抗体(相同类型或不同类型，例如用以产生双特异性抗体)来产生。合适的交联剂包括具有通过合适间隔子分隔的两个不同反应基团的异双官能性交联剂(例如间-马来酰亚胺苯甲酰基-n-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双官能性(例如二琥珀酰亚胺基辛二酸酯)交联剂。此类交联剂可获自皮尔斯化学品公司(pierce chemical company)(伊利诺斯州罗克福德)。
[0555]
可用于衍生化(或标记)抗登革热抗体分子的有用的可检测剂包括荧光化合物、各种酶、辅基、发光材料、生物发光材料、荧光发射金属原子(例如铕(eu)和其他镧系原子)以及放射性材料(如下文所述)。示例性荧光检测剂包括荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、5-二甲基胺-1-萘磺酸氯、藻红蛋白等。还可用可检测酶衍生化抗体，所述酶可为例如碱性磷酸酶、辣根过氧化酶、β-半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶、葡萄糖氧化酶等。用可检测酶衍生抗体时，可采用加入该酶用来产生可检测反应产物的其他试剂来检测该抗体。例如，当存在检测剂辣根过氧化酶时，加入过氧化氢和二氨基联苯胺产生可检测的颜色反应产物。也可用辅基(例如链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素)来衍生抗体分子。例如，可用生物素衍生抗体，并通过亲和素或链霉亲和素结合的间接测定来检测该抗体。合适荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、荧光素异硫氰酸酯、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；生物发光材料的例子包括萤光素酶、荧光素和水母发光蛋白。
[0556]
可例如诊断性和/或试验性地应用标记的抗体分子，包括(i)用于通过标准技术(如亲和层析或免疫沉淀)分离预定抗原；(ii)用于检测(例如细胞裂解物或细胞上清液中的)预定抗原以评价蛋白质的表达模式和丰度；(iii)用于监测组织中蛋白水平作为临床试验的一部分来例如用于测定给定治疗方案的功效。
[0557]
抗体分子可与其他分子实体偶联，所述分子实体通常为标记物或治疗剂(例如抗微生物剂(例如抗细菌剂或杀细菌剂)、免疫调节剂、免疫刺激剂、细胞毒剂或细胞抑制剂)或部分。可将放射性同位素用于检测或治疗应用中。可与抗体分子偶联的放射性同位素包括但不限于α-、β-或γ-放射体，或者β-和γ-放射体。此类放射性同位素包括但不限于：碘(
131
i或
125
i)、钇(
90
y)、镥(
177
lu)、锕(
225
ac)、镨、砹(
211
at)、铼(
186
re)、铋(
212
bi或
213
bi)、铟(
111
in)、锝(
99
mtc)、磷(
32
p)、铑(
188
rh)、硫(
35
s)、碳(
14
c)、氚(3h)、铬(
51
cr)、氯(
36
cl)、钴(
57
co或
58
co)、铁(
59
fe)、硒(
75
se)或镓(
67
ga)。可用作治疗剂的放射性同位素包括：钇(
90
y)、镥(
177
lu)、锕(
225
ac)、镨、砹(
211
at)、铼(
186
re)、铋(
212
bi或
213
bi)和铑(
188
rh)。可用作标记物例如用于诊断的放射性同位素包括：碘(
131
i或
125
i)、铟(
111
in)、锝(
99
mtc)、磷(
32
p)、碳(
14
c)和氚(3h)，或以上所列治疗用同位素中的一种或多种。
[0558]
在一个方面，本公开提供了一种制备本文所述的il-2复合物的方法。所述方法包括例如使本文所述的il-2变体与抗il-2抗体分子(例如能结合il-2变体的抗il-2抗体分子)接触，从而产生il-2复合物。在一个实施方式中，该方法还包括在体外、离体或体内评估il-2复合物的功效。
[0559]
本公开提供了编码本文所述的il-2复合物(或其部分)的分离的核酸分子，及其载体和宿主细胞。核酸分子包括但不限于rna、基因组dna和cdna。
[0560]
il-2偶联物
[0561]
在一个实施方式中，il-2制剂包含偶联物，例如本文所述的il-2偶联物。
[0562]
在一个实施方式中，il-2偶联物包含本文所述的il-2变体和非il-2部分。在一个实施方式中，il-2偶联物包含表9中描述的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)。在一个实施方式中，il-2偶联物包含表9中描述的氨基酸序列或其功能性片段。在一个实施方式中，非il-2部分包含抗体分子，例如本文所述的抗体分子。在一个实施方式中，非il-2部分包含聚合物，例如聚醚化合物。在一个实施方式中，聚醚化合物包括聚乙二醇(peg)。在一个实施方式中，非il-2部分包含细胞因子。il-2变体可以直接或间接地例如通过接头与非il-2部分偶联。在一个实施方式中，il-2偶联物是il-2融合蛋白。
[0563]
在一个实施方式中，所述il-2偶联物包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0564]
在一个实施方式中，il-2偶联物是免疫偶联物，例如，包含抗体分子。在一个实施方式中，il-2变体通过共价键与抗体分子偶联。在一个实施方式中，il-2变体通过肽键与抗体分子偶联。在一个实施方式中，il-2变体和抗体分子形成融合蛋白。在一个实施方式中，融合蛋白包含il-2变体和抗体分子(例如，重链、轻链或两者)之间的接头。在一个实施方式
中，il-2变体通过非肽键与抗体分子偶联。在一个实施方式中，il-2变体不通过非肽键与抗体分子偶联。
[0565]
在一个实施方式中，il-2变体与抗体分子的骨架偶联。在另一个实施方式中，il-2变体与抗体分子的侧链偶联。在一个实施方式中，抗体分子与il-2变体的骨架偶联。在一个实施方式中，抗体分子与il-2变体的侧链偶联。
[0566]
在一个实施方式中，两种或更多种(例如，三种、四种、五种、六种、七种、八种或更多种)il-2变体与抗体分子偶联。在一个实施方式中，四种il-2变体与抗体分子偶联。例如，il-2变体可以相同，或至少一些il-2变体彼此不同。在一个实施方式中，il-2变体以二价方式与抗体分子偶联。在另一个实施方式中，il-2变体以四价方式与抗体分子偶联。
[0567]
在一个实施方式中，il-2偶联物是通过酶促合成产生的。例如，il-2偶联物可通过il-2变体的化学合成、抗体分子的表达以及il-2变体与抗体分子的酶促连接来产生。在一个实施方式中，实现90％或更高，例如92％或更高，95％或更高，97％或更高，或99％或更高的反应效率。在另一实施方式中，该方法还包括纯化adc。在一个实施方式中，纯化后产率为60％或更高(例如，70％或更高，75％或更高，80％或更高，90％或更高，或95％或更高)。
[0568]
在一个方面，本公开提供了以下的组合：(a)包含具有降低的效应物功能的第一抗体分子和本文描述的il-2变体的免疫偶联物，和(b)具有提高的效应物功能的第二抗体分子，用于治疗疾病，例如本文所述的疾病。
[0569]
在一个实施方式中，第一抗体的降低的效应物功能包括降低的与活化性fc受体的结合、降低的adcc、降低的adcp、降低的cdc、降低的细胞因子分泌或其组合。在一个实施方式中，降低的效应物功能是降低的与活化性fc受体例如人fc受体的结合。在一个实施方式中，活化性fc受体是fey受体。在一个实施方式中，活化性fc受体是fcγriiia、fcγri或fcγriia。在一个实施方式中，降低的效应物功能包括降低的adcc。在一个实施方式中，增加的效应物功能包括减少的与活化性fc受体的结合和降低的adcc。
[0570]
在一个实施方式中，第一抗体分子在如本文所述的fc区中包含一个或多个氨基酸突变(例如，取代)。在一个实施方式中，第一抗体分子包含在免疫球蛋白重链的位置p329处的氨基酸取代。在一个实施方式中，氨基酸取代包括p329a或p329g，例如p329g。在一个实施方式中，抗体分子在免疫球蛋白重链的位置s228、e233、l234、l235、n297、p331或其组合处包含进一步的氨基酸取代。在一个实施方式中，进一步的氨基酸取代包括s228p、e233p、l234a、l235a、l235e、n297a、n297d、p331s或其组合。在一个具体实施方式中，该抗体在免疫球蛋白重链的位置p329、l234和l235处包含氨基酸取代。在一个实施方式中，氨基酸取代包括l234a、l235a和p329g(lala p329g)。
[0571]
在一个实施方式中，第一抗体分子针对呈递在肿瘤细胞上或肿瘤细胞环境中的抗原。在一个实施方式中，第一抗体针对选自以下的抗原：成纤维细胞活化蛋白(fap)、生腱蛋白-c的a1结构域(tnc a1)、生腱蛋白-c的a2结构域(tnc a2)、纤连蛋白的外部结构域b(edb)、癌胚抗原(cea)和黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(mcsp)。
[0572]
在一个实施方式中，第二抗体分子的增加的效应物功能包括增加的与活化性fc受体的结合、增加的adcc、增加的adcp、增加的cdc、增加的细胞因子分泌或其组合。在一个实施方式中，增加的效应物功能包括增加的与活化性fc受体的结合。在一个实施方式中，活化性fc受体是fcγriiia、fcγri或fcγriia。在一个实施方式中，增加的效应物功能包括增
加的adcc。在一个实施方式中，增加的效应物功能包括增加的与活化性fc受体的结合和增加的adcc。
[0573]
在一个实施方式中，第二抗体分子在fc区中包含一个或多个氨基酸突变(例如，取代)。在一个实施方式中，第二抗体分子包含fc区中糖基化的修饰。在一个实施方式中，fc区中糖基化的修饰包括，与未修饰的抗体分子相比，fc区中非岩藻糖基化寡糖的比例增加(例如，增加至至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)。在一个实施方式中，修饰包括与未修饰的抗体分子相比，在fc区中增加比例的二等分寡糖(例如，增加至至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)。在一个实施方式中，fc区中糖基化的修饰包括，与未修饰的抗体分子相比，fc区中二等分的非岩藻糖基化寡糖的比例增加(例如，增加至至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％)。
[0574]
在一个实施方式中，第二抗体分子针对呈现在肿瘤细胞上的抗原。在一个实施方式中，第二抗体分子针对选自以下的抗原：cd20、表皮生长因子受体(egfr)、her2、her3、胰岛素样生长因子1受体(igf-1r)、c-met、含有cub结构域的抗原蛋白-1(cdcp1)、癌胚抗原(cea)和黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(mcsp)。
[0575]
在一个实施方式中，该疾病是可通过刺激效应细胞功能治疗的病症，例如癌症。在一个方面，本公开提供了一种组合物，其包含：(a)免疫偶联物，其包含具有降低的效应物功能的第一抗体分子和本文所述的il-2变体，(b)具有提高的效应物功能的第二抗体分子，和(c)药学上可接受的运载体。
[0576]
il-2受体
[0577]
本文所述的il-2制剂(例如il-2变体、il-2融合蛋白、il-2复合物或il-2偶联物)可结合至il-2受体(il-2r)和/或调节与il-2r相关联的一种或更多种功能。
[0578]
il-2r是在一些免疫细胞(如淋巴细胞)表面表达的异源三聚体蛋白，可与il-2结合并对其作出响应。il-2受体通常具有三种形式，由三种不同链的不同组合产生：α(阿尔法)(也称为il-2rα、cd25或tac抗原)、β(贝塔)(也称为il-2rβ，或cd122)和γ(伽马)(也称为il-2rγ、γc、普通γ链或cd132)。
[0579]
il-2r链在各细胞类型上分别且不同地表达，并且可以以不同的组合和顺序组装以产生低、中和高亲和性的il-2r。il-2rα以低亲和性结合il-2；il-2rβ和il-2rγ一起形成以中等亲和性结合il-2的复合物(例如，在记忆t细胞和nk细胞上)；il-2rα、il-2rβ和il-2rγ一起形成以高亲和性结合il-2的复合物(例如，在活化的t细胞和调节性t细胞上)。
[0580]
il-2rβ和il-2rγ分别与janus激酶1(jak1)和janus激酶3(jak3)复合。il-2与il-2r的结合可以活化jak1/jak2并起始下游细胞内信号转导，例如map激酶通路、磷酸肌醇3-激酶(pi3k)通路或jak-stat通路(liao等,curr opin immunol.2011；23(5):598-604；malek和castro.immunity.2010；33(2):153-165)。
[0581]
il-2r在免疫系统、耐受性和免疫中起重要作用。例如，il-2和il-2r之间的相互作用涉及促进某些未成熟t细胞分化为调节性t细胞，以及t细胞分化为效应t细胞和记忆t细胞。il-2和il-2r之间的相互作用也与自身免疫性疾病、感染和细胞介导的免疫相关联。
[0582]
在一个方面，本公开提供了包含本文所述il-2变体的il-2制剂，所述il-2变体对il-2r，例如il-2rα、il-2rβ或il-2rγ中的一种、两种或全部具有改变的结合亲和性。例如，il-2变体可以具有与il-2和il-2r(例如，il-2rα、il-2rβ或il-2rγ中的一种、两种或全部)
之间的相互作用相关联的一个或多个(例如，两个、三个、四个、五个或更多个)氨基酸变化(例如，取代或突变)。
[0583]
在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rα具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rα的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rβ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rβ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rγ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
[0584]
在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rα具有变化的(例如降低的)结合亲和性且对il-2rβ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，对il-2rα的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，并且对il-2rβ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rα和il-2rβ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
[0585]
在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rα具有变化的(例如降低的)结合亲和性且对il-2rγ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，对il-2rα的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，并且对il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rα和il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
[0586]
在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rβ具有变化的(例如降低的)结合亲和性且对il-2rγ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，对il-2rβ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，并且对il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，与il-2rβ和il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
[0587]
在一个实施方式中，il-2制剂对il-2rα具有变化的(例如降低的)结合亲和性，对il-2rβ具有变化的(例如降低的)结合亲和性，且对il-2rγ具有变化的(例如降低的)结合亲和性。在一个实施方式中，对il-2ra的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，对il-2rβ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多，且对il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一个实施方式中，相对于包含野生型il-2的il-2制剂或包含参考il-2变体的il-2制剂，对il-2rα、il-2rβ和il-2rγ的结合亲和性降低约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。
[0588]
在一个实施方式中，本公开提供的il-2制剂与il-2rα、il-2rβ或il-2rγ中任一种的结合亲和性降低，但未消除。例如，降低的范围可以是相对于包含野生型il-2的il-2制剂
或包含参考il-2变体的il-2制剂，从约10％-约90％，例如从约20％-约80％，从约30％-约70％，从约40％-约60％，从约10％-约60％，从约10％-约50％，或从约50％-约90％。
[0589]
fc区
[0590]
本公开提供了包含fc区或其片段，例如本文所述的fc区或其片段(例如其功能性片段)的il-2制剂(例如il-2变体、融合多肽、复合物或免疫偶联物)。
[0591]
在一个实施方式中，il-2制剂包含本文所述的il-2变体和本文所述的fc区。在一个实施方式中，il-2制剂还包含il-2变体和fc区之间的接头。在一个实施方式中，il-2制剂包含il-2融合蛋白，该融合蛋白包含本文所述的fc区。在一个实施方式中，fc区包含一个或多个本文所述的突变。
[0592]
片段可结晶区或fc区是指与fc受体相互作用的免疫球蛋白区域。在一个实施方式中，fc区与补体系统的蛋白质相互作用。尽管不希望受理论束缚，但相信在一个实施方式中，fc区与fc受体之间的相互作用允许活化免疫系统。
[0593]
在igg、iga和igd抗体同种型中，天然产生的fc区通常包含两个相同的蛋白质片段，它们来自抗体两条重链的第二和第三恒定域。天然产生是的igm和ige fc区通常在每条多肽链中包含三个重链恒定结构域(ch结构域2-4)。igg的fc区可以包含高度保守的n-糖基化位点(stadlmann等.(2008).proteomics 8(14):2858
–
2871；stadlmann(2009)proteomics 9(17):4143
–
4153)。尽管不希望受理论束缚，但相信在一个实施方式中，fc片段的糖基化有助于fc受体介导的活性(peipp等.(2008)blood 112(6):2390
–
2399)。在一个实施方式中，连接到该位点的n-聚糖主要是复合类型的核心岩藻糖基化的二触角结构。在另一个实施方式中，小量的这些n-聚糖还含有二等分的glcnac和/或α-2,6连接的唾液酸残基。
[0594]
来自人igg1的fc区氨基酸序列的示例性片段在seq id no:40中提供并且如下所示：
[0595]
dkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqygstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seq id no:40)
[0596]
在seq id no:40中，该序列中的第一个氨基酸残基在本文中被称为位置221。以粗体和下划线显示的三个组氨酸残基分别是位置310、433和435。
[0597]
本文所述的包含fc区或其片段的il-2制剂(例如，il-2-fc融合蛋白)可以具有表1中描述的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个)突变或突变组合(例如，根据eu编号)。
[0598]
表1.示例性fc突变
[0599]
[0600]
[0601]
[0602]
[0603]
[0604]
[0605]
[0606]
[0607]
[0608]
[0609]
[0610]
[0611]
[0612]
[0613]
[0614][0615]
在一个实施方式中，fc区包括fcmut001。在一个实施方式中，fc区包括fcmut002。在一个实施方式中，fc区包括fcmut003。在一个实施方式中，fc区包括fcmut004。在一个实施方式中，fc区包括fcmut005。在一个实施方式中，fc区包括fcmut006。在一个实施方式中，fc区包括fcmut007。在一个实施方式中，fc区包括fcmut008。在一个实施方式中，fc区包括fcmut009。在一个实施方式中，fc区包括fcmut010。在一个实施方式中，fc区包括fcmut011。在一个实施方式中，fc区包括fcmut012。在一个实施方式中，fc区包括fcmut013。在一个实施方式中，fc区包括fcmut014。在一个实施方式中，fc区包括fcmut015。在一个实施方式中，fc区包括fcmut016。在一个实施方式中，fc区包括fcmut017。在一个实施方式中，fc区包括fcmut018。在一个实施方式中，fc区包括fcmut019。在一个实施方式中，fc区包括fcmut020。在一个实施方式中，fc区包括fcmut021。在一个实施方式中，fc区包括fcmut022。在一个实施方式中，fc区包括fcmut023。在一个实施方式中，fc区包括fcmut024。在一个实施方式中，fc区包括fcmut026。在一个实施方式中，fc区包括fcmut027。在一个实施方式中，fc区包括fcmut028。在一个实施方式中，fc区包括fcmut029。在一个实施方式中，fc区包括fcmut030。在一个实施方式中，fc区包括fcmut031。在一个实施方式中，fc区包括fcmut032。在一个实施方式中，fc区包括fcmut033。在一个实施方式中，fc区包括fcmut034。在一个实施方式中，fc区包括fcmut035。在一个实施方式中，fc区包括fcmut036。在一个实施方式中，fc区包括fcmut037。在一个实施方式中，fc区包括fcmut038。在一个实施方式中，fc区包括fcmut039。在一个实施方式中，fc区包括fcmut040。在一个实施方式中，fc区包括fcmut041。在一个实施方式中，fc区包括fcmut042。在一个实施方式中，fc区包括fcmut043。在一个实施方式中，fc区包括fcmut044。在一个实施方式中，fc区包括fcmut045。在一个实施方式中，fc区包括
fcmut046。在一个实施方式中，fc区包括fcmut047。在一个实施方式中，fc区包括fcmut048。在一个实施方式中，fc区包括fcmut049。在一个实施方式中，fc区包括fcmut050。在一个实施方式中，fc区包括fcmut051。在一个实施方式中，fc区包括fcmut052。在一个实施方式中，fc区包括fcmut053。在一个实施方式中，fc区包括fcmut067。在一个实施方式中，fc区包括fcmut068。在一个实施方式中，fc区包括fcmut069。在一个实施方式中，fc区包括fcmut070。在一个实施方式中，fc区包括fcmut071。在一个实施方式中，fc区包括fcmut072。在一个实施方式中，fc区包括fcmut073。在一个实施方式中，fc区包括fcmut074。在一个实施方式中，fc区包括fcmut075。在一个实施方式中，fc区包括fcmut076。在一个实施方式中，fc区包括fcmut077。在一个实施方式中，fc区包括fcmut078。在一个实施方式中，fc区包括fcmut079。在一个实施方式中，fc区包括fcmut080。在一个实施方式中，fc区包括fcmut081。在一个实施方式中，fc区包括fcmut082。在一个实施方式中，fc区包括fcmut083。在一个实施方式中，fc区包括fcmut084。在一个实施方式中，fc区包括fcmut085。在一个实施方式中，fc区包括fcmut086。在一个实施方式中，fc区包括fcmut087。在一个实施方式中，fc区包括fcmut088。在一个实施方式中，fc区包括fcmut089。在一个实施方式中，fc区包括fcmut090。在一个实施方式中，fc区包括fcmut091。在一个实施方式中，fc区包括fcmut093。在一个实施方式中，fc区包括fcmut094。在一个实施方式中，fc区包括fcmut095。在一个实施方式中，fc区包括fcmut096。在一个实施方式中，fc区包括fcmut097。在一个实施方式中，fc区包括fcmut098。在一个实施方式中，fc区包括fcmut099。在一个实施方式中，fc区包括fcmut100。在一个实施方式中，fc区包括fcmut101。在一个实施方式中，fc区包括fcmut102。在一个实施方式中，fc区包括fcmut103。在一个实施方式中，fc区包括fcmut104。在一个实施方式中，fc区包括fcmut105。在一个实施方式中，fc区包括fcmut106。在一个实施方式中，fc区包括fcmut107。在一个实施方式中，fc区包括fcmut108。在一个实施方式中，fc区包括fcmut109。在一个实施方式中，fc区包括fcmut110。在一个实施方式中，fc区包括fcmut111。在一个实施方式中，fc区包括fcmut112。在一个实施方式中，fc区包括fcmut113。在一个实施方式中，fc区包括fcmut114。在一个实施方式中，fc区包括fcmut115。在一个实施方式中，fc区包括fcmut116。在一个实施方式中，fc区包括fcmut117。在一个实施方式中，fc区包括fcmut118。在一个实施方式中，fc区包括fcmut119。在一个实施方式中，fc区包括fcmut120。在一个实施方式中，fc区包括fcmut121。在一个实施方式中，fc区包括fcmut122。在一个实施方式中，fc区包括fcmut123。在一个实施方式中，fc区包括fcmut124。在一个实施方式中，fc区包括fcmut125。在一个实施方式中，fc区包括fcmut126。在一个实施方式中，fc区包括fcmut127。在一个实施方式中，fc区包括fcmut128。在一个实施方式中，fc区包括fcmut129。在一个实施方式中，fc区包括fcmut130。在一个实施方式中，fc区包括fcmut131。在一个实施方式中，fc区包括fcmut132。在一个实施方式中，fc区包括fcmut133。在一个实施方式中，fc区包括fcmut134。在一个实施方式中，fc区包括fcmut135。在一个实施方式中，fc区包括fcmut136。在一个实施方式中，fc区包括fcmut137。在一个实施方式中，fc区包括fcmut138。在一个实施方式中，fc区包括fcmut139。在一个实施方式中，fc区包括fcmut140。在一个实施方式中，fc区包括fcmut141。在一个实施方式中，fc区包括fcmut142。在一个实施方式中，fc区包括fcmut143。在一个实施方式中，fc区包括fcmut144。在一个实施方式中，fc区包括fcmut145。在一个实施方式中，fc区包括fcmut146。在一个实施方式中，fc区包括fcmut147。在一个实施方式中，
fc区包括fcmut148。在一个实施方式中，fc区包括fcmut149。在一个实施方式中，fc区包括fcmut150。在一个实施方式中，fc区包括fcmut151。在一个实施方式中，fc区包括fcmut152。在一个实施方式中，fc区包括fcmut153。在一个实施方式中，fc区包括fcmut154。在一个实施方式中，fc区包括fcmut155。在一个实施方式中，fc区包括fcmut156。在一个实施方式中，fc区包括fcmut157。在一个实施方式中，fc区包括fcmut158。在一个实施方式中，fc区包括fcmut159。在一个实施方式中，fc区包括fcmut160。在一个实施方式中，fc区包括fcmut161。在一个实施方式中，fc区包括fcmut162。在一个实施方式中，fc区包括fcmut163。在一个实施方式中，fc区包括fcmut164。在一个实施方式中，fc区包括fcmut165。在一个实施方式中，fc区包括fcmut166。在一个实施方式中，fc区包括fcmut167。在一个实施方式中，fc区包括fcmut168。在一个实施方式中，fc区包括fcmut169。在一个实施方式中，fc区包括fcmut170。在一个实施方式中，fc区包括fcmut171。在一个实施方式中，fc区包括fcmut172。在一个实施方式中，fc区包括fcmut173。在一个实施方式中，fc区包括fcmut174。在一个实施方式中，fc区包括fcmut175。在一个实施方式中，fc区包括fcmut176。在一个实施方式中，fc区包括fcmut177。在一个实施方式中，fc区包括fcmut178。在一个实施方式中，fc区包括fcmut179。在一个实施方式中，fc区包括fcmut180。在一个实施方式中，fc区包括fcmut181。在一个实施方式中，fc区包括fcmut182。在一个实施方式中，fc区包括fcmut183。在一个实施方式中，fc区包括fcmut184。在一个实施方式中，fc区包括fcmut185。在一个实施方式中，fc区包括fcmut186。在一个实施方式中，fc区包括fcmut187。在一个实施方式中，fc区包括fcmut188。在一个实施方式中，fc区包括fcmut189。在一个实施方式中，fc区包括fcmut190。在一个实施方式中，fc区包括fcmut191。在一个实施方式中，fc区包括fcmut192。在一个实施方式中，fc区包括fcmut193。在一个实施方式中，fc区包括fcmut194。在一个实施方式中，fc区包括fcmut195。在一个实施方式中，fc区包括fcmut196。在一个实施方式中，fc区包括fcmut197。在一个实施方式中，fc区包括fcmut198。在一个实施方式中，fc区包括fcmut199。在一个实施方式中，fc区包括fcmut200。在一个实施方式中，fc区包括fcmut201。在一个实施方式中，fc区包括fcmut202。在一个实施方式中，fc区包括fcmut203。在一个实施方式中，fc区包括fcmut204。在一个实施方式中，fc区包括fcmut205。在一个实施方式中，fc区包括fcmut206。在一个实施方式中，fc区包括fcmut207。在一个实施方式中，fc区包括fcmut208。在一个实施方式中，fc区包括fcmut209。在一个实施方式中，fc区包括fcmut210。在一个实施方式中，fc区包括fcmut211。在一个实施方式中，fc区包括fcmut212。在一个实施方式中，fc区包括fcmut213。在一个实施方式中，fc区包括fcmut214。在一个实施方式中，fc区包括fcmut215。在一个实施方式中，fc区包括fcmut216。在一个实施方式中，fc区包括fcmut217。在一个实施方式中，fc区包括fcmut218。在一个实施方式中，fc区包括fcmut219。在一个实施方式中，fc区包括fcmut220。在一个实施方式中，fc区包括fcmut221。在一个实施方式中，fc区包括fcmut222。在一个实施方式中，fc区包括fcmut223。在一个实施方式中，fc区包括fcmut224。在一个实施方式中，fc区包括fcmut225。在一个实施方式中，fc区包括fcmut226。在一个实施方式中，fc区包括fcmut227。在一个实施方式中，fc区包括fcmut228。在一个实施方式中，fc区包括fcmut229。在一个实施方式中，fc区包括fcmut230。在一个实施方式中，fc区包括fcmut231。在一个实施方式中，fc区包括fcmut232。在一个实施方式中，fc区包括fcmut233。在一个实施方式中，fc区包括fcmut234。在一个实施方式中，fc区包括fcmut242。在一个实
施方式中，fc区包括fcmut243。在一个实施方式中，fc区包括fcmut244。
[0616]
在一个实施方式中，fc区包含选自以下的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或更多)突变或突变组合：fcmut045、fcmut171、fcmut183、fcmut186、fcmut190、fcmut197、fcmut213、fcmut215、fcmut216、fcmut219、fcmut222、fcmut223、fcmut224、fcmut226、fcmut227、fcmut228或fcmut229。在一个实施方式中，fc区包含选自以下的一个或多个(例如，2、3、4、5、6个或全部)突变或突变组合：fcmut045、fcmut183、fcmut197、fcmut213、fcmut215、fcmut228或fcmut156。在另一个实施方式中，fc区包含选自以下的一个或多个(例如、2、3、4、5个或全部)突变或突变组合：fcmut183、fcmut197、fcmut213、fcmut215、fcmut228或fcmut229。
[0617]
在一个实施方式中，fc区不包含选自以下的一个或多个(例如，2、3、4个或全部)突变或突变组合：fcmut018、fcmut021、fcmut050、fcmut102或yte。在一个实施方式中，fc区包含选自fcmut018、fcmut021、fcmut050、fcmut102或yte的一个或多个(例如，2、3、4个或全部)突变或突变组合，以及表1中描述的一个或多个其它突变或突变组合。
[0618]
在一个实施方式中，fc区包含表1中描述的突变或突变组合中的一个或多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个)，其导致如本文所述的协同效应(例如，结合亲和性或循环半衰期)。
[0619]
在一个实施方式中，fc区在选自t256、h285、n286、t307、q311、n315或a378的残基中包含一个或多个(例如，2、3、4、5、6或7个)突变。在一个实施方式中，fc区包含一个或多个(例如，2、3、4、5、6或7个)突变，其选自t256d、h285n、n286d、t307q、q311v、n315d或a378v。
[0620]
在一个实施方式中，fc区包含半衰期增强性突变、能够破坏fc效应物功能的突变或两者。在一个实施方式中，fc区包含本文所述的一个或多个突变或突变组合，例如选自m252w，v308f/n434y，r255y，p257l/n434y，v308f，p257n/m252y，g385n，p257n/v308y，n434y，m252y/s254t/t256e(“yte”)，m428l/n434s(“ls”)，或其任何组合。或者或另外，在一个实施方式中，fc区包含(a)选自以下的一种或多种(例如，2、3、4、5种或全部)突变组合：t256d/q311v/a378v，h285n/t307q/n315d，h285d/t307q/a378v，t307q/q311v/a378v，t256d/n286d/t307r/q311v/a378v，或t256d/t307r/q311v；(b)能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如，n297g，l234a/l235a(也称为“lala”突变)，l234a/l235a/p329g(也称为“lalapg”突变)，或(c)：(a)和(b)两者。
[0621]
在一个实施方式中，fc区包含突变t256d/q311v/a378v和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。在一个实施方式中，fc区包含突变h285n/t307q/n315d和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。在一个实施方式中，fc区包含突变h285d/t307q/a378v和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。在一个实施方式中，fc区包含突变t307q/q311v/a378v和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。在一个实施方式中，fc区包含突变t256d/n286d/t307r/q311v/a378v和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。在一个实施方式中，fc区包含突变t256d/t307r/q311v和能够破坏fc效应物功能的突变或突变组合，例如l234a/l235a。其他示例性fc突变描述于，例如，国际申请公开号wo2018/052556，美国专利申请公开号us2018/0037634，和booth等，mabs.2018；10(7):1098-1110，其全部内容通过引用纳入本文。
[0622]
在一个实施方式中，fc区包含人igg1，例如人igg1 m3同种异型的fc区。在一个实施方式中，fc区包含突变n297g。在一个实施方式中，fc区包含人igg1同种异型m3的fc区、包含突变n297g和/或人igg1同种异型m3的fc区的其它突变的人igg1同种异型m3的fc区，或其片段。在一个实施方式中，所述fc区包含seq id no:1003的氨基酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0623]
本文所述的延长半衰期的fc区中的任何突变可与能够增强或破坏fc效应物功能的任何fc突变组合使用。
[0624]
在一个实施方式中，fc区包含人igg4的fc区、含有s228p突变和/或r409k突变的人igg4和/或人igg4的fc区的其它突变的fc区，或其片段。来自人igg4的fc区氨基酸序列的示例性片段在seq id no:44中提供并且如下所示：
[0625][0626]
在seq id no:44中，该序列中的第一个氨基酸残基在本文中被称为位置219。用于延长人igg1半衰期的突变可应用于人igg4 fc。例如，mut215对应于seq id no:44中的突变t307q/q311v/a378v。
[0627]
fc区可以结合至各种细胞受体(例如，fc受体)和补体蛋白。fc区还可以介导抗体分子的不同生理作用，例如，调理颗粒的检测；细胞裂解；肥大细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞脱粒；和其它过程。
[0628]
有几种不同类型的fc受体(fcr)，可以根据它们识别的抗体类型进行分类。
[0629]
fcγ受体(fcγr)属于免疫球蛋白超家族，并且参与例如诱导调理微生物的吞噬作用。该家族包括几个成员，fcγri(cd64)、fcγriia(cd32)、fcγriib(cd32)、fcγriiia(cd16a)、fcγriiib(cd16b)，由于其不同的分子结构，它们的抗体亲和性不同。例如，与fcγrii或fcγriii相比，fcγri与igg的结合力更强。fcγri还具有包含三个免疫球蛋白(ig)样结构域的胞外部分，比fcγrii或fcγriii多一个结构域。这种性质允许fcγri结合单个igg分子(或单体)，但fcγ受体通常需要结合免疫复合物中的多个igg分子才能被活化。
[0630]
fcγ受体对igg的亲和性不同，不同的igg亚类对各fcγ受体具有独特的亲和性。这些相互作用可以通过igg特定位置的聚糖(寡糖)进一步调整。例如，通过产生空间位阻，含有ch2-84.4聚糖的岩藻糖会降低igg对fcγriiia的亲和性，而缺乏半乳糖并以glcnac部分终止的g0聚糖对fcγriiia的亲和性增加(maverakis等.(2015)journal of autoimmunity 57(6):1-13)。
[0631]
新生儿fc受体(fcrn)在多种细胞类型上表达，其结构与i类mhc相似。该受体还结
合igg并参与该抗体的保存(zhu等.(2001).journal of immunology 166(5):3266
–
76.)。fcrn还参与将igg从母亲通过胎盘转移到胎儿或在乳汁中转移到哺乳婴儿的过程。该受体也可能在igg血清水平的稳态中发挥作用。
[0632]
fcαri(或cd89)属于fcαr亚组。fcαri存在于中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞(包括kupffer细胞)和树突细胞的表面。它包含两个胞外ig样结构域，是免疫球蛋白超家族和多链免疫识别受体(mirr)家族的成员。它通过与两条fcrγ信号转导链相联合而发出信号。
[0633]
fc-α/μ受体(fcα/μr)是一种i型跨膜蛋白。它可以结合iga，尽管它对igm具有更高的亲和性(shibuya和honda(2006)springer seminars in immunopathology28(4):377
–
82)。这种fc受体在其细胞外部分具有一个ig样结构域，也是免疫球蛋白超家族的成员。
[0634]
有两种已知类型的fcεr。高亲和性受体fcεri是免疫球蛋白超家族的成员(它有两个ig样结构域)。fcεri存在于表皮langerhans细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和嗜碱性粒细胞中。这种受体可以在控制过敏反应中发挥作用。fcεri也在抗原呈递细胞上表达，并控制免疫介质的产生，例如促进炎症的细胞因子(von bubnoff等.(2003)clinical and experimental dermatology 28(2):184
–
7)。低亲和性受体fcεrii(cd23)是一种c型凝集素。fcεrii具有作为膜结合或可溶性受体的多种功能。它还可以控制b细胞的生长和分化，并阻断ige与嗜酸性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的结合(kikutani等.(1989)ciba foundation symposium 147:23
–
31)。
[0635]
在一个实施方式中，可以对fc区进行工程改造以包含抗原结合位点以产生fcab片段(wozniak-knopp等，(2010)protein eng des 23(4):289
–
297)。通过交换fc区，可以将fcab片段插入到完整的免疫球蛋白中，从而获得双特异性抗体(fab和fcab区都包含不同的结合位点)。
[0636]
fcrn的结合和再循环可以在下文中说明。例如，igg和白蛋白通过胞饮作用被内化到血管内皮细胞中。内体的ph值为6.0，促进与膜结合的fcrn相联合。内体的内容物可以通过以下两种方式之一进行处理：循环回顶端细胞膜或从顶端到基底外侧的转胞吞作用。与fcrn不相关的igg被溶酶体降解。
[0637]
尽管不希望受理论束缚，但认为fcrn与igg的相互作用是通过fc介导的。fc与fcrn的结合是ph特异性的，例如在ph7.4没有显著结合而在酸性环境中强结合。与igg1分子的fc结构域复合的fcrn的结构描述于，例如国际申请公布号wo2018/052556和美国申请公开号us2018/0037634的图1中。各fcrn分子通常与fc单体结合。在一个实施方式中，fab结构域还可以影响igg与fcrn的结合，例如，对igg对fcrn的亲和性具有负面影响或没有影响。
[0638]
当对fc区进行工程改造以提高多肽的半衰期时，可能需要考虑多种因素。例如，延长抗体分子或融合蛋白的半衰期和有效再循环通常需要增强ph特异性亲和性(例如，仅在内体的低ph下)。fcrn与fc区的ch2和ch3结构域之间的接头区近处结合。对接头的修饰会影响fc与fcγ受体的结合。对fc区的修饰会影响多肽的热稳定性和聚集性质。
[0639]
药物组合物和试剂盒/药盒
[0640]
本公开提供了组合物，例如药物组合物，其包含本文所述的il-2制剂，以及任选的药学上可接受的运载体。
[0641]
如本文所用，“药学上可接受的运载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散
介质、等渗剂和吸收延迟剂等等。运载体可适于静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、直肠、脊柱或表皮给予(例如，通过注射或输注)。在一个实施方式中，组合物中少于约5％(例如少于约4％、3％、2％或1％)的il-2制剂以聚集物形式存在。在另一些实施方式中，组合物中至少约95％(例如至少约96％、97％、98％、98.5％、99％、99.5％、99.8％或更多)的il-2制剂以单体形式存在。在另一些实施方式中，组合物中至少约95％(例如至少约96％、97％、98％、98.5％、99％、99.5％、99.8％或更多)的il-2制剂以二聚体形式存在。在一个实施方式中，聚集体、二聚体或单体的水平通过色谱法测定，例如高效液相色谱尺寸排阻色谱法(hplc-sec)。在一个实施方式中，il-2制剂与药学上可接受的运载体一起配制。
[0642]
本文所述组合物可为各种形式。这些包括例如，液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(例如可注射和可输注溶液)、分散体或悬浮体、脂质体以及栓剂。合适的形式取决于目标给药模式以及治疗应用。通常合适的组合物为可注射或可输注溶液形式。合适的给药模式之一是胃肠道外(例如静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内)。在一个实施方式中，il-2制剂通过静脉输注或注射给药。在另一个实施方式中，il-2剂通过肌肉内或皮下注射给药。在一个实施方式中，il-2制剂皮下给药(例如，存在于自动注射器或预充式注射器中)。
[0643]
本文所用术语“胃肠道外给药”和“经胃肠道外给予”表示除肠道和局部给药外的给药形式，通常通过注射，包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眼内、心脏内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下(subcapsular)、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注给药。
[0644]
药物组合物(例如，用于治疗性应用)在制造和储存条件下通常应该是无菌和稳定的。可将组合物配制成溶液、微乳剂、分散体、脂质体或适合高抗体浓度的其他有序结构。可根据需要将在合适溶剂中的所需量活性化合物(即抗体或抗体部分)与上述组分中的一种或组合掺混，然后进行过滤灭菌，从而制备无菌注射液。通常，分散系可通过将活性活化物加入含有碱性分散介质和上述其它所需成分的无菌载剂中来制备。在制备无菌注射液的无菌粉剂时，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，由之前无菌过滤的溶液得到活性组分和任何其它所需组分的粉末。可维持溶液的合适流动性，例如通过使用诸如卵磷脂的涂层、在分散剂情况下通过保持所需粒度以及通过使用表面活性剂。通过在组合物中包含延迟吸收的物质，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
[0645]
本文描述的il-2制剂可通过多种方法给予。本领域中已知数种，并且对于许多治疗性、预防性或诊断性应用，适当的给药途径/模式是静脉内注射或输注。例如，il-2制剂通过静脉内输注给药的速度可小于10mg/分钟；优选小于或等于5mg/分钟来达到约1～100mg/m2的剂量，优选约5～50mg/m2，约7～25mg/m2，更优选约10mg/m2。本领域技术人员会明白，给药途径和/或方式根据所需结果而有所不同。在某些实施方式中，活性化合物可与运载体一起制备，该运载体将保护该化合物不被迅速释放，如控释制剂，包括植入体、透皮贴片和微包封递送系统。可利用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。制备此类制剂的许多方法已获得专利或为本领域技术人员熟知。参见例如，sustained and controlled release drug delivery systems(《缓控释药物递送系统》)，j.r.robinson编,marcel dekker公司，纽约，1978。
[0646]
在一个实施方式中，il-2制剂，例如，与惰性稀释剂或可同化的可食用运载体一起口服给药。il-2制剂(以及按需的其他组分)也可容纳在硬或软壳明胶胶囊里、压缩成片剂、
或直接掺混入对象的膳食中。对于口服治疗性给药，可将il-2制剂与赋形剂混合，并以可摄取的片剂、口颊含片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮剂、糖浆、薄片等形式使用。为了通过非胃肠道外给药途径的其他形式来给予il-2制剂，可能需要用材料包覆化合物或将某种材料与该化合物共同给药，以防止该化合物失活。还可采用医疗装置来给予治疗性、预防性或诊断性组合物，本领域中已知数种此类装置。
[0647]
给药方案经调整能提供所需反应(例如治疗、预防或诊断反应)。例如，可以是一次推注，按时间分次给药或根据治疗情况的紧急性成比例地降低或增加剂量。尤其有利的是配制成单位剂型的胃肠道外组合物以便于给药和剂量均一性。本文中单位剂型指作为单个剂量用于待治疗对象的物理上离散的单位，每个单位包含预定量的活性化合物与所需药物运载体，该预定量经测算能够产生所需治疗效果。本发明中剂量单位形式的规格取决于或直接依赖于(a)抗体的独特特性和待实现的具体治疗、预防或诊断效果，以及(b)此抗体分子配制相关领域关于应对个体敏感性的固有限制。
[0648]
il-2制剂的治疗、预防或诊断有效量的示例性非限制性范围为约0.1～50mg/kg对象体重，例如，约0.1～30mg/kg，例如，约1～30、1～15、1～10、1～5、5～10或1～3mg/kg，例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40或50mg/kg。例如，il-2制剂通过静脉内输注给药，速度可小于10mg/分钟，例如小于或等于5mg/分钟来达到约1～100mg/m2的剂量，例如约5～50mg/m2，约7～25mg/m2，约10mg/m2。需要注意的是，剂量值可能会根据待缓解病症的种类和严重程度而不同。需要理解，对于每个具体对象，应当随着时间根据个体需求以及给予组合物或监管组合物给予的人的专业判断来调节具体剂量方案，本文所列的剂量范围仅仅是示例性的，并不意在对所要求权利的组合物的范围或实施方式构成限制。
[0649]
本文的药物组合物可包含“治疗有效量”、“预防有效量”或“诊断有效量”的本文所述的il-2制剂。
[0650]“治疗有效量”指的是以必要的剂量和持续时间段实现所需治疗结果的有效的量。多肽(例如抗体分子或融合蛋白)的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素以及抗体或抗体部分在个体中引起所需反应的能力而不同。治疗有效量，抗体分子的治疗有益效果胜过任何毒性或有害效果。相对于未治疗对象，“治疗有效剂量”通常使可测参数被抑制至少约20％，例如至少约40％，至少约60％或至少约80％。可测量参数可以变化，例如，基于被治疗的疾病。il-2制剂抑制可测量参数的能力可以在预测治疗或预防本文所述病症的功效的动物模型系统中进行评估。或者，可以通过检查il-2制剂调节靶分子或细胞的生物学功能的能力来评估组合物的这种性质，例如通过体外测定。
[0651]“预防有效量”指的是以必要的剂量和持续时间段实现所需预防结果的有效的量。通常，由于在疾病的早期阶段或之前在对象中使用预防剂量，预防有效量会比治疗有效量低。
[0652]“诊断有效量”指按照一定剂量和必要时程能够实现所需诊断效果的量。通常，诊断有效量是其中可以在体外、离体或体内诊断疾病(例如本文所述的疾病)的量。
[0653]
在一个实施方式中，药物组合物是良好生产规范(gmp)级别的药物组合物。在一个实施方式中，药物组合物具有大于99％的纯度，例如大于99.5％、99.8％或99.9％的纯度。在一个实施方式中，药物组合物中大于50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％的污染物被去除。在一个实施方式中，药物组合物是大规模的，例如至少20g、30g、40g、50g、
100g、200g、300g、400g、500g、600g、700g、800g、900g、1000g或更多。
[0654]
本公开还提供了包含本文所述的il-2制剂的试剂盒。试剂盒可以包括一种或多种其它组成部分，包括：使用说明；其它试剂，例如标记、治疗剂或用于螯合或以其它方式偶联的试剂，偶联至标记物或治疗剂的抗体分子或辐射防护组合物；用于制备用于给药的il-2制剂的装置或其它材料；药学上可接受的运载体；以及用于对对象给药的器具或其它材料。
[0655]
核酸
[0656]
本发明还提供了包含编码本文所述il-2制剂的核苷酸序列的核酸。
[0657]
在一个实施方式中，核酸包含编码本文描述的il-2变体的氨基酸序列的核苷酸序列，或与其基本相同的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，核酸包含编码il-2变体的核苷酸序列，该il-2变体包含本文所述的一种或多种突变。
[0658]
在一个实施方式中，核酸还包含编码fc区(例如本文所述的fc区)的核苷酸序列，或具有与其基本相同的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)的核苷酸序列。在一个实施方式中，fc区包含一种或多种突变，例如本文所述的一种或多种突变。在一个实施方式中，核酸从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述fc区的核苷酸序列。
[0659]
在另一个实施方式中，核酸还包含编码接头(例如本文所述的接头)的核苷酸序列，或与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，核酸从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述接头的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸从5'到3'包含编码本文所述接头的核苷酸序列和编码本文所述fc区的核苷酸序列。
[0660]
在另一个实施方式中，核酸包含编码il-2融合蛋白(例如本文所述的il-2融合蛋白)的核苷酸序列，或与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，编码il-2融合蛋白的核酸从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述fc区的核苷酸序列。在一个实施方式中，编码il-2融合蛋白的核酸从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列、编码本文所述接头的核苷酸序列和编码fc区的核苷酸序列，如本文所述。
[0661]
在一个实施方式中，核酸包含本文所述的核苷酸序列的部分。该部分可以编码例如il-2变体、接头或fc区中的一个、两个或全部。
[0662]
在一个实施方式中，核酸包含编码表9中描述的氨基酸序列的核苷酸序列，或其功能性片段。在一个实施方式中，核酸包含表10中描述的核苷酸序列。
[0663]
在一个实施方式中，核酸包含编码seq id no:2-38或1000-1002中任一个的氨基酸序列或其功能性片段的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含编码seq id no:56-359或1004-1009中任一个的氨基酸序列或其功能性片段的核苷酸序列。
[0664]
在一个实施方式中，所述核酸包含seq id no:361-398或1010-1012中任一个的核苷酸序列，或具有与其至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、
98％、99％或更多的序列同一性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，所述核酸还包含seq id no:399-407或1013中任一个的核苷酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10，11、12、13、14、15、20、25或30个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，所述核酸还包含seq id no:408-415中任一个的核苷酸序列。
[0665]
在一个实施方式中，所述核酸包含seq id no:416-481或1014-1019中任一个的核苷酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多序列同一性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:416-453或1014-1019中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:454-491中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:492-529中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:416-453中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:454-491中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:492-529中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:530-567中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:568-605中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:606-643中任一个的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:644-681中任一个的核苷酸序列。
[0666]
在一个实施方式中，所述核酸包含seq id no:364、365、371或1010-1012中任一个的核苷酸序列，或具有与其至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:364的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:365的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:371的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1010的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1011的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1012的核苷酸序列。
[0667]
在一个实施方式中，所述核酸还包含seq id no:1013的核苷酸序列，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、其96％、97％、98％、99％或更多序列相同性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13，14、15、20、25或30个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸还包含seq id no:48的核苷酸序列。
[0668]
在一个实施方式中，所述核酸包含seq id no:1014-1017中任一个的核苷酸序列，或具有与其至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的核苷酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个核苷酸的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1014的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1015的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1016的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1017的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1018的核苷酸序列。在
一个实施方式中，核酸包含seq id no:1019的核苷酸序列。
[0669]
在一个实施方式中，核酸包含seq id no:364的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:365的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:371的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1010的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1011的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1012的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸还包含seq id no:1013的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸还包含seq id no:48的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1014的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1015的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1016的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1017的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1018的核苷酸序列。在一个实施方式中，核酸包含seq id no:1019的核苷酸序列。
[0670]
本文所述的核酸包括脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其类似物。多核苷酸可以是单链或双链，并且如果是单链，可以是编码链或非编码(反义)链。多核苷酸可包括修饰的核苷酸，如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。核苷酸序列可间插有非核苷酸组分。多核苷酸聚合后可被进一步修饰，如通过与标记性组分偶联。核酸可为重组多核苷酸、或基因组、cdna、半合成或合成来源的多核苷酸，即非天然存在或以非天然排列方式与另一多核苷酸相联。
[0671]
在一个方面，本公开的特征在于包含本文所述核酸的宿主细胞和载体。核酸可存在于同一宿主细胞或非同一宿主细胞中的单个载体中或独立的多个载体中，详见下文。
[0672]
在一个方面，本公开的特征在于治疗病症(例如，本文所述的病症)的方法，所述方法包括给予有此需要的对象有效量的本文所述的核酸。
[0673]
载体
[0674]
本公开的特征在于包含编码本文所述的il-2制剂的核苷酸序列的载体。在一个实施方式中，载体包含本文(例如，表10中)所述的核酸。
[0675]
在一个实施方式中，载体包含编码本文(例如，在表9中)所述的il-2变体的氨基酸序列的核苷酸序列，或与其基本相同的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，所述载体包含编码il-2变体的核苷酸序列，所述il-2变体包含本文所述的一种或多种突变。
[0676]
在一个实施方式中，所述载体还包含编码fc区(例如本文所述的fc区)的核苷酸序列，或具有与其基本相同的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)的核苷酸序列。在一个实施方式中，fc区包含一种或多种突变，例如本文所述的一种或多种突变。在一个实施方式中，所述载体从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述fc区的核苷酸序列。
[0677]
在另一个实施方式中，所述载体还包含编码接头(例如本文所述的接头)的核苷酸序列，或与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，所述载体从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述接头的核苷酸序列。在一个实施方式中，所述载体从5'到3'包含编码本文所述接头的核苷酸序列和
编码本文所述fc区的核苷酸序列。
[0678]
在另一个实施方式中，所述载体包含编码il-2融合蛋白(例如本文所述的il-2融合蛋白)的核苷酸序列，或与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列相同性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)。在一个实施方式中，编码il-2融合蛋白的载体从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列和编码本文所述fc区的核苷酸序列。在一个实施方式中，编码il-2融合蛋白的载体从5'到3'包含编码本文所述il-2变体的核苷酸序列、编码本文所述接头的核苷酸序列和编码fc区的核苷酸序列，如本文所述。
[0679]
在一个实施方式中，载体还包含编码抗il-2抗体分子，例如本文所述的抗il-2抗体分子的重链可变区的核苷酸序列。在一个实施方式中，载体还包含编码抗il-2抗体分子，例如本文所述的抗il-2抗体分子的轻链可变区的核苷酸序列。在又一个实施方式中，载体还包含编码抗il-2抗体分子，例如本文所述的抗il-2抗体分子的重链可变区和轻链可变区的核苷酸序列。
[0680]
在一个实施方式中，载体还包含编码来自抗il-2抗体分子，例如本文所述的抗il-2抗体分子的重链可变区的至少一个、两个或三个cdr的核苷酸序列。在另一个实施方式中，载体还包含编码来自抗il-2抗体分子，例如本文所述的抗il-2抗体分子的轻链可变区的至少一个、两个或三个cdr的核苷酸序列。在又一个实施方式中，载体包含编码来自抗il-2抗体分子(例如本文所述的抗il-2抗体分子)的重链和轻链可变区的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个cdr的核苷酸序列。
[0681]
在一个实施方式中，载体包含本文所述的核苷酸序列的部分。该部分可以编码例如il-2变体；相似的fc区；可变区(例如，vh或vl)；一个、两个或三个或更多个(例如，四个、五个或六个)cdr；或一个、两个、三个或四个或更多个框架区。
[0682]
载体包括但不限于病毒、质粒、粘粒、λ噬菌体或酵母人工染色体(yac)。
[0683]
可采用许多种载体系统。例如，一类载体利用dna元件，这些元件衍生自动物病毒例如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、痘苗病毒、杆状病毒、逆转录病毒(劳斯氏肉瘤病毒、mmtv或momlv)或sv40病毒。另一类载体利用衍生自rna病毒的rna元件，所述rna病毒为例如塞姆利基森林病毒、东部马脑炎病毒和黄病毒。
[0684]
此外，通过引入能够选择已转染宿主细胞的一种或多种标志物，可选择已将dna稳定整合入其染色体中的细胞。该标志物可向营养缺陷型宿主提供例如营养缺陷型、杀生物剂(如抗生素)抗性或对重金属如铜等的抗性。选择性标志物基因可直接连接于待表达的dna序列，或者通过共同转化引入同一细胞内。mrna的优化合成也可能需要其它元件。这些元件可以包括剪接信号，以及转录启动子、增强子和终止信号。
[0685]
一旦制得用于表达的含构建体的表达载体或dna序列，可将表达载体转染或导入合适的宿主细胞。可用各种技术实现之，例如原生质体融合、磷酸钙沉淀、电穿孔、逆转录病毒转导、病毒转染、基因枪、基于脂质的转染或其他常规技术。在原生质体融合的情形下，可在培养基中使细胞生长，并筛选适当的活性。
[0686]
培养所得转染细胞以及回收所述多肽(例如，il-2变体或il-2融合蛋白)的方法和条件是本领域技术人员已知的，且可基于本文的描述，根据所用的特定表达载体和哺乳动物宿主细胞进行改变或优化。
[0687]
细胞
[0688]
本公开还提供了包含编码本文所述的il-2制剂的核酸或载体的细胞。
[0689]
在一个实施方式中，细胞是宿主细胞。例如，宿主细胞可以包含根据本文描述的方法工程改造的il-2制剂。在一个实施方式中，细胞是分离的细胞。在一个实施方式中，细胞是培养的细胞。
[0690]
在一个实施方式中，所述细胞包含核酸，所述核酸包含编码本文所述的il-2制剂的核苷酸序列(例如，表10中)、与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列同一性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)，或上述核酸的部分。在一个实施方式中，细胞包含载体，所述载体包含编码本文所述il-2制剂的核苷酸序列、与其基本上同源的核苷酸序列(例如，与其具有至少约85％、90％、95％、99％或更多序列同一性的序列，和/或能够在本文所述的严格条件下杂交的序列)，或上述载体的部分。
[0691]
在一个实施方式中，细胞被遗传工程改造以包含编码本文所述的il-2制剂的核酸或载体。在一个实施方式中，宿主细胞是通过使用表达盒进行基因工程改造的。术语“表达盒”是指能够影响与此类序列相容的宿主中基因表达的核苷酸序列。此类表达盒可包括启动子、含或不含内含子的开放阅读框、以及终止信号。也可以使用在影响表达中必需或有帮助的附加因子，例如，诱导型启动子。
[0692]
细胞可为但不限于：真核细胞、细菌细胞、昆虫细胞或人细胞。合适的真核细胞包括但不限于：vero细胞、hela细胞、cos细胞、cho细胞、hek293细胞、bhk细胞和mdckii细胞。合适的昆虫细胞包括但不限于：sf9细胞。
[0693]
il-2制剂的应用
[0694]
本文所述的il-2制剂(例如il-2变体、融合多肽、复合物或免疫偶联物)，以及本文所述的组合物和本文所述的核酸，具有体外、离体和体内治疗，预防和/或诊断实用性。
[0695]
在一个实施方式中，il-2制剂调节(例如，降低(例如，抑制、阻断或中和)或增加(例如，活化、启动或增强))与il-2相关联的一种或多种生物活性。例如，可以将这些il-2制剂给予体外或离体培养中的细胞，或给予对象，例如人类对象，例如，体内给予，以调节与il-2相关联的一种或多种生物活性。因此，在一个方面，本公开提供了一种治疗、预防或诊断对象中疾病(例如，本文所述的疾病)的方法，包括向对象给予本文所述的il-2剂，从而使得所述病症得到治疗、预防或诊断。例如，本公开提供了一种方法，所述方法包括使本文所述的il-2制剂与培养中的细胞(例如体外或离体)接触，或将本文所述的il-2制剂给予于对象，例如，在体内给予，以治疗，预防或诊断疾病，例如与il-2相关联的疾病(例如本文所述的疾病)。
[0696]
本文所用术语“对象”旨在包括人和非人动物。在一个实施方式中，所述对象是人类对象，例如患有本文所述病症或有患本文所述病症的风险的人类患者。术语“非人动物”包括哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类动物。在一个实施方式中，对象是人。本文所述的方法和组合物适用于治疗人类患者的本文所述疾病。具有本文所述病症的患者包括患有本文所述病症但(至少暂时)无症状的那些患者，已经表现出本文所述病症的症状的患者，或患有与本文所述的病症相关或相关联的病症的患者。
[0697]
不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂选择性地刺激
调节性t细胞(treg)。例如，本文所述的il-2制剂可以促进cd3 foxp3 t细胞的增殖、存活、活化和/或功能，相对于cd3 foxp3-t细胞。测量选择性刺激treg能力的方法可以通过外周血白细胞的流式细胞术测量，其中观察到foxp3 cd4 t细胞在总cd4 t细胞中的百分比增加，foxp3 cd8 t细胞在总cd8 t细胞中的百分比增加，foxp3 t细胞相对于nk细胞的百分比增加，和/或foxp3 t细胞表面cd25的表达水平相对于其它t细胞上cd25表达的增加的幅度更大。treg细胞的优势生长也可以检测为去甲基化foxp3启动子dna(即，treg特异性去甲基化区域，或tsdr)相对于全血中提取的dna中的去甲基化cd3基因的增加的呈现(representation)，如通过来自亚硫酸氢盐处理的基因组dna的聚合酶链式反应(pcr)产物的测序来检测(j.sehouli等.2011.epigenetics6:2,236-246)。不希望受理论束缚，相信在一个实施方式中，所描述的il-2制剂可通过调节性t细胞的选择性活化来实现免疫调节，导致对t效应细胞和nk细胞的影响最小的treg刺激。本文所述的il-2制剂特别适用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病，例如，主要由效应t细胞活化介导(例如，狼疮性肾炎、自身免疫性肝炎、肾病综合征)。在一个实施方式中，il-2制剂导致免疫调节而不伴随免疫抑制，这在il-2疗法中是非常需要的。
[0698]
在一个方面，本公开提供了增加t细胞群内调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞(non-treg)的比率的方法，包括使t细胞群与有效量的本文所述的il-2制剂接触。
[0699]
在一个实施方式中，il-2制剂选择性地将treg相对于非treg的比率增加约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9、10倍或更多。在一个实施方式中，il-2制剂选择性地将cd3 foxp3 细胞与cd3 foxp3-细胞的比率增加约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％，100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9、10倍或更多。
[0700]
在一个方面，本公开提供了增加对象(例如，对象的外周血)中调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞(non-treg)的比率的方法，包括使对象或样品与有效量的本文所述的il-2制剂接触。
[0701]
在一个实施方式中，il-2制剂选择性地将对象中或来自对象的样品(例如，外周血样品)中的treg与非treg的比率增加约20％、30％、40％，50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9、10倍或更多。在一个实施方式中，il-2制剂选择性地将对象中或来自对象的样品(例如，外周血样品)中的cd3 foxp3 细胞与cd3 foxp3-细胞的比率增加约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9、10倍或更多。
[0702]
在一个方面，本公开提供了增加对象(例如，对象的外周血)中调节性t细胞(treg)与自然杀伤细胞(nk)的比率的方法，包括使对象或样品与有效量的本文所述的il-2剂接触。
[0703]
在一个实施方式中，il-2制剂选择性地将对象中或来自对象的样品(例如，外周血样品)中的treg与nk的比率增加约20％、30％、40％，50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9、10倍或更多。在一个实施方式中，il-2制剂选择性地增加对象中或来自对象的样品(例如，外周血样品)中的cd3 foxp3 细胞与表达cd56和/或cd16的cd3-cd19-淋巴细胞的比率，增加约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多，或约2、3、4、5、6、7、8、9，10倍或更多。
[0704]
治疗或预防疾病的方法
[0705]
本文所述的il-2制剂(例如il-2变体、融合多肽、复合物或免疫偶联物)，以及本文所述的药物组合物和本文所述的核酸，可用于治疗或预防各种病症或病症。
[0706]
在一个实施方式中，所述病症是免疫病症，例如自身免疫疾病。在一个实施方式中，所述病症是癌症。在一个实施方式中，所述病症是传染病。
[0707]
本文所述的il-2制剂可具有最优或改善的半衰期，这对于治疗或预防广泛的病症或病症而言可能是合乎需要的。虽然不希望受理论束缚，但相信在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂可提供优于具有相同或相似结合亲和性和/或特异性的其它il-2制剂(例如，不具有或未工程改造成具有最优或改善的半衰期的il-2制剂)的一种或多种益处。这些益处可包括但不限于：提高的治疗或预防效力、降低或减少的剂量方案、或改善的药代动力学特性。在一个实施方式中，il-2包括如本文所述的突变的fc区。
[0708]
在一个实施方式中，对象内(例如对象的外周血中)的调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞的比率在给予后增加。在一个实施方式中，对象体内(例如对象的外周血中)的调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞的比率在给予后基本保持不变。在一个实施方式中，该方法还包括鉴定需要增加treg水平的对象。在一个实施方式中，该方法还包括在给予之前和/或之后确定对象中的treg水平。
[0709]
可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的示例性免疫病症或病症包括但不限于：艾迪生病、无丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗gbm/抗tbm肾炎、抗磷脂综合征(aps)、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳病(aied)、轴突和神经元神经病(aman)、白塞病、大疱性类天疱疮、巨大淋巴结增生(castleman病)(cd)、乳糜泻、恰加斯(chagas)病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(cidp)、慢性复发性多灶性骨髓炎(crmo)、变应性肉芽肿性血管炎(churg-strauss)、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、cogan综合征、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇心肌炎、crest综合征、克罗恩病、疱疹样皮炎、皮肌炎、devic病(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、dressler综合征、子宫内膜异位症、嗜酸性食管炎(eoe)、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、原发性混合冷球蛋白血症、evans综合征、纤维肌痛、纤维化肺泡炎、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肾小球肾炎、goodpasture综合征、肉芽肿性多血管炎、移植物抗宿主病(gvhd)、graves病、guillain-barre综合征、桥本甲状腺炎、溶血性贫血、henoch-schonlein紫癜(hsp)、妊娠疱疹或类天疱疮(pg))、低丙种球蛋白血症、iga肾病、igg4相关硬化性疾病、包涵体肌炎(ibm)、间质性膀胱炎(ic)、青少年关节炎、青少年糖尿病(1型糖尿病)、青少年肌炎(jm)、川崎病、lambert-eaton综合征、白细胞破碎性血管炎、扁平苔藓、硬化苔藓、木质结膜炎、线性iga病(lad)、狼疮(例如、系统性红斑狼疮(sle)或狼疮性肾炎)、慢性莱姆病、膜神经病、梅尼埃病、显微镜下多血管炎(mpa)、混合性结缔组织病(mctd)、莫伦氏溃疡、mucha-habermann病、多发性硬化症(ms)、重症肌无力、肌炎、嗜睡症、肾病综合征、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性类天疱疮、视神经炎、回文风湿病(pr)、pandas(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神疾病)、副肿瘤性小脑变性(pcd)、阵发性夜间血球(pnh)、parry romberg综合征、睫状体扁平部炎(外周葡萄膜炎)、parsonnage-turner综合征、天疱疮、外周神经病、外周脑脊髓炎、恶性贫血(pa)、poems综合征(多发性神经病、器官肿大、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、皮肤变化)、结节性多动脉炎、风湿性多发性肌痛、多发性肌炎、心肌梗塞后综合征、心包切开术后综合征、原
发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、孕激素皮炎、银屑病、银屑病关节炎、纯红细胞再生障碍(prca)、坏疽性脓皮病、雷诺氏病现象、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、reiter综合征、复发性多软骨炎、不宁腿综合征(rls)、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎(ra)、结节病、schmidt综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征(sps)、亚急性细菌性心内膜炎(sbe)、susac综合征、交感性眼炎(so)、takayasu动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(ttp)、tolosa-hunt综合征(ths)、横贯性脊髓炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎(uc)、未分化结缔组织病(uctd)、葡萄膜炎、血管炎、白癜风或韦格纳肉芽肿病(肉芽肿性多血管炎(gpa))。
[0710]
在一个实施方式中，可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的疾病是狼疮性肾炎。在一个实施方式中，可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的疾病是自身免疫性肝炎。在一个实施方式中，可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的病症是肾病综合征。
[0711]
可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的示例性病症或病症包括但不限于癌症(例如，实体瘤或血液癌症)、传染病(例如，细菌感染或病毒感染)、免疫疾病(例如，自身免疫性疾病)或器官移植排斥(例如，移植物抗宿主病(gvhd))。在一个实施方式中，所述病症是慢性病症。
[0712]
可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的示例性癌症包括但不限于急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞白血病(aml)、肾上腺皮质癌、卡波西肉瘤、aids相关淋巴瘤、原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤、肛门癌、阑尾癌、星形细胞瘤、非典型畸胎样/横纹肌样瘤、基底细胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌(如尤文肉瘤或骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤)、脑肿瘤(如星形细胞瘤、脑干神经胶质瘤、中枢神经系统非典型畸胎样/横纹肌样肿瘤、中枢神经系统胚胎肿瘤、中枢神经系统生殖细胞瘤、颅咽管瘤或室管膜瘤)、乳腺癌、支气管瘤、伯基特淋巴瘤、类癌瘤(例如胃肠道类癌瘤)、心脏(心脏)肿瘤、胚胎瘤、生殖细胞瘤、淋巴瘤、宫颈癌、胆管癌、脊索瘤、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性粒细胞性白血病(cml)、慢性骨髓增生性肿瘤、结肠癌、结直肠癌、颅咽管瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、导管原位癌(dcis)、子宫内膜癌、室管膜瘤、食管癌症、感觉神经母细胞瘤、尤文肉瘤、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、眼癌(例如，眼内黑色素瘤或视网膜母细胞瘤)、输卵管癌、骨纤维组织细胞瘤、骨肉瘤、胆囊癌、胃部(胃)癌、胃肠道类癌、胃肠道间质瘤(gist)、生殖细胞肿瘤(如中枢神经系统肿瘤、颅外肿瘤)、性腺外肿瘤、卵巢癌或睾丸癌)、妊娠滋养细胞疾病、神经胶质瘤、毛细胞白血病、头颈癌、肝细胞(肝癌)癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、胰岛细胞肿瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、卡波西肉瘤、肾癌(例如肾细胞癌或肾母细胞瘤)、朗格汉斯细胞组织细胞增多症(lch)、喉癌、白血病(例如，急性淋巴细胞白血病(all)、急性髓细胞白血病(aml)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性髓细胞白血病(cml)或毛细胞白血病)、唇癌和口腔癌、肝癌、肺癌(例如，非小细胞肺癌(nsclc)或小细胞肺癌)、淋巴瘤(例如，艾滋病相关淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤)，巨球蛋白血症、男性乳腺癌、骨恶性纤维组织细胞瘤和骨肉瘤、黑色素瘤(例如眼内(眼)黑色素瘤)、默克尔细胞癌、间皮瘤、转移性鳞状颈癌、中线癌、口腔癌、多发性内分泌肿瘤综合征、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤、蕈样肉芽肿、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓增生性肿瘤、慢性骨髓增生性肿瘤、鼻腔和鼻窦癌、鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌、唇癌和口腔癌、口咽癌、骨肉瘤和骨的恶性纤维组织细胞瘤、卵
巢癌(例如，上皮性卵巢癌或生殖细胞卵巢肿瘤)、胰腺癌、胰腺神经内分泌肿瘤(胰岛细胞肿瘤)、乳头状瘤病、副神经节瘤、鼻旁窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、垂体瘤、胸膜肺母细胞瘤、腹膜癌、前列腺癌、直肠癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺癌、肉瘤(例如，尤文肉瘤、卡波西肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、软组织肉瘤或子宫肉瘤)、s
é
zary综合征、皮肤癌(例如，黑色素瘤、默克尔细胞癌或非黑色素瘤皮肤癌)、小肠癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、喉癌、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、尿道癌、子宫内膜癌、阴道癌、外阴癌或其转移性病变。
[0713]
可以通过本文所述的il-2制剂治疗或预防的示例性传染病包括但不限于不动杆菌感染、放线菌病、非洲昏睡病(非洲锥虫病)、aids(获得性免疫缺陷综合征)、阿米巴病、无形体病、血管圆线虫病、异尖线虫病、炭疽、溶血隐秘杆菌感染、阿根廷出血热、蛔虫病、曲霉病、星状病毒感染、巴贝斯虫病、蜡状芽孢杆菌感染、细菌性肺炎、细菌性阴道病、拟杆菌感染、小袋虫病、巴尔通氏体病、贝利斯蛔虫感染、bk病毒感染、黑色发结节病、囊胚病、芽生菌病、玻利维亚出血热、肉毒杆菌中毒(和婴儿肉毒杆菌中毒)、巴西出血热、布鲁氏菌病、鼠疫、伯克霍尔德菌感染、布鲁里溃疡、杯状病毒感染(诺如病毒和沙波病毒)、弯曲杆菌病、念珠菌病(念珠菌病；鹅口疮)、毛细血管病、腐肉病、猫抓病、蜂窝组织炎、南美锥虫病(美国锥虫病)、软下疳、水痘、基孔肯雅热、衣原体感染、肺炎衣原体感染(台湾急性呼吸系统病原体或twar)、霍乱、嗜色芽生菌病、壶菌病、支睾吸虫病、艰难梭菌结肠炎、球孢子菌病、科罗拉多蜱热(ctf)、普通感冒(急性病毒性鼻咽炎；急性鼻炎)、克雅氏病(cjd)、克里米亚-刚果出血热(cchf)、隐球菌病、隐孢子虫病、皮肤幼虫移行症(clm)、环孢子虫病、囊尾蚴病、巨细胞病毒感染、登革热、桥丝线虫感染、齿阿米巴病、白喉、双叶虫病、麦地那龙线虫病、埃博拉出血热、棘球蚴病、埃立克体病、蛲虫病(蛲虫感染)、肠球菌感染、肠道病毒感染、流行性斑疹伤寒、传染性红斑(第五种疾病)、幼儿急疹(第六种疾病)、片形吸虫病、片形吸虫病、致死性家族性失眠症(ffi)、丝虫病、梭状芽孢杆菌引起的食物中毒产气荚膜梭菌感染、游离阿米巴感染、梭杆菌感染、气性坏疽(梭菌性肌坏死)、地毛病、gss综合征(gss)、贾第鞭毛虫病、鼻涕虫病、颌吸虫病、淋病、腹股沟肉芽肿(多诺瓦菌病)、a组链球菌感染、组b链球菌感染、流感嗜血杆菌感染、手足口病(hfmd)、汉坦病毒肺综合征(hps)、心脏地带病毒病、幽门螺杆菌感染、溶血性尿毒症(hus)、肾综合征出血热(hfrs)、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、戊型肝炎、单纯疱疹病毒、组织胞浆菌病、钩虫感染、人类博卡病毒感染、人类埃立克体病、人类粒细胞无形体病(hga)、人类偏肺病毒感染、人单核细胞埃立克体病、人乳头瘤病毒(hpv)感染、人副流感病毒感染、处女膜异位症、爱泼斯坦-巴尔病毒传染性单核细胞增多症(mono)、流感(流感)、等孢子虫病、川崎病、角膜炎、金格杆菌感染、库鲁病、拉沙热、军团病(军团病)、军团病(庞蒂亚克热)、利什曼病、麻风病、钩端螺旋体病、李斯特菌病、莱姆病(莱姆疏螺旋体病)、淋巴丝虫病(象皮病)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎、疟疾、马尔堡出血热(mhf)、麻疹、中东呼吸综合征(mers)，类鼻疽(惠特莫尔病)，脑膜炎，脑膜炎球菌病，后殖吸虫病，微孢子虫病，传染性软疣(mc)，猴痘，腮腺炎，鼠斑疹伤寒(地方性斑疹伤寒)，肺炎支原体，足菌肿(消歧)，蝇蛆病，新生儿结膜炎(新生儿眼炎)、(新)变体克鲁兹佛得-雅克病(vcjd、nvcjd)、诺卡氏菌病、盘尾丝虫病(河盲症)、螺旋体病、副球孢子菌病(南美芽生菌病)、肺吸虫病、巴氏杆菌病、头虱病(头虱)、虱病体虱(体虱)，耻骨虱(阴虱，蟹虱)，盆腔炎(pid)，百日咳(百日咳)，鼠疫，
肺炎球菌感染，肺孢子菌肺炎(pcp)，肺炎，脊髓灰质炎，普氏菌感染，原发性阿米巴脑膜脑炎(pam)、进行性多灶性白质脑病、鹦鹉热、q热、狂犬病、回归热、呼吸道合胞病毒感染、鼻孢子虫病、鼻病毒感染、立克次体感染、立克次体痘、裂谷热(rvf)、落基山斑疹热(rmsf)、轮状病毒感染、风疹、沙门氏菌病、sars(严重急性呼吸系统综合症)、疥疮、血吸虫病、败血症、志贺菌病(杆菌性痢疾)、带状疱疹(带状疱疹)、天花(天花)、孢子丝菌病、葡萄球菌食物中毒、葡萄球菌感染、类圆线虫病、亚急性硬化性全脑炎、梅毒、绦虫病、破伤风(lockjaw)、须癣(理发痒)、头癣(头皮癣)、体癣(体癣)、股癣(股癣)、手癣(手癣)，黑癣、足癣(运动员的足部)、甲癣(甲癣)、花斑癣(花斑癣)、弓蛔虫病(游走性幼虫(olm))、弓蛔虫病(游走性幼虫(vlm))、沙眼、弓形虫病、旋毛虫病、滴虫病、鞭虫病(鞭虫感染)、肺结核、土拉菌病、伤寒、斑疹伤寒、解脲脲原体感染、谷热、委内瑞拉马脑炎、委内瑞拉出血热、创伤弧菌感染、副溶血性弧菌肠炎、病毒性肺炎、西尼罗河热、白彼德拉(白癣)、假结核耶尔森氏菌感染、耶尔森氏菌病、黄热病、寨卡热或接合菌病。
[0714]
本文所述的il-2制剂通常以在患者系统中保持治疗有效水平的il-2制剂直至患者康复的频率给予。例如，il-2制剂的给药频度可实现足以使至少约1、2、5、10、20、30或40个/种制剂结合各自目标分子或细胞的血清浓度。在一个实施方式中，每1、2、3、4、5、6或7天，每1、2、3、4、5或6周，或者每1、2、3、4、5或6个月给予il-2制剂。在一个实施方式中，il-2制剂每月给予一次。在一个实施方式中，il-2制剂每周给予一次。
[0715]
给予各种试剂(例如，抗体分子或融合蛋白)的方法是本领域已知的并且描述如下。所用制剂的适宜剂量将取决于对象的年龄和体重以及所用的具体药物。
[0716]
在一个实施方式中，对象内(例如对象的外周血中)的调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞的比率在给予后增加。在一个实施方式中，对象体内(例如对象的外周血中)的调节性t细胞(treg)与非调节性t细胞的比率在给予后基本保持不变。
[0717]
il-2制剂可以单独使用或与第二试剂例如蛋白质例如抗体分子、聚合物(例如聚乙二醇(peg))或细胞因子偶联使用。在一个实施方式中，第二制剂包括第二il-2制剂。该方法包括：将il-2制剂单独或与第二种试剂联合，给予需要这种治疗的对象。
[0718]
狼疮性肾炎
[0719]
本文所述的il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白(例如，il-2-fc融合蛋白)、il-2复合物或il-2偶联物)，以及本文公开的药物组合物可用于治疗狼疮性肾炎。狼疮性肾炎是一种自身免疫性疾病，是肾小球肾炎的一种形式，可构成系统性红斑狼疮(sle)最严重的器官表现。狼疮性肾炎会导致肾脏出现自身抗体，例如，针对含核酸颗粒的抗体(抗核抗体(ana))，这会导致炎症，例如、肾单位发炎，并损害肾功能，例如废物清除和过滤。它可能导致永久性疤痕和肾脏损伤，并可能导致终末期肾病(esrd)。狼疮肾炎通常在发展狼疮的五年内在对象中发展。在一个实施方式中，狼疮，例如sle和/或狼疮性肾炎，可由多种因素的组合引起，例如遗传、环境、免疫调节、激素和/或表观遗传因素。
[0720]
由于il-2缺乏导致的t细胞失衡可以放大鼠狼疮，而il-2可以恢复treg:tcon平衡并阻碍疾病进展。离体扩增的调节性t细胞的过继转移可以抑制易患狼疮的小鼠的疾病。较低数量的treg通常与活动性sle患者相关，treg在发作期间会下降，在缓解期间会增加。
[0721]
狼疮性肾炎对更好治疗的需求尚未得到满足。例如，常规的免疫抑制治疗并非均一地有效。即使在有缓解的患者中，35％可能会复发。5-20％的狼疮性肾炎患者在最初事件
后10年内发展为终末期肾病(eskd)。药物引起的毒性仍然是一个问题，死亡和发病的最常见原因之一是感染。
[0722]
狼疮性肾炎的示例性症状包括但不限于尿液中的血液(血尿)、蛋白尿、泡沫尿(例如，由于尿液中蛋白质过多而导致的泡沫尿)、排尿增加、水肿、雷诺综合征、关节痛、心包炎和积液、关节炎、胸腔积液、高血压、手、脚踝和足部肿胀、血液中肌酸水平过高、肌肉疼痛、体重增加、不明原因发热、神经系统并发症和通常位于面部(例如，跨鼻和面部)的红疹。
[0723]
狼疮性肾炎的诊断可以基于尿液分析和血液、细胞管型(例如，经常在血液和/或肾小管中发现的细胞碎片)和尿液中的蛋白质水平的测量。诊断也可以基于评估肾功能的血液测试，例如，有或没有血尿素氮(bun)测试的肌酸血液测试。此外，为了测试肾功能，可以从血液样本中测量人的估计肾小球滤过率(egfr)。也可以进行肾活检，这可用于分期狼疮性肾炎。在一个实施方式中，狼疮性肾炎被分类为国际肾脏病学会/肾脏病理学会(isn/rps)分类系统下的六个阶段之一，其包括最小系膜狼疮肾炎(i类)、系膜增殖性狼疮肾炎(ii类))、局灶性狼疮性肾炎(《50％的肾小球)(iii类)、弥漫性节段性或全局性狼疮性肾炎(≥50％的肾小球)(iv类)、膜性狼疮性肾炎(v类)或晚期硬化性狼疮性肾炎(》90％的肾小球)(vi类)。
[0724]
在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂与不同的治疗剂或方式组合用于治疗对象的狼疮性肾炎。
[0725]
自身免疫性肝炎
[0726]
本文所述的il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白(例如，il-2-fc融合蛋白)、il-2复合物或il-2偶联物)，以及本文公开的药物组合物可用于治疗自身免疫性肝炎。自身免疫性肝炎是一种影响肝脏的自身免疫性疾病，导致进行性和慢性炎症以及肝损伤。它可能导致永久性瘢痕形成和肝硬化和/或肝功能衰竭。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎的特征可以是t细胞介导的针对肝脏自身抗原的免疫反应，该免疫反应由调节性免疫控制和耐受性的丧失引起。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎可以由多种因素的组合引起，例如遗传、环境、饮食和免疫调节因素。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎可由未知病因引起。
[0727]
肝脏炎症通常取决于t效应细胞和treg之间的平衡。活检是诊断和调整治疗所必需的，界面性肝炎通常是活检的标志性发现。aih患者的il-2水平较低，treg对il-2补充剂反应良好。不希望受理论束缚，据信在一个实施方式中，t细胞(treg和t效应细胞两者)在aih的发展和持续存在中起作用。例如，受损的treg功能和炎症肝组织中treg与t效应细胞的比率可能是疾病的潜在驱动因素。
[0728]
自身免疫性肝炎对更好治疗的需求尚未得到满足。基于类固醇的疗法被认为是护理标准。治疗停止后复发几乎是普遍的(例如，在25％和100％之间)。长期使用硫唑嘌呤可能与患癌风险相关联。
[0729]
自身免疫性肝炎的示例性症状包括但不限于关节疼痛、嗜睡、恶心、食欲不振、上腹部肝脏疼痛、眼睛和皮肤黄疸、深色尿液、皮疹、牛皮癣、白癜风、痤疮、疲劳、蜘蛛状血管瘤、肝肿大、直肠出血或呕吐、不明原因的体重减轻、瘙痒、小腿、脚踝或足部水肿以及腹部积液引起的腹胀。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎导致血清转氨酶、igg水平、自身抗体、肝界面肝炎和/或肝酶、丙氨酸转氨酶(alt)和天冬氨酸转氨酶(ast)水平升高。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎导致il-2水平降低。
[0730]
自身免疫性肝炎的诊断可以基于实验室检查和/或肝功能检查，例如血液检查、肝活检、超声波、多普勒超声检查、ct和/或mri和胆管造影(x射线检查胆管)。在一个实施方式中，血液测试包括一种或多种凝血测试(例如，测量凝血因子)，全血细胞计数(cbc)，电解质组，血清胆红素测试，血清白蛋白测试，血清碱性磷酸酶测试，血清转氨酶(转氨酶)测试，凝血酶原时间(ptt)测试，丙氨酸转氨酶(alt)测试，天冬氨酸转氨酶(ast)测试，γ-谷氨酰转肽酶测试，乳酸脱氢酶测试，5-核苷酸酶测试，甲胎蛋白测试和线粒体抗体测试。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎的诊断包括测量自身免疫性抗体，例如抗核抗体(ana)和抗平滑肌抗体(sma)。
[0731]
在一个实施方式中，自身免疫性肝炎的诊断包括量化修订的诊断标准(rdc)评分。在一个实施方式中，rdc分数的量化包括以下标准中的一个或多个：性别(例如，是女性)；碱性磷酸酶水平与天冬氨酸氨基转移酶或丙氨酸氨基转移酶水平的比率；γ-球蛋白或igg水平；ana，sna和抗肝肾微粒体i型(抗lkm1)抗体滴度，抗线粒体抗体阳性，病毒血清学标志物，使用具有肝毒性的药物，饮酒，hladr3或hladr4基因型，并发免疫疾病(例如，甲状腺炎和/或结肠炎)和/或组织学特征(例如，是否存在界面性肝炎，浆细胞，玫瑰花结和/或胆道变化)。在一个实施方式中，》15分的总rdc分数被分类为自身免疫性肝炎。在一个实施方式中，10-15的总rdc评分被分类为可能的自身免疫性肝炎。
[0732]
在一个实施方式中，自身免疫性肝炎的诊断包括量化简化诊断标准(sdc)评分。在一个实施方式中，≥7的sdc总分被分类为自身免疫性肝炎。在一个实施方式中，≥6的sdc总分被分类为可能的自身免疫性肝炎。在一个实施方式中，sdc评分的量化包括以下标准中的一项或多项：自身抗体(例如，ana、sna和/或抗lkm1抗体)的存在、免疫球蛋白水平(例如，γ-球蛋白或igg的水平)、病毒性肝炎和/或与自身免疫性肝炎相符的组织学特征。
[0733]
在一个实施方式中，自身免疫性肝炎可以分类为i型自身免疫性肝炎。i型自身免疫性肝炎可发生在任何年龄。在一个实施方式中，i型自身免疫性肝炎通常与其它自身免疫性疾病相关，例如甲状腺炎、炎性肠病、i型糖尿病、艾迪生病。在一个实施方式中，自身免疫性肝炎可以分类为ii型自身免疫性肝炎。ii型自身免疫性肝炎在儿童和年轻人中更为常见。在一个实施方式中，ii型自身免疫性肝炎可能与其它自身免疫性疾病、甲状腺炎、炎性肠病、i型糖尿病、艾迪生病相关联。
[0734]
在一个实施方式中，本文所述的il-2制剂与不同的治疗剂或方式组合用于治疗对象的自身免疫性肝炎。
[0735]
肾病综合征
[0736]
本文所述的il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白(例如，il-2-fc融合蛋白)、il-2复合物或il-2偶联物)，以及本文公开的药物组合物可用于治疗肾病综合征，例如特发性肾病综合征。肾病综合征是一系列表明肾脏受损的症状，包括但不限于白蛋白尿(尿液中的蛋白质增加)、高脂血症(血液中的脂肪和胆固醇水平高于正常水平)、水肿(例如，通常在腿、脚、脚踝，手或脸较少)和/或低白蛋白血症(血液中白蛋白水平低)。在一个实施方式中，肾病综合征是由肾脏肾小球的损伤引起的，这损害了肾功能，例如废物去除和过滤。在一个实施方式中，在肾病综合征中，受损的肾小球允许至少约3克或更多的蛋白质泄漏到尿液中，如在24小时期间测量的。在一个实施方式中，肾病综合征可导致其它健康问题，例如贫血、心脏病、高血压、积液、血栓、感染、营养不良、中风、心脏病发作、急性肾损伤、慢性肾病、
肾衰竭、和/或终末期肾病(esrd)。
[0737]
在一个实施方式中，肾病综合征起因于全身性t细胞失调，例如cd4 t辅助细胞减少和cd8 细胞毒性t细胞流行率增加；th2和th1细胞之间的不平衡，增加了il-13的产生，和/或t调节细胞的频率和/或功能降低。
[0738]
在一个实施方式中，肾病综合征是影响肾脏的其它疾病的结果，例如局灶节段性肾小球硬化(fsgs)、微小病变(mcd)、iga肾病、狼疮肾炎和膜性肾病。在一个实施方式中，肾病综合征是影响全身的全身性疾病的结果，包括但不限于肾脏，例如糖尿病、淀粉样变性和/或狼疮(例如系统性红斑狼疮(sle)和/或狼疮肾炎)。在一个实施方式中，特发性神经病由mcd或原发性fsgs引起。在一个实施方式中，局灶节段性肾小球硬化(fsgs)是成人特发性肾病综合征最常见的病因。在一个实施方式中，微小病变病(mcd)是儿童特发性肾病综合征最常见的病因。在一个实施方式中，mcd导致t调节细胞、t调节细胞相关细胞因子(例如，tgf-β1和il-10)和t调节细胞相关转录因子(例如，foxp3)水平降低。在一个实施方式中，增加调节性t细胞的数量可以诱导fsgs的缓解。
[0739]
肾病综合征的示例性症状包括但不限于水肿、泡沫尿(例如，由于尿液中过量蛋白质引起的泡沫尿)、体重增加(例如，由于液体潴留过多导致体重增加)、疲劳和食欲缺乏。
[0740]
肾病综合征的诊断可以基于尿液分析和血液、细胞管型(例如，经常在血液和/或肾小管中发现的细胞碎片)、尿液中的白蛋白和/或肌酸水平以及尿液中蛋白质水平的测量。诊断也可以基于评估肾功能的血液测试，例如，有或没有血尿素氮(bun)测试的肌酸血液测试。此外，为了测试肾功能，可以从血液样本中测量人的估计肾小球滤过率(egfr)。也可以进行肾活检。
[0741]
肾病综合征通常可以通过类固醇治疗，但复发很常见，并且通常需要使用一种或多种其它疗法。
[0742]
在一个实施方式中，本文所述的il-2剂与不同的治疗剂或方式组合用于治疗对象的肾病综合征。
[0743]
联合疗法
[0744]
本文所述的il-2制剂(例如，il-2变体、il-2融合蛋白、il-2复合物或il-2偶联物)以及本文所公开的药物组合物可与其它疗法联合使用。
[0745]
例如，联合疗法可包括本文所述的il-2制剂，与一种或多种其它治疗剂，例如本文所述的一种或多种其它治疗剂共同配制和/或共同给予。在其它实施方式中，il-2制剂与其它治疗性治疗方式组合给予，例如本文所述的其它治疗性治疗方式。此类联合治疗可有利地利用较低剂量的所给治疗剂，由此避免了与各种单独治疗相关的可能毒性或并发症。
[0746]
如本文所用，“联合”给予是指在对象罹患病症之前或期间，将两种(或更多种)不同处理/治疗递送给该对象。在一个实施方式中，两种或更多种处理是预防性递送的，例如在对象罹患病症前或被诊断患有该病症前递送。在另一个实施方式中，在对象已发展或诊断出患有所述疾病之后进行两种或更多种处理。在一个实施方式中，在第二处理开始递送时，第一处理的递送仍在持续，由此存在重叠。这有时在本文中称为“同时”或“共同递送”。在其他实施方式中，在第一处理的递送终止后，再开始递送其他处理。在这两种情况之任一的实施方式中，处理因联合给予而更有效。例如，与若只给予第二处理而不给予第一处理所能观察到的相比，第二处理更有效(例如采用更少的第二处理观察到同样的效果，或者第二
处理更大程度地减轻或减少症状)，或者第一处理亦然。在一个实施方式中，与递送一种处理而不递送另一种所能观察到的相比，递送更大程度地减轻或减少或降低症状或病症相关的其他参数。两种处理的效果可部分加合、完全加合或大于加合。递送可使递送第一处理的效果在递送第二处理时仍可被检测到。
[0747]
在一个实施方式中，il-2制剂与第二种疗法(例如，其它制剂)组合给予以治疗或预防本文所述的病症。在一个实施方式中，其它制剂是第二il-2制剂，例如不同于第一il-2制剂的il-2制剂。可以联合使用的示例性il-2制剂包括但不限于本文所述的il-2制剂的任何组合。在另一个实施方式中，其它制剂不是il-2制剂。例如，其它试剂可以是小分子或核酸分子。在又一个实施方式中，第二疗法选自手术、放射疗法、细胞疗法(例如，干细胞疗法)，或器官或组织移植。
[0748]
在一个实施方式中，第二疗法包括选自以下中的一种或多种的疗法：雄激素替代疗法，抗激素疗法，抗血清疗法，自体免疫增强疗法，生物疗法，血液辐射疗法，近距离放射疗法，心脏再同步化疗法，细胞疗法，细胞转移疗法，螯合疗法，化学疗法，金黄疗法，钴疗法，冷加压疗法，冷冻疗法，电痉挛疗法，电磁疗法，电子疗法，电疗法，酶替代疗法，表观遗传疗法，雌激素替代疗法，体外冲击波疗法，快中子疗法，氟化物疗法，基因疗法，热疗法，蠕虫疗法，激素疗法，激素替代疗法，宿主调节治疗，高压氧疗法，热疗疗法，免疫抑制疗法，免疫疗法，术中电子放射疗法，术中放射疗法，倒置疗法，激光疗法，光疗法，锂疗法，低强度激光疗法，磁力疗法，磁共振疗法，医用气体疗法，医学营养疗法，分子伴侣疗法，分子疗法，单克隆抗体疗法，负空气电离疗法，中子俘获疗法，中子疗法，口服补液疗法，渗透疗法，氧气疗法，臭氧疗法，姑息疗法，粒子疗法，噬菌体疗法，音素神经学低铬疗法，光动力疗法，光疗法，光热疗法，物理疗法，增殖疗法，蛋白质疗法，质子疗法，脉冲电磁场疗法，puva疗法，放射疗法，补液疗法，呼吸疗法，抢救疗法，血清疗法，干细胞疗法，立体定向放射疗法，靶向疗法，温热疗法，tk细胞疗法，致耐受性疗法，透皮持续氧疗，紫外线疗法或病毒疗法。
[0749]
可与本文所述的il-2制剂联合使用以治疗或预防其它病症的示例性疗法也在本文“治疗或预防疾病的方法”部分中进行了描述。
[0750]
本公开内容还包括如下编号段落中的任意内容：
[0751]
1.一种白介素2(il-2)试剂，其包含人il-2变体，所述人il-2变体在选自以下的一个或多个位置处包含氨基酸变化(例如，取代)：t3、h16、i28、k35、r38、f42、e68、v69、q74、d84、s87、n88、i92、c125、q126或其组合。
[0752]
2.如段落1所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74或其组合处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0753]
3.如段落1或2所述的il-2制剂，其包含在位置v69和q74处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0754]
4.如段落1-3中任一项所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是v69a。
[0755]
5.如段落1-4中任一项所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是q74p。
[0756]
6.如段落1-5中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置h16、i92、d84或其组合处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0757]
7.如段落1-6中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置h16处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是h16n、h16l或h16d。
[0758]
8.如段落7所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是h16n。
[0759]
9.如段落7所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是h16l。
[0760]
10.如段落1-9中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置i92处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是i92s。
[0761]
11.如段落1-10中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置d84处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是d84v。
[0762]
12.如段落1-11中任一项所述的il-2制剂，其包含氨基酸变化(例如，在位置k35、r38、f42、e68或其组合处的取代)。
[0763]
13.如段落1-12中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置k35处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是k35e。
[0764]
14.如段落1-13中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是r38e、r38n或r38q。
[0765]
15.如段落14所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是r38n。
[0766]
16.如段落15所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是r38q。
[0767]
17.如段落1-16中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置f42处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是f42k或f42q。
[0768]
18.如段落17所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是f42q。
[0769]
19.如段落1所述的il-2制剂，其包含氨基酸变化(例如，取代)：
[0770]
(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
[0771]
(ii)在位置h16、i92或d84处；和任选地
[0772]
(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
[0773]
20.如段落1所述的il-2制剂，其包含氨基酸变化(例如，取代)：
[0774]
(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
[0775]
(ii)在位置h16、i92或d84处；和
[0776]
(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
[0777]
21.如段落1所述的il-2制剂，其包含氨基酸变化(例如，取代)：
[0778]
(i)在位置v69和q74处，和/或在位置k35处；和
[0779]
(ii)在位置h16、i92或d84处；或
[0780]
(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
[0781]
22.如段落1所述的il-2制剂，其包含氨基酸变化(例如，取代)：
[0782]
(i)在位置v69和q74处；和/或在位置k35处；和
[0783]
(ii)在位置h16、i92、d84或其组合处，和
[0784]
(iii)在位置r38、f42、e68处或其组合。
[0785]
23.如段落19-22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和h16处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和h16n或h16l，任选地其中氨基酸取代是v69a、q74p和h16l。
[0786]
24.如段落19-22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和i92处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和i92s。
[0787]
25.如段落19-22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和d84处的氨基
酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和d84v。
[0788]
26.如段落21所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38q。
[0789]
27.如段落21所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和f42处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和f42q。
[0790]
28.如段落21所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38n。
[0791]
29.如段落21所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74和r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和r38e。
[0792]
30.如段落19-22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74、k35和h16处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p、k35e，和h16n或h16l。
[0793]
31.如段落30所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是v69a、q74p、k35e和h16n。
[0794]
32.如段落30所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是v69a、q74p、k35e和h16l。
[0795]
33.如段落19、20或22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74、k35、h16和r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是v69a、q74p、k35e、h16n和r38n。
[0796]
34.如段落19、20或22中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置v69、q74、h16和r38处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是v69a、q74p、h16n或h16l，和r38n或r38q，任选地其中氨基酸取代是v69a、q74p、h16n或h16l和r38q。
[0797]
35.如段落34所述的il-2制剂，其中氨基酸取代是v69a、q74p、h16l和r38q。
[0798]
36.如段落1-35中任一项所述的il-2制剂，包含在位置i28、e68、s87、n88、q126或其组合处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0799]
37.如段落1-36中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置i28处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是i28t或i28f。
[0800]
38.如段落1-37中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置e68处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是e68q或e68n。
[0801]
39.如段落1-38中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置s87处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是s87r。
[0802]
40.如段落1-39中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置n88处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是n88s、n88l或n88d。
[0803]
41.如段落1-40中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置q126处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是q126t、q126k或q126r。
[0804]
42.如段落1-41中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置c125处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0805]
43.如段落42所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是c125s。
[0806]
44.如段落1-43中任一项所述的il-2制剂，包括在位置t3处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0807]
45.如段落44所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是t3a。
[0808]
46.如段落1-45中任一项所述的il-2制剂，包含在位置v69、q74和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是v69a、q74p和c125s。
[0809]
47.如段落46所述的il-2制剂，其还包含在位置t3、h16、i92或其组合处的氨基酸变化(例如，取代)。
[0810]
48.如段落46或47所述的il-2制剂，其包含在位置h16、v69、q74和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是h16n或h16l、v69a、q74p，和c125s。
[0811]
49.如段落46-48中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置h16、v69、q74和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是h16l、v69a、q74p和c125s。
[0812]
50.如段落48或49所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是h16l、v69a、q74p和c125s。
[0813]
51.如段落48所述的il-2制剂，其中所述氨基酸取代是h16n、v69a、q74p和c125s。
[0814]
52.如段落46-48中任一项所述的il-2制剂，其包含在位置h16、v69、q74、i92和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代是h16l、v69a、q74p、i92s和c125s。
[0815]
53.如段落46或47所述的il-2制剂，其包含在位置t3、v69、q74和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是t3a、v69a、q74p和c125s。
[0816]
54.如段落53所述的il-2制剂，其包含在位置t3、h16、v69、q74和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是t3a、h16n或h16l、v69a、q74p和c125s。
[0817]
55.如段落53所述的il-2制剂，其包含在位置t3、v69、q74、i92和c125处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中所述氨基酸取代分别是t3a、h16n、v69a、q74p、i92s，和c125s。
[0818]
56.如段落1所述的il-2制剂，其中人il-2变体包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，seq id no:1002，或其功能性片段，或与其具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，20，25，或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0819]
57.如段落56所述的il-2制剂，其中人il-2变体包含以下氨基酸序列：如seq id no:4、seq id no:5所示的氨基酸序列，或其功能性片段，或与其具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列相同性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9，10、11、12、13、14、15、20、25或30个氨基酸的氨基酸序列。
[0820]
58.如前述段落中任一项所述的il-2制剂，其中所述人il-2变体通过接头融合至
非il-2部分，其中所述接头是多肽接头，任选地其中所述多肽接头是柔性接头、刚性接头或可裂解接头。
[0821]
59.如段落58所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是gly-ser接头(例如，(g4s)n接头，其中n＝1、2、3、4、5、6或更大(seq id no:1020))、富含的脯氨酸延伸接头(例如，v1gpc、v2、gpgc、v3gcgcp、纤维素酶接头4、纤维素酶接头4)、刚性接头(例如，a(eaaak)na，其中n＝2、3、4、5或更大(seq id no:1021)；repr_12)，非gs接头(例如，(gggsa)n，其中n＝1、2、3、4、5或更大(seq id no:1022))，或免疫球蛋白铰链区或其部分。
[0822]
60.如段落58或59所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是gly-ser接头，其包含(g4s)1(seq id no:1023)、(g4s)2(seq id no:1024)、(g4s)3(seq id no:1025)，(g4s)4(seq id no:48)、(g4s)5(seq id no:1026)或(g4s)6(seq id no:1027)。
[0823]
61.如段落60所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是包含(g4s)4(seq id no:48)的gly-ser接头。
[0824]
62.如段落58所述的il-2制剂，其中所述多肽接头包含选自seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:54，或seq id no:55的氨基酸序列。
[0825]
63.如段落62所述的il-2制剂，其中该多肽接头包含seq id no:48的氨基酸序列。
[0826]
64.如段落58-63中任一项所述的il-2制剂，其中所述非il-2部分是免疫球蛋白fc区或其片段或部分。
[0827]
65.如段落64所述的il-2制剂，其中所述免疫球蛋白fc区包含igg fc区、igd fc区、iga fc区、igm fc区或ige fc区，或其片段或部分。
[0828]
66.如段落65所述的il-2制剂，其中所述igg fc区包含野生型人igg1 fc区，野生型igg2 fc区，或野生型人igg4 fc区，或其片段或部分。
[0829]
67.如段落65所述的il-2制剂，其中igg fc区包含突变igg1(例如，igg1m3同种异型)或突变igg4 fc区，或其片段或部分。
[0830]
68.如段落67所述的il-2制剂，其包含突变的igg4 fc区或其片段或部分，其中所述突变的igg4 fc区是人的。
[0831]
69.如段落67或68所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区或其片段或部分包含根据eu编号法编号的ser228处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中在ser228处的氨基酸变化(例如，取代)是s228p。
[0832]
70.如段落67-69中任一项所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区或其片段或部分在根据eu编号法编号的arg409处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中arg409处的氨基酸变化(例如，取代)是r409k。
[0833]
71.如段落67-70中任一项所述的il-2制剂，其中突变igg4 fc区或其片段或部分包含在根据eu编号法编号的thr307、gln311和ala378处的氨基酸变化(例如，取代)，任选其中氨基酸变化(例如，取代)分别是t307q、q311v和a378v。
[0834]
72.如段落67或68所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区包含选自seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46或seq id no:47的氨基酸序列。
[0835]
73.如段落67所述的il-2制剂，其包含突变的igg1 fc区或其片段或部分，其中所述突变的igg1 fc区是人的。
[0836]
74.如段落67或73所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区或其片段或部分在根据eu编号法编号的asn297处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中asn297处的氨基酸变化(例如，取代)是n297g。
[0837]
75.如段落67或73所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区或其片段或部分包含根据eu编号法编号的leu234、leu235和pro329处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地，其中氨基酸变化(例如，取代)分别是l234a、l235a和p329g。
[0838]
76.如段落67或73-75所述的il-2制剂，其中突变igg1 fc区或其片段或部分包含在根据eu编号法编号的thr307、gln311和ala378处的氨基酸变化(例如，取代)，任选其中氨基酸变化(例如，取代)分别是t307q、q311v和a378v。
[0839]
77.如段落67或73所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区包含选自seq id no:40、seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:1003的氨基酸序列。
[0840]
78.如段落67或73所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区包含seq id no:1003的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列。
[0841]
79.如段落58-77中任一项所述的il-2制剂，其中所述非il-2部分抑制或减低所述il-2制剂引发fc受体介导的免疫效应功能的能力。
[0842]
80.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含il-2变体，该变体包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，或seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，或seq id no:1002，或其功能性片段；其中il-2制剂包含gly-ser接头，任选地其中所述gly-ser接头包含(g4s)4(seq id no:48)，并且其中所述il-2变体通过所述gly-ser接头融合至包含选自以下的氨基酸序列的igg fc区：seq id no:39，seq id no:40，seq id no:41，seq id no:42，seq id no:43，seq id no:44，seq id no:45，seq id no:46，seq id no:47，或seq id no:1003。
[0843]
81.如段落80所述的il-2制剂，其中所述il-2制剂包含il-2变体序列，所述il-2变体序列包含如seq id no:4或seq id no:5所示的氨基酸序列。
[0844]
82.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:56，seq id no:57，seq id no:58，seq id no:59，seq id no:60，seq id no:61，seq id no:62，seq id no:63，seq id no:64，seq id no:65，seq id no:66，seq id no:67，seq id no:68，seq id no:69，seq id no:70，seq id no:71，seq id no:72，seq id no:73，seq id no:74，seq id no:75，seq id no:76，seq id no:77，seq id no:78，seq id no:79，seq id no:80，seq id no:81，seq id no:82，seq id no:83，seq id no:84，seq id no:85，seq id no:86，seq id no:87，seq id no:88，seq id no:89，seq id no:90，seq id no:91，seq id no:92，seq id no:93，seq id no:1004，seq id no:1005，seq id no:1006，seq id no:1007，seq id no:1008，或seq id no:1009，或其功能性片段。
[0845]
83.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:1004、
seq id no:1005、seq id no:1006、seq id no:1007、seq id no:1008或seq id no:1009或其功能性片段。
[0846]
84.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:94，seq id no:95，seq id no:96，seq id no:97，seq id no:98，seq id no:99，seq id no:100，seq id no:101，seq id no:102，seq id no:103，seq id no:104，seq id no:105，seq id no:106，seq id no:107，seq id no:108，seq id no:109，seq id no:110，seq id no:111，seq id no:112，seq id no:113，seq id no:114，seq id no:115，seq id no:116，seq id no:117，seq id no:118，seq id no:119，seq id no:120，seq id no:121，seq id no:122，seq id no:123，seq id no:124，seq id no:125，seq id no:126，seq id no:127，seq id no:128，seq id no:129，seq id no:130，或seq id no:131，或其功能性片段。
[0847]
85.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:132，seq id no:133，seq id no:134，seq id no:135，seq id no:136，seq id no:137，seq id no:138，seq id no:139，seq id no:140，seq id no:141，seq id no:142，seq id no:143，seq id no:144，seq id no:145，seq id no:146，seq id no:147，seq id no:148，seq id no:149，seq id no:150，seq id no:151，seq id no:152，seq id no:153，seq id no:154，seq id no:155，seq id no:156，seq id no:157，seq id no:158，seq id no:159，seq id no:160，seq id no:161，seq id no:162，seq id no:163，seq id no:164，seq id no:165，seq id no:166，seq id no:167，seq id no:168，或seq id no:169，或其功能性片段。
[0848]
86.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:170，seq id no:171，seq id no:172，seq id no:173，seq id no:174，seq id no:175，seq id no:176，seq id no:177，seq id no:178，seq id no:179，seq id no:180，seq id no:181，seq id no:182，seq id no:183，seq id no:184，seq id no:185，seq id no:186，seq id no:187，seq id no:188，seq id no:189，seq id no:190，seq id no:191，seq id no:192，seq id no:193，seq id no:194，seq id no:195，seq id no:196，seq id no:197，seq id no:198，seq id no:199，seq id no:200，seq id no:201，seq id no:202，seq id no:203，seq id no:204，seq id no:205，seq id no:206，或seq id no:207，或其功能性片段。
[0849]
87.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:208，seq id no:209，seq id no:210，seq id no:211，seq id no:212，seq id no:213，seq id no:214，seq id no:215，seq id no:216，seq id no:217，seq id no:218，seq id no:219，seq id no:220，seq id no:221，seq id no:222，seq id no:223，seq id no:224，seq id no:225，seq id no:226，seq id no:227，seq id no:228，seq id no:229，seq id no:230，seq id no:231，seq id no:232，seq id no:233，seq id no:234，seq id no:235，seq id no:236，seq id no:237，seq id no:238，seq id no:239，seq id no:240，seq id no:241，seq id no:242，seq id no:243，seq id no:244，或seq id no:245，或其功能性片段。
[0850]
88.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:246，seq id no:247，seq id no:248，seq id no:249，seq id no:250，seq id no:251，seq id no:252，seq id no:253，seq id no:254，seq id no:255，seq id no:256，seq id no:257，seq id no:258，seq id no:259，seq id no:260，seq id no:261，seq id no:262，seq id no:263，seq id no:264，seq id no:265，seq id no:266，seq id no:267，seq id no:268，
seq id no:269，seq id no:270，seq id no:271，seq id no:272，seq id no:273，seq id no:274，seq id no:275，seq id no:276，seq id no:277，seq id no:278，seq id no:279，seq id no:280，seq id no:281，seq id no:282，或seq id no:283，或其功能性片段。
[0851]
89.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:284，seq id no:285，seq id no:286，seq id no:287，seq id no:288，seq id no:289，seq id no:290，seq id no:291，seq id no:292，seq id no:293，seq id no:294，seq id no:295，seq id no:296，seq id no:297，seq id no:298，seq id no:299，seq id no:300，seq id no:301，seq id no:302，seq id no:303，seq id no:304，seq id no:305，seq id no:306，seq id no:307，seq id no:308，seq id no:309，seq id no:310，seq id no:311，seq id no:312，seq id no:313，seq id no:314，seq id no:315，seq id no:316，seq id no:317，seq id no:318，seq id no:319，seq id no:320，或seq id no:321，或其功能性片段。
[0852]
90.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:322，seq id no:323，seq id no:324，seq id no:325，seq id no:326，seq id no:327，seq id no:328，seq id no:329，seq id no:330，seq id no:331，seq id no:332，seq id no:333，seq id no:334，seq id no:335，seq id no:336，seq id no:337，seq id no:338，seq id no:339，seq id no:340，seq id no:341，seq id no:342，seq id no:343，seq id no:344，seq id no:345，seq id no:346，seq id no:347，seq id no:348，seq id no:349，seq id no:350，seq id no:351，seq id no:352，seq id no:353，seq id no:354，seq id no:355，seq id no:356，seq id no:357，seq id no:358，或seq id no:359，或其功能性片段。
[0853]
91.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:59的氨基酸序列或其功能性片段。
[0854]
92.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:97的氨基酸序列或其功能性片段。
[0855]
93.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:135的氨基酸序列或其功能性片段。
[0856]
94.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:173的氨基酸序列或其功能性片段。
[0857]
95.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:211的氨基酸序列或其功能性片段。
[0858]
96.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:249的氨基酸序列或其功能性片段。
[0859]
97.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:287的氨基酸序列或其功能性片段。
[0860]
98.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:325的氨基酸序列或其功能性片段。
[0861]
99.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:66的氨基酸序列或其功能性片段。
[0862]
100.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:104的氨基酸序列或其功能性片段。
[0863]
101.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:142的氨基酸序列或其功能性片段。
[0864]
103.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:180的氨基酸序列或其功能性片
段。
[0865]
104.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:218的氨基酸序列或其功能性片段。
[0866]
105.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:256的氨基酸序列或其功能性片段。
[0867]
106.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:294的氨基酸序列或其功能性片段。
[0868]
107.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:332的氨基酸序列或其功能性片段。
[0869]
108.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:60的氨基酸序列或其功能性片段。
[0870]
109.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:98的氨基酸序列或其功能性片段。
[0871]
110.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:136的氨基酸序列或其功能性片段。
[0872]
111.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:174的氨基酸序列或其功能性片段。
[0873]
112.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:212的氨基酸序列或其功能性片段。
[0874]
113.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:250的氨基酸序列或其功能性片段。
[0875]
114.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:288的氨基酸序列或其功能性片段。
[0876]
115.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:326的氨基酸序列或其功能性片段。
[0877]
116.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:69的氨基酸序列或其功能性片段。
[0878]
117.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:107的氨基酸序列或其功能性片段。
[0879]
118.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:145的氨基酸序列或其功能性片段。
[0880]
119.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:183的氨基酸序列或其功能性片段。
[0881]
120.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:221的氨基酸序列或其功能性片段。
[0882]
121.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:259的氨基酸序列或其功能性片段。
[0883]
122.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:297的氨基酸序列或其功能性片段。
[0884]
123.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:335的氨基酸序列或其功能性片段。
[0885]
124.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1004的氨基酸序列或其功能性片段。
[0886]
125.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1005的氨基酸序列或其功能性片段。
[0887]
126.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1006的氨基酸序列或其功能性片段。
[0888]
127.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1007的氨基酸序列或其功能性片段。
[0889]
128.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1008的氨基酸序列或其功能性片段。
[0890]
129.一种白介素-2(il-2)试剂，包含seq id no:1009的氨基酸序列或其功能性片段。
[0891]
130.如前述段落中任一项所述的il-2制剂，其中，相对于不包含所述氨基酸变化(例如，取代)的参考il-2制剂，所述氨基酸变化(例如取代)为所述il-2制剂提供以下性质中的至少一种或多种(例如2、3、4、5、6、7、8种或全部)：
[0892]
(i)增强或增加的il-2制剂的表达；
[0893]
(ii)抑制或减少的il-2制剂的聚集；
[0894]
(iii)增强或增加的il-2制剂的稳定性；
[0895]
(iv)延长或增加的il-2制剂的半衰期；
[0896]
(v)抑制或减少的il-2制剂的周转和/或清除；
[0897]
(vi)抑制或减少(例如，中度抑制或减少)或基本不变的il-2制剂与人cd25的结合；
[0898]
(vii)抑制或减低的il-2制剂对人cd122的亲和性；
[0899]
(viii)抑制或减低的il-2制剂对人cd132的亲和性；或
[0900]
(ix)抑制或减低的il-2制剂对由人cd122和人cd132构成的二聚il-2受体的亲和性；
[0901]
(x)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3
t细胞)；
[0902]
(xi)treg中il-2信号转导通路的选择性活化；和/或
[0903]
(xii)增强或增加的，或减少或减低的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0904]
131.如段落130所述的il-2制剂，其中所述参考il-2制剂包含seq id no:1031、seq id no:1或seq id no:2的氨基酸序列，或其功能性片段。
[0905]
132.一种白介素-2(il-2)试剂，其包含人il-2变体，其包含选自h16d、h16n、h16l、i28t、k35e、r38q、r38n、r38e、f42k、f42q、v69a、q74p、d84v、s87r、n88l、n88s、i92s、c125s中的一个或多个氨基酸变化(例如，取代)；多肽接头；和，非il-2部分；其中氨基酸变化(例如取代)使il-2制剂相对于不包含所述氨基酸变化(例如，取代)的参考il-2制剂具有以下性质中的至少一项或多项：
[0906]
(i)增强或增加的il-2制剂的表达；
[0907]
(ii)抑制或减少的il-2制剂的聚集；
[0908]
(iii)增强或增加的il-2制剂的稳定性；
[0909]
(iv)延长或增加的il-2制剂的半衰期；
[0910]
(v)抑制或减少的il-2制剂的周转和/或清除；
[0911]
(vi)抑制或减少(例如，中度抑制或减少)或基本不变的il-2制剂与人cd25的结合；
[0912]
(vii)抑制或减低的il-2制剂对人cd122的亲和性；
[0913]
(viii)抑制或减低的il-2制剂对人cd132的亲和性；
[0914]
(ix)抑制或减低的il-2制剂对由人cd122和人cd132构成的二聚il-2受体的亲和性；
[0915]
(x)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3 t细胞)；
[0916]
(xi)treg中il-2信号转导通路的选择性活化；和/或
[0917]
(xii)增强或增加、或减少或减低的诱导或促进treg扩增、活性、存活和/或增殖的能力。
[0918]
133.如段落132所述的il-2制剂，其中人il-2变体包含氨基酸变化(例如，取代)：
[0919]
(i)c125s；
[0920]
(ii)v69a，q74p和c125s；
[0921]
(iii)h16d，v69a，q74p和c125s；
[0922]
(iv)h16n，v69a，q74p和c125s；
[0923]
(v)h16l，v69a，q74p和c125s；
[0924]
(vi)i28t，v69a，q74p和c125s；
[0925]
(vii)v69a，q74p，d84v和c125s；
[0926]
(viii)v69a，q74p，s87r和c125s；
[0927]
(ix)v69a，q74p，n88l和c125s；
[0928]
(x)v69a，q74p，n88s和c125s；
[0929]
(xi)v69a，q74p，i92s和c125s；
[0930]
(xii)k35e，v69a，q74p和c125s；
[0931]
(xiii)k35e，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0932]
(xiv)k35e，h16l，v69a，q74p和c125s；
[0933]
(xv)k35e，d84v，v69a，q74p和c125s；
[0934]
(xvi)k35e，i92s，v69a，q74p和c125s；
[0935]
(xvii)r38q，v69a，q74p和c125s；
[0936]
(xviii)r38q，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0937]
(xix)r38q，h16l，v69a，q74p和c125s；
[0938]
(xx)r38q，d84v，v69a，q74p和c125s；
[0939]
(xxi)r38q，i92s，q74p和c125s；
[0940]
(xxii)r38n，v69a，q74p和c125s；
[0941]
(xxiii)r38n，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0942]
(xxiv)r38n，h16l，v69a，q74p和c125s；
[0943]
(xxv)r38n，d84v，v69a，q74p和c125s；
[0944]
(xxvi)r38n，i92s，q74p和c125s；
[0945]
(xxvii)r38e，v69a，q74p和c125s；
[0946]
(xxviii)f42k，v69a，q74p和c125s；
[0947]
(xxix)f42q，v69a，q74p和c125s；
[0948]
(xxx)f42a，y45a，l72g，n88d，v69a，q74p和c125s；
[0949]
(xxxi)r38n，s87r，v69a，q74p和c125s；
[0950]
(xxxii)r38e，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0951]
(xxxiii)r38e，d84v，v69a，q74p和c125s；
[0952]
(xxxiv)r38e，s87r，v69a，q74p和c125s；
[0953]
(xxxv)r38e，i92s，v69a，q74p和c125s；
[0954]
(xxxvi)f42q，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0955]
(xxxvii)f42q，i92s，v69a，q74p和c125s；
[0956]
(xxxviii)k35e，r38n，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0957]
(xxxix)t3a，h16n，v69a，q74p和c125s；
[0958]
(xl)t3a，h16l，v69a，q74p和c125s；或
[0959]
(xli)t3a，v69a，q74p，i92s和c125s。
[0960]
134.如段落133所述的il-2制剂，其中人il-2变体包含氨基酸变化(例如，取代)：(i)h16n，v69a，q74p和c125s，或(ii)h16l，v69a，q74p和c125s。
[0961]
135.一种白介素-2(il-2)制剂，其包含人il-2变体，该变体包含选自以下的氨基酸序列：seq id no:2，seq id no:3，seq id no:4，seq id no:5，seq id no:6，seq id no:7，seq id no:8，seq id no:9，seq id no:10，seq id no:11，seq id no:12，seq id no:13，seq id no:14，seq id no:15，seq id no:16，seq id no:17，seq id no:18，seq id no:19，seq id no:20，seq id no:21，seq id no:22，seq id no:23，seq id no:24，seq id no:25，seq id no:26，seq id no:27，seq id no:28，seq id no:29，seq id no:30，seq id no:31，seq id no:32，seq id no:33，seq id no:34，seq id no:35，seq id no:36，seq id no:37，seq id no:38，seq id no:1000，seq id no:1001，或seq id no:1002，或其功能性片段，或与其具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；多肽接头；和非il-2部分；其中，相对于不包含所述人il-2多肽变体的参考il-2制剂，所述il-2制剂显示以下性质中的一种或多种：
[0962]
(i)增强或增加的il-2制剂的表达；
[0963]
(ii)抑制或减少的il-2制剂的聚集；
[0964]
(iii)增强或增加的il-2制剂的稳定性；
[0965]
(iv)延长或增加的il-2制剂的半衰期；
[0966]
(v)抑制或减少的il-2制剂的周转和/或清除；
[0967]
(vi)抑制或减少(例如，中度抑制或减少)或基本不变的il-2制剂与人cd25的结合；
[0968]
(vii)抑制或减低的il-2制剂对人cd122的亲和性；
[0969]
(viii)抑制或减低的il-2制剂对人cd132的亲和性；
[0970]
(ix)抑制或减低的il-2制剂对由人cd122和人cd132构成的二聚il-2受体的亲和性；
[0971]
(x)选择性结合至调节性t细胞(例如，foxp3
t细胞)；或
[0972]
(xi)treg中il-2信号转导通路的选择性活化；或
[0973]
(xii)增强或增加的，或减少或减低的诱导或促进treg扩增、活性和/或增殖的能力。
[0974]
136.如段落135所述的il-2制剂，其中所述人il-2变体包含如seq id no:4或seq id no:5所示的氨基酸序列。
[0975]
137.如段落132-136中任一项所述的il-2制剂，其中所述人il-2变体通过接头融合至非il-2部分，其中所述接头是多肽接头，任选地其中所述多肽接头是柔性接头、刚性接头或可裂解接头。
[0976]
138.如段落137所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是gly-ser接头(例如，(g4s)n接头，其中n＝1、2、3、4、5、6或更大(seq id no:1020))、富含的脯氨酸延伸接头(例如，v1gpc、v2、gpgc、v3gcgcp、纤维素酶接头4、纤维素酶接头4)、刚性接头(例如，a(eaaak)na，其中n＝2、3、4、5或更大(seq id no:1021)；repr_12)，非gs接头(例如，(gggsa)n，其中n＝1、2、3、4、5或更大(seq id no:1022))，或免疫球蛋白铰链区或其部分。
[0977]
139.如段落137或138所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是gly-ser接头，其包含(g4s)1(seq id no:1023)、(g4s)2(seq id no:1024)、(g4s)3(seq id no:1025)，(g4s)4(seq id no:48)、(g4s)5(seq id no:1026)或(g4s)6(seq id no:1027)。
[0978]
140.如段落130所述的il-2制剂，其中所述多肽接头是包含(g4s)4(seq id no:48)的gly-ser接头。
[0979]
141.如段落137所述的il-2制剂，其中所述多肽接头包含选自seq id no:48、seq id no:49、seq id no:50、seq id no:51、seq id no:52、seq id no:53、seq id no:54，或seq id no:55的氨基酸序列。
[0980]
142.如段落141所述的il-2制剂，其中该多肽接头包含seq id no:48的氨基酸序列。
[0981]
143.如段落132-142中任一项所述的il-2制剂，其中所述非il-2部分是免疫球蛋白fc区或其片段或部分。
[0982]
144.如段落143所述的il-2制剂，其中所述免疫球蛋白fc区包含igg fc区、igd fc区、iga fc区、igm fc区或ige fc区，或其片段或部分。
[0983]
145.如段落144所述的il-2制剂，其中所述igg fc区包含野生型人igg1 fc区，野生型igg2 fc区，或野生型人igg4 fc区，或其片段或部分。
[0984]
146.如段落144所述的il-2制剂，其中igg fc区包含突变igg1(例如，igg1m3同种异型)或突变igg4 fc区，或其片段或部分。
[0985]
147.如段落146所述的il-2制剂，其包含突变的igg4 fc区或其片段或部分，其中所述突变的igg4 fc区是人的。
[0986]
148.如段落146或147所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区或其片段或部分包含根据eu编号法编号的ser228处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中在ser228处的
氨基酸变化(例如，取代)是s228p。
[0987]
149.如段落146-148中任一项所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区或其片段或部分在根据eu编号法编号的arg409处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中arg409处的氨基酸变化(例如，取代)是r409k。
[0988]
150.如段落146-149中任一项所述的il-2制剂，其中突变igg4 fc区或其片段或部分包含在根据eu编号法编号的thr307、gln311和ala378处的氨基酸变化(例如，取代)，任选其中氨基酸变化(例如，取代)分别是t307q、q311v和a378v。
[0989]
151.如段落146或147所述的il-2制剂，其中所述突变igg4 fc区包含选自seq id no:44、seq id no:45、seq id no:46或seq id no:47的氨基酸序列.
[0990]
152.如段落146所述的il-2制剂，其包含突变的igg1 fc区或其片段或部分，其中所述突变的igg1 fc区是人的。
[0991]
153.如段落146或152所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区或其片段或部分在根据eu编号法编号的asn297处包含氨基酸变化(例如，取代)，任选地其中asn297处的氨基酸变化(例如，取代)是n297g。
[0992]
154.如段落146或152所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区或其片段或部分包含根据eu编号法编号的leu234、leu235和pro329处的氨基酸变化(例如，取代)，任选地，其中氨基酸变化(例如，取代)分别是l234a、l235a和p329g。
[0993]
155.如段落146或152-154中任一项所述的il-2制剂，其中突变igg1 fc区或其片段或部分包含在根据eu编号法编号的thr307、gln311和ala378处的氨基酸变化(例如，取代)，任选其中氨基酸变化(例如，取代)分别是t307q、q311v和a378v。
[0994]
156.如段落146或152所述的il-2制剂，其中所述突变igg1 fc区包含选自seq id no:40、seq id no:41、seq id no:42、seq id no:43或seq id no:1003的氨基酸序列。
[0995]
157.如段落132-156中任一项所述的il-2制剂，其中所述非il-2部分抑制或减低所述il-2制剂引发fc受体介导的免疫效应功能的能力。
[0996]
158.如段落132-157中任一项所述的il-2制剂，其中所述参考il-2制剂包含seq id no:1031、seq id no:1或seq id no:2的氨基酸序列。
[0997]
159.如前述段落中任一项所述的il-2制剂，其形成二聚体(例如，同二聚体或异二聚体)。
[0998]
160.如前述段落中任一项所述的il-2制剂，其包含il-2制剂/抗il-2抗体复合物。
[0999]
161.如前述段落中任一项所述的il-2制剂，其包含偶联物。
[1000]
162.一种药物组合物，其包含前述段落中任一项所述的il-2制剂和药学上可接受的运载体。
[1001]
163.编码如前述段落中任一项所述的il-2制剂的核酸。
[1002]
164.包含如段落163所述的核酸的载体(例如，表达载体)。
[1003]
165.一种细胞，其包含如段落135所述的核酸或如段落164所述的载体。
[1004]
166.一种产生il-2制剂的方法，其包括在允许il-2制剂表达的条件下培养(例如，维持)如段落156所述的细胞。
[1005]
167.如段落157所述的方法，还包括获得所述il-2制剂。
[1006]
168.一种增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，包括使treg
细胞或treg细胞群(例如，体外、离体或体内)接触如段落1-152中任一项所述的il-2制剂，或如段落153所述的药物组合物，或给予有此需要的对象有效量的如段落1-152中任一项所述的il-2制剂，或如段落153所述的药物组合物。
[1007]
169.一种选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，包括使treg细胞或treg细胞群(例如，体外、离体或体内)接触如段落1-161中任一项所述的il-2制剂，或如段落162所述的药物组合物，或给予有此需要的对象有效量的如段落1-161中任一项所述的il-2制剂，或如段落162所述的药物组合物。
[1008]
170.一种在有需要的对象中诱导免疫耐受的方法，包括给予有效量的如段落1-161中任一项所述的il-2制剂或如段落162所述的药物组合物。
[1009]
171.一种治疗病症(例如，自身免疫性疾病、癌症)的方法，包括给予有需要的对象有效量的如段落1-161中任一项所述的il-2制剂，或如段落162所述的药物组合物。
[1010]
172.一种组合物，其用于治疗病症(例如，自身免疫性疾病或癌症)的方法，所述方法包括给予有需要的对象如段落1-161中任一项所述的il-2制剂，或如段落162所述的药物组合物。
[1011]
173.一种试剂盒，其包含段落1-161中任一项所述的il-2制剂，或段落162所述的药物组合物，以及使用说明。
[1012]
174.一种容器，其包含段落1-161中任一项所述的il-2制剂或段落162所述的药物组合物。
[1013]
175.一种治疗病症(例如，自身免疫疾病、癌症)的方法，包括给予有需要的对象有效量的段落163所述的核酸。
[1014]
176.一种组合物，其用于治疗病症(例如，自身免疫性疾病或癌症)的方法，所述方法包括给予有需要的对象如段落163所述的核酸。
[1015]
本公开还包括以下编号的实施方式中的任一个：
[1016]
1.一种白介素2(il-2)变体，包括：
[1017]
(i)氨基酸取代h16l或h16n，和/或氨基酸取代i92s，和
[1018]
(ii)氨基酸取代v69a、q74p和c125s，
[1019]
对应于野生型人il-2(例如，seq id no:1031)。
[1020]
2.如实施方式1所述的il-2变体，其还包含氨基酸取代t3a。
[1021]
3.如实施方式1或2所述的il-2变体，其包含seq id no:4、5、11、1000、1001或1002中任一个的氨基酸序列，与其具有至少95％同一性的氨基酸序列或与其相差不多于1、2、3、4或5个氨基酸的氨基酸序列，或其功能性片段。
[1022]
4.如实施方式1-3中任一项所述的il-2变体，其选择性地刺激调节性t细胞(treg)。
[1023]
5.一种il-2融合蛋白，其包含实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1024]
6.如实施方式5所述的il-2融合蛋白，其还包含fc区。
[1025]
7.如实施方式6所述的il-2融合蛋白，其中所述fc区包含igg1同种异型m3的fc区，其包含根据eu编号法的n297g取代。
[1026]
8.如实施方式6或7所述的il-2融合蛋白，其中所述fc区包含seq id no:1003的氨基酸序列，或与其具有至少95％的同一性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、
7、8、9或10个氨基酸的氨基酸序列，或其功能性片段。
[1027]
9.如实施方式6-8中任一项所述的il-2融合蛋白，其中所述fc区与所述il-2变体的c端融合。
[1028]
10.如实施方式6-9中任一项所述的il-2融合蛋白，其还包含接头。
[1029]
11.如实施方式10所述的il-2融合蛋白，其中所述接头包含(g4s)4(seq id no:48)。
[1030]
12.如实施方式6-11中任一项所述的il-2融合蛋白，其包含seq id no:1004、1005、1006、1007、1008或1009中任一项的氨基酸序列，与其具有至少95％同一性的氨基酸序列，或与其相差不多于1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸的氨基酸序列，或其功能性片段。
[1031]
13.如实施方式6-12中任一项所述的il-2融合蛋白，其形成二聚体。
[1032]
14.一种il-2复合物，其包含实施方式1-4中任一项所述的il-2变体和抗il-2抗体分子。
[1033]
15.一种il-2偶联物，其包含实施方式1-4中任一项所述的il-2变体和非il-2部分。
[1034]
16.一种药物组合物，包含实施方式1-4中任一项所述的il-2变体和药学上可接受的运载体。
[1035]
17.一种药物组合物，其包含实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白和药学上可接受的运载体。
[1036]
18.一种药物组合物，其包含实施方式14所述的il-2复合物和药学上可接受的运载体。
[1037]
19.一种药物组合物，其包含实施方式15所述的il-2偶联物和药学上可接受的运载体。
[1038]
20.一种核酸，其编码实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1039]
21.一种核酸，其编码实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1040]
22.一种核酸，其编码实施方式14所述的il-2复合物。
[1041]
23.一种核酸，其编码实施方式15所述的il-2偶联物。
[1042]
24.一种载体，其包含实施方式20所述的核酸。
[1043]
25.一种载体，其包含实施方式21所述的核酸。
[1044]
26.一种载体，其包含实施方式22所述的核酸。
[1045]
27.一种载体，其包含实施方式23所述的核酸。
[1046]
28.一种细胞，其包含实施方式20所述的核酸。
[1047]
29.一种细胞，其包含实施方式21所述的核酸。
[1048]
30.一种细胞，其包含实施方式22所述的核酸。
[1049]
31.一种细胞，其包含实施方式23所述的核酸。
[1050]
32.一种产生il-2变体的方法，其包括在允许il-2变体表达的条件下培养实施方式28所述的细胞。
[1051]
33.一种产生il-2融合蛋白的方法，其包括在允许il-2融合蛋白表达的条件下培养实施方式29所述的细胞。
[1052]
34.一种产生il-2复合物的方法，其包括在允许il-2复合物表达的条件下培养实施方式30所述的细胞。
[1053]
35.一种产生il-2偶联物的方法，其包括在允许il-2偶联物表达的条件下培养实施方式31所述的细胞。
[1054]
36.一种增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，或给予有此需要的对象有效量的如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1055]
37.一种增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，或给予有此需要的对象有效量的如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1056]
38.一种增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式14所述的il-2复合物，或给予有此需要的对象有效量的如实施方式14所述的il-2复合物。
[1057]
39.一种增强调节性t细胞(treg)扩增、活性、存活和/或增殖的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式15所述的il-2偶联物，或给予有此需要的对象有效量的如实施方式15所述的il-2偶联物。
[1058]
40.一种选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，或给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1059]
41.一种选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，或给予有此需要的对象有效量的实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1060]
42.一种选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式14所述的il-2复合物，或给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1061]
43.一种选择性活化调节性t细胞(treg)中的il-2信号转导通路的方法，其包括使treg细胞或treg细胞群在体外、离体或体内接触如实施方式15所述的il-2偶联物，或给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1062]
44.一种诱导免疫耐受的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1063]
45.一种诱导免疫耐受的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式5-13所述的il-2融合蛋白。
[1064]
46.一种诱导免疫耐受的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1065]
47.一种诱导免疫耐受的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1066]
48.一种治疗自身免疫性疾病的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1067]
49.一种治疗自身免疫性疾病的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方
式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1068]
50.一种治疗自身免疫性疾病的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1069]
51.一种治疗自身免疫性疾病的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1070]
52.一种治疗狼疮性肾炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1071]
53.一种治疗狼疮性肾炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1072]
54.一种治疗狼疮性肾炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1073]
55.一种治疗狼疮性肾炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1074]
56.一种治疗自身免疫性肝炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1075]
57.一种治疗自身免疫性肝炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1076]
58.一种治疗自身免疫性肝炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1077]
59.一种治疗自身免疫性肝炎的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1078]
60.一种治疗肾病综合征的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式1-4中任一项所述的il-2变体。
[1079]
61.一种治疗肾病综合征的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白。
[1080]
62.一种治疗肾病综合征的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式14所述的il-2复合物。
[1081]
63.一种治疗肾病综合征的方法，包括给予有此需要的对象有效量的实施方式15所述的il-2偶联物。
[1082]
64.一种试剂盒，其包含实施方式1-4中任一项所述的il-2变体和使用说明。
[1083]
65.一种试剂盒，其包含实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白和使用说明。
[1084]
66.一种试剂盒，其包含实施方式14所述的il-2复合物和使用说明。
[1085]
67.一种试剂盒，其包含实施方式15所述的il-2偶联物和使用说明。
[1086]
68.如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，其用于在对象中诱导免疫耐受的方法中。
[1087]
69.如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，其用于在对象中诱导免疫耐受的方法中。
[1088]
70.如实施方式14所述的il-2复合物，其用于在对象中诱导免疫耐受的方法中。
[1089]
71.如实施方式15所述的il-2偶联物，其用于在对象中诱导免疫耐受的方法中。
[1090]
72.如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，其用于治疗对象的自身免疫疾病的方法中。
[1091]
73.如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，其用于治疗对象的自身免疫疾病的方法中。
[1092]
74.如实施方式14所述的il-2复合物，其用于治疗对象自身免疫疾病的方法中。
[1093]
75.如实施方式15所述的il-2偶联物，其用于治疗对象的自身免疫疾病的方法中。
[1094]
76.如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，其用于治疗对象狼疮性肾炎的方法中。
[1095]
77.如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，其用于治疗对象狼疮性肾炎的方法中。
[1096]
78.如实施方式14所述的il-2复合物，其用于治疗对象狼疮性肾炎的方法中。
[1097]
79.如实施方式15所述的il-2偶联物，其用于治疗对象狼疮性肾炎的方法中。
[1098]
80.如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，其用于治疗对象自身免疫性肝炎的方法中。
[1099]
81.如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，其用于治疗对象的自身免疫性肝炎的方法中。
[1100]
82.如实施方式14所述的il-2复合物，其用于治疗对象自身免疫性肝炎的方法中。
[1101]
83.如实施方式15所述的il-2偶联物，其用于治疗对象自身免疫性肝炎的方法中。
[1102]
84.如实施方式1-4中任一项所述的il-2变体，其用于治疗对象肾病综合征的方法中。
[1103]
85.如实施方式5-13中任一项所述的il-2融合蛋白，其用于治疗对象肾病综合征的方法中。
[1104]
86.如实施方式14所述的il-2复合物，其用于治疗对象肾病综合征的方法中。
[1105]
87.如实施方式15所述的il-2偶联物，其用于治疗对象肾病综合征的方法中。
实施例
[1106]
实施例1：能防止il-2聚集的突变的鉴定
[1107]
编码人il-2突变蛋白的开放阅读框(orf)文库通过位点饱和诱变(一种诱变技术，其中所产生的文库包含一组orf，各orf都具有单点突变，因此各氨基酸在orf内的各位置都有代表)。为了提高稳定性和防止不正确的二硫键配对，实施例中讨论的全部il-2分子都包含突变c125s，如图1b所示。
[1108]
随后将包含编码il-2突变蛋白的orf文库的pcr扩增子克隆到酵母表达载体中，允许将各诱变的人il-2突变蛋白与ha-标签和myc-标签以及与酵母aga2p多肽融合。所得酵母表达载体用于转化酵母细胞，如描述于boder和wittrup(1997)nat biotechnol 15(6):553-557。克隆表达il-2突变蛋白文库的酵母细胞采用荧光活化细胞分选法(facs)分选一次，以分选表达全长il-2突变蛋白的克隆，如myc和ha标签的同时存在所指示。
[1109]
然后将所得群体分选两次，以进一步选择这样的克隆，所述克隆显示编码的il-2突变蛋白的高表达(通过用抗myc抗体和合适的荧光二抗染色测量)和表达的il-2突变蛋白对低亲和性il-2受体(il2-ra/cd25)的高结合能力(图2)。具体而言，酵母细胞与不同水平
的含有6xhis标签的重组人cd25(“6xhis”公开为seq id no:1028)孵育，并且结合cd25的量通过流式细胞术使用抗6xhis抗体(“6xhis”公开为seq id no:1028)和适当的荧光二抗测定。对个体克隆进行桑格测序且使用下一代测序对整个群体进行测序，以识别富集的突变。
[1110]
在进行分选步骤后，v69a突变以非常高的频率出现。据报道，这种突变与q74p一起增加对cd25的亲和性，如描述于rao等.(2005)biochem44:10696-10701。为了证实这一观察结果，在以下测定中评估了包含氨基酸取代v69a/q74p的il-2突变蛋白。简而言之，用重组cd25滴定在其表面上表达具有氨基酸取代v69a/q74p、e68q、v69a、i114w、l721、n71y或m104d的il-2或il-2突变蛋白的个体酵母克隆，以确定结合亲和性(kd)和酵母表面上的活性il-2分子的相对分数(由相对结合能力＝结合的cd25与表达的il-2突变蛋白的比率确定)。几个突变大大增加了酵母细胞表面表达的活性il-2分子的比率，但没有增加对cd25的结合亲和性。与先前的报道不同，v69a/q74p降低了对cd25的结合亲和性(图3a)，同时提供了测试的活性il-2分子的最高的观察到的分数(图3b)。这些结果表明v69a/q74p取代不会增加il-2分子对cd25的结合亲和性，而是将il-2分子稳定在足以结合cd25的活性构象中。
[1111]
为了进一步评估v69a/q74p取代对il-2稳定性的作用，将野生型il-2序列和v69a/q74p il-2序列克隆到质粒中，以在人细胞中表达与人igg1的fc部分的融合物，其包括突变n297g以去除fc上的糖基化位点(seq id no:40)。将两种蛋白质转染到expi293表达系统(thermo fisher scientific)中，使用蛋白质a从上清液中纯化，并分析稳定性。含有野生型il-2(wt)的融合蛋白通过分析其解链温度(图4a)和通过尺寸排阻色谱法(图4b)确定具有大幅聚集。总之，使用酵母表面表达和分析il-2-fc融合蛋白的测定的组合举例说明了突变，特别是v69a和v69a/q74p组合，它们增加了il-2的稳定性，但对cd25结合亲和性具有不超过最小作用。
[1112]
实施例2：能降低与中间亲和性il-2受体(cd122、cd132或cd122/cd132二聚体)的组分的结合亲和性的il-2突变蛋白的产生
[1113]
il-2突变蛋白通过使用易错pcr将随机突变引入编码具有氨基酸取代v69a和q74p的人il-2多肽的基因的核苷酸序列而产生。将表达il-2突变蛋白的酵母细胞与带有6xhis标签(“6xhis”公开为seq id no:1028)的重组cd25一起孵育，然后进行facs分析以分离表达高水平的全功能/活性il-2突变蛋白的酵母细胞克隆，如实施例1中所述。
[1114]
facs分析进一步用于分离表达il-2突变蛋白的酵母细胞克隆，该突变蛋白与二聚体il-2受体(cd122/cd132)的结合减少。cd122/cd132 il-2受体通过以下方式以异二聚体形式产生：表达与igg1 fc融合的cd122，和与不同fc融合的cd132，其中在各fc中引入突变，从而它们在同一细胞中一起表达时能选择性地彼此成对(杵臼异二聚体)(杵突变s354c/t366q和臼突变y349c/t366s/l368a/y407v，如综述于liu等.(2017)frontiers in immunology8:38)。在用10nm(图5a)或50nm(图5b)的cd122/cd132异二聚体染色酵母细胞后，使用抗人fc荧光二抗检测结合的受体二聚体，并使用各种门控进行分选，如图所示(图5a和5b)。如实施例1中所述确定通过各分选策略富集的克隆。通过用一定浓度范围的cd122/cd132异二聚体(图6a)或用cd25 il-2受体的重组胞外结构域(图6b)滴定酵母细胞来测量所选酵母细胞克隆的受体结合亲和性。在accuri c6或intellicyt ique流式细胞仪上通过流式细胞术测量结合抗体的量，曲线拟合用于确定kd(表2)。总体而言，为减少与cd122/cd132fc异二聚体的结合而选择的突变显示出与该受体的结合亲和性降低，但与
cd25的结合亲和性不降低。
[1115]
这些il-2序列中的一些，连同从未以酵母展示形式个体测试的序列中鉴定的其它序列，被转移到质粒中，以用于如实施例1中所述那样以fc融合蛋白形式表达和纯化。具体而言，所指示的突变被引入il-2v69a/q74p/c125s(seq id no:2)的碱基序列，在其c端融合到包含序列(g4s)4的20氨基酸的接头(seq id no:48)，然后是含有n297g突变的igg1 fc片段(seq id no:40)。使用octet仪器(分子仪器有限责任公司(molecular devices,llc))以确定对这种形式的cd122/cd132异二聚体的亲和性。具体而言，il-2-fc融合蛋白以优化的密度被捕获于抗人fc尖端上，并在一系列受体浓度范围内确定结合和解离速率。代表性数据显示，当将野生型il-2与突变形式进行比较时，较低的亲和性是显而易见的(图7)，观察到的kd值汇总在表3中。
[1116]
此外，il-2突变蛋白、igg1 fc融合多肽通过如下方式以单体蛋白的形式表达：将突变引入fc结构域以阻止其二聚化，但仍允许被蛋白a纯化。此外，将氨基酸序列添加到各分子中以允许通过酶bira进行位点特异性生物素化。这些融合物首先在expi293细胞中表达，然后通过蛋白a层析纯化，并进行位点特异性生物素化。octet仪器(分子仪器有限责任公司)和链霉亲和素生物传感器用于捕获生物素化融合体并确定这种形式的cd122/cd132异二聚体和cd25的亲和性。具体而言，将cd122/cd132杵臼二聚体应用于生物传感器，并在一系列受体浓度范围内确定结合和解离速率。表11汇总了带有观察到的kd值的代表性数据。
[1117]
这些结果举例说明了对中等亲和性二聚体cd122/cd132 il-2受体具有一系列亲和性的il-2突变蛋白的产生和分离。
[1118]
[1119][1120][1121]
[1122][1123]
实施例3：具有降低的cd122/cd132受体亲和性的il-2-fc融合蛋白特异性活化cd25 foxp3 t调节细胞
[1124]
评估了具有改变的il-2受体亲和性的il2-fc融合蛋白特异性活化treg细胞的能力。简言之，采用基于流式细胞术的pstat5测定(如下文进一步描述)，将具有能降低cd122/cd132受体亲和性的突变(h16n、h16l、i92s、d84v和s87r)的示例性il-2-fc融合蛋白在cd25 foxp3 t调节细胞中诱导il-2信号转导的能力与在cd25
高
foxp3-t辅助细胞(定义为cd4 cd25
高
foxp3-淋巴细胞)和自然杀伤细胞(nk细胞，定义为cd3-cd56 淋巴细胞)中信号转导的诱导做比较(图8)。本实施例中，包含il2-fc融合蛋白的fc区和接头如实施例2中所述。在该测定中测量cd25 t辅助细胞，因为它们代表旨在治疗涉及异常免疫活化的疾病或病症的基于il-2的的治疗剂的最可能的非期望靶标。不包含已知会影响il-2受体亲和性的突变的亲本il-2-fc融合蛋白(seq id no:2)和临床试验中的类似分子(无关抗体，其中il-2与其c末端融合，且包含il-2中的n88d突变(c末端n88d，如描述为igg-(il-2n88d)2，于peterson等.journal of autoimmunity(2018)95:1-14)被用作比较物。
[1125]
将冷冻的人pbmc(atcc)解冻并分进96孔板。静息2小时后，用一系列浓度的il-2-fc融合蛋白、天然il-2或比较分子处理细胞30分钟。处理后，用甲醛固定细胞以“暂停”它们的信号转导过程，然后用冷甲醇处理以去除它们的质膜。然后用识别细胞身份标志物的荧光抗体对细胞进行染色。例如，t调节细胞是cd4 cd25
高
foxp3 ，il-2反应性非t调节细胞是cd4 cd25
高
foxp3-，而nk细胞是cd3-cd56 )。细胞还使用与在酪氨酸647处磷酸化的转录因子stat5结合的抗体(细胞信号转导技术公司(cell signaling technology)，目录号9365和14603)染色(pstat5)。pstat5是细胞表面受体产生il-2信号转导的直接结果，使其成为il-2信号转导的合适标志物。流式细胞术用于测量细胞身份标志物(图8)以及pstat5的水平。确定使各细胞群达到其最大信号输出的50％的il-2-fc融合蛋白浓度(ec50)，以及可获得的最大信号输出。出于分析目的，将最大信号输出标准化至使用il-2中仅含有v69a/q74p突变的il-2-fc蛋白获得的最大信号。
[1126]
图9a、9b、9c和9d分别显示了在与一系列浓度的il-2-fc融合体孵育后，cd25 treg细胞和cd25 非treg细胞、nk细胞和cd8 细胞毒性t细胞中的pstat5信号转导的水平，如图所示。如同预期，与仅含有v69a/q74p的野生型分子相比，所有突变的il-2-fc分子在活化信号转导方面的功效都降低了。与野生型分子(cd25
高
t辅助细胞、nk细胞和cd8 细胞毒性t细
胞)相比，它们均显示增加的对treg的特异性，ec50比treg移动更远，最大活化比treg降低更多，和/或在非treg群体中的信号转导因为无法测量)。此外，c末端n88d il-2-fc融合蛋白显示treg中的pstat5信号转导的诱导低于所有测试的il-2-fc融合蛋白(阴性对照分子除外)。c末端n88d在非treg细胞类型上没有可检测的信号转导，因此无法确定相对特异性(图8和表4)。
[1127]
这些结果表明，包含il-2-fc融合蛋白的人il-2多肽中的使cd122/cd132受体亲和性降低的特定突变(例如，h16n、h16l、i92s、d84v、s87r)能够增加其特异性活化t调节细胞的能力，相对于cd25
高
t辅助细胞和nk细胞，由ec
50
和最大活化的组合测量，不同的突变蛋白显示各个方面的各种行为。此外，这些数据表明，如上所述测试的一些il-2-fc融合蛋白具有比比较分子c末端n88d分子更大的活化t调节细胞的能力。
[1128]
表4：il-2-fc融合蛋白对人pbmc中treg、cd25
高
t辅助细胞和nk细胞的信号转导功效(ec
50
和最大活化)
[1129]
[1130][1131]
实施例4：与其它cd25
高
t细胞相比，对cd25具有中等亲和性的il2-fc融合蛋白对treg具有增强的特异性
[1132]
先前的工作已开发出对cd25的亲和性大大降低的il-2突变蛋白，因为此类分子可能在治疗癌症的情况下有用(levin等.nature(2012)484:529-533)。其它工作旨在增加对cd25的亲和性，基于“相对于其它细胞类型，这可能会增加对treg的活性”的假设，这可能有助于治疗涉及免疫系统异常活动的疾病。尚未探索中度降低对cd25的亲和性以增加treg特异性活化的il-2突变的能力。我们利用来自实施例1和2中酵母表面展示实验的数据来鉴定允许突变的氨基酸位置，然后将这些位置与已发表的il-2/cd25复合物结构中接触cd25的残基进行比较(stauber等.proc natl acad sci usa(2006)103(8):2788-2793)。具体地，il-2残基k35、r38、f42和e68与cd25接触并允许突变。现有突变靶向r38、f42和e68以消除cd25亲和性(carmenate等.j immunol(2013)190(12):6230-6238)，而已报道k35突变能改善il-2稳定性(rojas等.scientific reports(2019)9:800)。
[1133]
产生了在这些位置含有突变的一系列il-2-fc融合蛋白。具体而言，所指示的突变被引入il-2v69a/q74p(seq id no:2)的碱基序列，在其c端融合到包含序列(g4s)4的20氨基酸的接头(seq id no:48)，然后是含有n297g突变的igg1fc片段(seq id no:40)。测试的特定突变是k35e、r38q、r38n、r38e、f42q、f42k、e68n和e68q。如实施例4中所述，测定这些示例性il-2-fc融合蛋白在人pbmc中的treg、cd25
高
t辅助细胞和nk细胞中的il-2信号转导活性。不包含已知影响il-2受体亲和性的突变的亲本il-2-fc融合蛋白(seq id no:2)用作比较
物。在该试验中，e68n和e68q与野生型无法区分，因此不包括在下文中。
[1134]
图10a、10b和10c分别显示了在与一定浓度的il-2-fc融合蛋白孵育后，treg细胞、cd25
高
t辅助细胞和nk细胞中的pstat5信号转导水平，如图所示。表5显示了treg与cd25
高
t辅助细胞的ec
50
以及特异性(计算为cd25
高
t辅助ec
50
除以treg ec
50
的比率)。正如所料，降低对cd25的亲和性也降低了treg和cd25
高
t辅助细胞中的信号转导，但对nk细胞(不表达cd25)几乎没有影响。结果与我们的假设一致，但在就现有技术而言出乎意料，降低对cd25的亲和性也增加了(相比cd25
高
t辅助细胞)对treg的特异性。这对于r38n和k35e突变尤其明显，但这种作用发生在所有测试的突变蛋白中。
[1135]
表5.对cd25具有降低的亲和性的il-2-fc融合蛋白对t调节的信号转导功效和特异性
[1136][1137][1138]
这些结果表明，包含il-2-fc融合蛋白的人il-2多肽中的降低cd25受体亲和性的特定突变(例如，r38q、r38n、r38e、f42q、f42k、k35e)增加了(相比其它cd25
高
t细胞)特异性活化t调节细胞的能力。此外，这些结果证明，在包含il-2-fc融合蛋白的il-2多肽中某个位
置处进行取代的所选氨基酸残基(例如，r38q、r38n、r38e)不同地影响t调节细胞活化和选择性的程度。存在一个窗口，其中降低的cd25亲和性导致对于treg(相对于其它cd25
高
t细胞的)的选择性。本文介绍的试验中，该窗口开始于对treg的功效的约50％减低(2x基线ec
50
)，最大值约为80％减低的功效(5x基线ec
50
)。在87x这个点处的附加选择性减低使对treg的功效减低。因为认为treg相对于其它t细胞的选择性活化对治疗许多免疫疾病的治疗益处是有用的，所以这些位置的突变可能会赋予临床分子有用的性质。
[1139]
实施例5：具有影响与cd122/cd132和cd25两者结合的突变的il-2-fc融合蛋白保持对t调节细胞(相对于cd25
高
t细胞和nk细胞)的特异性
[1140]
因为影响与cd122/cd132二聚体结合的突变提供了对treg(相对于nk细胞和非tregt细胞的)的特异性，而cd25突变独立地提供对treg(相对于cd25
高
t辅助细胞)的特异性，因此组合突变可能具有特异性和功效的新组合，这将有用于免疫调节治疗。我们如实施例1、3和4中所述生产了il-2-fc融合蛋白并如实施例3和4中所述在pstat5试验中使用人pbmc测试它们的信号转导能力。
[1141]
图11a、11b和11c分别显示在与一定浓度范围的指定il-2-fc融合蛋白(未显示含有r38e的突变蛋白，因为它们对treg具有低功效，见表6)孵育后，treg细胞、cd25
高
t辅助细胞和nk细胞中的pstat5信号转导水平。此处显示的所有数据都使用来自单个人类供体的pbmc，但它与早前的实施例中显示的供体不同。数据在上分图和下分图之间拆分，从而使得个体曲线可见。每幅分图中都显示了仅包含v69a/q74p突变的对照il-2-fc融合体。重要的是，所有组合突变蛋白都保留了活化treg细胞中il-2信号转导的能力，对treg的功效跨越大约3个数量级。针对cd25
高
t辅助细胞和nk细胞的相对特异性无法测定，因为大多数突变蛋白无法产生足够的pstat5(能进行可靠测定的任何浓度)。以下事实，即，对treg的功效仍然很容易检测到，但对其它细胞类型的pstat5信号转导几乎无法检测，表明，靶向与cd122/cd132和与cd25相互作用的突变的组合在很大程度上保留了它们对treg的选择性。
[1142]
表6.含有靶向cd25和cd122/cd132界面的突变组合的il-2-fc融合蛋白对treg的功效(ec
50
)
[1143][1144][1145]
实施例6：柔性、螺旋和刚性接头对il-2-fc融合体的功能和稳定性影响最小
[1146]
通过掺入比(g4s)
x
(seq id no:1029)柔性接头刚性更高的螺旋接头和富含pro的接头，一些融合蛋白的功能性质、它们的表达水平和热稳定性得到改善(zhao等,protein expr purif(2008)61:73-77))。
[1147]
为了测试接头的刚性和增加的长度能否提高il-2突变蛋白的热稳定性和信号转导活性，同时仍保持它们活化调节性t细胞的特异性，设计并表达了含有稳定化il-2的fc融合蛋白(v69a/q74p突变蛋白)和含有降低对cd122的亲和性的突变(v69a/q74p/h16n)的il-2，采用8种不同的接头(il2-li-fc，表7)。测试的接头具有几个特征中的一个或多个。一些接头富含脯氨酸并且纳入了n-糖基化位点(它们被添加以增加接头肽的刚性)。测试的其它接头是α-螺旋刚性接头(arai等.,protein eng(2001)14(8):529-532)。其它一些接头是在多个结构域蛋白中被发现的天然接头，并且一些是富含脯氨酸的人工设计的序列。
[1148]
在采用荧光蛋白染料sypro橙的差示扫描荧光法(dsf)测定中，相比il-2-(g4s)
4-fc接头(“(g4s)
4”，公开为seq id no:48)，具有新接头的il-2-li-fc融合蛋白中的一些显示
了稍有改善的热稳定性(表7)。
[1149]
为了评估不同接头对il-2-li-fc融合蛋白的生物活性的作用，使用了前面实施例中描述的pstat5信号转导试验。pstat5测定用于评估接头在稳定化的il-2(包含v69a/q74p/c125s)和稳定化的il-2(包括h16n突变，其赋予对treg的选择性)的情况下，对il-2-li-fc融合蛋白的选择性和活性的作用。比较具有不同接头的il-2-li-fc融合蛋白的ec
50
显示，大多数接头与具有(g4s)4接头(seq id no:48)的il-2-fc融合物相似或较之略更有活性(表8)。一些接头显示出明显较低的活性(具有h16n突变的v5和v7)。
[1150]
表7.在野生型(wt，包含v69a/q74突变)和h16n形式(v69a/q74p/h16n)中测试的接头的氨基酸序列(li)和il-2-fc的解链温度
[1151][1152][1153]
表8.通过采用人pbmc的pstat5信号转导试验测定具有不同接头的il-2-fc蛋白对treg、cd25
高
t辅助细胞和nk的信号转导功效。
[1154][1155][1156]
实施例7：具有降低的cd122受体亲和性的il-2-fc融合蛋白在体内特异性扩增t调节细胞
[1157]
评估了具有改变的il-2受体亲和性的il2-fc融合蛋白特异性活化小鼠中的t调节细胞的能力。简言之，表达人fcrn的tg32小鼠(杰克森实验室公司(jackson labs)，缅因州巴尔港，储存货号014565)通过尾静脉注射一次一定范围剂量(0.5μg至15μg)的h16n融合蛋白，其包含与具有n297g突变的igg1 fc的n末端融合的20aags接头(g4s)4(seq id no:48)。对照小鼠用等摩尔量(1μg至30μg)的c末端n88d融合蛋白进行处理。在给药前通过流式细胞术测定淋巴细胞水平，然后在注射后3、5和7天测定淋巴细胞水平。为了测定il-2-fc融合蛋白的体内作用，测量了几个关键参数：t细胞占总淋巴细胞的分数，foxp3 treg占t细胞的分数，cd4 t辅助细胞(不包括treg)占t细胞的分数、cd8 t细胞占t细胞的分数，和自然杀伤(nk)细胞占总淋巴细胞的分数。具体而言，总淋巴细胞定义为活cd45 细胞，t细胞定义为活
cd45 cd3 ，treg定义为活cd45 cd3 cd4 cd25
高
cd127
–
细胞，t辅助细胞定义为活cd45 cd3 cd4 非cd25
高
和cd127
–
，cd8 t细胞为活cd45 cd3 cd8 细胞，nk细胞为活cd45 cd3
–
nk1.1 。
[1158]
图12显示了treg占总t细胞的百分比。两种分子在3天时都显示出强力的剂量依赖性增加，在随后的时间点下降。在这些小鼠中，对il-2-fc h16n的响应更持久，表明该分子在更长时间内发挥活性。图12a和图12b的数据被绘制为三只小鼠在各剂量各时间点的相对于基线(处理前的值)的平均响应，而图12c显示用最高剂量的各分子处理的个体小鼠的数据。图13和图14显示了在用各剂量的il-2-fc融合蛋白或c末端n88d处理后，分别为t辅助细胞和cd8 t细胞的t细胞百分比。3天后，t效应细胞占总量的分数有明显的剂量依赖性下降，该作用在之后的时间点下降。对两种分子的剂量匹配响应之间没有有意义的差异。
[1159]
图15a和图15b分别显示用il-2-fc h16n和c末端n88d处理的小鼠的nk细胞响应(nk细胞/总淋巴细胞)。数据绘制为三只小鼠在各剂量各时间点的相对于基线(处理前的值)的平均nk细胞百分比。在用il-2-fc h16n处理的小鼠中，在第3天，nk细胞的分数在低剂量时略有下降或在高剂量时略有增加，呈剂量依赖性。该作用在之后的时间点下降。相比之下，在用c末端n88d处理的小鼠中，nk细胞扩增的剂量依赖性刺激比用il-2-fc h16n蛋白处理的小鼠观察到的程度要大得多。对于用各分子的最高剂量处理的个体小鼠，相对于基线，nk细胞占总淋巴细胞的分数显示在图15c中。
[1160]
总之，这些结果表明用il-2-fc h16n融合蛋白处理小鼠会诱导foxp3 t调节细胞的选择性扩增。与比较分子相比，il-2-fc h16n在较长时间内诱导treg的扩增，并在体内诱导少得多的nk细胞扩增。
[1161]
实施例8：降低il-2-fc融合蛋白的il-2受体结合亲和性延长其体内寿命
[1162]
与使用il-2的现有疗法相比，il-2-fc融合蛋白的一个重要优势预计是延长体内寿命(bell等.j autoimmunity(2015)56:66-80)。在fc或抗体融合蛋白的情况下，假设与il-2受体结合是体内清除的主要途径。我们已经通过用对cd25和cd122受体具有降低的亲和性的il-2-fc融合蛋白处理tg32小鼠来测试这一点(突变f42a、y45a、l72g、n88d、v69a、q74p、c125s(seq id no:30))。图16显示的结合数据证明了相较于仅含有v69a/q74p/c125s突变的il-2-fc的对cd25和cd122两者的降低的亲和性，和，il-2-fc失活在体外在任何测试浓度的人pbmc中不会引起pstat5磷酸化(图9a)。
[1163]
如实施例7中所述从采用il-2-fc融合蛋白或c末端n88d处理的小鼠采集血浆。使用elisa测定法，用抗il-2捕获抗体(r&d systems，af-202)和偶联至辣根过氧化物酶的抗人fc二抗(杰克森免疫研究公司(jackson immuno research)109-035-008)测量各时间点呈现的il-2-fc融合蛋白或c末端n88d的量。为了分析，100％的起始材料定义为注射后1小时在血浆中可检测到的量。等摩尔量的il-2-fc h16n和c末端n88d在各剂量水平显示基本相同的清除动力学(图17a和图17b)。相反，失活il-2-fc持续时间更长，尤其是在低剂量时(图17c和图17d)。
[1164]
该示例性分子显示了降低对il-2受体的亲和性可以增加治疗分子在体内的寿命。降低对cd25的亲和性但保留对treg的活性的il-2突变，例如实施例4中描述的那些，可用于延长这些il-2-fc融合蛋白的治疗寿命，从而延长临床益处的持续时间并减少对频繁给药的需求。
[1165]
实施例9：il-2-fc融合蛋白在人源化小鼠体内扩增t调节细胞、t辅助细胞和nk细
胞
[1166]
为了研究人类免疫细胞对il-2-fc融合蛋白的反应，对nod scidγ(nsg)小鼠进行致命辐照并用人cd34 脐带干细胞重建。七个实验组，每组六只小鼠，使用从三个不同的人类供体中分离的cd34 脐带干细胞进行重建。各供体重建两只小鼠/实验组。完全植入后，给小鼠皮下注射低剂量和/或高剂量的对照单克隆抗体(莫塔维珠单抗)，具有失活il-2部分的对照il-2fc融合蛋白，具有野生型il-2蛋白的对照il-2fc融合蛋白的，和在il-2部分内包含不同突变的三种不同的il-2-fc融合蛋白。表12汇总了所研究的剂量和实验治疗组。注射后，在不同时间点从小鼠获得血液，如图18a所示，并进行流式细胞术以测量这些时间点的各种淋巴细胞群(图18a)。与实施例7类似，通过流式细胞术对给药后至多第9天的t调节性细胞、t辅助性细胞和nk细胞的倍数扩增进行量化，并分别显示在图18b、图18c和图18d中。
[1167]
表12：il-2-fc融合蛋白和对照蛋白以及给予用人cd34 脐带干细胞重建的人源化小鼠的相应剂量
[1168][1169][1170]
实施例10：il-2-fc融合蛋白在循环中具有数天的寿命
[1171]
tg32小鼠(杰克森实验室公司，缅因州巴尔港，储存货号014565)皮下注射5μg包含突变组合的il-2融合蛋白(图19a-19b)。所研究的全部il-2融合蛋白均包含v69a/q74p/c125s突变与h16n、h16l或i92s突变组合(图19a)。这些分别对应于seq id no:1007、1008和1009。此外，比较了两种il-2融合蛋白的半衰期，这些融合蛋白包含在il-2部分中的h16n/v69a/q74p/c125s突变，有或没有fc区中的附加突变(图19b)。这些il-2融合蛋白对应于seq id no:1007和135。在用示例性il-2融合蛋白注射后，在图19a-19b所示的时间点收集血液。从血液中分离血浆并如实施例8中所述测量il-2融合蛋白的浓度。
[1172]
如图19a所示，具有所示突变的全部il-2融合蛋白在注射后的前12小时内显示出最大分布。i92s突变导致小鼠血浆中循环il-2融合蛋白的量最大。
[1173]
如图19b所示，与在il-2部分中包含相同突变但fc序列(seq id no:1007)中没有附加突变的il-2融合蛋白相比，增加fc序列对fcrn(seq id no:135)的亲和性适度延长il-2融合蛋白的寿命。
[1174]
实施例11：il-2-fc融合蛋白在食蟹猴体内选择性扩增t调节细胞
[1175]
示例性il-2-fc融合蛋白的药代动力学和药效学特征，即包含突变h16l/v69a/q74p/c125s(seq id no:1008)的il-2-fc融合蛋白(il2-118与igg1fc n297g同种异型m3融合)，以及其对免疫细胞扩增和增殖的作用，在食蟹猴体内进行了研究。每周一次(第1、8、15和22天)给猴子皮下注射100μg/kg il-2-fc融合蛋白或安慰剂(磷酸盐缓冲盐水)，持续4周。四个每周给药之后是四周的恢复期。
[1176]
示例性il-2-fc融合蛋白在所有猴子中均具有良好的耐受性，在4周给药或4周恢复期间未观察到临床症状或观察结果。关于il-2-fc融合蛋白的药代动力学，数据显示了一个快速的初始吸收阶段(所有动物的t
最大
《24小时)，然后是一个消除阶段(半衰期(t
1/2
)约为10小时)(图20)。猴子中il-2-fc融合蛋白随时间的血清水平汇总在图20中。
[1177]
还研究了示例性il-2-fc融合蛋白在猴子中给予后对免疫细胞扩增的作用。流式细胞术用于在用il-2-fc融合蛋白或安慰剂对照处理后对循环免疫细胞亚群进行定量。表13列出了所分析的细胞内和细胞表面标志物以及相应的细胞群。如图21a所示，与安慰剂对照相比，il-2-fc融合蛋白显著增加了猴子中调节性t细胞的量。此外，如图21b所示，在接受il-2-fc融合蛋白的猴子中，多达80％的调节性t细胞对ki67(细胞增殖的标志物)染色呈阳性。总之，这些数据表明调节性t细胞过度增殖并显示响应于il-2-fc融合蛋白的扩增增加。
[1178]
如图22a-22d所示，il-2-fc融合蛋白不导致nk细胞(图22a)、细胞毒性t细胞(图22b)、辅助t细胞(图22c)或总t细胞(图22d)的扩增的增加。
[1179]
总之，这些数据表明与igg1 fc n297g同种异型m3融合的il2-118能够在体内选择性地扩增调节性t细胞。
[1180]
表13：用于循环免疫细胞流式细胞术分析的细胞内和细胞表面标志物及相应细胞群列表
[1181][1182][1183]
实施例12：il-2-fc融合蛋白减少狼疮肾炎小鼠模型中的肾损伤
[1184]
mrl/mpj-faslpr/j小鼠品系(杰克森实验室公司，缅因州巴尔港，储存货号000485)对于fas基因突变是纯合的，导致系统性自身免疫，类似于人类系统性红斑狼疮(sle)，其中肾脏受累类似于人类狼疮性肾炎。这些小鼠用于通过测量对sle模型中疾病进展的影响来研究il-2-fc融合蛋白诱导t调节细胞扩增的能力。
[1185]
每3天用pbs载剂对照或本文描述的示例性il-2-fc融合蛋白以40μg/kg皮下处理多达30只小鼠的组。治疗从11周龄开始，一直持续到小鼠18周龄时研究结束。疾病评分包括对于所有小鼠每周测量的蛋白尿、研究结束时测量肾组织学进行的肾小球病变分析、研究结束时测量的血尿素氮(bun)以及识别双链dna的血清中抗体的定量测量(抗dsdna抗体)。
[1186]
图23a显示了整个研究过程中两组的平均蛋白尿。在研究早期，治疗组显示较低的平均蛋白尿，当小鼠为12周龄(p＝0.004，使用双尾非配对t检验)和13周龄(p＝0.056)时具有最大的统计学意义(图23b，中间和右侧分图)。
[1187]
在研究结束时还进行了肾脏组织学检查，以评估肾小球损伤，其表明肾损伤。分析方案与对治疗组不知情的分析师一起使用。在未处理的小鼠中鉴定的平均损伤数为6.72，而在处理的小鼠中的平均值为5.167(图23c)。该结果具有统计学意义，p《0.005(双尾非配对t检验)，表明治疗组在研究过程中累积的肾损伤较少。在抗dsdna抗体或bun中未观察到差异。
[1188]
总之，这些数据表明示例性il-2-fc融合蛋白影响狼疮肾炎鼠模型中的疾病进展。
[1189]
通过引用纳入
[1190]
本文提到的所有出版物、专利和登记号在此通过引用全文纳入本文，如同每个单独的出版物或专利被明确单独指明通过引用纳入。
[1191]
等同形式
[1192]
尽管讨论了本发明的具体实施方式，但以上说明书仅为说明性而非限制性的。本领域的技术人员阅读了本说明书和所附权利要求后将清楚了解本发明的许多变化。本发明的全部范围应该通过参考所附权利要求书连同其等同物的全部范围，以及说明书连同此类变化来确定。
[1193]
表9：序列表(氨基酸)
[1194]
[1195]
[1196]
[1197]
[1198]
[1199]
[1200]
[1201]
[1202]
[1203]
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本文用于企业家、创业者技术爱好者查询，结果仅供参考。
