使用核酸酶靶向的IDLV的精确整合

技术特征：
1.整合缺陷型慢病毒载体(idlv)，其包含核酸，所述核酸在5'ltr序列和3'ltr序列之间包含：a.至少一个核输出信号序列，特别是至少一个hiv-1rev应答元件(rre)，特别是一个rre；b.至少一个选自下组的目标核酸序列：polya信号；剪接信号序列；dna或rna结合位点；启动子；和编码治疗性蛋白或者是治疗性核糖核酸的转基因或其片段；c.至少一个核酸酶位点，特别是至少一个引导核酸靶向序列(grna-t)；d.任选地，至少一个同源臂序列，其包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的一部分同源的序列；和e.任选地，至少一个允许增强至少一个目标核酸序列的稳定表达的序列，特别是至少一个土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件(wpre)序列。2.根据权利要求1所述的idlv，其中所述idlv包括：d.至少一个同源臂序列，其包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的一部分同源的序列。3.根据权利要求1或2所述的idlv，其中所述idlv是圆形或线形的，特别是圆形的。4.根据权利要求1-3中任一项所述的idlv，其包含至少两个相同或不同的核酸酶位点，特别是至少两个相同或不同的grna-t序列，特别是两个相同或不同的grna-t序列。5.根据权利要求4所述的idlv，其中至少一个目标核酸序列包含在所述idlv的至少两个，特别是两个核酸酶位点之间。6.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中所述至少一个核酸酶位点与d点的包含在细胞基因组中的目标内源基因组位点中的内源性核酸酶位点相同或不同。7.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中所述idlv包含至少两个同源臂序列，特别是两个，每个都彼此不同，并且包括与细胞基因组中的目标内源基因组位点的至少两个，特别是两个不同部分同源的序列。8.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中所述idlv不包含启动子。9.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中所述细胞基因组中的目标内源基因组位点位于球蛋白基因中，特别是选自下组：ε珠蛋白基因、γg珠蛋白基因、γa珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、β珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、假δ珠蛋白基因、μ珠蛋白基因、假α1珠蛋白基因、α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因，特别是选自下组：γg珠蛋白基因、γa珠蛋白基因、δ珠蛋白基因、β珠蛋白基因、α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因，更特别选自下组：α1珠蛋白基因和α2珠蛋白基因。10.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中所述至少一个目标核酸序列是编码治疗性蛋白或治疗性核糖核酸的转基因或其片段。11.根据权利要求10所述的idlv，其中所述治疗性蛋白选自下组：细胞因子，特别是干扰素，更特别是干扰素-α、干扰素-β或干扰素-pi；激素；趋化因子；抗体(包括纳米抗体)；抗血管生成因子；用于替代治疗的酶，例如腺苷脱氨酶、α-葡糖苷酶、α-半乳糖苷酶、α-l-尿素酶和β-葡糖苷酶；白细胞介素；胰岛素；g-csf；gm-csf；hpg-csf；m-csf；凝血因子，诸如因子viii、因子ix、tpa、因子v、因子vii、因子x、因子xi、因子xii或因子xiii；跨膜蛋白，诸如神经生长因子受体(ngfr)；溶酶体酶，诸如α-半乳糖苷酶(gla)、α-l-艾杜糖苷酶(idua)、溶酶
体酸性脂肪酶(lal)和半乳糖胺(n-乙酰)-6-硫酸酯酶(galns)；β样珠蛋白；白介素受体，诸如il-2受体、il-3受体、il-4受体、il-5受体、il-6受体、il-7受体、il-9受体、il-11受体、il-12受体、il-13受体、il-15受体、il-21受体、il-23受体和il-27受体；wiskott-aldrich综合症蛋白(wasp)；腺苷脱氨酶、三肽基肽酶1、α-l-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶、n-磺基葡糖胺磺基水解酶、半乳糖胺-6硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、n-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶、葡糖脑苷脂酶、芳基硫酸酯酶a、细胞色素b-245α链、细胞色素b-245β链、嗜中性粒细胞胞质因子1、嗜中性粒细胞胞质因子2、嗜中性粒细胞胞质因子4；可以被工程化为分泌的并最终被非修饰细胞摄取的任何蛋白质，及其组合。12.根据前述权利要求中任一项所述的idlv，其中序列a-c，以及d和e(如果存在)以下列顺序之一存在于idlv中，从5'到3'：-a，c，d，b；-a、c、d、b、e；-a，c，d，b，d，c，e；-a，d，c，d，b；-a，d，c，d，b，e；-a，c，b，d，c，e；或-a，c，d，b，c，e。13.分离细胞，其包含至少一个如权利要求1-12中任一项所定义的idlv。14.根据权利要求13所述的分离细胞，其中所述细胞选自下组：造血干细胞；免疫系统细胞，特别是淋巴细胞；多能干细胞；胚胎干细胞；卫星细胞；神经干细胞；间充质干细胞；视网膜干细胞；和上皮干细胞，并且特别是造血干细胞。15.药物组合物，其包含至少一种如权利要求1-12中任一项所定义的idlv和/或至少一种如权利要求13或14所定义的分离细胞，以及药学上可接受的介质。16.根据权利要求1-12中任一项所定义的idlv、根据权利要求13和14中所定义的分离细胞或权利要求15中所定义的药物组合物，其用于治疗：-选自下组的疾病：免疫性疾病、病毒性感染、肿瘤或血液病；和/或-在有需要的个体中因缺乏蛋白质或存在异常的非功能性蛋白质而引起的疾病。17.用于产生car-t细胞的方法，其包括将权利要求1-12中任一项所定义的至少一种idlv整合到淋巴细胞t细胞或造血干细胞中，所述idlv包含编码靶向癌细胞的嵌合抗原受体的转基因作为至少一个目标核酸序列。18.用于产生表达抗体的b细胞的方法，其包括将权利要求1-12中任一项所定义的至少一种idlv整合到淋巴细胞b细胞或造血干细胞中，所述idlv包含编码抗体的转基因作为至少一个目标核酸序列。

技术总结
本发明涉及包含核酸的整合缺陷型慢病毒载体(IDLV)，所述核酸在5'LTR序列和3'LTR序列之间包含至少一个核输出信号序列；至少一个目标核酸序列；以及至少一个核酸酶位点。本发明还涉及包含所述IDLV的分离细胞，包含所述IDLV或所述分离细胞的药物组合物，以及它们在治疗选自免疫性疾病、病毒性感染、肿瘤或血液病的疾病；和/或由有此需要的个体中因缺乏蛋白质或存在异常的非功能性蛋白质而引起的疾病中的药物用途。的药物用途。


技术研发人员：M
受保护的技术使用者：国家医疗保健研究所 埃夫里-瓦尔德艾松大学
技术研发日：2020.07.22
技术公布日：2022/5/5