用于改善肉鸡肠道健康指数的饲料添加剂及其应用的制作方法

1.本发明涉及家禽养殖技术领域，具体地说，涉及一种用于改善肉鸡肠道健康指数的饲料添加剂及其应用。


背景技术：

2.肠道是肉鸡营养物质消化和吸收的重要场所，同时也是机体“最大”的免疫器官。家禽养殖每年因肠道健康问题遭受巨大的经济损失，在很长一段时间内，在饲料中添加抗生素是防止这一问题发生的主要预防策略，但是因细菌耐药和抗生素残留等公共卫生问题，国家禁止在饲料中添加促生长类抗生素，饲料禁抗以来，肉鸡肠道健康问题增多，如吃料慢、均匀度差、拉稀过料、料肉比增高、继发感染别的疾病等等，因此保持肉鸡肠道健康，维护其正常的消化吸收与免疫功能，不但能使肉鸡获得良好的生产性能，而且能有效抵御疾病的侵袭。
3.目前针对肉鸡肠道健康的解决方法有很多，主要依靠在饲料中添加抑菌杀菌类的饲料添加剂来解决，如植物提取物、酸化剂、益生菌、酶制剂、抗菌肽等饲料添加剂均在一定程度上可直接抑杀肠道内微生物或阻断病原微生物在肠道黏膜上定植与增殖，从而达到促进畜禽生产性能的目的，这均与饲料抗生素的作用效果类似，而肉鸡的肠道健康既需要稳定的肠道微生态菌群结构，也需要良好的肠道结构功能。
4.微生物之间是通过信号分子进行信息交流的，对外界环境变化进行群体性应答，称之为群体感应（quorum sensing，qs），研究发现，许多动物中的病原菌都是依赖ahl信号分子来调控致病因子的生成。n-酰基高丝氨酸内酯酶，通过抑制信号分子的合成、积累、监测，或对信号分子进行酶降解或修饰的机制来干扰群体感应系统，即群体感应n-酰基高丝氨酸内酯酶。包括n-乙酰基高丝氨酸（ahls）内酯酶，ahls酰胺酶，ahls氧化还原酶等，可降解病原菌致病因子产生的ahl，减轻和消除病原菌的致病性，在实现疾病防治中作用巨大。
5.益生菌作为一种活菌制剂，从饲料禁抗以来在畜牧生产中的应用越来越广泛，它通过调节消化道的微生态菌群的结构，来建立和完善畜禽肠道的微生物区系，改善生产性能，改善机体免疫力，提高畜产品的质量，且对畜禽无毒副作用。益生菌特别是乳酸菌作为一种新型饲料添加剂，在饲料禁抗以来为养殖业带来了明显的经济效益。
6.畜禽肠道致病菌如大肠杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌等均为革兰氏阴性菌，其群体感应的信号分子主要由n-酰基高丝氨酸内酯类化合物组成，能够被n-酰基高丝氨酸内酯酶识别并降解；而肠道有益菌如乳酸菌属革兰氏阳性菌，其群体感应的信号分子主要是寡肽类物质组成，n-酰基高丝氨酸内酯酶不能对其进行识别和降解。n-酰基高丝氨酸内酯酶在淬灭群体感应后，有害的革兰氏阴性致病菌无法通过群体感应发挥作用，同时通过补充乳酸菌（革兰氏阳性益生菌）可增加环境中耗氧量，抑制有害菌的繁殖，同时，可以发挥益生菌的调节作用。目前，未见将n-酰基高丝氨酸内酯酶与乳酸菌协同用于降低肉鸡肠道出血点、改善肠道结构以及肠道微生物菌群平衡方面的相关报道。


技术实现要素：

7.本发明针对禁抗后肉鸡肠道健康问题，提供一种绿色、安全、无抗的用于改善肉鸡肠道健康指数的新型饲料添加剂及其应用。
8.为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种用于改善肉鸡肠道健康指数的饲料添加剂，其活性成分为n-酰基高丝氨酸内酯酶和乳酸菌。
9.所述饲料添加剂由如下重量份的组分混合而成：n-酰基高丝氨酸内酯酶10-45、乳酸菌10-45和载体10-80。
10.所述载体可选自玉米淀粉、小麦淀粉、木薯淀粉、马铃薯淀粉、β-环糊精、麦芽糊精、变性淀粉、稻壳粉、玉米芯粉、沸石粉或膨润土等中的至少一种。
11.优选地，所述n-酰基高丝氨酸内酯酶是由大肠埃希氏菌bl21pet28a( )/aiia-ai06（保藏编号cgmcc no.4621）产生的n-酰基高丝氨酸内酯酶，酶活性为1
×
10
4-1
×
105u/g。有关菌株及n-酰基高丝氨酸内酯酶的制备方法可参见zl201110082565.5。
12.优选地，所述乳酸菌可选自粪肠球菌、屎肠球菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、乳酸片球菌、乳酸肠球菌、嗜酸乳杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种等中的至少一种，更优选粪肠球菌gdmcc 1.612。
13.所述粪肠球菌的活菌数为1
×
10
9-1
×
10
11 cfu/g，优选1
×
10
11 cfu/g。
14.在本发明的一个具体实施方式中，所述饲料添加剂由如下重量份的组分混合而成：n-酰基高丝氨酸内酯酶25、粪肠球菌25和玉米淀粉50。
15.第二方面，本发明提供所述饲料添加剂在家禽养殖中的应用。
16.进一步地，所述饲料添加剂在基础日粮中的添加量为150-500克/吨。
17.第三方面，本发明提供所述饲料添加剂在提高家禽的肠道健康，降低家禽死淘率以及提高家禽生产性能中的应用。
18.优选地，所述家禽为鸡（如肉鸡）。
19.借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：肉鸡养殖试验表明，n-酰基高丝氨酸内酯酶与乳酸菌具有协同效果，能够通过改善肉鸡肠道健康状况，从而提高肉鸡成活率及生产性能。
附图说明
20.图1为本发明较佳实施例中菌酶组合对肉鸡肠道血斑点的影响。其中，左为对照组肠道，右为试验组肠道。
21.图2为本发明较佳实施例中菌酶组合对肉鸡空肠肠道形态的影响。其中，左为对照组，右为试验组。
具体实施方式
22.以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
23.以下实施例中使用的n-酰基高丝氨酸内酯酶来自大肠埃希氏菌bl21pet28a( )/aiia-ai06，保藏编号为cgmcc no.4621，酶活性为1
×
105u/g。
24.粪肠球菌为gdmcc 1.612菌株，活菌数为1
×
10
11 cfu/g左右。
25.枯草芽孢杆菌购自思科福（北京）生物科技有限公司，商品名称为：益菌健。
26.屎肠球菌、凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌均为市场购买，活菌数为1
×
10
11 cfu/g左右，购自思科福（北京）生物科技有限公司。
27.实施例1 菌酶组合用于肉鸡养殖1、试验动物选择1日龄aa肉仔鸡（艾拔益加肉仔鸡）432只，按公母和体重随机分为2个处理，每个处理6个重复，每个重复36只鸡，试验阶段为42天，分两阶段进行饲喂。
28.2、日粮与试验设计试验开始前，采集所用饲料原料，分析其常规养分含量，以实际检测结果进行饲料配方制作，各原料其它营养成分含量参照“中国饲料成分及营养价值表2017”，营养需要量参考nrc（1994）肉鸡饲养标准。对照组饲喂基础日粮；试验组为在基础日粮中添加50g/tn-酰基高丝氨酸内酯酶 50g/t粪肠球菌，试验设计如表1所示：表1 试验设计3、饲养管理饲养试验在北京挑战集团遵化动物试验基地进行，试验过程为常规饲养，自由采食与饮水，免疫和用药按照鸡场《免疫程序》和《用药指南》进行操作。
29.4、测定指标4.1 生产性能饲养试验分别于试验开始和结束时在早上空腹称重，试验过程中记录每日采食量，试验结束后计算肉鸡全阶段末重，平均采食量，日增重，料重比，存活率。
30.4.2 肠道形态饲养试验于42d日龄结束时，每组随机抽取6只，公母各半进行屠宰，屠宰后取空肠中部组织样品2-3cm于4%甲醛固定液中固定后，用乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，he染色，光学显微镜下观察，测量肠段绒毛高度、隐窝深度，计算绒毛高度/隐窝深度比值。
31.4.3 肠道损伤统计解刨后取出十二指肠、空肠、回肠的全部肠断，用生理盐水清洗肠外壁，肉眼观察肠外壁肠道病变情况，统计肉眼可见的外壁血斑点。
32.5、数据统计首先使用excel 2019对试验数据进行整理，然后采用spss 19.0对试验数据进行单因素方差分析（one-way anova），数据分析结果以平均值
±
标准误表示。
33.6、试验结果与分析6.1 菌酶组合对肉鸡生产性能的影响由表2可知，n-酰基高丝氨酸内酯酶与乳酸菌组合使用，能显著增加肉鸡末重、日均增重（p＜0.05），对肉鸡料重比也有显著降低趋势（p＜0.05），成活率改善2.09%，试验组欧指与对照组相比显著提高，欧指提高10.12%（p＜0.05）。
34.表2 菌酶组合对肉鸡生产性能的影响（1-42d）
注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（p＞0.05）。
35.6.2菌酶组合对肉鸡肠道血斑点的影响由表3可知，n-酰基高丝氨酸内酯酶与乳酸菌组合使用，能明显降低肉鸡十二指肠、空肠、回肠的出血斑点数，试验组与对照组相比，降低肠道血斑点80.26%；由图1可知，肠道出血斑点试验组明显少于对照组。
36.表3菌酶组合对肉鸡肠道血斑点的影响6.3菌酶组合对肉鸡空肠肠道形态的影响由表4可知，n-酰基高丝氨酸内酯酶与乳酸菌组合使用，能显著改善肠道形态（图2），显著提高绒毛高度/隐窝深度的比值（p＜0.05），从而提高养分的消化吸收能力。
37.表4菌酶组合对肉鸡空肠肠道形态的影响注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（p＞0.05）。
38.由以上试验结果可知，本发明饲料添加剂可通过增加肠绒毛高度，降低肠道炎症反应，降低肠道出血点，通过改善肉鸡肠道健康，从而提升肉鸡的生产性能。
39.实施例2不同菌酶组合对肉鸡生产性能的影响1、试验动物选择1日龄aa肉仔鸡432只，按公母和体重随机分为6个处理，每个处理6个重复，每个重复12只鸡，试验阶段为42天，分两阶段进行饲喂。
40.2、日粮与试验设计与实施例1类似，试验开始前，采集所用饲料原料，分析其常规养分含量，以实际检测结果进行饲料配方制作，各原料其它营养成分含量参照“中国饲料成分及营养价值表2017”，营养需要量参考nrc（1994）肉鸡饲养标准。对照组饲喂基础日粮；各试验组为在基础日粮中添加不同菌酶产品，试验设计如表5所示：表5试验设计
3、饲养管理饲养试验在北京挑战集团遵化动物试验基地进行，试验过程为常规饲养，自由采食与饮水，免疫和用药按照鸡场《免疫程序》和《用药指南》进行操作。
41.4、生产性能指标测定饲养试验分别于试验开始和结束时在早上空腹称重，试验过程中记录每日采食量，试验结束后计算肉鸡全阶段末重，平均采食量，日增重，料重比，存活率。
42.5、数据统计首先使用excel 2019对试验数据进行整理，然后采用spss 19.0对试验数据进行单因素方差分析（one-way anova），数据分析结果以平均值
±
标准误表示。
43.6、试验结果与分析表6结果显示，枯草芽孢杆菌、乳酸菌及n-酰基高丝氨酸内酯酶的单独使用对肉鸡生产性能均有一定的改善作用，在组合试验效果中，n-酰基高丝氨酸内酯酶 乳酸菌组合在料肉比上，欧洲效益指数上均显著优于n-酰基高丝氨酸内酯酶 枯草芽孢杆菌组合，试验结果表明，n-酰基高丝氨酸内酯酶 乳酸菌的协同效果更强。
44.表6 菌酶组合对肉鸡生产性能的影响（1-42d）注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（p＞0.05）。
45.实施例3 不同乳酸菌与n-酰基高丝氨酸内酯酶组合对肉鸡生产性能的影响1、试验动物选择1日龄aa肉仔鸡360只，按公母和体重随机分为5个处理，每个处理6个重复，每个重复12只鸡，试验阶段为42天，分两阶段进行饲喂。
46.2、日粮与试验设计
与实施例1类似，试验开始前，采集所用饲料原料，分析其常规养分含量，以实际检测结果进行饲料配方制作，各原料其它营养成分含量参照“中国饲料成分及营养价值表2017”，营养需要量参考nrc（1994）肉鸡饲养标准。对照组饲喂基础日粮；各试验组为在基础日粮中添加不同菌酶产品，试验设计如表7所示：表7 试验设计3、饲养管理饲养试验在北京挑战集团遵化动物试验基地进行，试验过程为常规饲养，自由采食与饮水，免疫和用药按照鸡场《免疫程序》和《用药指南》进行操作。
47.4、生产性能指标测定饲养试验分别于试验开始和结束时在早上空腹称重，试验过程中记录每日采食量，试验结束后计算肉鸡全阶段末重，平均采食量，日增重，料重比，存活率。
48.5、数据统计首先使用excel 2019对试验数据进行整理，然后采用spss 19.0对试验数据进行单因素方差分析（one-way anova），数据分析结果以平均值
±
标准误表示。
49.6、试验结果与分析表8结果显示，粪肠球菌、屎肠球菌、凝结芽孢杆菌及植物乳杆菌与n-酰基高丝氨酸内酯酶的组合使用对肉鸡生产性能均有一定的改善作用，在组合试验效果中，n-酰基高丝氨酸内酯酶 粪肠球菌组合在末重、料肉比、欧洲效益指数上均优于n-酰基高丝氨酸内酯酶 其它乳酸菌组合，试验结果表明，n-酰基高丝氨酸内酯酶 粪肠球菌的协同效果更强。
50.表8 菌酶组合对肉鸡生产性能的影响（1-42d）注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（p＞0.05）。
51.实施例4 乳酸菌与n-酰基高丝氨酸内酯酶组合对蛋鸡生产性能的影响1、试验动物试验设计
试验选择健康、采食量正常、体重均匀的海兰褐产蛋后期蛋鸡72只，随机分为2组（每个处理组36只鸡），每组12个笼子（上、中、下各4个笼子，每个笼子3只鸡），每个重复有相似的环境。对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮中添加50g/tn-酰基高丝氨酸内酯酶 50g/t粪肠球菌。所有日粮采用等蛋氨酸日粮。试验期为2个月。
52.2、饲养管理饲养试验在北京挑战集团遵化动物试验基地进行，试验过程为常规饲养，自由采食与饮水，免疫和用药按照鸡场《免疫程序》和《用药指南》进行操作。
53.3、生产性能指标测定试验期间，以重复为单位，每天记录产蛋性能相关指标，包括试验组蛋鸡各重复蛋鸡产蛋数、蛋重、次损蛋数（破壳蛋、裂纹蛋、无壳蛋、软壳蛋、畸形蛋等），据此计算日均产蛋重、蛋均重、产蛋率和次损蛋率。于试验正式开始后，每组每周以重复为单位统计一次饲料消耗量，即根据料槽中剩料量、已记录的料袋中的剩余量，计算饲料剩余量，据此计算日均采食量和料蛋比。
54.4、数据统计首先使用excel 2019对试验数据进行整理，然后采用spss 19.0对试验数据进行单因素方差分析（one-way anova），数据分析结果以平均值
±
标准误表示。
55.5、试验结果与分析表9结果显示，粪肠球菌与n-酰基高丝氨酸内酯酶组合对蛋鸡产蛋率有明显促进效应，对料蛋比和破蛋率均有一定的改善，表明粪肠球菌和n-酰基高丝氨酸内酯酶组合能够改善蛋鸡的产蛋性能。
56.表9 菌酶组合对蛋鸡产蛋性能的影响注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），相同或无字母表示差异不显著（p＞0.05）。
57.虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。