包含志贺菌毒素A亚基支架的PD-L1结合分子的制作方法

技术特征：
1.pd-l1结合分子，其包含志贺菌毒素a亚基效应多肽和能够特异性结合pd-l1的细胞外部分的结合区；其中所述结合区包括：(a)重链可变区(vh)，其包含：(i)cdr1，其包含氨基酸序列eytmh(seq id no：27)，(ii)cdr2，其包含氨基酸序列ginpnnggtwynqkfkg(seq id no：29)，和(iii)cdr3，其包含氨基酸序列pyyygsredyfdy(seq id no：32)；和(b)轻链可变区(vl)，其包含：(i)cdr1，其包含氨基酸序列sasssvsymy(seq id no：19)，(ii)cdr2，其包含氨基酸序列ltsnlas(seq id no：20)，和(iii)cdr3，其包含氨基酸序列qqwssnppt(seq id no：26)。2.根据权利要求1所述的pd-l1结合分子，其中所述志贺菌毒素a亚基效应多肽包含seq id no：41的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。3.根据权利要求1-2中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vh包含seq id no：34的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。4.根据权利要求1-3中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vl包含seq id no：35的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。5.根据权利要求1-2中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vh包含seq id no：34的序列，所述vl包含seq id no：35的序列。6.根据权利要求1-5中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合区包含scfv接头，其连接所述vh和所述vl。7.根据权利要求6所述的pd-l1结合分子，其中所述scfv接头的长度为约3至约12个氨基酸残基。8.根据权利要求6-7中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述scfv接头是柔性接头。9.根据权利要求6所述的pd-l1结合分子，其中所述scfv接头包含seq id no：72的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。10.根据权利要求1-9中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合区是单链可变片段(scfv)。11.根据权利要求1-9中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合区包含seq id no：106的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。12.根据权利要求1-11中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子包含结合结构域接头，其连接所述志贺菌毒素a亚基效应多肽和所述结合区。13.根据权利要求12所述的pd-l1结合分子，其中所述结合结构域接头包含seq id no：73的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。14.根据权利要求12-13中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头和结合区。15.根据权利要求12-13中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头、vh和vl。16.根据权利要求12-13中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到
c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头、vh、scfv接头和vl。17.根据权利要求1-16中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子包含cd8 t细胞表位，其与志贺菌毒素a亚基是异源的。18.根据权利要求17所述的pd-l1结合分子，其中所述cd8 t细胞表位包含序列nlvpmvatv(seq id no：78)。19.根据权利要求17-18中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述cd8 t细胞表位通过间隔区连接至所述结合区。20.根据权利要求19所述的pd-l1结合分子，其中所述间隔区具有序列hhaa(seq id no：265)。21.根据权利要求17-20中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头、结合区和cd8 t细胞表位。22.根据权利要求17-20中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头、vh、scfv接头、vl和cd8 t细胞表位。23.根据权利要求19-20中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子从n末端到c末端包含志贺菌毒素a亚基效应多肽、结合结构域接头、结合区、间隔区和cd8 t细胞表位。24.根据权利要求1-23中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子包含seq id no：128的序列，或与其具有至少90％或至少95％同一性的序列。25.根据权利要求1-24中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是单个连续的多肽。26.根据权利要求1-24中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子包含两个多肽。27.根据权利要求26所述的pd-l1结合分子，其中两个多肽中的每一个都包含seq id no：128的序列。28.根据权利要求26-27中任一项所述的pd-l1结合分子，其中两个多肽彼此非共价连接。29.根据权利要求26-27中任一项所述的pd-l1结合分子，其中两个多肽通过结合区彼此非共价连接。30.根据权利要求1-29中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子是细胞毒性的。31.根据权利要求1-29中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述结合分子是非细胞毒性的。32.药物组合物，其包含根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子，以及至少一种药学上可接受的赋形剂或载体。33.编码根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子的多核苷酸，或其互补物。34.表达载体，其包含根据权利要求33的多核苷酸。35.宿主细胞，其包含根据权利要求33的多核苷酸或根据权利要求34的载体。36.制备根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子的方法，所述方法包括(a)表达根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子，和(b)回收所述pd-l1结合分子。
37.根据权利要求36所述的方法，其中表达pd-l1结合分子包括在表达pd-l1结合分子的条件下培养根据权利要求35所述的宿主细胞。38.用于从包含pd-l1结合分子的表达系统组合物中纯化根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子的方法，所述方法包括：(i)使表达系统组合物与细菌蛋白l接触以产生pd-l1结合分子-蛋白l复合物，和(ii)回收pd-l1结合分子-蛋白l复合物。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述表达系统组合物是细胞溶解产物。40.根据权利要求38-39中任一项所述的方法，其中所述蛋白l分离或衍生自大芬戈尔德菌(f.magna)。41.根据权利要求38-40中任一项所述的方法，其中所述蛋白l缀合至树脂。42.杀死表达pd-l1的细胞的方法，所述方法包括使所述细胞与根据权利要求1-31中任一项的pd-l1结合分子或根据权利要求32的药物组合物接触的步骤。43.治疗受试者的疾病、紊乱或病症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-31中任一项的pd-l1结合分子或根据权利要求32的药物组合物。44.根据权利要求43所述的方法，其中所述疾病、紊乱或病症是免疫紊乱或微生物感染。45.治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的受试者施用有效量的根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子或根据权利要求32所述的药物组合物。46.根据权利要求45所述的方法，其中所述癌症的特征在于高突变负荷和/或高频率的插入缺失。47.根据权利要求45-46中任一项所述的方法，其中所述癌症是实体瘤。48.根据权利要求45-47中任一项的方法，其中所述癌症是膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、输卵管癌、胃肠道癌、神经胶质瘤、头颈癌、肾癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、梅克尔细胞癌、间皮瘤、骨髓瘤、鼻咽肿瘤、卵巢癌、胰腺癌、腹膜肿瘤、前列腺癌、皮肤癌、移行细胞癌或尿路上皮癌。49.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是膀胱癌，所述膀胱癌是尿路上皮癌。50.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是乳腺癌，所述乳腺癌是her2阳性乳腺癌或三阴性乳腺癌。51.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是结肠癌，所述结肠癌是结肠直肠癌。52.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是胃肠道癌，所述胃肠道癌是胃癌、胆道肿瘤或胃食管结合部癌。53.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是胶质瘤，所述胶质瘤是成胶质细胞瘤。54.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述癌症是头颈癌，所述头颈癌是头颈部鳞状细胞癌。55.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是肾癌，所述肾癌为肾细胞癌。56.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是肝癌，所述肝癌是肝细
胞癌。57.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是肺癌，所述肺癌是非小细胞肺癌或小细胞肺癌。58.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是淋巴瘤，所述淋巴瘤是霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤或弥漫性大b细胞淋巴瘤。59.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是间皮瘤，所述间皮癌是胸膜间皮瘤。60.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中所述癌症是骨髓瘤，所述骨髓瘤是多发性骨髓瘤。61.根据权利要求45-47中任一项所述的方法，其中，所述癌症是皮肤癌，所述皮肤癌是皮肤鳞状细胞癌或黑色素瘤。62.根据权利要求45-61中任一项所述的方法，其中癌症对涉及伊匹单抗、纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、阿特珠单抗、德瓦鲁单抗、阿维单抗、曲美木单抗和西米普利单抗中的至少一种的治疗是复发或难治的。63.根据权利要求45-62中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性的。64.使用免疫疗法治疗癌症的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的根据权利要求1-31中任一项所述的pd-l1结合分子或根据权利要求32所述的药物组合物。

技术总结
本文提供了包含或缀合至毒素的PD-L1结合分子，所述毒素例如志贺菌毒素A亚基衍生的多肽。在一些实施方案中，PD-L1结合分子是细胞毒性的。在一些实施方案中，PD-L1结合分子能够将CD8 T细胞表位递送至PD-L1阳性细胞内的MHC类分子。本文所述的PD-L1结合分子具有选择性杀伤特定细胞(例如，PD-L1阳性肿瘤细胞和/或免疫细胞)；用于选择性地将货物递送至特定细胞(例如，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞)，并作为治疗和/或诊断分子用于治疗和诊断各种病症，包括涉及表达PD-L1的细胞的癌症和肿瘤(例如，PD-L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞)的用途。L1阳性肿瘤细胞或免疫细胞)的用途。


技术研发人员：埃里克
受保护的技术使用者：分子模板公司
技术研发日：2020.09.18
技术公布日：2022/4/29