免疫调节组合物和方法与流程

免疫调节组合物和方法
相关申请的交叉引用
1.本技术根据35u.s.c.
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技术领域
3.本发明涉及用于治疗炎症性病症的组合物和方法。


背景技术：

4.炎症是生理防御机制，用于识别和去除潜在的有害刺激，例如病原体、刺激物或受损细胞。炎症分为急性或慢性。急性炎症是指身体的即时免疫反应，以帮助防止进一步受伤并促进愈合。急性炎症通常是自限性的。在一些情况下，炎症过程变得持续，导致慢性炎症的发展。慢性炎症会导致慢性疼痛、发红、肿胀、僵硬和对正常组织的损害。慢性炎症与大范围的疾病相关，这些疾病在全球范围内具有显著的发病率和死亡率，例如，关节炎和关节疾病、心血管疾病、过敏症、慢性阻塞性肺病、糖尿病、炎症性肠病和癌症。持续需要治疗炎症性病症的新的和有效的方法。


技术实现要素：

5.本文公开了包含组合物的构建体，所述组合物包括两种或更多种截短的t3ss细菌效应多肽。本文提供的构建体可以包括两个或更多个截短的t3ss细菌效应多肽，所述截短的t3ss细菌效应多肽包括全长细菌效应多肽yope、yopj、yopm、nlee、nlec、nleb、ospz、ipah4.5、ipah7.8和ipah9.8的一部分。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域。构建体可以配制成用于治疗炎症性病症的药物。
附图说明
6.本发明的这些和其他特征和优点将在本发明的优选实施方案的以下详细描述中更充分地公开或变得显而易见，其将与附图一起考虑，其中相似的数字表示相似的元件，并且进一步其中：
7.图1是细菌效应多肽氨基酸和核苷酸序列的列表。
8.图2是显示包含yope多肽和ospz多肽的构建体的图。
9.图3是显示包含截短的yopm多肽和截短的ospz多肽的构建体的图。
10.图4是显示包含截短的yopm多肽和截短的nlec多肽的构建体的图。
11.图5是显示全长ipah9.8多肽和全长ipah4.5多肽的结构域的图。
具体实施方式
12.优选实施方案的描述旨在结合附图进行阅读，这些附图被认为是本发明的整个书面描述的一部分。附图不一定按比例绘制，并且为了清楚和简洁起见，本发明的某些特征可以按比例放大或以某种示意性的形式显示。在描述中，诸如“水平”、“垂直”、“向上”、“向下”、“顶部”和“底部”等相关术语及其派生词(例如，“水平地”、“向下地”、“向上地”等)应解释为是指当时描述的或正在讨论的附图中所示的方向。这些相对术语是为了便于描述，通常并不旨在需要特定的方向。包括“向内”对“向外”、“纵向”对“横向”等的术语将视情况相对于彼此或相对于伸长轴、或旋转轴或旋转中心来解释。关于附接、耦合等术语，例如“连接的”和“互连的”，是指一种关系，其中结构通过中间结构直接或间接地相互固定或附接，以及可移动或刚性的附接或关系，除非另有明确描述。术语“可操作地连接”是这样的附接、耦合或连接，其允许相关结构凭借该关系如预期那样操作。当仅示出单个机器时，术语“机器”也应被认为包括单独或联合执行一组(或多组)指令以实施本文讨论的任何一种或多种方法的机器的任何集合。在权利要求中，方法加功能条款(如果使用)旨在涵盖由书面描述或附图所描述、建议或显而易见的结构，用于实施所述功能，不仅包括结构等效物，还包括等效结构。
13.本文公开了用于治疗炎症性病症的组合物和方法。组合物可以包括包含两种或更多种截短的t3ss细菌效应多肽的构建体。在感染过程中，通常通过iii型分泌系统(t3ss)将细菌效应多肽注射到宿主细胞中。这些多肽通过靶向宿主炎症信号通路来抑制或禁用宿主免疫反应，允许病原体破坏宿主防御以确保细菌存活。本文公开的组合物和方法具有免疫调节活性，因此可用于治疗炎症。截短的t3ss细菌效应多肽可以提供增强的药代动力学特性和生物利用度，以提高治疗效果。
14.本文提供的构建体可以包括两个或更多个截短的t3ss细菌效应多肽，所述截短的t3ss细菌效应多肽包括t3ss全长细菌效应多肽的一部分。t3ss全长细菌效应多肽可以具有生物活性，例如e3泛素连接酶活性、rhogtp酶调节活性、半胱氨酸甲基化酶活性、锌金属蛋白酶活性、乙酰转移酶活性或o-glcnac转移酶活性。本文提供的构建体可以包括两个或更多个截短的t3ss细菌效应多肽，所述截短的t3ss细菌效应多肽包括全长细菌效应多肽yope、yopj、yopm、nlec、nleb、ospz、ipah4.5、ipah7.8和ipah9.8的一部分。两个或更多个截短的t3ss细菌效应多肽可以相同或不同。示例性构建体可以包括截短的yope多肽和截短的ospz多肽；截短的yopm多肽和截短的ospz多肽；截短的yopm多肽和截短的nlec多肽；截短的yopm多肽和截短的nleb多肽；和截短的ipah9.8多肽和截短的ipah4.5多肽。在一些实施方案中，本文提供的构建体可以排除包含全长细菌效应多肽yope、yopj、yopm、nlec、nleb、ospz、ipah4.5、ipah7.8和ipah9.8的一部分的任何一种截短的t3ss细菌效应多肽。
15.有用的细菌效应多肽可以具有如表1所示的生物化学活性、靶标特异性和细胞效应。表1：t3ss效应物活性
lys二肽接头、val-cit-pabc接头；酶特异性接头，例如葡糖苷酸-mabc接头或β-葡糖苷酸接头；二硫化物接头，例如：二硫环肽接头、s nfo-spdb接头或spdb接头；金属辅助接头，例如钯接头或铁接头；光可裂解接头，例如硝基苄基接头，或二6-(3-琥珀酰亚胺基羰氧基甲基-4-硝基-苯氧基)-己酸二硫化物二乙醇酯(scne)接头。
21.在一些实施方案中，接头可以包括至少一个氨基酸残基并且可以是至少或大约2、3、4、5、6、7、10、15、20、25、30、40、或50个氨基酸残基的肽。当接头是单个氨基酸残基时，它可以是任何天然或非天然存在的氨基酸(例如，gly、cys、lys、glu或asp)或包含两个此类残基的二肽(例如，gly-lys)。当接头是短肽时，它可以是富含甘氨酸的肽(其往往是柔性的)，例如具有序列[gly-gly-gly-gly-ser]n的肽，其中n是1到6的整数(seq id no.:25)(包括在内)，或富含丝氨酸的肽接头。富含丝氨酸的肽接头包括式[x-x-x-x-gly]y的接头，其中多达两个x是thr，其余的x是ser，并且y是1到5的整数(seq id no.:26)(包括在内)(例如，ser-ser-ser-ser-gly(seq id no.:27)，其中y大于1)。其他接头包括刚性接头(例如，papap(seq id no.:28)和(pt)np，其中n是2、3、4、5、6或7(seq id no.:29))和α-螺旋接头(例如，a(eaaak)na，其中n是1、2、3、4或5(seq id no.:30))。当接头是琥珀酸时，其一个羧基可以与氨基酸残基的氨基形成酰胺键，而其另一个羧基可以例如与肽或取代基的氨基形成酰胺键。当接头是lys、glu或asp时，其羧基可以与氨基酸残基的氨基形成酰胺键，而其氨基可以例如与取代基的羧基形成酰胺键。当lys用作接头时，可以在lys的ε-氨基和取代基之间插入另外的接头。另外的接头可以是琥珀酸，其可以与lys的ε-氨基和取代基中存在的氨基形成酰胺键。在一个实施方案中，另外的接头是glu或asp(例如，其与lys的ε-氨基形成酰胺键并且与取代基中存在的羧基形成另一个酰胺键)，即，取代基是n
ε-酰化的赖氨酸残基。
[0022]
本文公开的构建体还可包含蛋白质转导结构域(ptd)，即介导跨细胞膜易位的氨基酸序列。有用的蛋白转导结构域包括yopm蛋白质转导结构域和ipah蛋白质转导结构域。示例性的yopm蛋白质转导结构域可以具有如seq id no.:17中所示的氨基酸序列。示例性的ipah9.8转导结构域可以具有如seq id no.11的氨基酸1-57中所示的氨基酸序列。蛋白质转导结构域和包含第一截短的t3ss细菌效应多肽序列和第二截短的t3ss细菌效应多肽序列的构建体可以是融合蛋白。在一些实施方案中，蛋白质转导结构域的氨基酸序列和第一截短的细菌效应多肽和第二截短的细菌效应多肽的氨基酸序列可以是相邻的，蛋白质转导结构域的氨基酸序列和第一截短的细菌效应多肽和第二截短的细菌效应多肽的氨基酸序列通过肽键接合。在一些实施方案中，蛋白质转导结构域和第一截短的细菌效应多肽的氨基酸序列和第二截短的细菌效应多肽的氨基酸序列通过接头连接，即上述任何接头。
[0023]
示例性的构建体和此类构建体的氨基酸序列在图3和4中示出。图3描绘了包含yopm蛋白质转导结构域、截短的yopm多肽和截短的ospz多肽的融合蛋白。图3中所示的融合蛋白的氨基酸序列为seq id no.:23。图4描绘了包含yopm蛋白质转导结构域、截短的yopm多肽和截短的nlec多肽的融合蛋白。图4中所示的融合蛋白的氨基酸序列为seq id no.:24。
[0024]
相对于天然多肽氨基酸序列(本文也称为“变体”t3ss多肽)，本文提供的多肽可以具有一个或多个氨基酸添加、减少或取代，可以如本文所述制备和修饰。在一些情况下，可以通过选择在不显著改变其对维持以下方面的作用的取代来进行氨基酸取代：(a)取代区
sciences(e.w.martin)和usp/nf(美国药典和国家处方集)中描述了药物载体。示例性的赋形剂可以包括糖类，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇；淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。在一些实施方案中，制剂可以包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、防腐剂、甜味剂或调味剂。
[0030]
用于肠胃外给药的制剂可以包含无菌水或盐水、聚亚烷基二醇例如聚乙二醇、植物来源的油、氢化萘等作为常见赋形剂。特别地，生物相容的、可生物降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物是用于控制体内多肽释放的赋形剂的实例。其他合适的肠胃外递送系统包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物颗粒、渗透泵、可植入的输注系统和脂质体。如果需要，用于吸入给药的制剂可以包含赋形剂，例如乳糖。吸入制剂可以是包含例如聚氧乙烯-9-月桂基醚、甘胆酸盐和脱氧胆酸盐的水溶液，或者它们可以是用于以滴鼻剂形式给药的油性溶液。如果需要，可以将化合物配制成鼻内施用的凝胶。用于肠胃外给药的制剂还可以包括用于口腔给药的甘胆酸盐。
[0031]
对于口服给药，片剂或胶囊可以通过常规方法与药学上可接受的赋形剂一起制备，例如粘合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石粉或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)。片剂可以通过本领域已知的方法进行包衣。还可以配制用于口服给药的制剂以提供化合物的受控释放。
[0032]
鼻用制剂可以以液体形式或作为干燥产品存在。雾化的水性悬浮液或溶液可以包括载体或赋形剂以调节ph和/或张力。
[0033]
在一些实施方案中，可以配制药物组合物以调节活性成分的释放。还可以配制药物组合物以便在施用于患者后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。本文提供的多肽可以配制成持续释放的剂型。例如，可以将多肽配制成受控释放制剂。在一些实施方案中，包衣、包膜或保护性基质可以配制为包含一种或多种本文提供的多肽。在一些实施方案中，此类包衣、包膜或保护性基质可以用于涂覆留置装置，例如支架、导管和腹膜透析管。在一些情况下，本文提供的多肽可以并入聚合物、脂质体、微乳液、微粒、纳米颗粒或蜡中。
[0034]
还提供了编码本文公开的任何构建体的核酸。分离的核酸是指不直接与衍生出它的生物体的天然存在的基因组中与其直接相邻的两个序列(一个在5'端和一个在3'端)相邻的核酸。例如，分离的核酸可以是但不限于任何长度的重组dna分子，条件是通常发现的紧接天然存在的基因组中重组dna分子侧翼的核酸序列之一被去除或不存在。因此，分离的核酸包括但不限于独立于其他序列作为单独分子存在的重组dna(例如，通过pcr或限制性内切核酸酶处理产生的cdna或基因组dna片段)，以及并入载体、自主复制的质粒、病毒(例如逆转录病毒、腺病毒或疱疹病毒)或并入原核生物或真核生物的基因组dna的重组dna。此外，分离的核酸可以包括作为杂交或融合核酸序列的一部分的重组dna分子。
[0035]
分离的核酸还包括任何非天然存在的核酸，因为非天然存在的核酸序列在自然界中未发现并且在天然存在的基因组中不具有直接相邻的序列。例如，非天然存在的核酸(例如工程化的核酸)被认为是分离的核酸。可以使用分子克隆或化学核酸合成技术制备工程化的核酸(例如，编码包含或由如seq id no.:23和seq id no.:24中所示的氨基酸序列组成的多肽的核酸)。分离的非天然存在的核酸可以独立于其他序列，或并入载体、自主复制的质粒、病毒(例如逆转录病毒、腺病毒或疱疹病毒)，或原核生物或真核生物的基因组dna。
此外，非天然存在的核酸可以包括作为杂交或融合核酸序列的一部分的核酸分子。存在于例如cdna文库或基因组文库或含有基因组dna限制性消化的凝胶切片中的数百至数百万其他核酸中的核酸不被视为分离的核酸。
[0036]
核酸可以是rna和dna，包括mrna、cdna、基因组dna、合成的(例如化学合成的)dna和核酸类似物。核酸可以是双链或单链的，在单链的情况下，可以是有义链或反义链。此外，核酸可以是环状或线性的。核酸类似物可以在碱基部分、糖部分或磷酸骨架上进行修饰以提高例如核酸的稳定性、杂交或溶解度。碱基部分的修饰包括脱氧胸苷修饰为脱氧尿苷，以及脱氧胞苷修饰为5-甲基-2'-脱氧胞苷和5-溴-2'-脱氧胞苷。糖部分的修饰可以包括修饰核糖的2'羟基以形成2'-0-甲基或2'-0-烯丙基糖。可以修饰磷酸脱氧核糖骨架以产生吗啉代核酸，其中每个碱基部分都连接到六元的吗啉代环或肽核酸，其中脱氧磷酸酯骨架被假肽骨架取代，四个碱基保留。此外，脱氧磷酸酯骨架可以被例如硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯骨架、亚磷酰胺或烷基磷酸三酯骨架替代。
[0037]
本文提供的核酸可以包括或由如seq id no.:2；seq id no.:4；seq id no.:6；seq id no.:8；seq id no.:10；seq id no.:12；seq id no.:14；seq id no.:16；seq id no.:18；seq id no.:20；或seq id no.:22中所示的序列中所示的任何核酸序列组成。在一些实施方案中，核酸可以包括seq id no.:2；seq id no.:4；seq id no.:6；seq id no.:8；seq id no.:10；seq id no.:12；seq id no.:14；seq id no.:16；seq id no.:18；seq id no.:20；或seq id no.:22中的任何一个的截短的核酸。
[0038]
编码第一截短的t3ss细菌效应多肽序列和第二截短的t3ss细菌效应多肽序列的核酸包括密码子优化的核酸。为了表达，可以将核酸引入载体(例如，质粒或病毒载体)中，并且本发明包括这样的载体。核酸可以与适用于原核或真核系统的调节区域可操作地连接。在具体实施方案中，调节区域可以是例如启动子或增强子。有用的启动子包括细胞类型特异性启动子、组织特异性启动子、组成型活性启动子和广泛表达启动子。本发明还包括宿主细胞，所述宿主细胞包括表达本发明的多肽的载体，这些细胞可以是原核细胞(例如细菌)或真核细胞(例如哺乳动物)。
[0039]
通常，本文提供的分离的核酸长度至少为10个核苷酸(例如，长度为10、15、20、25、30、35、40、50、75、100、200、300、350、400或更多个核苷酸)。小于全长的核酸分子可以用作例如引物或探针。可以用分子克隆和化学核酸合成技术产生分离的核酸分子。例如，可以使用聚合酶链反应(pcr)技术。也可以化学合成分离的核酸，作为单个核酸分子(例如，使用亚磷酰胺技术在3'到5'方向使用自动dna合成)或作为一系列寡核苷酸，然后可以将其连接到载体中。治疗方法
[0040]
还提供了通过施用治疗有效量的包含本文公开的任何构建体的药物组合物来治疗患有炎症性病症或处于炎症性病症风险中的受试者的方法。在一些实施方案中，需要治疗的受试者(例如，人类患者)被诊断患有、怀疑患有炎症性病症或处于炎症性病症的风险中。示例性的炎症性病症包括但不限于关节炎和关节疾病中发现的炎症性病症，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；心血管疾病；过敏；哮喘；慢性阻塞性肺病；糖尿病；胃肠道疾病，例如炎症性肠病、克罗恩病和回肠结肠炎(ileocolitis)；癌症，例如肾癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、结直肠癌、肺癌和间皮瘤；慢性肾病；和阿尔茨海默病。
[0041]
一般而言，治疗可以包括抑制正在经历或表现出疾病、病症或疾病的病理学或症候学的个体的炎症性病症的一种或多种(即阻止病理学和/或症候学的进一步发展)。治疗还可以包括改善正在经历或表现出疾病、病症或疾病的病理学或症候学的个体的炎症性病症(即，逆转病理学和/或症候学)，例如降低疾病的严重程度或减轻或缓和疾病的一种或多种症状。
[0042]
受试者可以是人类或非人类动物。示例性的非人类物种包括但不限于非人类灵长类动物；家畜，例如马、猪、牛、羊；猫、狗、小鼠或大鼠。可以通过检测通常与炎症性病症相关的症状来鉴定适合治疗的受试者，例如疼痛、疲劳、胃肠道症状例如便秘、腹泻和胃酸倒流、体重增加和频繁感染。还可以通过实验室测试来鉴定适合治疗的受试者，包括例如血清蛋白电泳(spe)、高敏c反应蛋白、纤维蛋白原和促炎细胞因子的检测。
[0043]
治疗有效量可以是引发生物或医学反应的活性化合物或药剂的量，研究人员、兽医、医生或其他临床医生正在组织、系统、动物、个体或人中寻找这样的反应。
[0044]
本文提供的组合物可以与一种或多种常规治疗剂联合施用，包括治疗关节炎和关节疾病，例如类风湿性关节炎和骨关节炎；心血管疾病；过敏；哮喘；慢性阻塞性肺病；糖尿病；胃肠道疾病，例如炎症性肠病、克罗恩病和回肠结肠炎；癌症，例如肾癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、结直肠癌、肺癌和间皮瘤；慢性肾病；和阿尔茨海默病。本发明的特点
[0045]
一般而言，本发明的特征在于可以包括两个或更多个截短的t3ss细菌效应多肽的构建体，所述截短的t3ss细菌效应多肽包括全长细菌效应多肽的一部分。在一方面，构建体可以包括与截短的t3ss半胱氨酸甲基转移酶多肽连接的截短的yopm多肽。截短的yopm多肽可以具有与seq id no.:19中所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。截短的yopm多肽可以具有如seq id no.:19中所示的氨基酸序列。截短的t3ss半胱氨酸甲基转移酶多肽可以包括ospz多肽的一部分，所述ospz多肽具有如seq id no.:3中所示的氨基酸序列。截短的ospz多肽可以具有与seq id no.:3的氨基酸226-446至少90％相同的氨基酸序列。截短的ospz多肽可以具有如seq id no.:3的氨基酸226-446中所示的氨基酸序列。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域，例如，如seq id no.:17中所示的yopm蛋白质转导结构域。在一些实施方案中，构建体包括如seq id no.:23中所示的氨基酸序列。
[0046]
在另一方面，构建体可以包括与截短的t3ss锌金属蛋白酶多肽连接的截短的yopm多肽。截短的yopm多肽可以具有与seq id no.:19中所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。截短的yopm多肽可以具有如seq id no.:19中所示的氨基酸序列。截短的t3ss锌金属蛋白酶多肽可以包括具有如seq id no.:5中所示的氨基酸序列的nlec多肽的一部分。截短的nlec多肽可以具有与seq id no.:5的氨基酸2-187至少90％相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，截短的nlec多肽可以具有如seq id no.:5的氨基酸2-187中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，截短的nlec多肽具有如seq id no.:5的氨基酸2-187中所示的氨基酸序列。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域，例如，如seq id no.:17中所示的yopm蛋白质转导结构域。在一些实施方案中，构建体具有如seq id no.:24中所示的氨基酸序列。
[0047]
在一方面，构建体可以包括与截短的t3ss o-glcnac转移酶连接的截短的yopm多肽。截短的yopm多肽可以具有与seq id no.:19中所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基
酸序列。截短的yopm多肽可以具有如seq id no.:19中所示的氨基酸序列。截短的t3ss o-glcnac转移酶可以包括具有如seq id no.:9中所示的氨基酸序列的nleb多肽的一部分。截短的nleb多肽可以具有与seq id no.:9的氨基酸2-226至少90％的相同的氨基酸序列。截短的nleb多肽可以具有如seq id no.:9的氨基酸2-226中所示的氨基酸序列。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域，例如，如seq id no.:17中所示的yopm蛋白质转导结构域。
[0048]
在一方面，构建体可以包括与截短的第二t3ss e3泛素连接酶连接的截短的第一t3ss e3泛素连接酶多肽。第一和第二截短的t3ss e3泛素连接酶多肽可以不同。截短的第一e3泛素连接酶可以包括具有如seq id no.:11中所示的氨基酸序列的ipah9.8多肽的一部分。截短的第一ipah9.8多肽包括与seq id no.:11的氨基酸56-228至少90％相同的氨基酸序列。截短的第二e3泛素连接酶包括具有如seq id no.:13中所示的氨基酸序列的ipah4.5多肽的一部分。截短的第二ipah4.5多肽包括与seq id no.:13的氨基酸62-270至少90％相同的氨基酸序列。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域，例如，如seq id no.:11的氨基酸1-57中所示的ipah9.8蛋白质转导结构域。
[0049]
在一方面，构建体可以包括与半胱氨酸甲基转移酶连接的rhogtp酶调节剂，其中rhogtp酶调节剂通过ph敏感性接头与半胱氨酸甲基转移酶连接。rhogtp酶调节剂可以是具有如seq id no.:1中所示的氨基酸序列的yope多肽。半胱氨酸甲基转移酶可以是具有如seq id no.:5中所示的氨基酸序列的ospz多肽。ph敏感性接头包括肼、基于氨基磷酸酯的接头或硫代马来酸。
[0050]
在一方面，构建体可以包括与乙酰转移酶连接的截短的yopm多肽。截短的yopm多肽可以具有与seq id no.:19中所示的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。截短的yopm多肽可以具有如seq id no.:19中所示的氨基酸序列。乙酰转移酶可以是yopj多肽，其具有如seq id no.:9中所示的氨基酸序列，包括在半胱氨酸172处的突变。
[0051]
在一方面，构建体可以包括与乙酰转移酶连接的截短的yope多肽。截短的yope多肽可以包括具有如seq id no.:1中所示的氨基酸序列的yope多肽的一部分。构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域，例如，如seq id no.:11的氨基酸1-57中所示的ipah9.8蛋白质转导结构域。
[0052]
在一方面，构建体可以进一步包括蛋白质转导结构域。蛋白质转导结构域可以是yopm蛋白质转导结构域。yopm蛋白质转导结构域可以具有seq id no.:19中所示的氨基酸序列。蛋白转导结构域可以是ipah9.8蛋白质转导结构域。ipah9.8蛋白质转导结构域可以具有如seq id no.:23的氨基酸1-56中所示的氨基酸序列。
[0053]
在一方面，任何构建体可以包括融合蛋白。第一截短的t3ss细菌效应多肽和第二截短的t3ss细菌效应多肽可以通过接头接合。接头可以是可切割的接头。可切割的接头可以是ph敏感性接头。ph敏感性接头可以选自由肼、基于氨基磷酸酯的接头和硫代马来酸组成的组。
[0054]
在一方面，还提供了编码本文公开的任何构建体的核酸。
[0055]
在一方面，构建体可以配制成包含构建体和药学上可接受的载体的药物组合物。
[0056]
在一方面，本技术的特征在于治疗患有炎症性病症或处于炎症性病症风险中的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包括构建体，所述构建体可以包括第一截短的t3ss细菌效应多肽和第二截短的t3ss细菌效应多
肽和药学上可接受的载体。方法可以包括鉴定受试者的步骤。炎症性病症可以是胃肠道疾病、肌肉骨骼疾病、自身免疫疾病或皮肤疾病。在一方面，炎症性病症可以包括炎症性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、骨关节炎、癌症、过敏、心血管疾病、慢性阻塞性肺病和糖尿病。实施例实施例1
[0057]
我们分析了e3泛素连接酶ipah7.8和ipah9.8对来自thp-1细胞的细胞因子释放的影响。在存在和不存在递增量(0.25μg、0.5μg和1.0μg)重组ipah7.8或ipah9.8的情况下培养thp-1细胞。对于ipah7.8，0.25μg蛋白质约为3.87nm。对于ipah9.8，0.25μg蛋白质约为4.0nm。然后用脂多糖(lps)处理培养物以诱导细胞因子释放。
[0058]
如表2所示，重组ipah7.8抑制il-1β、tnf-α、mcp-1、il-6、il-8、il-23的释放。如表3所示，重组ipah9.8对il-1β、tnf-α和mcp-1、il-6、il-8、il-23的释放产生剂量依赖性抑制。这些数据表明，低纳摩尔浓度的e3泛素连接酶ipah7.8和ipah9.8可以有效地下调thp-1细胞中的细胞因子水平。表2：ipah7.8对细胞因子释放的影响表3：ipah9.8对细胞因子释放的影响