一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法

技术特征：
1.一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：s1、取土壤样品于pbs缓冲液中充分摇匀，依次稀释不同梯度的土壤悬浮液；s2、在lb培养基中加入抗生素溶液得到培养液；s3、将s2培养液进行倒平板，然后取s1土壤悬浮液进行平板涂布，然后将平板倒置培养，观察菌落确定最优稀释浓度；s4、根据最优稀释浓度进行批量平板涂布，分别进行倒置培养后用移液枪灭菌枪头挑菌完成接种，然后进行振荡培养；s5、采用甘油保藏法进行菌种保藏；s6、利用细菌16s rdna引物f27和r1492进行pcr扩增，将得到的序列进行对比鉴定。2.根据权利要求1所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，步骤s2培养液中加入的抗生素溶液为红霉素浓度、链霉素浓度、硫酸多粘菌素b溶液中的一种。3.根据权利要求2所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，培养液中红霉素浓度为13-18ug/ml。4.根据权利要求2所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，培养液中链霉素浓度为45-55ug/ml。5.根据权利要求2所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，培养液中硫酸多粘菌素b浓度为8-12ug/ml。6.根据权利要求2所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，链霉素溶液、硫酸多粘菌素b溶液经过0.20-0.25um水膜滤器过滤。7.根据权利要求1所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，步骤s4振荡培养温度为28-32℃，转速为170-185rpm，时间为12-24h。8.根据权利要求1所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，菌种保藏为在-20℃下将甘油与菌液混匀保藏，其中甘油终浓度为15％-30％。9.根据权利要求1所述的一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法，其特征在于，引物f27的序列为5'-aga gtt tga tcc tgg ctc ag-3'；引物r1492的序列为5'-ggt tac ctt gtt acg act t-3'。

技术总结
本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种筛选鉴定抗生素抗性菌的方法。本发明通过将不同浓度梯度的土壤悬浮液进行涂布，根据平板上生长的菌落情况确定有效挑选单菌落的最优稀释梯度，以便于后续大批量筛选鉴定抗生素抗性菌；本发明通过控制抗性培养基中红霉素、链霉素、硫酸多粘菌素B的浓度控制抗性菌生长速度，达到准确筛选耐药细菌的目的；而且本发明用灭菌枪头代替传统的接种环挑选单菌落，反复吹打即可完成挑菌步骤，避免灼烧冷却接种环消耗大量时间，且难以掌控冷却程度，无故烫死细菌。菌。菌。


技术研发人员：孟淼玲 李雅颖 姚槐应
受保护的技术使用者：中国科学院城市环境研究所
技术研发日：2021.12.03
技术公布日：2022/4/15