用于受控制的有效成分释放的挤出式储库剂型的制作方法

1.本发明涉及一种挤出式储库剂型(extrudierte depotform)，其包括至少一种有效成分(wirkstoff)和至少一种由可生物降解的有机聚合物类构成的第一化合物。本发明还涉及一种用于制备挤出式储库剂型的方法以及挤出式储库剂型的用途。


背景技术：

2.皮下递药剂型一般包括液体制剂或固体制剂，其可以通过注射或外科手术施用在皮下组织中。在此，固体制剂大多作为带有嵌入其中的有效成分的圆柱形聚合物小棒施用。在此将经过数日至例如24个月的时间段内释放有效成分的递药剂型也称作储库药物剂型。
3.由储库药物剂型释放的有效成分不经受所谓的首过效应、即不经过消化系统和肝脏并且还可以确保有效成分在一段持续时间内连续地释放。以该方式避免了有效成分浓度的强烈波动并由此避免了伴随的副作用，这些副作用例如经常出现在静脉内递药剂型中。储库药物剂型(在下文中也称为“储库剂型”)的受控制的、持续的有效成分释放还可以延长给药时间间隔。此外，可生物降解的储库药物剂型在预期的给药时间之后不必被移除。这些特性使皮下储库剂型成为用户友好的药物。
4.储库剂型中的有效成分释放速率和有效成分释放持续时间可以受包含在制剂中的添加剂的影响，其中对于具有较长的给药持续时间的制剂存在对内含物的生物相容性方面的高的要求，以使对患者健康的损害最小化。
5.因此，需要经历长的给药时间段而能连续、受控制地释放且具有高度生物相容性以及在其生物可降解性方面的良好特性的制剂。
6.现有技术中描述的递药系统具有短的给药时间和/或甚至错过用户所需要的治疗有效成分剂量。


技术实现要素：

7.因此，本发明的目的是提供一种用于有效成分的肠胃外施用的生物可降解的储库剂型，该储库剂型能够实现以适合用于治疗的剂量持续地、受控制地释放有效成分。
8.本发明的目的通过根据权利要求1的包括至少一种有效成分和由可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种化合物的挤出式储库剂型以及通过根据权利要求11的、用于制备根据本发明的储库剂型的方法实现。本发明的目的还通过根据权利要求14的根据本发明的组合物的用途来实现。
9.因此，本发明涉及一种用于持续释放有效成分的挤出式储库剂型，其包括
10.(a)至少一种有效成分，
11.(b)至少一种第一化合物，该至少一种第一化合物由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成。
12.在本发明中，术语“储库剂型”应理解为有效成分释放通过经由较长时间段的延缓而进行。根据本发明，储库剂型的施用以肠胃外方式进行并且形成优选的皮下储库。
13.术语“可生物降解的”应理解为包含在制剂中的物质在体内例如通过酶促过程、化学过程或物理过程被降解或腐蚀成较小的单元。
14.在其最简单的实施方式中，根据本发明的储库剂型包括至少一种有效成分和由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种第一化合物。
15.根据本发明，至少一种有效成分从挤出式储库剂型中的受控制的释放可以通过由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物构成的组合显著改善。因此，根据本发明的挤出式储库剂型有利地具有在一周至一年的时间段中受控制的有效成分释放、高的生物相容性和良好的生物可降解性。
16.在其皮下给药时，根据本发明的挤出式储库剂型将至少一种有效成分从包含有效成分的储库剂型中释放到周围组织，其中有效成分的主要部分优选被全身吸收。倘若挤出式储库剂型设置为局部治疗，有效成分的主要部分可以有利地释放到给药部位周围的组织中。
17.包含在储库剂型中的绝对有效成分量一般确定保持有效成分连续输送到生物体中或生物体上的时间间隔。因此，当储库剂型的给药时间长、即数周至十二个月时，那么具有至少一种有效成分的储库剂型的尽可能地高负荷是值得期望的。
18.根据本发明的挤出式储库剂型优选用于至少一周至最大12个月的给药持续时间，优选用于一周至6个月的给药持续时间，尤其是用于2周至3个月的给药持续时间。
19.因此，本发明涉及根据本发明的储库剂型用于将有效成分释放到人体或动物体的血液循环中的医药、兽医或化妆品的用途。
20.本发明还涉及一种用于制备根据本发明的储库剂型的方法，其中该方法包括下列步骤：
21.(i)提供优选的均匀的混合物，该混合物包括至少一种有效成分和由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种第一化合物，
22.(ii)优选在高于由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的该至少一种第一化合物的熔融温度的温度下挤出、尤其是熔融挤出芯核，
23.(iii)可选地将涂层混合物或涂层组合物施加在上述获得的挤出物上，优选与步骤(ii)同时进行，
24.(iv)将挤出物切割成适当大小的小块，
25.(v)可选地尤其是通过球化将小块滚圆，
26.(vi)可选地执行储库剂型的灭菌过程和/或包装。
27.在此，术语提供应理解为现场制备以及输送均匀的混合物。在这种情况下，均匀的混合物可以通过合适的混合过程，优选无需添加溶剂而制成。混合过程还可以包括一个以上的步骤：通过例如首先由可生物降解的聚合物构成混合物，以及与其分开地，添加一种或更多种可选的助剂和/或至少一种有效成分的混合物，其在第二步骤中与聚合物混合。
28.将如此获得的优选的均匀的混合物加热到比所使用的由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的化合物的熔点温度优选更高的温度，并且紧接着借助挤出、尤其是借助熔融挤出而挤出。
29.在挤出芯核(即没有涂层混合物的挤出物)的同时或在挤出芯核之后，必要时，施加优选均匀的涂层混合物或涂层组合物，它们由根据本发明的储库剂型的根据步骤(i)的
上述组分中的至少一种构成。优选地，涂层混合物的施加与芯核的挤出同时进行。
30.在此，根据步骤(i)的组分优选包括根据本发明的储库剂型的至少大约50重量％的干重，根据本发明的储库剂型的优选至少大约55重量％，尤其优选至少大约60重量％，尤其优选至少大约62重量％的总重量。
31.倘若有效成分是热敏性有效成分，挤出有利地可以在甚至能够加工热敏性有效成分而无损害的温度下进行。在这种情况下，选择由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种化合物，使其熔点优选低于使有效成分受热损害的温度。这尤其对于蛋白质有效成分、核酸等是有利的。
32.倘若制备尚未在无菌条件下发生，则有利的制备方法可以在可能的包装步骤之前设置对根据本发明的挤出式储库剂型灭菌。然而，根据本发明的储库剂型也可以无需灭菌过程或也可以在非无菌条件下制备。
33.此外，根据本发明的挤出式储库剂型可以经历包装过程，其中在可能的灭菌过程之后将储库剂型直接包装在包装单元中。替选地，挤出式储库剂型也可以首先引入到设计用于根据本发明的储库剂型给药的给药器中并且与其共同包装在包装单元中。
34.最后，本发明包括挤出式储库剂型，其可按照前面描述的方法获得。
35.本发明的其他特别有利的设计方案和改进方案从从属权利要求以及下面的说明书中给出，其中特定类别的专利权利要求也可以根据其他类别的从属权利要求进一步形成并且不同实施例的特征可以组合成新的实施例。
36.根据一个优选的实施方式，由基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物类构成的至少一种第一化合物选自聚(l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(l-丙交酯-共-d,l-丙交酯)、聚(l-丙交酯-共-乙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)、聚(内消旋-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-三亚甲基碳酸酯)、聚(l-丙交酯-共-内消旋-丙交酯)、聚(l-丙交酯-共-ε-己内酯)、聚(d,l-丙交酯-共-内消旋-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-ε-己内酯)、聚(内消旋-丙交酯-共-乙交酯)、聚(内消旋-丙交酯-共-三亚甲基碳酸酯)、聚(内消旋-丙交酯-共-ε-己内酯)、聚(乙交酯-共-三亚甲基碳酸酯)、聚(乙交酯-共-甲基己内酯)和/或聚(乙交酯-共-己内酯)，优选聚(l-丙交酯)、聚(d,l-丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(l-丙交酯-共-d,l-丙交酯)、聚(l-丙交酯-共-乙交酯)、聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)。
37.在此，聚(d,l-丙交酯)(pla)和聚(d,l-丙交酯-共-乙交酯)(plga)适合作为由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的尤其优选的化合物，它们例如可从evonik industries股份有限公司(德国)的名为r 202h(聚(d,l-丙交酯))或rg 502h和rg 752h(plga)购得。
38.在本发明中，术语聚丙交酯(同义词：聚乳酸，pla)应理解为乳酸聚合物。由于不对称碳原子而具有光学活性的聚合物呈d-丙交酯或l-丙交酯形式出现。
39.在本发明中，术语“聚乙交酯”(pga)应理解为乙醇酸(同义词：羟基乙酸)的聚合物。
40.术语聚(丙交酯-共-乙交酯)(plga)是丙交酯与乙交酯单体构成的共聚物，该丙交酯与乙交酯可以按不同比例使用。在这种情况下，聚酯由d,l-乳酸和乙醇酸构成的聚酯，其是可生物降解的。
41.基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物、尤其是pla或plga的分子量原则上可以在宽
的范围中变化。然而，分子量优选为至少大约5kda和/或最高大约100kda。分子量尤其优选为至少大约7kda和/或最高大约60kda，尤其至少大约9kda和/或最高大约40kda，尤其优选至少大约10kda和/或最高大约30kda。
42.在根据本发明的储库剂型中包含至少一种有效成分。该至少一种有效成分可以选自但不限于：抗生素，抗微生物剂，抗真菌剂，防腐剂，化学治疗剂，细胞生长抑制剂，转移抑制剂，抗过敏剂，抗凝血剂，性激素，性激素抑制剂，止血剂，激素，肽类激素，融合蛋白，抗抑郁药，疫苗，促性腺激素释放激素类似物，生长因子抑制剂，激素拟似物，多发性硬化症治疗剂，程序性细胞死亡受体-1-拮抗剂(programmed cell death rezeptor 1-antagonisten)，神经阻滞剂，补体系统抑制剂，维生素，抗组胺药，抗体，抗体片段，核酸，dna，质粒dna，阳离子dna复合物和rna，sirna，mrna和抗糖尿病药。
43.有用的有效成分包括但不限于：肝素，肝素衍生物，水蛭素，乙酰水杨酸，依诺肝素，利拉鲁肽，阿比鲁肽(albiglutid)，杜拉鲁肽(dulaglutid)，利西那肽(lixisenatid)，艾塞那肽(exenatid)，胰岛素，胰岛素类似物，阿卡波糖，醋酸格拉替雷，奥曲肽(octreotid)，帕西瑞肽(pasireotid)，兰瑞肽(lanreotid)和/或伐普肽(valpreotid)，去氨加压素，催产素，扎鲁司特，布舍瑞林，生长抑素，格列本脲，格列齐特，格列美脲，格列喹酮，吡格列酮，米格列醇，那格列奈，米格列奈，瑞格列奈，西他列汀，维达列汀，地塞米松，泼尼松龙，皮质酮，布地奈德，雌激素，柳氮磺胺吡啶，美沙拉嗪，利培酮，紫杉醇，5-氟尿嘧啶，顺铂，长春碱，长春新碱，埃博霉素(epothilone)，内皮抑素，血管抑制素，d-苯丙酰氨-脯酰氨-精氨酸-氯甲基酮(d-phe-pro-arg-chloromethylketon)，阿柏西普(aflibercept)和单克隆抗体，例如阿达木单抗(adalimumab)，阿杜卡尼单抗(aducanumab)，贝那利珠单抗(benralizumab)，贝伐珠单抗(bevacizumab)，塞妥珠单抗(certolizumab)，地诺单抗(denosumab)，度匹鲁单抗(dupilumab)，依法利珠单抗(efalizumab)，厄瑞努单抗(erenumab)，英夫利西单抗(infliximab)，伊匹木单抗(ipilimumab)，美泊珠单抗(mepolizumab)，那他珠单抗(natalizumab)，奈莫珠单抗(nemolizumab)，奥瑞珠单抗(ocrelizumab)，奥马珠单抗(omalizumab)，帕博丽珠单抗(pembrolizumab)，帕妥珠单抗(pertuzumab)，雷珠单抗(ranibizumab)，瑞利珠单抗(reslizumab)，利妥昔单抗(rituximab)，苏兰珠单抗(solanezumab)，托珠单抗(tocilizumab)，曲罗芦单抗(tralokinumab)，曲妥珠单抗(trastuzumab)，乌司奴单抗(ustekinumab)和维多珠单抗(vedolizumab)。
44.在此，含有至少一种有效成分的优选的挤出式储库剂型可以用于治疗肢端肥大症；与(功能活跃的)胃肠胰腺内分泌肿瘤相关的症状，例如具有类癌综合征特征的类癌；晚期神经内分泌肿瘤；和促甲状腺激素(tsh)分泌垂体腺瘤；癌症，例如，多发性骨髓瘤，套细胞淋巴瘤，弥漫性大b细胞淋巴瘤，急性髓性淋巴瘤，滤泡性淋巴瘤，慢性淋巴细胞白血病，乳腺癌，肺癌，子宫内膜癌，卵巢癌，胃癌，宫颈癌或前列腺癌，胰腺癌，胶质母细胞瘤，肾癌；肝细胞癌，结肠癌，神经内分泌肿瘤，头颈肿瘤，肉瘤；直接或间接由肿瘤抑制基因如p53，pten或vhl中的遗传缺陷造成的肿瘤综合征，子宫内膜癌，淋巴管平滑肌瘤病，神经纤维瘤病1型，希佩尔
·
林道综合征；以及类风湿性关节炎；强直性脊柱炎(morbus bechterew(别赫捷列夫氏病))；银屑病关节炎；牛皮癣；骨关节炎；痛风；哮喘；支气管炎；过敏性鼻炎；慢性阻塞性肺疾病；囊性纤维化；慢性炎症性肠病如肠易激综合征，溃疡性结肠炎，溃疡性结
肠炎，克罗恩氏病，亨廷顿病；胃炎；食道炎；肝炎；胰腺炎；肾炎；红斑狼疮；动脉粥样硬化；血管成形术引起的再狭窄；左心室肥厚；心肌梗塞；中风；心脏、肺、肠、肾脏、肝脏、胰腺、脾脏和大脑的缺血性损伤；急性或慢性器官移植排斥；黄斑变性；糖尿病性黄斑水肿；生长激素过少症；贫血；生育障碍；肥胖；性早熟；子宫内膜异位症；乳房痛；抽动秽语综合征；抑郁症；人格障碍；强迫症；儿童多动症；胎儿酒精综合症和孤独症时的易激动性；妄想症；幻觉；癫痫；阿尔茨海默病；帕金森病；阵发性睡眠性血红蛋白尿；作为镇静剂；性别调节措施；多发性硬化症和糖尿病。
45.根据一个优选的实施方式，有利的挤出式储库剂型包含由肽类激素类构成的至少一种有效成分。尤其优选地，至少一种有效成分选自奥曲肽(octreotid)，帕西瑞肽(pasireotid)，兰瑞肽(lanreotid)和/或伐普肽(valpreotid)。至少一种有效成分尤其选自奥曲肽。
46.至少一种有效成分尤其优选选自核酸，优选dna，质粒dna，阳离子dna复合物和/或rna，sirna和/或mrna。至少一种有效成分尤其选自rna，sirna和/或mrna，尤其优选是自我复制的rna和/或mrna。这种自我复制的rna是现有技术中已知的并且例如可以从病毒中获得。
47.优选的(自我复制的)rna或mrna优选可以用作疫苗和/或用于癌症治疗。在这种情况下，rna或mrna编码所期望的抗原，例如来自病原体的抗原。因此，疫苗还刺激针对肿瘤相关抗原的免疫应答和刺激针对癌细胞的防御细胞。
48.另一应用领域是rna和/或mrna在有利的储库剂型中作为有效成分来形成内源性蛋白质和/或酶的用途。因此，非功能性内源性蛋白质和酶可以借助用于编码相应的功能性蛋白质或酶的rna和/或mrna被这些rna或mrna所编码的功能性蛋白质或酶替代。
49.优选地，rna或mrna释放到特定器官或组织中或释放到特定器官或组织上是重要的。尤其地，rna和/或mrna从储库剂型中释放到眼睛中。尤其优选，这种应用用于治疗黄斑变性和/或青光眼，糖尿病相关眼病和肿瘤相关眼病。
50.有利地，rna或mrna的免疫刺激或治疗特性或作用可以通过添加佐剂来提高。这些佐剂是现有技术中已知的。因此，显示出：当自我复制的rna疫苗配制成基于角鲨烯和聚山梨醇酯(tween 80)和脱水山梨糖醇三油酸酯(span 85)、柠檬酸钠和柠檬酸，例如佐剂mf59(诺华)的阳离子水包油纳米乳浊液时，该自我复制的rna疫苗更有效。通过将分子与trimix(编码激活免疫系统的三个蛋白质catlr4、cd40l和cd70)连接在一起能够例如实现mrna效果增强。
51.根据另一优选的实施方式，储库剂型包括由脂质构成的至少一种第二化合物。
52.在此，由基于乳酸和/或乙醇酸的可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种第一化合物和由脂质类构成的至少一种第二化合物的干重具有占储库剂型的总重量的超过大约50重量％，优选超过大约55重量％，尤其优选超过大约60重量％，尤其优选至少大约62重量％的份额。
53.然而，由可生物降解的有机聚合物类构成的至少一种化合物和由脂质类构成的至少一种化合物的干重具有占储库剂型的总重量的最大大约99重量％，优选最大大约97.5重量％，尤其优选最大大约95重量％，尤其优选大约90重量％的份额。
54.术语“大约”表示特定的测量值、例如组合物中的含量可以具有在适合的测量方法
的测量公差之内规定的测量值的测量误差。
55.在本发明中，将制剂的准备用于递药的重量称作储库剂型的干重，所述制剂具有没有的或可忽略不计的含量，尤其是小于3重量％的水。
56.在此，由可生物降解的聚合物类构成的至少一种化合物的总重量包括在含有效成分的储库剂型中由可生物降解的聚合物类构成和由脂质类构成的全部化合物的含量。
57.在根据本发明的储库剂型中，由脂质类构成的至少一种第二化合物具有熔点，该熔点高于室温，即大约25℃的温度。至少一种脂质的熔点优选为高于大约40℃，尤其优选高于大约50℃，尤其高于大约60℃，尤其优选高于大约70℃。然而，根据本发明的储库剂型中的脂质的熔点不高于100℃。
58.根据另一优选的实施方式，包含在挤出式储库剂型中的脂类具有至少大约60℃和/或最高大约80℃的熔点。尤其优选地，脂质的熔点为至少大约62℃，尤其至少大约69℃。尤其优选的熔点为最高大约77℃，尤其大约73℃。
59.根据另一优选的实施方式，至少一种脂质选自：甘油单酯，甘油二酯和/或甘油三酯，例如甘油与至少5个和/或最多26个碳原子长度的饱和的和/或不饱和的脂肪酸的酯化，磷脂酸，卵磷脂，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇，磷脂酰丝氨酸，二磷脂酰甘油，神经酰胺，脑苷脂，神经节苷脂，神经鞘氨醇磷脂，鞘磷脂，神经鞘氨醇，糖鞘氨醇，酰基氨基糖，酰基氨基糖二糖，酰基海藻糖，酰基海藻糖，山梨糖醇脂肪酸酯，角鲨烯，类固醇，聚酮化合物，甾醇，孕烯醇，胆固醇，硬脂，蜡，及其盐和衍生物。
60.用于优选的脂质的实例是硬脂，其例如由甘油单酯，甘油二酯和甘油三酯的混合物构成，所述硬脂可以通过天然来源的脂肪酸与甘油的酯化作用或通过天然来源的脂肪的转酯作用获得。尤其优选的脂质包括具有至少12个和/或最多22个、尤其至少18个和/或最多22个碳原子数量的脂肪酸。完全尤其优选的脂质选自甘油三硬脂酸酯。在欧洲药典(ph.eur.第8版，概论，2014年)中描述了这样的硬脂并且例如可以选择名为dynasan 112(三月桂酸甘油酯)、dynasan 116(三棕榈酸甘油酯)和/或dynasan 118(三硬脂酸甘油酯)。这些例如可从ioi oleo有限责任公司(德国)购得。倘若要使用热敏性有效成分，则具有低于50℃的熔点的优选的脂质是合适的，如witepsol e85、witepsol h5、witepsol h12、witepsol h37和/或witepsol h15，它们例如可以从ioi oleo有限责任公司(德国)购得。
61.此外，挤出式储库剂型还可以包括由脂质类构成的一种以上的化合物。然而，挤出式储库剂型优选仅包括由脂质类构成的一种化合物。
62.根据一个优选的实施方式，由聚合物类构成的至少一种第一化合物与由脂质类构成的至少一种第二化合物的比例为最高大约25:1，优选最高大约20:1，尤其优选最高大约19:1。然而，由聚合物类构成的至少一种第一化合物与由脂质类构成的至少一种第二化合物的比例为至少大约5:1，优选至少大约10:1，尤其优选至少大约12:1。
63.表1中概括了由基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物类构成的至少一种化合物与由脂质类构成的至少一种化合物的示例性组合。
64.表1：根据本发明的储库剂型的示例性组合物。
[0065][0066][0067]
n.a.＝不可使用
[0068]
更优选的挤出式储库剂型用于治疗肢端肥大症；与(功能活性的)胃肠胰腺内分泌肿瘤相关的症状，例如具有类癌综合征特征的类癌；晚期神经内分泌肿瘤；和促甲状腺激素(tsh)分泌垂体瘤。
[0069]
在此，尤其优选的有效成分奥曲肽优选可以包括由具有下列序列的氨基酸构成的多肽：
[0070]
fcfwktct(phe-cys-phe-trp-lys-thr-cys-thr)。
[0071]
至少一种有效成分还可以以不同形式包含在储库剂型中，这取决于哪种形式得出
有效成分从储库剂型中最佳释放特性。基于氨基酸的有效成分一般可以作为环肽、寡肽或聚合肽或其他药学上可接受的衍生物或分子络合物的组分存在。在此，氨基酸既可以经由α-肽键也可以经由ω-肽键彼此结合。至少一种有效成分也可以作为盐例如乙酸盐，或也可以成游离的碱或酸形式存在。
[0072]
此外，作为优选的有效成分的上述基于氨基酸的有效成分的氨基酸中的至少一种可以具有翻译后修饰。这种情况下，该翻译后修饰有利地不影响有效成分的特性，尤其是在释放和效果方面。
[0073]
根据本发明的储库剂型中有效成分的含量原则上可以在宽的范围中变化。
[0074]
根据一个优选的实施方式，有利的有效成分量包括在储库剂型中至少大约1重量％，优选至少大约5重量％，尤其优选大约8重量％的核酸，优选dna，质粒dna，阳离子dna复合物和/或rna，sirna和mrna。至少一种有效成分尤其优选选自rna，sirna和/或mrna，尤其是自我复制的rna和/或mrna。这种有效成分在储库剂型中按最高大至多大约40重量％，优选最多大约30重量％，尤其优选至多大约20重量％的量存在。这种有效成分尤其按大约10重量％和/或至多大约15重量％的量存在。
[0075]
优选肽类激素类，尤其优选奥曲肽、帕西瑞肽、兰瑞肽、和/或伐普肽，尤其是奥曲肽的有利的有效成分量为大约0.3重量％至大约50重量％，优选大约3重量％至大约45重量％，尤其优选大约4重量％至大约40重量％，尤其优选大约7重量％至大约35重量％。
[0076]
活性有效成分的有效成分浓度对于有效的治疗是重要的，所述活性有效成分在施用储库剂型之后存在于使用者的血液中。因此，优选含有肽类激素、尤其奥曲肽的优选的挤出式储库剂型有利地具有按包含在植入物中的全部有效成分量计在7天之后为至少大约20重量％和/或在28天之后为至少大约60重量％的体外有效成分释放。
[0077]
根据本发明的挤出式储库剂型还适合用于化妆品的用途。尤其是，有利的储库剂型可以用于化妆品的抗皱紧肤。因此，根据本发明的组合物用于局部地，尤其是用于针对抗皱紧肤，尤其优选用于避免皱纹、皮肤紧致和保护免受皮肤老化。为此示例性的有效成分可以选自透明质酸、胶原蛋白和/或肉毒杆菌毒素。
[0078]
有利的储库剂型还可以包含至少一种常用于皮下给药剂型的辅助材料，在此，所述辅助材料可以影响有效成分从储库剂型中释放、至少一种有效成分的有效成分稳定性、血浆半衰期和/或生物利用度。优选的辅助材料有利地促进至少一种有效成分从储库剂型中的释放。这种辅助材料尤其有助于持续有效成分释放，然而对生物相容性不产生不利影响。替选地或附加地，这些辅助材料的添加可以改善包含在储库剂型中的有效成分的稳定性。如果储库剂型设计为用于数周至一年的长期持续地给药，则这是尤其有利的。
[0079]
在这种情况下，主要是在制备皮下植入物时使用的并且生理上无害的物质。辅助材料优选具有高的生物相容性，使得辅助材料和辅助材料的任何降解产物都对用户无毒并且不引起不期望的副作用。
[0080]
可以看出，添加成孔剂可以有利地改善至少一种有效成分从皮下储库剂型中的释放。这种成孔剂例如可以选自亲水性物质如硫酸钙，磷酸氢钙，糖例如葡萄糖，乳糖，果糖，甘露醇，海藻糖，糊精，麦芽糖糊精，蔗糖，山梨糖醇，木糖醇，淀粉或其衍生物例如羟乙基淀粉，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇(peg)如peg 6000或peg 8000，氯化钠，柠檬酸钠，柠檬酸，透明质酸，聚乙烯醇，聚丙烯酸及其衍生物，聚甲基丙烯酸及其衍生物，聚甲基丙烯酸甲酯，聚
苯乙烯，带有甲基丙烯酸甲酯和苯乙烯的单体的共聚物，以及其混合物。
[0081]
海藻糖和/或羟乙基淀粉和/或聚乙二醇适合作为尤其优选的成孔剂，其例如可以从clariant公司或sigma-aldrich公司(奥地利)购得。
[0082]
因此，成孔剂、尤其是peg的分子量为优选至少大约1kda，尤其优选至少大约3kda，尤其至少大约4kda。peg的优选的分子量为最高大约10kda，尤其优选最高大约8kda。
[0083]
根据另一优选的实施方式，有利的储库剂型可以包括辅助材料，该辅助材料抑制聚合肽，优选奥曲肽，帕西瑞肽，兰瑞肽和/或伐普肽的酯化。优选二价盐或二价金属离子的盐、例如氯化钙适用于此。
[0084]
根据另一优选的实施方式，辅助材料包括至少一种酶。这种酶可以有利地影响至少一种有效成分从有利的储库剂型中的释放，而在这种情况下对储库剂型的稳定性和/或生物可降解性不产生不利影响。这种酶有利地对储库剂型的改善额生物稳定性产生影响。这种酶尤其优选选自由脂肪酶构成的组。这种脂肪酶例如可以从sigma-aldrich公司购得。
[0085]
有效成分释放速率还可以通过添加可溶胀的聚合物来提高，所述聚合物优选选自胶原蛋白，明胶及其衍生物，淀粉及其衍生物(优选羟乙基淀粉，羟丙基淀粉，羧甲基淀粉)，纤维素衍生物，几丁质，壳聚糖及其衍生物，聚酰胺，多羟基酸，多羟基丁酸酯，多羟基戊酸酯，聚己内酯和聚二恶烷酮。这尤其对于需要较高剂量的有效成分和/或对于具有较短的给药持续时间例如数周至数月的给药持续时间的含有效成分的储库剂型是关系重大的。因此，尤其优选的可溶胀的聚合物是羟乙基淀粉(hes)并且因此可以从sigma-aldrich公司(奥地利)购得。
[0086]
可溶胀的聚合物、尤其是hes的分子量有利地为至少大约50kda，优选至少大约70kda，尤其至少大约100kda，尤其优选至少大约120kda。可溶胀的聚合物、尤其hes的分子量为最高大约400kda，尤其优选最高大约300kda，尤其最高大约200kda，尤其优选最高大约150kda。
[0087]
hes的取代度、即用羟烷基改性的葡萄糖单元的数量与单体单元的总数的比例为至少大约0.1，优选至少大约0.2，尤其至少大约0.3。取代度为最高大约1，优选大约0.7，尤其大约0.5。
[0088]
附加地，根据本发明的储库剂型可以包含又一本领域技术人员已知的常规的辅助材料，例如生育酚，例如α-生育酚，β-生育酚，γ-生育酚，δ-生育酚和其混合物(维生素e)，其尤其用作抗氧化剂。
[0089]
在一有利的实施方式中，这些抗氧化剂使储库剂型中的反应性的氧化性物质失活，由此减缓或甚至阻止有效成分的氧化，因此引起有效成分的更好的稳定性，从而引起在贮藏和应用期间根据本发明的储库剂型的更长的耐久性。
[0090]
一种或多种辅助材料的含量有利地影响有效成分从优选的挤出式储库剂型中受控制地并且持续地释放。
[0091]
挤出式储库剂型的有利的组合物如下所示：
[0092]
(i)0.1重量％至50重量％的有效成分，优选1重量％至50重量％的有效成分，尤其2.5重量％至40重量％的有效成分，
[0093]
(ii)1重量％至95重量％的基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物，优选10重量％至89重量％的基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物，
[0094]
(iii)必要时1重量％至25重量％的海藻糖，优选5重量％至20重量％的海藻糖，
[0095]
(iv)必要时1重量％至25重量％的peg，优选5重量％至20重量％的peg。
[0096]
挤出式储库剂型的组合物尤其优选包括
[0097]
(i)5重量％至45重量％的有效成分，尤其是10重量％至40重量％的有效成分，
[0098]
(ii)30重量％至85重量％的基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物，优选plga和/或pla，
[0099]
(iii)必要时2.5重量％至18重量％的海藻糖，优选3重量％至16重量％的海藻糖，尤其3.5重量％至15重量％的海藻糖，和
[0100]
(iv)必要时3重量％至17.5重量％的peg。
[0101]
挤出式储库剂型的组分尤其优选包括
[0102]
(i)15重量％至35重量％的有效成分，
[0103]
(ii)40重量％至75重量％的基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物，优选plga和/或pla，
[0104]
(iii)1重量％至10重量％的脂质，
[0105]
(iv)必要时5重量％至10重量％的海藻糖，和
[0106]
(v)必要时5重量％至15重量％的peg。
[0107]
挤出式储库剂型的组分还优选包括
[0108]
(i)0.1重量％至50重量％的有效成分，优选1重量％至50重量％的有效成分，尤其2.5重量％至40重量％的有效成分，尤其优选5重量％至20重量％的有效成分，
[0109]
(ii)40重量％至75重量％的基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物，优选plga和/或pla，
[0110]
(iii)必要时1重量％至10重量％的脂质，
[0111]
(iv)必要时0.1重量％至2重量％的脂肪酶，优选0.2重量％至1重量％的脂肪酶，
[0112]
(v)必要时5重量％至10重量％的海藻糖，和
[0113]
(vi)必要时5重量％至15重量％的peg。
[0114]
有利的有效成分含量尤其为大约5重量％至30重量％，可生物降解的有机聚合物的含量为大约50重量％至70重量％以及脂质的更佳的含量为大约5重量％。
[0115]
根据另一优选的实施方式，海藻糖可以完全地或部分地被hes替代。
[0116]
如本文开始已经提及的，根据本发明的挤出式储库剂型借助挤出制成。已经显示出，当作为干粉，优选喷雾干燥的粉末或冷冻干燥的粉末或冻干物的有效成分与至少两种化合物混合时，在此由基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物类构成和由脂质类构成的至少两种化合物与至少一种有效成分的用于准备挤出的混合物的特性改善。
[0117]
倘若购得呈溶解的状态的有效成分，在混合物质用来制备根据本发明的储库剂型之前，优选进行干燥步骤、尤其是冻干步骤。
[0118]
为此，原则上可以向有效成分添加多种物质，以确保有效成分维持生物活性。这些物质也称作冷冻保护剂或冻干保护剂，其中在上下文中冻干保护剂用于在干燥时保护物质以及冷冻保护剂在冷冻时具有相应的任务。
[0119]
此外，已发现，通过不将挤出物在挤出之后立即冷却到环境温度，而是例如在干燥箱或培养箱中在提高的温度下贮藏一定时间的方式，可以影响在皮下给药之后有效成分释
放的时长。在这种情况下，在大约0.5小时至大约5小时的范围中的持续时间被证明为有利的。在此，在高温下可选的贮藏(也称作退火步骤)取决于至少一种脂质的熔点并且例如在大约40℃至大约80℃的范围中，优选在大约55℃至大约75℃的范围中，尤其优选在大约65℃至大约70℃的范围中。在此，当然优选的贮藏温度始终也取决于至少一种有效成分的温度稳定性。
[0120]
优选的储库剂型还可以通过滚圆方法、尤其是通过球化制成。因此，圆柱状的挤出物有利地以该方式滚圆，使得可以在挤出时产生的形状例如角或棱边被移除，它们可能对给药特性产生不利影响。球化还可以用于制备微粒，所述微粒随后皮下施用，从而同样是生物可降解的储库剂型。
[0121]
有利地，储库剂型具有均匀的涂层，其由至少一种施加在芯核上的层构成并且有利地限定有效成分从储库剂型中最初的释放推动力并且确保至少一种有效成分经过持续的一段时间后的治疗浓度。优选的涂层具有物质混合物或组合物，它们选自根据本发明的储库剂型的上述组分a)至c)中的至少一种，因此例如也可以设计为不含有效成分的。倘若涂层包含有效成分，其含量可以与芯核的有效成分含量相同或不同。然而，在一个特别优选的实施方式中，将涂层设计为不含有效成分的。
[0122]
原则上，挤出式储库剂型的合适的重量在用于皮下植入的常规范围中变化。因此，挤出式储库剂型的重量也与期望的给药时间和/或给药部位相关。然而，挤出式储库剂型的优选的重量在1mg至1000mg的范围中，尤其优选至少大约20mg和/或最高大约180mg，尤其至少大约50mg和/或最高大约150mg，尤其优选至少大约80mg和/或最高大约120mg。
[0123]
因此，就本发明而言，可以将储库剂型设计为小棍、球体、立方体、椭圆体、长方体、软垫、圆柱、药片、粒状物、小盘或团块。
[0124]
根据本发明的储库剂型优选具有可注射的尺寸，然而，如果期望的话，也可以借助外科手术引入到施用处。因此，优选的储库剂型具有至少0.1mm至10mm的直径和至少0.15mm至50mm的长度。尤其是，储库剂型具有至少0.15mm至7.5mm的直径和至少0.2mm至45mm的长度，尤其优选至少0.2mm至5mm的直径和至少0.3mm至40mm的长度。
[0125]
在此，术语“直径”表示与旋转轴线正交伸展的最长的线段，该线段将所涉及的体部的边缘的两点彼此连接。旋转体部可以围绕其转动的这样的直线称作旋转轴线。
[0126]
术语“长度”涉及旋转轴线的处于旋转体部内部的部分。
[0127]
优选的储库剂型的直径与长度的比例有利地在1:30至10:1的范围中，优选在1:15至5:1的范围中，尤其优选在1:13至1:1的范围中。
[0128]
倘若挤出式储库剂型是微粒，则圆形的或近似圆形的颗粒的直径可以在大约1μm至大约100μm，优选大约5μm至大约90μm，尤其优选10μm至大约80μm。
[0129]
如上面已经阐述的，根据本发明的用于制备挤出式储库剂型的方法包括混合物：(a)至少一种有效成分，和(b)至少一种化合物，该至少一种化合物由基于乳酸和/或乙醇酸的有机聚合物类构成，可选地(c)至少一种化合物，该至少一种化合物由脂质类构成，由此获得均匀的粉末混合物。
[0130]
就本发明而言，粉末混合物在这种情况下应理解为大小合适的多个固体组分的混合物，其中组分颗粒可以具有小于1nm的尺寸。粉末混合物还可以具有带有在1nm至1μm的范围中的尺寸的颗粒和/或带有大于1μm的尺寸的颗粒。倘若待混合的组分中的至少一种在混
合之前不以固体形式存在，则在制备粉末混合物之前可以例如通过喷射干燥或冷冻干燥将其转化成固态。
[0131]
为了将根据本发明的挤出式储库剂型给药到皮下组织中，原则上可以使用本领域技术人员已知的全部给药仪器。因此，根据本发明的储库剂型例如可以通过注射器、小管、给药器和喷射器，尤其通过给药器施用。
[0132]
最后，本发明还涉及一种试剂盒，该试剂盒包括根据本发明的挤出式储库剂型和适合用于给药的给药器，借助所述给药器可以将储库剂型皮下施用。因此，根据本发明的挤出式储库剂型不必须强制性在吸收到给药器之前灭菌，而是也可以在给药器内部经受灭菌过程。此外，这种给药器能够吸收不同长度的挤出式储库剂型。因此，储库剂型本身也可以给药，所述储库剂型不具有圆柱状的形状，而是例如是长方形的或圆形等。
[0133]
这种给药器适宜地具有用于吸收挤出式储库剂型的、具有上面阐述的大小和保护帽的中空针，所述保护帽在给药之前被移除并且在使用后可以再次固定。由此，有利地保护挤出式储库剂型免受外部影响，所述外部影响会以任何方式对优选的应用产生负面影响。
附图说明
[0134]
本发明的其他特征从下面结合权利要求以及附图描述的实施例中给出。应注意的是，本发明不限于所描述的实施例的实施方案，而是通过所附的权利要求的范围确定。尤其是，在根据本发明的实施方式中的各个特征可以以作为下面列举的实例的不同组合方式实现。在下面阐述本发明的实施例时参考附图。附图示出：
[0135]
图1：比较根据本发明的含有奥曲肽的储库剂型(根据实施例2，见下面)与非根据本发明的含有奥曲肽的储库剂型的释放曲线。储库剂型具有大约2mm的直径。实线(根据本发明的实施例)：33重量％的奥曲肽，32重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物，32重量％聚乳酸，3重量％甘油三酸酯。虚线(对比实例)：33重量％的奥曲肽，33.5重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物，33.5重量％聚乳酸。
具体实施方式
[0136]
实施例
[0137]
根据本发明的实施例1：
[0138]
为了制备根据本发明的储库剂型，将粉末混合物称重，该粉末混合物由等份额的34重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，34重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)和32重量％的奥曲肽冻干物(bachem，布本多夫，瑞士)构成。该粉末混合物借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。
[0139]
随后的挤出经由反向转子螺杆-熔融挤出(mini ctw，thermo fisher scientific有限责任公司，卡尔斯鲁厄，德国)在85℃至92℃和8upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。挤出物的直径借助喷嘴调节到2.0mm。挤出束状物被切割成适合长度的挤出物(在当前的实施例中长度为2cm)。替选地，挤出物可以经由球化作用成型为微粒。
[0140]
根据本发明的实施例2：
[0141]
为了制备根据本发明的储库剂型，将粉末混合物称重，该粉末混合物由32重量％
的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，32重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)，3重量％的甘油三酸酯(dynasan 118，ioi oleo有限责任公司，汉堡，德国)和33重量％的奥曲肽冻干物(bachem，布本多夫，瑞士)构成。该粉末混合物借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。随后的挤出经由反向转子螺杆-熔融挤出(mini ctw，thermo fisher scientific有限责任公司，卡尔斯鲁厄，德国)在85℃至92℃和8upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。挤出物的直径借助喷嘴调节到2.0mm。挤出束状物被切割成适合长度的挤出物(在当前的实施例中长度为2cm)。替选地，挤出物可以经由球化作用成型为微粒。
[0142]
根据本发明的实施例3：
[0143]
制备根据实施例1进行，然而，根据本发明的储库剂型的组合物用氯化钙(sigma aldrich，维也纳，奥地利)替代。粉末混合物由31.75重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，31.75重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)，3.5重量％的氯化钙和33重量％的奥曲肽冻干物构成。
[0144]
根据本发明的实施例4：
[0145]
制备根据实施例1进行，然而，根据本发明的储库剂型的组合物用甘油三酯和海藻糖(sigma aldrich，维也纳，奥地利)替代。粉末混合物由30重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，30重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)，3.5重量％的甘油三酸酯(dynasan 118，ioi oleo有限责任公司，汉堡，德国)，3.5重量％的海藻糖和33重量％的奥曲肽冻干物构成。
[0146]
根据本发明的实施例5：
[0147]
为了制备根据本发明的储库剂型，粉末混合物由57重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，10重量％的二山嵛酸甘油酯(compritol 888ato，gattefosse)和33重量％的奥曲肽冻干物构成。该粉末混合物的组分借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。随后的挤出经由同向转子螺杆-熔融挤出(mini ctw，thermo fisher scientific有限责任公司，卡尔斯鲁厄，德国)在83℃至90℃和8upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。
[0148]
根据本发明的实施例6：
[0149]
为了制备根据本发明的储库剂型，粉末混合物由28.5重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg502h，evonik industries，德国)，28.5重量％的聚乳酸(r203h，evonik industries，德国)，3重量％的甘油三酸酯(dynasan 118，ioi oleo有限责任公司，汉堡，德国)和40重量％的兰瑞肽构成，该粉末混合物借助低温研磨加工成均匀的混合物。为了研究有效成分释放，例如首先对呈相应的合适的形状和尺寸(例如，切割成1.5cm至2cm长度和1.8mm的直径的圆柱)的根据本发明的储库剂型单独称重。
[0150]
根据本发明的实施例7：
[0151]
为了制备根据本发明的储库剂型，粉末混合物由38重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，26重量％的聚乳酸(
r202h，evonik industries，德国)，3重量％的甘油三酸酯(dynasan 118，ioi oleo有限责任公司，汉堡，德国)和33重量％的奥曲肽冻干物(bachem，布本多夫，瑞士)构成。该粉末混合物借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。随后的共挤出借助双组元喷嘴执行，其中除实际的粉末混合物之外，借助结构相同的第二挤出机(mini ctw，thermo fisher scientific有限责任公司，卡尔斯鲁厄，德国)挤出由100重量％的聚乳酸-共-乙醇酸共聚物(rg752h，evonik industries，德国)构成的均匀的涂层。芯核挤出物的直径调节到2.0mm并且涂层的涂覆厚度借助双组元喷嘴调节到0.1mm。紧接着挤出束状物被切割成适合长度的挤出物。
[0152]
对比实例
[0153]
为了制备用作对比实例的储库剂型，制备粉末混合物，该粉末混合物由33.5重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，33.5重量％的聚乳酸r202h，evonik industries，德国)和33重量％的奥曲肽冻干物(bachem，布本多夫，瑞士)构成。该粉末混合物借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。
[0154]
随后的挤出经由反向转子螺杆-熔融挤出(mini ctw，thermo fisher scientific有限责任公司，卡尔斯鲁厄，德国)在85℃至92℃和5upm至15upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。挤出物的直径借助喷嘴调节到2.0mm。挤出束状物被切割成适合长度的挤出物(在当前的实施例中长度为2.0cm)。
[0155]
确定有效成分从储库剂型中的体外释放(实施例1至7以及对比实例)
[0156]
为了研究有效成分从储库剂型中的体外释放，将(根据实施例1至6的)储库剂型放置在释放细胞中并且掺有50ml的释放介质(磷酸氢二钠，ph为7.4)。紧接着将储库剂型放置在37℃下孵育摇床(有限两合公司，德国)中经过期望的应用时间。
[0157]
在各自的采样时间点，用一次性移液管抽取约1ml样本溶液并直接填充到hplc容器中。在每个采样时间点之后，释放介质被完全更换。
[0158]
根据本发明的实施例8：
[0159]
为了制备根据本发明的储库剂型，将粉末混合物称重，该粉末混合物由44重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，44重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)，12重量％的mrna(egfp mrna，trilink biotechnologies股份有限公司，美国)构成。
[0160]
随后的挤出经由同向转子螺杆-熔融挤出(mini extruder ze-5，three-tec有限责任公司，birnen，瑞士)在85℃至90℃和10upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。挤出物的直径用喷嘴调节到0.5mm。挤出束状物被切割成适合长度的挤出物(在当前的实施例中长度为0.5cm)。
[0161]
借助gfp(绿色荧光蛋白)测定系统(arbor assays有限责任公司(llc)，美国)进行表达控制(gfp活性测定)。在此，根据以下方案运行：将根据本发明的储库剂型放置在人类细胞培养中。从储库剂型中的释放和所编码的蛋白的活性经由荧光测定法检测。在用波长为395nm的光刺激时，吸收mrna并且表达gfp基因的细胞发射具有509nm的波长的可检测的
光。在保持阴性对照(无mrna)细胞培养中，未测量到大量荧光。
[0162]
根据本发明的实施例9：
[0163]
制备根据实施例1进行，然而，根据本发明的储库剂型的组合物用二山嵛酸甘油酯替代。粉末混合物由40重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，40重量％的聚乳酸(r202h，evonik industries，德国)，5重量％的甘油三酸酯(dynasan 118，ioi oleo有限责任公司，汉堡，德国)，4.5重量％的二山嵛酸甘油酯(compritol 888 ato，gattefosse)，10重量％的mrna(egfp mrna，trilink biotechnologies股份有限公司，美国)和0.5重量％的脂肪酶(源自假单胞菌属的甘油三酯脂肪酶，merck两合股份公司(kgaa)，达姆施塔特)构成。表达控制类似于实施例8进行。
[0164]
根据本发明的实施例10：
[0165]
为了制备根据本发明的储库剂型，将粉末混合物称重，该粉末混合物由86重量％的聚乳酸-共-乙醇酸聚合物(rg752h，evonik industries，德国)，和14重量％的mrna(fluc mrna，trilink biotechnologies股份有限公司，美国)构成。该粉末混合物借助低温研磨(freezer/mill，c3 prozess-und analysentechnik有限责任公司，位于慕尼黑附近的哈尔，德国)均匀混合。随后的挤出经由同向转子螺杆-熔融挤出(mini extruder ze-5，three-tec有限责任公司，birnen，瑞士)在83℃至92℃和10upm(每分钟转速)的螺杆转速下执行。
[0166]
借助荧光素酶测定系统e1500(promega corporation，美国)进行表达控制(荧光素酶活性测定)。在此，根据以下方案运行：将根据本发明的储库剂型放置在人类细胞培养中。从储库剂型中的释放和所编码的蛋白的活性经由荧光素酶测定法检测。在添加底物(荧光素)时，吸收mrna并且表达荧光素酶的细胞发射可测的光。在保持阴性对照(无mrna)细胞培养中，未测量到大量发光。