同时分离、测定盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法与流程

1.本发明属于分析化学领域，具体涉及一种同时分离、测定盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法。


背景技术：

2.盐酸帕洛诺司琼(palonosetron hydrochloride)由美国syntex公司(现属瑞士roche biosicence公司)berger,j等人在1991年合成。然后由瑞士helsinn healthcare开发成功，mgi pharma买入了该药在北美的市场销售权，于2003年获得fda批准，同年9月在美国上市。用于预防由中度或高度致呕性化疗引发的急性或迟发性恶心呕吐。本品为高选择性的5－ht3受体拮抗剂，作用效果明显。盐酸帕洛诺司琼化学名2-[1-氮杂双环(2.2.2)辛-3s-基]-2,3,3as,4,5,6-六氢-1h-苯并[de]异喹啉-1-酮盐酸盐，分子式为c
19h24
n2o
·
hcl。盐酸帕洛诺司琼结构式为：
[0003]
杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体的化学名称及结构式如下表1所示。表1盐酸帕洛诺司琼杂志名称及结构式
[0004]
药物合成和制剂过程中需要对盐酸帕洛诺司琼中杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体含量进行严格控制。盐酸帕洛诺司琼与杂质f互为对映异构体，杂质c和杂质d互为对映异构体，与盐酸帕洛诺司琼互为非对映异构体，盐酸帕洛诺司琼与杂质c、杂质d、对映异构体均为异构体，而对异构体的分析、分离一直是药物合成和制剂过程中质量控制的难点和重点，实现盐酸帕洛诺司琼中这3个异构体和1个工艺杂质的分离在盐酸帕洛诺司琼药物合成和制剂过程的质量控制方面具有非常重要的社会意义和经济效益。
[0005]
对于制备盐酸帕洛诺司琼过程中产生的异构体，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。目前usp中收载有药品盐酸帕洛诺司琼，并且有杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体的检测方法，但是usp盐酸帕洛诺司琼的检测方法中，杂质c和杂质d的分离度小于1.0，杂质d与对映异构体分离度小于1.5，对映异构体与杂质e分离度小于1.5，以上杂质均不能有效分离，分离度无法满足大于1.5的要求。国家征求意见搞中有药品盐酸帕洛诺司琼，其有关物质方法中，杂质c和杂质d完全重合，不能有效分离。
[0006]
目前还没有一种能同时分离盐酸帕洛诺司琼中杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体的分离、检测方法。


技术实现要素：

[0007]
有鉴于此，本发明目的在于提供一种同时分离盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法，所述杂质为异构体和工艺杂质，该方法最多可以同时分离、测定分离盐酸帕洛诺司琼及其3种异构体杂质及1种工艺杂质，专属性好，且有优良的分离性能和耐久性，拖尾因子和理论踏板数均能达到非常好的效果。
[0008]
所述杂质为杂质c、杂质d、杂质e、杂质f中一种或多种，其中，盐酸帕洛诺司琼与杂质f互为对映异构体，杂质c和杂质d互为对映异构体，与盐酸帕洛诺司琼互为非对映异构体，盐酸帕洛诺司琼与杂质c、杂质d、对映异构体均为异构体，所述质c、杂质d、杂质e、杂质f的结构式如下所示：
[0009]
所述方法包括：采用以表面涂敷直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈、正丁醇和二乙胺的混合溶液为流动相进行洗脱分离。
[0010]
优选地，在某些具体实施例中，选择chiralpak ad-h色谱柱，其规格为250
×
4.6mm，5μm。
[0011]
具体地，对此规格的chiralpak ad-h分析柱，最佳的流动相流速范围为0.6-1.0ml/min，在高流速下(1.5-3.0ml/min)由于溶质传递效应引起的峰扩散会导致降低柱效和分离度。
[0012]
更优选地，所述流动相的流速为0.8ml/min。
[0013]
优选地，所述二乙胺的浓度为0.01mol/l-0.03mol/l。
[0014]
优选地，所述流动相中，所述乙腈、正丁醇和二乙胺的体积比为85：15：0.1-95：5：0.1。
[0015]
更优选地，所述流动相中，所述乙腈、正丁醇和二乙胺的体积比为90：10：0.1。
[0016]
优选地，所述色谱柱的温度设置为30-40℃。
[0017]
具体地，溶质对表面涂敷直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶的结合
常数受温度的影响很大，在低温下结合常数增大，但溶质传递会变差，所以降低柱温可使辛基硅烷键合硅胶键合相的选择性增大，同时也可能会使分离度降低，但增加柱温对强保留的溶质的分离会有所改善，所以经过试验验证，色谱柱柱箱温度范围选择为30-40℃。
[0018]
优选地，所述色谱柱的温度设置为35℃。
[0019]
优选地，进样样品使用乙腈、正丁醇和二乙胺的混合溶液，所述所述乙腈、正丁醇和二乙胺的体积比为85：15：0.1-95：5：0.1，更优选为90：10：0.1。
[0020]
本发明目的进一步在前述同时分离盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法的基础上，提供提供检测盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法，包括：(1)使用权利要求1-7任一所述的方法对盐酸帕洛诺司琼及其杂质进行分离；(2)进入检测器进行检测。
[0021]
优选地，所述检测器的波长为230-240nm，更优选为235nm。
[0022]
进一步，检测结束后，根据检测的峰面积计算盐酸帕洛诺司琼及其杂质的含量。
[0023]
进一步，所述检测器在某些检测环境中可替换为质谱等检测仪器，实现色谱和质谱联用。
[0024]
在某些具体实施例中，同时分离、检测盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法包括以下步骤：
[0025]
(1)分别取盐酸帕洛诺司琼、杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和杂质f(对映异构体)的对照品，用稀释剂溶解制成待测样品及杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和杂质f(对映异构体)的对照品溶液，分别取待测样品盐酸帕洛诺司琼及杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和杂质f(对映异构体)的对照品溶液进样，进行高效液相色谱分析，确定盐酸帕洛诺司琼及杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和杂质f(对映异构体)的保留时间；
[0026]
(2)取盐酸帕洛诺司琼供试样品加稀释剂(乙腈、正丁醇和二乙胺比例为90：10：0.1混合)制成供试品溶液，再取稀释剂作为空白溶液，分别取供试品溶液及空白溶液进样，进行高效液相色谱分析，记录色谱图，完成盐酸帕洛诺司琼中杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体的分离测定。
[0027]
在某些具体实施例中，具体步骤如下：
[0028]
(1)取盐酸帕洛诺司琼适量，用稀释剂(乙腈：正丁醇：二乙胺＝90：10：0.1)溶解样品，配制成每1ml含盐酸帕洛诺司琼1.5-2.5mg的样品溶液；
[0029]
(2)选用型号为岛津lc-20at的色谱仪，色谱柱型号为chiralpak ad-h，(250
×
4.6mm，5μm)，流动相乙腈：正丁醇：二乙胺的比例为90：10：0.1，取步骤(1)的样品溶液10μl注入液相色谱仪中，设置流动相流速为0.8ml/min，检测波长为235nm，色谱柱柱箱温度为35℃，完成盐酸帕洛诺司琼中杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和杂质f(对映异构体)的分离及测定。本发明有益效果在于
[0030]
(1)本发明提供的同时分离盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法，所述杂质为异构体和工艺杂质，该方法最多可以在30分钟内同时分离、测定分离盐酸帕洛诺司琼及其3种异构体杂质(杂质c、d、f)及1种工艺杂质(杂质e)，专属性好，灵敏度高，重现性好，且有优良的分离性能和耐久性，拖尾因子和理论踏板数均能达到非常好的效果。
[0031]
(2)本发明提供的同时分离盐酸帕洛诺司琼及其杂质的方法以表面涂敷直链淀粉-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)的硅胶为填料，该填料经久耐用、环保、毒性小且能快速分离盐酸帕洛诺司琼及杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体的分析方法，对于药物分析人员健康及其产品的质量控制研究都是十分有意义的工作。
附图说明
[0032]
图1为空白溶剂的高效液相色谱图。
[0033]
图2为对映异构体定位溶液高效液相色谱图。
[0034]
图3为杂质d定位溶液高效液相色谱图。
[0035]
图4为杂质c定位溶液高效液相色谱图。
[0036]
图5为杂质e定位溶液高效液相色谱图。
[0037]
图6为供试品溶液高效液相色谱图。
[0038]
图7为混合溶液(盐酸帕洛诺司琼及其杂质c、杂质d、杂质e和杂质f(对映异构体)混合溶液)高效液相色谱图。
[0039]
图8为定量限高效色谱图。
[0040]
图9为检测限高效色谱图。
具体实施方式
[0041]
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
[0042]
本发明实施例中，采用的仪器及色谱条件如下：高效液相色谱仪：岛津lc-20at；色谱柱：chiralpak ad-h，(250
×
4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：正丁醇：二乙胺＝90：10：0.1；检测器检测波长：235nm；流动相流速：0.8ml/min；色谱柱柱箱柱温：35℃；进样量：10μl；稀释剂(乙腈：正丁醇：二乙胺＝90：10：0.1)。
[0043]
本发明实施例中，杂质c定位溶液的配制为：精密称取杂质c 49.33mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质c贮备液；精密移取上述溶液0.5ml，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0044]
本发明实施例中，杂质d定位溶液的配制为：精密称取杂质d 50.02mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质d贮备液；精密移取上述溶液0.5ml，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0045]
本发明实施例中，杂质e定位溶液的配制为：精密称取杂质e 50.43mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质e贮备液；精密移取上述溶液0.5ml，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0046]
本发明实施例中，对映异构体定位溶液的配制为：精密称取对映异构体50.10mg，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得杂质对映异构体贮备液；精密移取上述溶液0.5ml，置50ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0047]
本发明实施例中，供试品溶液的配制为：精密称取供试品51.08mg，置25ml量瓶中，
加稀释剂使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0048]
本发明实施例中，混合溶液的配制为：精密称取供试品100.68mg，置50ml量瓶中，精密移取上述杂质c、杂质d、杂质e和对映异构体贮备液各0.5ml，置上述同一50ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
[0049]
本发明实施例中，定量限溶液的配制为：精密称取供试品和杂质c照品，配成一定浓度的溶液，并逐级稀释得定量限溶液。
[0050]
本发明实施例中，检测限溶液的配制为：精密移取定量限溶液7.0ml，置20ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得检测限溶液。
[0051]
本发明实施例中，定量限和检测限的计算公式为：本发明实施例中，定量限和检测限的计算公式为：
[0052]
实施例1分离测定盐酸帕洛诺司琼及杂质c(非对映异构体)、杂质d(非对映异构体)、杂质e(工艺杂质)和对映异构体
[0053]
分别取空白溶剂(稀释剂)、各杂质定位溶液、供试品溶液、混合溶液各10μl，依法进样，记录色谱图，其中，空白溶剂的色谱如图1所示，对映异构体定位溶液的色谱如图2所示，杂质d定位溶液的色谱如图3所示，杂质c定位溶液的色谱如图4所示，杂质e定位溶液的色谱如图5所示，供试品溶液的色谱如图6所示，混合溶液的色谱如图7所示。
[0054]
各组分测定结果列表如下表2。表2专属性试验测定结果
[0055]
结论：空白稀释剂不干扰样品测定；盐酸帕洛诺司琼峰与杂质c峰分离度为2.51，大于1.5，杂质c与杂质d峰分离度为2.91，分离度大于1.5，各已知杂质与盐酸帕洛诺司琼峰间分离度均大于1.5，分离良好，专属性强。
[0056]
实施例2色谱系统对杂质c(非对映异构体)和盐酸帕洛诺司琼的检测限、定量限测试
[0057]
(1)定量限测试
[0058]
取定量限溶液连续进样3次，计算主峰峰高与噪声的比值(信噪比)。记录色谱图。其中一次进样的色谱图如图8所示，试验结果如下表3所示。表3定量限测定结果
[0059]
(2)检测限测试
[0060]
取检测限溶液连续进样3次，计算主峰峰高与噪声的比值(信噪比)，记录色谱图，其中一次进样的图谱如图9所示，试验结果如下表4所示。表4检测限测定结果
[0061]
结论：从上表3和表4试验数据可知，本色谱系统下，杂质c的检测限、定量限分别符合s/n＝3(10)：1的要求。
[0062]
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较
佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。