一种人精子形态学染色试剂及染色方法与流程

1.本发明涉及人类精子检测领域，具体来说是一种人精子形态学染色试剂及染色方法。


背景技术：

2.本发明应用于医疗行业，适用于现在辅助生殖技术，可用于对精子染色，进而进行精子的形态学检测，精子的形态学检测是评估精子功能和男子生育力的重要指标，且随着男性学的发展而日益受到临床的重视。
3.现有的精子染色法，诸如改良巴氏染色方法、papanicolaou染色法等配方组成复杂，操作时间长；diff-quik法，它原是一种用于白细胞分类检测的常规快速染色法，操作简便快速，但其原料价格昂贵，难以购买。
4.申请公布号为cn103558200a的中国发明专利中公开了“使用灭菌天然海水分别配制4～6g/l伊红生物染色液和90～100g/l的苯胺黑的生物染色液，然后等体积混合得到混合染色液，将混合染色液和化学处理后精子悬液按照体积比例为1～2ul：8～9ul混匀并置于载玻片上，于光学显微镜下观察，根据活精子不着色、死精子呈紫红色，记录200个精子着色情况，计算得出精子成活率。”虽然本发明与对比文件所用染色液相同，但是本发明与对比文件领域不同，染色时间更快速，操作更简洁方便。对比文件需要对精子悬浊液进行化学处理，本发明不需要对人精子悬浊液处理，直接将染色液与精子悬浊液等体积混合即可完成染色。克服了对比文件操作繁琐的缺陷。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种染色迅速、操作快捷方便地对人精子染色的染色液及染色方式。
6.为了实现上述目的，设计一种人精子形态学染色试剂，染色液svs包括：0.1-1m的氯化钠溶液，20-100mm的伊红溶液，100-200g/l的苯胺黑溶液，0.01-1％的甲醛溶液，1m的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节ph值位于7.3-9.5。
7.一种采用上述人精子染色剂的染色方法，具体步骤如下：
8.(1)取等量的精子染色液和精子标本于试管内混合均匀，在室温下保持15-30秒；
9.(2)取20μl步骤s1中配置的混合液滴在标记了的显微镜载玻片上；
10.(3)将载玻片自然风干，用油滴覆盖，在明亮的区域使用显微镜进行观察。
11.优选地，步骤(3)中，使用显微镜的物镜为40x或100x。
12.本发明同现有技术相比，其优点在于：本发明为一步法，简洁高效，仅一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30～60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。
具体实施方式
13.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
14.实施例：
15.1.本产品需要与光学显微镜(40-100x倍率)配合使用。
16.2.使用前摇晃瓶身。
17.3.取等量的精子染色液和精子标本，50μl svs染色剂和50μl精子标本，使用艾本德试管混合均匀。
18.4.在室温下保持15-30秒。
19.5.准备载玻片。
20.6.用移液管将20μl的液滴滴在标记了的显微镜载玻片上，用液滴在载玻片中间画一条线。
21.7.用另一个显微镜载玻片盖住这个载玻片，当液滴均匀分散在两个载玻片中间时，将两个载玻片水平拉开，就有了两块制作好的载玻片。
22.8.将两个载玻片自然风干并且测试。也可以使用dpx或其他等效的固封剂与盖玻片，将载玻片堆叠起来，储存起来为后续的测试使用。
23.9.用油滴覆盖后，在明亮的区域使用40x的物镜或100x的物镜进行观察。
24.10.以200个精子数量为参考，白色的(未染色的)精子为活性的，红色或粉色的是死细胞，只有颈部染色的精子算是活精子。
25.只需一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30～60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。
26.以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。


技术特征：
1.一种人精子形态学染色试剂，其特征在于，人精子染色液svs包括：0.1-1m的氯化钠溶液，20-100mm的伊红溶液，100-200g/l的苯胺黑溶液，0.01-1%的甲醛溶液，1m的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节ph值位于7.3-9.5。2.一种采用如权利要求1所述人精子染色剂的染色方法，其特征在于，具体步骤如下：s1. 取等量的精子染色液和精子标本于试管内混合均匀，在室温下保持15-30秒；s2. 取20
µ
l步骤 s1中配置的混合液滴在标记了的显微镜载玻片上；s3. 将载玻片自然风干，用油滴覆盖，在明亮的区域使用显微镜进行观察。3.根据如权利要求2所述人精子染色剂的染色方法，其特征在于，步骤s3中，使用显微镜的物镜为40x或100x。

技术总结
本发明涉及人类精子检测领域，具体来说是一种人精子形态学染色试剂及染色方法，人精子染色液SVS包括：0.1-1M的氯化钠溶液，20-100mM的伊红溶液，100-200g/L的苯胺黑溶液，0.01-1%的甲醛溶液，1M的氢氧化钠溶液、盐酸溶液调节pH值位于7.3-9.5。本发明为一步法，简洁高效，仅一瓶试剂即可满足所有染色需求，仅需30~60秒即可完成染色，待风干后在显微镜下进行人精子染色剂精子形态学的观察，操作简单，耗时短。耗时短。


技术研发人员：张献新 安淑英 吴迪 朱德新
受保护的技术使用者：力因精准医疗产品（上海）有限公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/4/8