重组人唾液酸酶、唾液酸酶融合蛋白及其使用方法与流程

技术特征：
1.一种重组突变人唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含：(a)在对应于野生型人类neu2的第5位的位置处脯氨酸残基(p5)的替换；(b)在对应于野生型人类neu2的第9位的位置处赖氨酸残基(k9)的替换；(c)在对应于野生型人类neu2的第44位的位置处赖氨酸残基(k44)的替换；(d)在对应于野生型人类neu2的第45位的位置处赖氨酸残基(k45)的替换；(e)在对应于野生型人类neu2的第54位的位置处亮氨酸残基(l54)的替换；(f)在对应于野生型人类neu2的第62位的位置处脯氨酸残基(p62)的替换；(g)在对应于野生型人类neu2的第69位的位置处谷氨酰胺残基(q69)的替换；(h)在对应于野生型人类neu2的第78位的位置处精氨酸残基(r78)的替换；(i)在对应于野生型人类neu2的第80位的位置处天冬氨酸残基(d80)的替换；(j)在对应于野生型人类neu2的第93位的位置处丙氨酸残基(a93)的替换；(k)在对应于野生型人类neu2的第107位的位置处甘氨酸残基(g107)的替换；(l)在对应于野生型人类neu2的第108位的位置处谷氨酰胺残基(q108)的替换；(m)在对应于野生型人类neu2的第112位的位置处谷氨酰胺残基(q112)的替换；(n)在对应于野生型人类neu2的第125位的位置处半胱氨酸残基(c125)的替换；(o)在对应于野生型人类neu2的第126位的位置处谷氨酰胺残基(q126)的替换；(p)在对应于野生型人类neu2的第150位的位置处丙氨酸残基(a150)的替换；(q)在对应于野生型人类neu2的第164位的位置处半胱氨酸残基(c164)的替换；(r)在对应于野生型人类neu2的第170位的位置处精氨酸残基(r170)的替换；(s)在对应于野生型人类neu2的第171位的位置处丙氨酸残基(a171)的替换；(t)在对应于野生型人类neu2的第188位的位置处谷氨酰胺残基(q188)的替换；(u)在对应于野生型人类neu2的第189位的位置处精氨酸残基(r189)的替换；(v)在对应于野生型人类neu2的第213位的位置处丙氨酸残基(a213)的替换；(w)在对应于野生型人类neu2的第217位的位置处亮氨酸残基(l217)的替换；(x)在对应于野生型人类neu2的第225位的位置处谷氨酸残基(e225)的替换；(y)在对应于野生型人类neu2的第239位的位置处组氨酸残基(h239)的替换；(z)在对应于野生型人类neu2的第240位的位置处亮氨酸残基(l240)的替换；(aa)在对应于野生型人类neu2的第241位的位置处精氨酸残基(r241)的替换；(bb)在对应于野生型人类neu2的第242位的位置处丙氨酸残基(a242)的替换；(cc)在对应于野生型人类neu2的第244位的位置处缬氨酸残基(v244)的替换；(dd)在对应于野生型人类neu2的第249位的位置处苏氨酸残基(t249)的替换；(ee)在对应于野生型人类neu2的第251位的位置处天冬氨酸残基(d251)的替换；(ff)在对应于野生型人类neu2的第257位的位置处谷氨酸残基(e257)的替换；(gg)在对应于野生型人类neu2的第258位的位置处丝氨酸残基(s258)的替换；(hh)在对应于野生型人类neu2的第260位的位置处亮氨酸残基(l260)的替换；(ii)在对应于野生型人类neu2的第265位的位置处缬氨酸残基(v265)的替换；(jj)在对应于野生型人类neu2的第270位的位置处谷氨酰胺残基(q270)的替换；(kk)在对应于野生型人类neu2的第292位的位置处色氨酸残基(w292)的替换；(ll)在对应于野生型人类neu2的第301位的位置处丝氨酸残基(s301)的替换；
(mm)在对应于野生型人类neu2的第302位的位置处色氨酸残基(w302)的替换；(nn)在对应于野生型人类neu2的第363位的位置处缬氨酸残基(v363)的替换；或(oo)在对应于野生型人类neu2的第365位的位置处亮氨酸残基(l365)的替换；或任何上述替换的组合。2.权利要求1所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含：(a)在对应于野生型人类neu2的第5位的位置处脯氨酸残基(p5)的替换；(b)在对应于野生型人类neu2的第9位的位置处赖氨酸残基(k9)的替换；(c)在对应于野生型人类neu2的第44位的位置处赖氨酸残基(k44)的替换；(d)在对应于野生型人类neu2的第45位的位置处赖氨酸残基(k45)的替换；(e)在对应于野生型人类neu2的第54位的位置处亮氨酸残基(l54)的替换；(f)在对应于野生型人类neu2的第62位的位置处脯氨酸残基(p62)的替换；(g)在对应于野生型人类neu2的第69位的位置处谷氨酰胺残基(q69)的替换；(h)在对应于野生型人类neu2的第78位的位置处精氨酸残基(r78)的替换；(i)在对应于野生型人类neu2的第93位的位置处丙氨酸残基(a93)的替换；(j)在对应于野生型人类neu2的第107位的位置处甘氨酸残基(g107)的替换；(k)在对应于野生型人类neu2的第108位的位置处谷氨酰胺残基(q108)的替换；(l)在对应于野生型人类neu2的第112位的位置处谷氨酰胺残基(q112)的替换；(m)在对应于野生型人类neu2的第125位的位置处半胱氨酸残基(c125)的替换；(n)在对应于野生型人类neu2的第126位的位置处谷氨酰胺残基(q126)的替换；(o)在对应于野生型人类neu2的第150位的位置处丙氨酸残基(a150)的替换；(p)在对应于野生型人类neu2的第164位的位置处半胱氨酸残基(c164)的替换；(q)在对应于野生型人类neu2的第171位的位置处丙氨酸残基(a171)的替换；(r)在对应于野生型人类neu2的第217位的位置处亮氨酸残基(l217)的替换；(s)在对应于野生型人类neu2的第249位的位置处苏氨酸残基(t249)的替换；(t)在对应于野生型人类neu2的第251位的位置处天冬氨酸残基(d251)的替换；(u)在对应于野生型人类neu2的第270位的位置处谷氨酰胺残基(q270)的替换；(v)在对应于野生型人类neu2的第292位的位置处色氨酸残基(w292)的替换；(w)在对应于野生型人类neu2的第301位的位置处丝氨酸残基(s301)的替换；(x)在对应于野生型人类neu2的第302位的位置处色氨酸残基(w302)的替换；(y)在对应于野生型人类neu2的第363位的位置处缬氨酸残基(v363)的替换；或(z)在对应于野生型人类neu2的第365位的位置处亮氨酸残基(l365)的替换；或任何上述替换的组合。3.权利要求1或2所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含k9、p62、a93、q216、a242、q270、s301、w302、v363或l365的替换或任何上述替换的组合。4.权利要求1-3中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含k9、p62、a93、q270、s301、w302、v363或l365的替换或任何上述替换的组合。5.权利要求1-4中的任一项所述的唾液酸酶，其中在所述唾液酸酶中：(a)对应于野生型人类neu2的第5位的位置处的脯氨酸残基被组氨酸替换(p5h)；(b)对应于野生型人类neu2的第9位的位置处的赖氨酸残基被天冬氨酸替换(k9d)；
(c)对应于野生型人类neu2的第44位的位置处的赖氨酸残基被精氨酸(k44r)或谷氨酸(k44e)替换；(d)对应于野生型人类neu2的第45位的位置处的赖氨酸残基被丙氨酸(k45a)、精氨酸(k45r)或谷氨酸(k45e)替换；(e)对应于野生型人类neu2的第54位的位置处的亮氨酸残基被甲硫氨酸替换(l54m)；(f)对应于野生型人类neu2的第62位的位置处的脯氨酸残基被天冬酰胺(p62n)、天冬氨酸(p62d)、组氨酸(p62h)、谷氨酸(p62e)、甘氨酸(p62g)、丝氨酸(p62s)或苏氨酸(p62t)替换；(g)对应于野生型人类neu2的第69位的位置处的谷氨酰胺残基被组氨酸替换(q69h)；(h)对应于野生型人类neu2的第78位的位置处的精氨酸残基被赖氨酸替换(r78k)；(i)对应于野生型人类neu2的第80位的位置处的天冬氨酸残基被脯氨酸替换(d80p)；(j)对应于野生型人类neu2的第93位的位置处的丙氨酸残基被谷氨酸(a93e)或赖氨酸(a93k)替换；(k)对应于野生型人类neu2的第107位的位置处的甘氨酸残基被天冬氨酸替换(g107d)；(l)对应于野生型人类neu2的第108位的位置处的谷氨酰胺残基被组氨酸替换(q108h)；(m)对应于野生型人类neu2的第112位的位置处的谷氨酰胺残基被精氨酸(q112r)或赖氨酸(q112k)替换；(n)对应于野生型人类neu2的第125位的位置处的半胱氨酸残基被亮氨酸替换(c125l)；(o)对应于野生型人类neu2的第126位的位置处的谷氨酰胺残基被亮氨酸(q126l)、谷氨酸(q126e)、苯丙氨酸(q126f)、组氨酸(q126h)、异亮氨酸(q126i)或酪氨酸(q126y)替换；(p)对应于野生型人类neu2的第150位的位置处的丙氨酸残基被缬氨酸替换(a150v)；(q)对应于野生型人类neu2的第164位的位置处的半胱氨酸残基被甘氨酸替换(c164g)；(r)对应于野生型人类neu2的第170位的位置处的精氨酸残基被脯氨酸替换(r170p)；(s)对应于野生型人类neu2的第171位的位置处的丙氨酸残基被甘氨酸替换(a171g)；(t)对应于野生型人类neu2的第188位的位置处的谷氨酰胺残基被脯氨酸替换(q188p)；(u)对应于野生型人类neu2的第189位的位置处的精氨酸残基被脯氨酸替换(r189p)；(v)对应于野生型人类neu2的第213位的位置处的丙氨酸残基被半胱氨酸(a213c)、天冬酰胺(a213n)、丝氨酸(a213s)或苏氨酸(a213t)替换；(w)对应于野生型人类neu2的第217位的位置处的亮氨酸残基被丙氨酸(l217a)或缬氨酸(l217v)替换；(x)对应于野生型人类neu2的第249位的位置处的苏氨酸残基被丙氨酸替换(t249a)；(y)对应于野生型人类neu2的第251位的位置处的天冬氨酸残基被甘氨酸替换(d251g)；(z)对应于野生型人类neu2的第225位的位置处的谷氨酸残基被脯氨酸替换(e225p)；
(aa)对应于野生型人类neu2的第239位的位置处的组氨酸残基被脯氨酸替换(h239p)；(bb)对应于野生型人类neu2的第240位的位置处的亮氨酸残基被天冬氨酸(l240d)、天冬酰胺(l240n)或酪氨酸(l240y)替换；(cc)对应于野生型人类neu2的第241位的位置处的精氨酸残基被丙氨酸(r241a)、天冬氨酸(r241d)、亮氨酸(r241l)、谷氨酰胺(r241q)或酪氨酸(r241y)替换；(dd)对应于野生型人类neu2的第242位的位置处的丙氨酸残基被半胱氨酸(a242c)、苯丙氨酸(a242f)、甘氨酸(a242g)、组氨酸(a242h)、异亮氨酸(a242i)、赖氨酸(a242k)、亮氨酸(a242l)、甲硫氨酸(a242m)、天冬酰胺(a242n)、谷氨酰胺(a242q)、精氨酸(a242r)、丝氨酸(a242s)、缬氨酸(a242v)、色氨酸(a242w)或酪氨酸(a242y)替换；(ee)对应于野生型人类neu2的第244位的位置处的缬氨酸残基被异亮氨酸(v244i)或脯氨酸(v244p)替换；(ff)对应于野生型人类neu2的第257位的位置处的谷氨酸残基被脯氨酸替换(e257p)；(gg)对应于野生型人类neu2的第258位的位置处的丝氨酸残基被半胱氨酸替换(s258c)；(hh)对应于野生型人类neu2的第260位的位置处的亮氨酸残基被天冬氨酸(l260d)、苯丙氨酸(l260f)、谷氨酰胺(l260q)或苏氨酸(l260t)替换；(ii)对应于野生型人类neu2的第265位的位置处的缬氨酸残基被苯丙氨酸替换(v265f)；(jj)对应于野生型人类neu2的第270位的位置处的谷氨酰胺残基被丙氨酸(q270a)、组氨酸(q270h)、苯丙氨酸(q270f)、脯氨酸(q270p)、丝氨酸(q270s)或苏氨酸(q270t)替换；(kk)对应于野生型人类neu2的第292位的位置处的色氨酸残基被精氨酸替换(w292r)；(ll)对应于野生型人类neu2的第301位的位置处的丝氨酸残基被丙氨酸(s301a)、天冬氨酸(s301d)、谷氨酸(s301e)、苯丙氨酸(s301f)、组氨酸(s301h)、赖氨酸(s301k)、亮氨酸(s301l)、甲硫氨酸(s301m)、天冬酰胺(s301n)、脯氨酸(s301p)、谷氨酰胺(s301q)、精氨酸(s301r)、苏氨酸(s301t)、缬氨酸(s301v)、色氨酸(s301w)或酪氨酸(s301y)替换；(mm)对应于野生型人类neu2的第302位的位置处的色氨酸残基被丙氨酸(w302a)、天冬氨酸(w302d)、苯丙氨酸(w302f)、甘氨酸(w302g)、组氨酸(w302h)、异亮氨酸(w302i)、赖氨酸(w302k)、亮氨酸(w302l)、甲硫氨酸(w302m)、天冬酰胺(w302n)、脯氨酸(w302p)、谷氨酰胺(w302q)、精氨酸(w302r)、丝氨酸(w302s)、苏氨酸(w302t)、缬氨酸(w302v)或酪氨酸(w302y)替换；(nn)对应于野生型人类neu2的第363位的位置处的缬氨酸残基被精氨酸替换(v363r)；或(oo)对应于野生型人类neu2的第365位的位置处的亮氨酸残基被谷氨酰胺(l365q)、组氨酸(l365h)、异亮氨酸(l365i)、赖氨酸(l365k)或丝氨酸(l365s)替换；或所述唾液酸酶包含任何上述替换的组合。6.权利要求1-5中的任一项所述的唾液酸酶，其中在所述唾液酸酶中：(a)对应于野生型人类neu2的第5位的位置处的脯氨酸残基被组氨酸替换(p5h)；(b)对应于野生型人类neu2的第9位的位置处的赖氨酸残基被天冬氨酸替换(k9d)；(c)对应于野生型人类neu2的第44位的位置处的赖氨酸残基被精氨酸(k44r)或谷氨酸
(k44e)替换；(d)对应于野生型人类neu2的第45位的位置处的赖氨酸残基被丙氨酸(k45a)、精氨酸(k45r)或谷氨酸(k45e)替换；(e)对应于野生型人类neu2的第54位的位置处的亮氨酸残基被甲硫氨酸替换(l54m)；(f)对应于野生型人类neu2的第62位的位置处的脯氨酸残基被天冬酰胺(p62n)、天冬氨酸(p62d)、组氨酸(p62h)、谷氨酸(p62e)、甘氨酸(p62g)、丝氨酸(p62s)或苏氨酸(p62t)替换；(g)对应于野生型人类neu2的第69位的位置处的谷氨酰胺残基被组氨酸替换(q69h)；(h)对应于野生型人类neu2的第78位的位置处的精氨酸残基被赖氨酸替换(r78k)；(i)对应于野生型人类neu2的第93位的位置处的丙氨酸残基被谷氨酸(a93e)或赖氨酸(a93k)替换；(j)对应于野生型人类neu2的第107位的位置处的甘氨酸残基被天冬氨酸替换(g107d)；(k)对应于野生型人类neu2的第108位的位置处的谷氨酰胺残基被组氨酸替换(q108h)；(l)对应于野生型人类neu2的第112位的位置处的谷氨酰胺残基被精氨酸(q112r)或赖氨酸(q112k)替换；(m)对应于野生型人类neu2的第125位的位置处的半胱氨酸残基被亮氨酸替换(c125l)；(n)对应于野生型人类neu2的第126位的位置处的谷氨酰胺残基被亮氨酸替换(q126l)；(o)对应于野生型人类neu2的第150位的位置处的丙氨酸残基被缬氨酸替换(a150v)；(p)对应于野生型人类neu2的第164位的位置处的半胱氨酸残基被甘氨酸替换(c164g)；(q)对应于野生型人类neu2的第171位的位置处的丙氨酸残基被甘氨酸替换(a171g)；(r)对应于野生型人类neu2的第217位的位置处的亮氨酸残基被丙氨酸(l217a)或缬氨酸(l217v)替换；(s)对应于野生型人类neu2的第249位的位置处的苏氨酸残基被丙氨酸替换(t249a)；(t)对应于野生型人类neu2的第251位的位置处的天冬氨酸残基被甘氨酸替换(d251g)；(u)对应于野生型人类neu2的第270位的位置处的谷氨酰胺残基被丙氨酸(q270a)、组氨酸(q270h)、苯丙氨酸(q270f)或脯氨酸(q270p)替换；(v)对应于野生型人类neu2的第292位的位置处的色氨酸残基被精氨酸替换(w292r)；(w)对应于野生型人类neu2的第301位的位置处的丝氨酸残基被精氨酸替换(s301r)；(x)对应于野生型人类neu2的第302位的位置处的色氨酸残基被赖氨酸替换(w302k)；(y)对应于野生型人类neu2的第363位的位置处的缬氨酸残基被精氨酸替换(v363r)；或(z)对应于野生型人类neu2的第365位的位置处的亮氨酸残基被谷氨酰胺(l365q)、组氨酸(l365h)、异亮氨酸(l365i)、赖氨酸(l365k)或丝氨酸(l365s)替换；
或所述唾液酸酶包含任何上述替换的组合。7.权利要求1-6中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含选自k9d、p62g、p62n、p62s、p62t、a93e、q126y、a242f、a242w、a242y、q270a、q270t、s301a、s301r、w302k、w302r、v363r和l365i的替换或任何上述替换的组合。8.权利要求1-7中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含选自k9d、p62g、p62n、p62s、p62t、a93e、q270a、s301r、w302k、v363r和l365i替换的替换或任何上述替换的组合。9.权利要求1-8中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶还包含：(a)对应于野生型人类neu2的第1位的位置处的甲硫氨酸残基(m1)的替换或缺失；(b)对应于野生型人类neu2的第6位的位置处的缬氨酸残基(v6)的替换；(c)对应于野生型人类neu2的第187位的位置处的异亮氨酸残基(i187)的替换；或(d)对应于野生型人类neu2的第332位的位置处的半胱氨酸残基(c332)的替换；或任何上述替换的组合。10.权利要求9所述的唾液酸酶，其中在所述唾液酸酶中：(a)所述对应于野生型人类neu2的第1位的位置处的甲硫氨酸残基被缺失(δm1)、被丙氨酸替换(m1a)或被天冬氨酸替换(m1d)；(b)所述对应于野生型人类neu2的第6位的位置处的缬氨酸残基被酪氨酸替换(v6y)；(c)所述对应于野生型人类neu2的第187位的位置处的异亮氨酸残基被赖氨酸替换(i187k)；或(d)所述对应于野生型人类neu2的第332位的位置处的半胱氨酸残基被丙氨酸替换(c332a)；或者所述唾液酸酶包含任何上述替换的组合。11.权利要求10所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含：(a)m1d、v6y、p62g、a93e、i187k和c332a替换；(b)m1d、v6y、k9d、a93e、i187k、c332a、v363r和l365i替换；(c)m1d、v6y、p62n、i187k和c332a替换；(d)m1d、v6y、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；(e)m1d、v6y、p62s、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；(f)m1d、v6y、p62t、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；(g)m1d、v6y、p62n、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；(h)m1d、v6y、p62g、a93e、i187k、s301a、w302r和c332a替换；(i)m1d、v6y、p62g、a93e、q126y、i187k、q270t和c332a替换；(j)m1d、v6y、p62g、a93e、q126y、i187k和c332a替换；或(k)m1d、v6y、p62g、a93e、q126y、i187k、a242f、q270t和c332a替换。12.权利要求10所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含：(a)m1d、v6y、p62g、a93e、i187k和c332a替换；(b)m1d、v6y、k9d、a93e、i187k、c332a、v363r和l365i替换；(c)m1d、v6y、p62n、i187k和c332a替换；(d)m1d、v6y、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；
(e)m1d、v6y、p62s、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；(f)m1d、v6y、p62t、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换；或(g)m1d、v6y、p62n、i187k、q270a、s301r、w302k和c332a替换。13.权利要求1-12中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶选自neu1、neu2、neu3和neu4。14.权利要求13所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶是neu2。15.权利要求1-14中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶具有与相应的野生型唾液酸酶不同的底物特异性。16.权利要求15所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶可以切开α2,3、α2,6和/或α2,8键连接。17.权利要求15或16所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶可以切开α2,3和α2,8键连接。18.权利要求1-17中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含seq id nos：48-54、149、154、159或191中的任一者。19.权利要求1-17中的任一项所述的唾液酸酶，其中所述唾液酸酶包含seq id nos：48-54中的任一者。20.一种重组突变人唾液酸酶，其包含在表5-9、11-13或15-30中的任一者中阐述的突变或突变的组合，任选地还包含在表1-4中的任一者中阐述的突变或突变的组合。21.一种融合蛋白，其包含：(a)权利要求1-20中的任一项所述的重组突变人唾液酸酶；和(b)免疫球蛋白fc结构域和/或免疫球蛋白抗原结合结构域；其中所述唾液酸酶与所述免疫球蛋白fc结构域和/或免疫球蛋白抗原结合结构域通过肽键或氨基酸连接物相连。22.权利要求21所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含免疫球蛋白fc结构域。23.权利要求22所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白fc结构域源自于人类igg1、igg2、igg3、igg4、iga1、iga2、igd、ige或igm fc结构域。24.权利要求23所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白fc结构域源自于人类igg1、igg2、igg3或igg4 fc结构域。25.权利要求24所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白fc结构域源自于人类igg1 fc结构域。26.权利要求21-25中的任一项所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含免疫球蛋白抗原结合结构域。27.权利要求26所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白抗原结合结构域与第二免疫球蛋白抗原结合结构域结合，以产生抗原结合部位。28.权利要求26或27所述的融合蛋白，其中所述免疫球蛋白抗原结合结构域源自于选自曲妥珠单抗、达雷木单抗、吉伦妥昔单抗、奥法木单抗、阿维单抗和利妥昔单抗的抗体。29.一种抗体偶联物，其包含权利要求21-28中的任一项所述的融合蛋白。30.权利要求29所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含单个唾液酸酶。31.权利要求30所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含两个唾液酸酶。32.权利要求31所述的抗体偶联物，其中所述两个唾液酸酶是相同的。
33.权利要求29-32中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含单个抗原结合部位。34.权利要求29-33中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含两个抗原结合部位。35.权利要求34所述的抗体偶联物，其中所述两个抗原结合部位是相同的。36.权利要求29-35中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物具有约135kda至约165kda的分子量。37.权利要求29-35中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物具有约215kda至约245kda的分子量。38.权利要求29-37中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含：(a)包含免疫球蛋白轻链的第一多肽；(b)包含免疫球蛋白重链的第二多肽；和(c)包含免疫球蛋白fc结构域和唾液酸酶的第三多肽；其中所述第一和第二多肽被共价连接在一起，并且所述第二和第三多肽被连接在一起，并且其中所述第一多肽和第二多肽一起定义抗原结合部位。39.权利要求38所述的抗体偶联物，其中所述第三多肽以n-至c-端的方向包含所述唾液酸酶和免疫球蛋白fc结构域。40.权利要求29-37中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述融合蛋白包含：(a)包含第一免疫球蛋白轻链的第一多肽；(b)包含第一免疫球蛋白重链和第一唾液酸酶的第二多肽；(c)包含第二免疫球蛋白重链和第二唾液酸酶的第三多肽；和(d)包含第二免疫球蛋白轻链的第四多肽；其中所述第一和第二多肽被共价连接在一起，所述第三和第四多肽被共价连接在一起，并且所述第二和第三多肽被共价连接在一起，并且其中所述第一多肽和第二多肽一起定义第一抗原结合部位，并且所述第三多肽和第四多肽一起定义第二抗原结合部位。41.权利要求40所述的抗体偶联物，其中所述第二和第三多肽分别以n-至c-端的方向包含所述第一和第二免疫球蛋白重链和所述第一和第二唾液酸酶。42.权利要求29-37中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述融合蛋白包含：(a)包含第一唾液酸酶、第一免疫球蛋白fc结构域和第一单链可变片段(scfv)的第一多肽；和(b)包含第二唾液酸酶、第二免疫球蛋白fc结构域和第二单链可变片段(scfv)的第二多肽；其中所述第一和第二多肽被共价连接在一起，并且其中所述第一scfv定义第一抗原结合部位，并且所述第二scfv定义第二抗原结合部位。43.权利要求42所述的抗体偶联物，其中所述第一多肽以n-至c-端的方向包含所述第一唾液酸酶、第一免疫球蛋白fc结构域和第一scfv，并且所述第二多肽以n-至c-端的方向包含所述第二唾液酸酶、第二免疫球蛋白fc结构域和第二scfv。44.权利要求29-37中的任一项所述的抗体偶联物，其中所述抗体偶联物包含：(a)包含免疫球蛋白轻链的第一多肽；
(b)包含免疫球蛋白重链和单链可变片段(scfv)的第二多肽；和(c)包含免疫球蛋白fc结构域和唾液酸酶的第三多肽；其中所述第一和第二多肽被共价连接在一起，并且所述第二和第三多肽被共价连接在一起，并且其中所述免疫球蛋白轻链和免疫球蛋白重链一起定义第一抗原结合部位，并且所述scfv定义第二抗原结合部位。45.权利要求44所述的抗体偶联物，其中所述第二多肽以n-至c-端的方向包含所述免疫球蛋白重链和scfv，并且所述第三多肽以n-至c-端的方向包含所述唾液酸酶和免疫球蛋白fc结构域。46.一种分离的核酸，其包含编码权利要求1-20中的任一项所述的重组突变人唾液酸酶、权利要求21-28中的任一项所述的融合蛋白或权利要求29-45中的任一项所述的抗体偶联物的至少一部分的核苷酸序列。47.一种表达载体，其包含权利要求46所述的核酸。48.一种宿主细胞，其包含权利要求47所述的表达载体。49.一种药物组合物，其包含权利要求1-20中的任一项所述的重组突变人唾液酸酶、权利要求21-28中的任一项所述的融合蛋白或权利要求29-45中的任一项所述的抗体偶联物。50.一种在需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向所述受试者给药有效量的权利要求1-20中的任一项所述的重组突变人唾液酸酶、权利要求21-28中的任一项所述的融合蛋白、权利要求29-45中的任一项所述的抗体偶联物或权利要求49所述的药物组合物。51.权利要求50所述的方法，其中所述癌症是实体肿瘤、软组织肿瘤、造血系肿瘤或转移性病变。52.权利要求51所述的方法，其中所述实体肿瘤是肉瘤、腺癌或癌。53.权利要求51或52所述的方法，其中所述实体肿瘤是头颈部(例如咽)、甲状腺、肺(例如小细胞或非小细胞肺癌(nsclc))、乳腺、淋巴、胃肠道(例如口腔、食道、胃、肝、胰腺、小肠、结肠和直肠、肛管)、生殖或泌尿生殖道(例如肾、尿路上皮、膀胱、卵巢、子宫、宫颈、子宫内膜、前列腺、睾丸)、cns(例如神经或神经胶质细胞，例如神经母细胞瘤或神经胶质瘤)或皮肤(例如黑色素瘤)肿瘤。54.权利要求51所述的方法，其中所述造血系肿瘤是白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(all)、b-细胞、t-细胞或fab all、急性髓系白血病(aml)、慢性粒细胞性白血病(cml)、慢性淋巴细胞性白血病(cll)例如转移cll、弥漫性大b-细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤、毛细胞白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、淋巴瘤、霍奇金病、恶性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、多发性骨髓瘤或richter’s综合征(richter’s转化)。

技术总结
本发明总体涉及重组人唾液酸酶和重组唾液酸酶融合蛋白，其中所述唾液酸酶与野生型人唾液酸酶相比任选地含有一个或多个突变，例如至少一个氨基酸的替换、缺失或添加。本发明还提供了包含唾液酸酶和抗体或其部分的抗体偶联物。本发明还涉及使用所述唾液酸酶融合蛋白或抗体偶联物治疗癌症的方法。或抗体偶联物治疗癌症的方法。


技术研发人员：彭力 曹立志 桑迪普
受保护的技术使用者：帕利昂制药有限公司
技术研发日：2020.07.03
技术公布日：2022/3/29