一种构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料的制作方法

1.本发明属于饲料技术领域，具体涉及一种构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料。


背景技术：

2.非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，nafld)作为代谢综合征在肝脏的表现与肥胖、胰岛素抵抗、糖尿病、高脂血症等代谢异常具有密切的联系。近年来，随着人们生活方式的改变和饮食结构的西化，非酒精性脂肪肝的发病率呈不断上升的趋势。因此对非酒精性脂肪性肝病的研究是目前肝病的主要方向之一。
3.非酒精性脂肪性肝病的确切发病机制尚不完全清楚，也缺乏有效的治疗方法，动物模型是研究nafld发病机制以及新药开发的重要平台，因此有效构建非酒精性脂肪性肝病动物模型是确保肝病研究能够顺利开展的关键。


技术实现要素：

4.基于上述问题，本发明提供了一种用于构建非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的饲料，利用该饲料对小鼠进行喂养4周后，小鼠肝内出现轻轻度脂肪变性和局部炎症。利用该饲料对小鼠进行喂养6周后，小鼠肝内出现轻中度脂肪变性和脂肪空泡，接近人类非酒精性脂肪肝病理变化。
5.50kg本发明构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料中含有以下重量的原料：
6.混合氨基酸8.49kg
7.维生素0.50kg
8.矿物盐1.73kg
9.纤维素1.49kg
10.小苏打0.37kg
11.玉米油4.95kg
12.麦芽糊精2.48kg
13.玉米淀粉7.43kg
14.蔗糖22.56kg。
15.优选地，本发明为了提高饲料的造模效果，将上述饲料中的蛋氨酸和胆碱全部去除，并提高了脂肪的含量。
16.优选地，所述混合氨基酸由以下重量份的组成：
17.l-丙氨酸 174份
18.l-精氨酸 599份
19.l-天冬氨酸 297份
20.天冬酰胺 173份
21.l-半胱氨酸 43份
22.l-谷氨酸 1981份
23.甘氨酸 1154份
24.l-组氨酸 223份
25.l-异亮氨酸 406份
26.l-亮氨酸 550份
27.l-赖氨酸 892份
28.l-苯丙氨酸 371.5份
29.l-脯氨酸 173份
30.l-丝氨酸 173份
31.l-苏氨酸 406份
32.l-色氨酸 89份
33.l-酪氨酸 248份
34.l-缬氨酸 406份。
35.优选地，本发明所述维生素为ain-93g混合维生素。
36.优选地，本发明所述矿物盐为ain-93g混合矿物盐。
37.与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
38.利用本发明的饲料对小鼠进行喂养，实验小鼠能够在短时间内出现轻中度脂肪变性和局部炎症，接近人类非酒精性脂肪肝病理变化，即成功建立了小鼠脂肪肝动物模型。
附图说明
39.图1为小鼠喂养本发明饲料前的小鼠肝组织病理变化图(he染色，20x物镜)；
40.图2为利用本发明的饲料对小鼠进行喂养2周的小鼠肝组织病理变化图(he染色，20x物镜)。
41.图3为利用本发明的饲料对小鼠进行喂养4周的小鼠肝组织病理变化图(he染色，20x物镜)。
42.图4为利用本发明的饲料对小鼠进行喂养6周的小鼠肝组织病理变化图(he染色，20x物镜)。
43.图5为利用本发明的饲料对小鼠进行喂养10周的小鼠肝组织病理变化图(he染色，20x物镜)。
具体实施方式
44.下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
45.1.饲料配方成分：
46.本发明饲料配方成分：混合氨基酸8.49kg、93g维生素0.50kg、93g矿物盐1.73kg、纤维素1.49kg、小苏打0.37kg、玉米油4.95kg、麦芽糊精2.48kg、玉米淀粉7.43kg、蔗糖22.56kg、抗氧剂2g。
47.基础饲料为上述饲料配方基础上，额外添加0.3％蛋氨酸和0.2％酒石酸胆碱。
48.2.材料与方法
49.实验用c57bl/6j雄性小鼠购自于斯贝福(北京)生物技术有限公司，生产许可证号为scxk(京)2019-0010。
50.雄性小鼠12只，4周龄，体重16-18g，收到动物后，按照3只/笼随机分笼，之后用基础饲料进行了为期一周的适应性喂养，饲料喂养量为5克/只/天，正常饮水。一周以后进入正式实验期，改用本发明的饲料进行喂养。饲料喂养量为6克/只/天，正常饮水。
51.在喂养第0周、2周、4周、6周、10周后进行肝质量测定以及肝脏病理检查，如图1-图5所示。
52.从图1中可以看出，实验开始之前的小鼠，肝组织结构清晰，肝小叶结构清晰，肝血窦明显。肝细胞内未出现脂肪滴。
53.利用本发明的饲料对小鼠进行喂养2周后(如图2)，小鼠肝细胞索、肝窦结构模糊，有灶性肝细胞坏死，出现炎性细胞浸润和吞噬细胞结节。肝细胞颗粒变性为主，出现空泡变，肝细胞胞浆中仅有极少量细小的脂肪滴。利用本发明的饲料对小鼠进行喂养4周后(如图3)，小鼠肝细胞严重颗粒变性和轻度脂肪变性，部分肝细胞中出现许多大小不等的脂肪滴，其中少数肝细胞充满脂肪，镜下呈现较大的空泡。另见灶性肝细胞坏死和吞噬细胞结节，肝小叶内炎性细胞浸润；喂养6周(如图4)后小鼠肝细胞轻中度脂肪变性，部分肝细胞充满脂肪，形成大的空泡，另见弥散性肝细胞坏死和炎性细胞浸润。喂养10周(如图5)后小鼠肝细胞轻重度脂肪变性，肝细胞内充满脂肪滴，形成更大的脂肪空泡。上述肝组织病理学检查结果表明，利用本发明的饲料对小鼠进行喂养6周(42天)，小鼠肝内出现轻中度脂肪变性和局部炎症，接近人类非酒精性脂肪肝病理变化。
54.需要说明的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例，显然本发明不仅仅限于以上实施例，还可以有其他变形。本领域的技术人员从本发明公开内容直接导出或间接引申的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。


技术特征：
1.一种构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，其特征在于，每50kg饲料中含有以下重量的原料：混合氨基酸 8.49kg维生素 0.50kg矿物盐 1.73kg纤维素 1.49kg小苏打 0.37kg玉米油 4.95kg麦芽糊精 2.48kg玉米淀粉 7.43kg蔗糖 22.56kg。2.根据权利要求1所述构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，其特征在于，所述混合氨基酸中不含有蛋氨酸和胆碱。3.根据权利要求2所述构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，其特征在于，所述混合氨基酸是由以下重量份的组成：l-丙氨酸 174份l-精氨酸 599份l-天冬氨酸 297份天冬酰胺 173份l-半胱氨酸 43份l-谷氨酸 1981份甘氨酸 1154份l-组氨酸 223份l-异亮氨酸 406份l-亮氨酸 550份l-赖氨酸 892份l-苯丙氨酸 371.5份l-脯氨酸 173份l-丝氨酸 173份l-苏氨酸 406份l-色氨酸 89份l-酪氨酸 248份l-缬氨酸 406份。4.根据权利要求3所述构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，其特征在于，所述维生素为ain-93g混合维生素。5.根据权利要求3所述构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，其特征在于，所述矿物盐为ain-93g混合矿物盐。

技术总结
本发明公开了一种构建小鼠脂肪肝动物模型用饲料，本发明的饲料是利用混合氨基酸、维生素、矿物盐、纤维素、小苏打、玉米油、麦芽糊精、玉米淀粉以及蔗糖构成，本发明的饲料能够在较短时间使得小鼠出现轻度脂肪变性和局部炎症的情况，喂养6周即可构建典型的非酒精性脂肪肝动物模型。脂肪肝动物模型。脂肪肝动物模型。


技术研发人员：王玉培 苏华维 李晓轩
受保护的技术使用者：小黍有泰（北京）生物科技有限公司
技术研发日：2021.12.30
技术公布日：2022/3/25