一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用与流程

技术特征：
1.一种荔枝离体再生的方法，包括下述步骤：1)以荔枝花药为外植体，在愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导，得到胚性愈伤组织；2)将所述胚性愈伤组织在含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养，得到增殖愈伤组织；所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基包括愈伤组织增殖培养基和氨基酸复合液amo1；3)将步骤1)中所述胚性愈伤组织步骤2)中所述增殖愈伤组织在含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基中进行体胚诱导培养，得到体胚；所述含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基包括体胚诱导培养基和氨基酸复合液amo2；4)将所述体胚在成熟培养基中进行成熟培养，得到成熟体胚；5)将所述成熟体胚在萌发培养基中进行萌发培养，得到再生荔枝植株。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氨基酸复合液为含21种不同浓度的氨基酸，所述氨基酸为天冬氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、γ-氨基丁酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、胱氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和赖氨酸。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基中氨基酸复合液amo1的含量为1～15ml/l；所述含有所述氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基中氨基酸复合液amo2的含量为1～15ml/l。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基中，所述氨基酸复合液amo1由如下含量的氨基酸组成：所述天冬氨酸的含量为4～65mg/l；所述谷氨酸的含量为9.5～150mg/l；所述天冬酰胺的含量为2～45mg/l；所述丝氨酸的含量为4～75mg/l；所述谷氨酰胺的含量为20～330mg/l；所述甘氨酸的含量为1～25mg/l；所述组氨酸的含量为2～45mg/l；所述γ-氨基丁酸的含量为40～660mg/l；所述精氨酸的含量为25～400mg/l；所述苏氨酸的含量为3～55mg/l；所述丙氨酸的含量为25～405mg/l；所述脯氨酸的含量为10～225mg/l；所述酪氨酸的含量为2～35mg/l；所述缬氨酸的含量为5～85mg/l；所述甲硫氨酸的含量为0.5～15mg/l；所述胱氨酸的含量为1.5～30mg/l；
所述异亮氨酸的含量为5.5～90mg/l；所述亮氨酸的含量为10～170mg/l；所述苯丙氨酸的含量为6～100mg/l；所述色氨酸的含量为1～25mg/l；所述赖氨酸的含量为3～55mg/l；和/或，所述含有所述氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基中，所述氨基酸复合液amo2由如下含量的氨基酸组成：天冬氨酸的含量为3～50mg/l；所述谷氨酸的含量为6～105mg/l；所述天冬酰胺的含量为2～35mg/l；所述丝氨酸的含量为3～60mg/l；所述谷氨酰胺的含量为20～360mg/l；所述甘氨酸的含量为1～20mg/l；所述组氨酸的含量为3～60mg/l；所述γ-氨基丁酸的含量为40～670mg/l；所述精氨酸的含量为30～450mg/l；所述苏氨酸的含量为3～50mg/l；所述丙氨酸的含量为20～350mg/l；所述脯氨酸的含量为10～185mg/l；所述酪氨酸的含量为1.5～30mg/l；所述缬氨酸的含量为8～135mg/l；所述甲硫氨酸的含量为0.5～9mg/l；所述胱氨酸的含量为1～25mg/l；所述异亮氨酸的含量为4～65mg/l；所述亮氨酸的含量为10～215mg/l；所述苯丙氨酸的含量为5.5～85mg/l；所述色氨酸的含量为1.5～25mg/l；所述赖氨酸的含量为4.5～75mg/l。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养基包括2,4-d、6-ba和naa中的至少一种；所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基还包括2,4-d；所述含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基还包括zt、naa、肌醇、lh和椰汁中的至少一种；所述成熟培养基包括iaa、aba和椰汁中的至少一种；所述萌发培养基包括ga3。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养基中包括如下含量的组分中的至少一种：所述2,4-d的含量为0.5～3mg/l；所述6-ba的含量为0.1～1mg/l；所述naa的含量为0.1
～1mg/l；所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基中，所述2,4-d的含量为0.5～2mg/l；所述含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基中包括如下含量的组分中的至少一种：所述naa的含量为3～7mg/l；所述zt的含量为0.1～1mg/l；所述肌醇的含量为0.05～0.2g/l；所述lh的含量为0.3～0.5g/l；所述椰汁的含量为50～100ml/l；所述成熟培养基中包括如下含量的组分中的至少一种：所述iaa的含量为0.1～1mg/l；所述aba的含量为0.5～2mg/l；所述椰汁的含量为50～100ml/l；所述萌发培养基中，所述ga3的含量为0.5～2mg/l。7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：步骤1)中还包括将所述胚性愈伤组织进行继代保存培养的步骤；所述继代保存培养的方法包括如下步骤：将所述胚性愈伤组织在继代保存培养基i和继代保存培养基ii上交替培养，每隔20～35天继代一次；所述继代保存培养基i包括2,4-d，含量为0.5～2mg/l；所述继代保存培养基ii包括2,4-d、kt和agno3，所述2,4-d的含量为0.5～2mg/l，所述kt的含量为0.5～2mg/l，所述agno3的含量为3～7mg/l。8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述愈伤组织诱导培养条件为23～27℃暗培养45～60天；步骤2)中，所述愈伤组织继代培养条件为23-27℃暗培养20～35天；步骤3)中，所述体胚诱导培养条件为23-27℃暗培养30～45天；步骤4)中，所述成熟培养条件为23～27℃黑暗培养50～65天；步骤5)中，所述萌发培养条件为23～27℃光照培养30～40天，光照强度为2000～5000lux，光照时间为15～17小时/天；所述继代保存培养条件为23～27℃，暗培养；所述继代保存培养的次数为45～55次。9.用于荔枝离体再生的产品，其特征在于：包括选自权利要求1-8中任一所述的愈伤组织诱导培养基、权利要求1-8中任一所述的所述含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基、权利要求1-8中任一所述的所述含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基、权利要求1-8中任一所述的所述成熟培养基、权利要求1-8中任一所述的所述萌发培养基、权利要求7所述的所述继代保存培养基i和权利要求7所述的所述继代保存培养基ii中的至少一种。10.如下a1)-a4)任一种应用：a1)权利要求9所述的产品在荔枝离体再生培养中的应用；a2)权利要求9所述的产品在制备荔枝离体再生培养的产品中的应用；a3)权利要求1-8中任一所述的含有氨基酸复合液amo1的愈伤组织增殖培养基在提高荔枝愈伤组织增殖率中的应用；a4)权利要求1-8中任一所述的含有氨基酸复合液amo2的体胚诱导培养基在提高荔枝体胚诱导率中的应用。

技术总结
本发明公开了一种含氨基酸复合液用于荔枝离体再生的产品及方法与应用。本发明荔枝离体再生的方法，包括下述步骤：以荔枝花药为外植体，经愈伤组织诱导、增殖培养、体胚诱导培养、成熟培养萌发培养，得到再生荔枝植株；其中，增殖培养、体胚诱导培养分别采用含有氨基酸复合液AMO1的愈伤组织增殖培养基和含有氨基酸复合液AMO2的体胚诱导培养基。本发明提供荔枝离体再生的方法通过添加氨基酸复合液优化了愈伤组织增殖培养基和体胚诱导培养基的组分，特别是氨基酸种类及含量，从而优化体胚质量，提高愈伤组织增殖率、体胚诱导率，促进体胚萌发。胚萌发。


技术研发人员：王果 王家保 刘耀婷 李焕苓 王树军 李芳 高兆银
受保护的技术使用者：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
技术研发日：2021.11.12
技术公布日：2022/3/25