PIK3CA基因和BRAF基因突变多重检测引物探针及其试剂盒的制作方法

技术特征：
1.一种pik3ca基因和braf基因突变多重检测引物探针，其特征在于：包括检测pik3ca基因e545k突变的上游引物f-e545、下游引物r-e545、野生型探针wp-e545和突变型探针mp-e545k，检测pik3ca基因h1047r突变的上游引物f-h1047、下游引物r-h1047、野生型探针wp-h1047和突变型探针mp-h1047r，以及检测braf基因v600e突变的上游引物f-v600、下游引物r
‑ꢀ
v600、野生型探针wp
‑ꢀ
v600和突变型探针mp
‑ꢀ
v600e；所述上游引物f-e545的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述下游引物r-e545的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述野生型探针wp-e545的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述突变型探针mp-e545k的核苷酸序列如seq id no.4所示；所述上游引物f-h1047的核苷酸序列如seq id no.5所示，所述下游引物r-h1047的核苷酸序列如seq id no.6所示，所述野生型探针wp-h1047的核苷酸序列如seq id no.7所示，所述突变型探针mp-h1047r的核苷酸序列如seq id no.8所示；所述上游引物f-v600的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述下游引物r-v600的核苷酸序列如seq id no.10所示，所述野生型探针wp-v600的核苷酸序列如seq id no.11所示，所述突变型探针mp-v600e的核苷酸序列如seq id no.12所示。2.根据权利要求1所述的pik3ca基因和braf基因突变多重检测引物探针，其特征在于：所述突变型探针mp-e545k的使用浓度为50nm，所述突变型探针mp-h1047r的使用浓度为30nm，所述突变型探针mp-v600e的使用浓度为10nm。3.根据权利要求1所述的pik3ca基因和braf基因突变多重检测引物探针，其特征在于：所有引物的使用浓度为50nm。4.根据权利要求1所述的pik3ca基因和braf基因突变多重检测引物探针，其特征在于：所有野生型探针的使用浓度为20nm。5.根据权利要求1所述的pik3ca基因和braf基因突变多重检测引物探针，其特征在于：所有野生型探针和突变型探针为经过修饰的mgb探针，所有野生型探针的5’端为vic荧光基团修饰，所有突变型探针的5’端为fam荧光基团修饰，所有突变型探针的3’端为nfq基团修饰。6.一种采用如权利要求1所述的引物探针的pik3ca基因和braf基因突变多重检测试剂盒。7.根据权利要求6所述的pik3ca基因和braf基因突变多重检测试剂盒，其特征在于：还包括带有pik3ca基因e545k突变、h1047r突变与braf基因v600e突变的质粒。

技术总结
本发明涉及一种PIK3CA基因和BRAF基因突变多重检测引物探针及其试剂盒包括检测PIK3CA基因和BRAF基因20号外显子T790M突变的上游引物F-T790M、下游引物R-T790M、野生型探针WP-T790和突变型探针MP-T790M，检测PIK3CA基因和BRAF基因21号外显子L858R突变的上游引物F-L858R、下游引物R-L858R、野生型探针WP-L858和突变型探针MP-L858R，以及检测PIK3CA基因和BRAF基因19号外显子片段缺失突变的上游引物F-E19del、下游引物R-E19del、野生型探针WP-E19和突变型探针MP-E19del。本发明的PIK3CA基因和BRAF基因突变多重检测引物探针及其试剂盒快速高效，标准品的配制简单，检测体系的特异性与灵敏度高，游离DNA的利用率高，准确度高。准确度高。准确度高。


技术研发人员：洪专 潘文健
受保护的技术使用者：普瑞斯新（上海）生物医疗科技有限公司
技术研发日：2021.12.28
技术公布日：2022/3/22