一种硫酸酯酶的水溶性荧光探针及其合成方法和应用与流程

技术特征：
1.一种硫酸酯酶的水溶性荧光探针，其特征在于，所述的荧光探针的结构式如结构i所示：2.一种硫酸酯酶的水溶性荧光探针的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将4-溴-1，8-萘二甲酸酐(化合物1)和n-(2-氨基乙基)吗啉溶于乙醇中，90-95℃加热回流3.5-4.5小时，冷却至室温过滤后得到固体减压浓缩得到化合物(2)；(2)将化合物2、碳酸钾和2-2-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(t-buxphos)溶于n,n-二甲基甲酰胺和水(体积比(8-12)：1)的混合溶液中，加入醋酸钯；氮气保护下90-95℃加热回流搅拌15-17小时，冷却浓缩，浓缩后的粗品在乙醇和水(体积比(4-6):1)混合液中溶解过滤，得到化合物(3)；(3)将化合物3、氧化银和2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-d-吡喃葡萄糖溴化物溶于乙腈，氮气保护，混合物在80-85℃加热回流15-17小时，冷却至室温，混合物浓缩至固体，柱层析分离得到化合物(4)；(4)将化合物4和甲醇钠溶于甲醇，氮气保护，室温搅拌2-2.5小时，加入浓度2-2.5m的盐酸猝灭反应，调整ph至6.0-6.2，减压浓缩，制备型色谱分离得到最终产物，命名为mng。3.根据权利要求2所述硫酸酯酶的水溶性荧光探针的合成方法，其特征在于，所述步骤(1)中，4-溴-1，8-萘二甲酸酐(化合物1)和n-(2-氨基乙基)吗啉以摩尔比1：(2-2.5)；4-溴-1，8-萘二甲酸酐与乙醇的摩尔体积比为1:(2-3)mmol/ml；所述步骤(2)中，化合物2、碳酸钾和2-2-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(t-buxphos)以摩尔比1：(2-2.5)：(0.04-0.05)，化合物2与n,n-二甲基甲酰胺的摩尔体积比1:(1.5-2.5)mmol/ml；化合物2与醋酸钯摩尔比(20-25):1；化合物2与乙醇的摩尔体积比(0.5-0.6):1mmol/ml；所述步骤(3)中，化合物3、氧化银和2,3,4,6-四乙酰氧基-alpha-d-吡喃葡萄糖溴化物摩尔比1:(1.8-2.2):(1.4-1.6)；化合物3与乙腈的摩尔体积比1：(6-7)mmol/ml；所述步骤(4)中，化合物4和甲醇钠摩尔比1:(1.5-2.5)；化合物4与甲醇的摩尔体积比1：(3-4)mmol/ml。4.根据权利要求2所述硫酸酯酶的水溶性荧光探针的合成方法，其特征在于，所述的合成方法中化合物(2)的结构式如结构2所示：
所述的合成方法中化合物(3)的结构式如结构3所示：所述的合成方法中化合物(4)的结构式如结构(4)所示：5.一种权利要求1所述水溶性荧光探针在检测硫酸酯酶中的应用。6.根据权利要求5所述水溶性荧光探针在检测硫酸酯酶中的应用，其特征在于，结构i表示的化合物可用于硫酸酯酶的定性或定量检测。7.根据权利要求5或6所述水溶性荧光探针在检测硫酸酯酶中的应用，其特征在于，结构i可用于快速检测硫酸酯酶，其作用模型符合动力学；将结构i表示的化合物应用于检测硫酸酯酶时，其是生成具有结构ii的化合物，从而导致荧光变化；
8.根据权利要求5或6所述水溶性荧光探针在检测硫酸酯酶中的应用，其特征在于，结构i表示的化合物与硫酸酯酶作用后，568nm处检测得的荧光强度正比于硫酸酯酶的活性，活性越强荧光强度越高。9.根据权利要求5或6所述水溶性荧光探针在检测硫酸酯酶中的应用，其特征在于，可利用所述荧光探针实现细胞内溶酶体硫酸酯酶的荧光成像。

技术总结
一种硫酸酯酶的水溶性荧光探针及其合成方法和应用涉及一类在硫酸酯酶存在下荧光发生变化的荧光探针。本发明提供了一种可用于选择性检测硫酸酯酶的荧光探针。本发明在小分子4-溴-1,8-萘二甲酸酐类作为荧光母体，引入N-(2-氨基乙基)吗啉定位于溶酶体，引入beta-葡萄糖作为活性位点，利用反应物与产物的荧光差别实现选择性地检测活细胞中的硫酸酯酶。别实现选择性地检测活细胞中的硫酸酯酶。别实现选择性地检测活细胞中的硫酸酯酶。


技术研发人员：韩克利 张萌萌
受保护的技术使用者：中国科学院大连化学物理研究所
技术研发日：2021.09.06
技术公布日：2022/3/18