端粒G四链体DNA与硫黄素T介导的荧光生物传感器及其在lncRNA检测中的应用的制作方法

技术特征：
1.一种端粒g四链体dna与硫黄素t介导的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器至少包括捕获探针，信号探针，双链特异性核酸酶，末端转移酶和硫磺素t；其中，所述捕获探针具有与待测lncrna特异性杂交的互补区域；所述信号探针包括端粒g四链体dna片段和聚t碱基链。2.如权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述dna捕获探针近5'端设置有t9间隔区；所述dna捕获探针5'末端修饰有生物素；所述dna捕获探针3'末端修饰有spacer c3间隔子。3.如权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述端粒g四链体dna为人端粒g四链体dna。4.如权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器还包括链霉亲和素包被的磁珠。5.如权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器还包括三磷酸脱氧腺苷、氯化钴和氯化钾；优选的，所述荧光生物传感器还包括缓冲液。6.权利要求1-5任一项所述荧光生物传感器在检测lncrna中的应用。7.一种检测lncrna的方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1-5任一项所述荧光生物传感器进行检测。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括：s1、将待测样品与上述捕获探针、双链特异性核酸酶进行孵育；s2、将链霉亲和素包被的磁珠加入上述步骤s1获得的产物中进行孵育后进行磁分离，洗涤重悬后向其中加入末端转移酶进行孵育；s3、将信号探针加入上述步骤s2获得的产物中进行混合得混合物，洗涤重悬后加热孵育，从而使信号探针从磁珠上洗脱；磁分离后加入氯化钾和硫磺素t进行孵育。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括：所述步骤s1中，所述孵育条件为：在50～60℃(优选为55℃)孵育0.5-2小时(优选为1小时)；所述步骤s2中，加入末端转移酶进行孵育的具体条件为：在30～40℃(优选为37℃)下孵育0.5～2小时(优选为1.5小时)；所述步骤s3中，混合反应具体条件为；在室温下混合10-60分钟(优选为30分钟)；加热孵育具体条件为：在30～40℃(优选为37℃)下孵育10-60分钟(优选为30分钟)；磁分离后加入氯化钾和硫磺素t进行孵育的具体条件为：在30～40℃(优选为37℃)下孵育10-60分钟(优选为30分钟)；优选的，所述方法还包括对步骤s3获得的反应产物进行荧光检测分析。10.权利要求1-5任一项所述生物传感器和/或权利要求7-9任一项所述检测方法在lncrna相关药物筛选和/或生物样品lncrna分析中的应用；优选的，所述生物样品包括离体的血液、体液、组织和细胞。

技术总结
本发明提供端粒G四链体DNA与硫黄素T介导的荧光生物传感器及其在lncRNA检测中的应用，属于荧光检测技术领域。所述荧光生物传感器至少包括捕获探针，信号探针，双链特异性核酸酶，末端转移酶和硫磺素T；其中，所述捕获探针具有与待测lncRNA特异性杂交的互补区域；所述信号探针包括端粒G四链体DNA片段和聚T碱基链。本发明设计的荧光生物传感器基于双链特异性核酸酶介导的靶标回收、末端转移酶诱导的扩增和硫磺素T/G-四链体复合物诱导的增强荧光方法用于无标记来灵敏地检测细胞中的lncRNA，具有极佳的灵敏度和特异性，为基于lncRNA的生物医学研究、临床诊断和治疗提供了一个有价值的平台。台。台。


技术研发人员：张春阳 姜苏 刘倩 崔琳
受保护的技术使用者：山东师范大学
技术研发日：2021.11.30
技术公布日：2022/3/18