一种用于益生菌生物膜冷藏的载体及其制备方法与流程

技术特征：
1.一种用于益生菌生物膜冷藏的载体的制备方法，其特征在于：具体包含以下步骤：(1)水相制备：在水系培养液中添加1％-4％的缓释碳源，加热助溶，冷却至室温后备用。(2)有机相制备：聚乳酸颗粒溶解于二氯甲烷中，配成0.1g/ml的聚合物有机溶液备用。(3)混合乳化：将水相和有机相1∶9混合，加入至一个干燥洁净的玻璃杯中，高速分散乳化20-30min。(4)挥发成膜：将乳化好的混合液倒入玻璃平皿，要求完全覆盖皿底，厚度5-10mm，通风环境下放置12-24h，待有机溶剂完全挥发后形成薄膜。(5)洗涤烘干：将薄膜用水反复清洗去除残留的有机试剂，40-60℃恒温干燥8-12h。(6)灭菌：将薄膜置于玻璃容器中，121℃高压蒸汽灭菌15min后备用。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：益生菌生物膜载体的制备方法中以聚乳酸为基质，添加培养液和缓释碳源。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：益生菌生物膜载体的制备中优选的缓释碳源为淀粉。4.利用权利要求1-3所述的载体制备益生菌生物膜，其特征在于：包含以下步骤：(1)菌种活化：将益生菌接种于培养液中，适温培养至稳定期后从中抽取2ml菌液接种于新鲜培养液，活化3次后5000-8000r/min离心5-15min取菌体，用无菌水清洗两次后调节菌液浓度至od
600nm
为1.0-2.0。(2)生物膜形成：抽取三代菌液接种于含新鲜的液体培养基的锥形瓶中，在35-42℃培养，每隔12-24h将培养液倒出，补充新鲜的培养液，培养4-7d，在载体表面形成生物膜。5.按照权利要求4所述的益生菌生物膜，其特征在于：使用的益生菌为嗜热链球菌、乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌。6.按照权利要求4所述的益生菌生物膜，其特征在于：嗜热链球菌、乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌在载体上的生物膜量可达到14log cfu/cm2以上。7.按照权利要求4所述的方法得到的益生菌生物膜进行冷藏，其特征在于：益生菌在载体上形成生物膜后，室温无菌条件晾干4h，在4℃冰箱冷藏保存一周。8.按照权利要求7所述的生物膜冷藏，其特征在于：益生菌在载体上形成生物膜后，室温无菌条件晾干4h。9.按照权利要求7所述的生物膜冷藏，其特征在于：含有益生菌生物膜的载体在4℃冰箱冷藏保存一周后，载体上的活菌数仍达到6log cfu/cm2以上。

技术总结
本发明提供一种用于益生菌生物膜冷藏的载体及其制备方法，属于微生物领域。该发明以聚乳酸为基质并添加培养液和缓释碳源制备载体，促使嗜热链球菌、乳酸乳球菌和保加利亚乳杆菌在载体表面形成生物膜，提高菌体细胞的耐冷性，使益生菌在4℃存放一周后仍有大量活性细胞存活。本发明提供的技术便于益生菌的冷藏与连续使用，克服冷冻菌株能耗大、活化次数多、难以连续使用的问题。难以连续使用的问题。难以连续使用的问题。


技术研发人员：张秋勤 董明盛 陈晓红 李伟 芮昕
受保护的技术使用者：南京农业大学
技术研发日：2020.09.17
技术公布日：2022/3/18