嘧啶并五元氮杂环化合物及其用途的制作方法

1.本发明公开了嘧啶并五元氮杂环化合物、其药学上可接受的盐、水合物、前药、立体异构体、溶剂化物或其同位素标记化合物。本发明也提供了该类化合物及其中间体化合物的制备方法、含有该类化合物的组合物以及该类化合物在制备预防和/或治疗与shp2活性异常相关疾病或病症的药物中的用途。


背景技术：

2.酪氨酸磷酸酶shp2由两个n-末端src同源2结构域(n-sh2和c-sh2)和一个蛋白酪氨酸磷酸酶催化结构域(ptp)构成。在基础状态下，n-sh2能够与ptp结合形成一个环状结构，从而阻碍ptp与底物的结合，使得酶催化活性被抑制；当上游受体蛋白的酪氨酸被磷酸化后，nsh2与之相结合，ptp催化域得到释放从而发挥出磷酸酶活性。
3.在细胞水平上，shp2通过在诸多受体酪氨酸激酶的细胞质下游的功能作用，参与多个肿瘤细胞信号传导通路，如rtk/ras/mapk、jak/stat和pb3k/akt等。通过对这些激酶以及信号通路的调控作用，shp2与许多重要的细胞生命活动密切相关，如细胞增殖、迁移、分化、死亡、细胞因子的调控及肿瘤发生等等。
4.同时，shp2也参与程序性死亡受体1(pd1)介导的免疫系统抑制。t细胞的pd-1与pd-l1结合后，在细胞内能够招募大量的shp2。shp2能够将t细胞内抗原受体通路蛋白去磷酸化，从而抑制t细胞的激活。因此，抑制shp2的活性能够在肿瘤微环境中逆转免疫抑制。
5.作为一类重要的细胞信号因子，shp-2突变与多种疾病密切相关。研究发现：在神经母细胞瘤、aml(4％)、乳腺癌、nsclc(10％)、肺腺癌(30％)、食道癌、头颈部肿瘤、黑色素瘤和胃癌中，发现存在shp-2突变。
6.目前已有多个shp-2的变构抑制剂进入临床研究阶段，如novartis公司开发的tno-155，revolution medicine公司开发的rmc-4630，以及北京加科思的jab-3068等化合物都已经进入临床研究阶段。但还没有一款开发上市的shp-2抑制剂用于制备治疗努南氏症候群、豹皮症候群、白血病、神经母细胞瘤、黑色素瘤、乳腺癌、食道癌、头颈部肿瘤、肺癌及其结肠癌。因此迫切需要开发一类成药性好的ship-2抑制剂药物。


技术实现要素：

7.本发明提供的嘧啶并五元氮杂环化合物是一类全新的shp2抑制剂，表现出对肿瘤细胞很好的抑制活性且成药性好，具有广阔的药物开发前景。而且该类化合物的制备方法简单，有利于工业化生产。
8.根据本发明的第一方面，本发明提供了一种如式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药，
[0009][0010]
其中，
[0011]
x1、x2或x3独立地选自cr5或n，且其中至少有一个为n；
[0012]
x4或x5独立地选自c或n；
[0013]
r1、r2、r3和r4独立地选自h、卤素、羟基、氨基、氰基、c
2-c8烯基、c
2-c8炔基、c
1-c8醛基、c
1-c8烷基、c
1-c8杂烷基、c
3-c8环烷基、c
3-c8杂环烷基、c
1-c8烷氧基或c
1-c3卤代烷氧基，所述c
1-c8烷基、c
1-c8杂烷基、c
3-c8环烷基、c
3-c8杂环烷基、c
1-c8烷氧基或c
1-c3卤代烷氧基任选被一个或多个r5所取代，当被多个r5取代时，r5可以相同或不同；
[0014]
r5选自h、卤素、羟基、氨基、氰基、c
1-c3烷基、c
1-c3杂烷基、c
3-c8环烷基、c
3-c8杂环烷基、c
1-c3烷氧基或c
1-c3卤代烷氧基；
[0015]
n选自0、1、2、3、4和5；
[0016]
m选自0、1、2、3、4和5；
[0017]
环a独立地选自c
3-c8环烷基、c
6-c
12
螺环烷基、c
3-c8杂环烷基、c
6-c
10
芳基或c
5-c
12
杂芳基；
[0018]
环b独立地选自c
3-c8环烷基、c
3-c8杂环烷基、c
6-c
10
芳基或c
5-c
12
杂芳基；
[0019]
所述杂烷基、杂环烷基、杂芳基中所含的杂原子或杂原子团分别独立地选自-c(＝o)n(r5)-、-n(r5)-、-nh-、-n＝、-o-、-s-、-c(＝o)o-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-s(＝o)-、-s(＝o)
2-和-n(r5)c(＝o)n(r5)-；所述杂原子或杂原子团的数目分别独立地选自1、2和3。
[0020]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x1和x3为n时，x2为c。
[0021]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x2和x3为n时，x1为c。
[0022]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x1和x2为c时，x3为n。
[0023]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x4为n时，环a选自吡咯环、螺环吡咯环、哌啶环、螺环哌啶环或二氢吡唑环。
[0024]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x4为n时，所述环a独立地选自
[0025]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x4为c时，环a选自苯环、吡啶环、嘧啶环、吡嗪环或哒嗪环。
[0026]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x4为c时，所述环a独立地选自为c时，所述环a独立地选自
[0027]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x5为n时，环b独立地为吡咯环、哌啶环、哌嗪环或吗啉环。
[0028]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x5为n时，环b独立地为
[0029]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x5为c时，环b独立地为苯环、吡啶环、嘧啶环、吡嗪环或哒嗪环。
[0030]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，当x5为c时，环b独立地选自为c时，环b独立地选自
[0031]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，r1、r2、r3和r4选自h、卤素、羟基、氨基、氰基、c
2-c4烯基、c
1-c4烷基、c
1-c4杂烷基、c
3-c6环烷基、c
3-c6杂环烷基、c
1-c4烷氧基或c
1-c3卤代烷氧基，所述c
1-c4烷基、c
1-c4杂烷基、c
3-c6环烷基、c
3-c6杂环烷基、c
1-c4烷氧基或c
1-c3卤代烷氧基任选被一个或多个r5所取代，当被多个r5取代时，r5可以相同或不同；其中r5选自h、f、cl、br、羟基、氨基、氰基、甲基、乙基、环丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲氧基。
[0032]
其中一种优选例中，在本发明所述的式(i)所示的嘧啶并五元氮杂环化合物结构中，r1、r2、r3和r4选自h、卤素、羟基、氨基、氰基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、乙烯基、甲氧
基、乙氧基、异丙氧基、三氟甲基、二氟甲基、三氟甲氧基、-och2chf2、-n(ch3)2、-nh(ch3)或-och2cf3。
[0033]
在一些实施方案中，本发明所述的式(i)所示的化合物选自以下式(ii)、式(iii)或式(iv)所示的化合物：
[0034][0035][0036]
其中，r1、r2、r3、r4、x4、x5、环a和环b如权利要求1所定义，m选自0、1、2、3、4和5，n选自0、1、2、3、4和5。
[0037]
在一些实施方案中，本发明所述的式(i)所示的化合物选自以下式(ii-1)至式(iv-3)所示的化合物：
[0038][0039][0040]
其中，r1、r2、r3、r4、x4、x5、环a和环b如权利要求1所定义，m选自0、1、2、3、4和5，n选自0、1、2、3、4和5。
[0041]
根据本发明的具体实施例，本发明所述的式i所示的化合物，为如下任一化合物：
[0042][0043]
在本发明中，本领域技术人员可对式i所示的化合物中的所述基团及其取代基进行选择，以提供稳定的式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药，包括但不限于本发明的实施例中所述的i-1～i-6。
[0044]
本发明所述的各反应步骤所使用的反应溶剂没有特别限制，任何在一定程度上能溶解起始原料并且不抑制反应的溶剂均包含在本发明中。另外，本领域的许多类似改动，等同替换，或等同于本发明所描述的溶剂，溶剂组合，及溶剂组合的不同比例，均视为本发明的包含范围。
[0045]
根据本发明的第二方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含有效剂量的式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药，和至少一种药用辅料。
[0046]
所述的药用辅料可为药物生产领域中广泛采用的那些辅料。辅料主要用于提供一个安全、稳定和功能性的药物组合物，还可以提供方法，使受试者接受给药后活性成分以所期望的速率溶出，或促进受试者接受组合物给药后活性成分得到有效吸收。所述的药用辅料可以是惰性填充剂，或者提供某种功能，例如稳定该组合物的整体ph值或防止组合物活性成分的降解。所述的药用辅料可以包括下列辅料中的一种或多种：粘合剂、助悬剂、乳化剂、稀释剂、填充剂、成粒剂、胶粘剂、崩解剂、润滑剂、抗粘着剂、助流剂、润湿剂、胶凝剂、吸
收延迟剂、溶解抑制剂、增强剂、吸附剂、缓冲剂、螯合剂、防腐剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。
[0047]
本发明的药物组合物可根据公开的内容使用本领域技术人员已知的任何方法来制备。例如，常规混合、溶解、造粒、乳化、磨细、包封、包埋或冻干工艺。
[0048]
本发明所述的药物组合物可以任何形式给药，包括注射(静脉内)、粘膜、口服(固体和液体制剂)、吸入、眼部、直肠、局部或胃肠外(输注、注射、植入、皮下、静脉内、动脉内、肌内)给药。本发明的药物组合物还可以是控释或延迟释放剂型(例如脂质体或微球)。固体口服制剂的实例包括但不限于粉末、胶囊、囊片、软胶囊剂和片剂。口服或粘膜给药的液体制剂实例包括但不限于悬浮液、乳液、酏剂和溶液。局部用制剂的实例包括但不限于乳剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、贴剂、糊剂、泡沫剂、洗剂、滴剂或血清制剂。胃肠外给药的制剂实例包括但不限于注射用溶液、可以溶解或悬浮在药学上可接受载体中的干制剂、注射用悬浮液和注射用乳剂。所述的药物组合物的其它合适制剂的实例包括但不限于滴眼液和其它眼科制剂；气雾剂：如鼻腔喷雾剂或吸入剂；适于胃肠外给药的液体剂型；栓剂以及锭剂。
[0049]
优选口服施用本发明化合物。还优选静脉内施用本发明化合物。取决于情况，可以应用或甚至优选其它施用途经。例如，对于健忘或对口服药物易发怒的患者，经皮施用可能非常需要。在特别的情况下，本发明化合物还可以通过透皮、肌内、鼻内或直肠内途径施用。施用途经可以以任何方式变化，其受药物的物理性质、患者和看护者的便利以及其它相关情况的限制。
[0050]
根据本发明的第三方面，本发明提供一种式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体，或其药物组合物在制备治疗和/或预防由shp2异常突变引起的疾病的药物中的用途。本发明所提供的化合物，可用于治疗和/或预防一种或两种以上与shp2异常突变引起的疾病，具有良好的临床应用和医药用途。
[0051]
根据本发明的第四方面，本发明提供一种如式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药，或其药物组合物在制备shp2抑制剂药物中的用途。本发明所提供的化合物，具有优良的shp2酶活性及细胞增殖抑制活性，能够有效作为shp2抑制剂，用作shp2抑制剂的治疗药物。
[0052]
根据本发明的第五方面，本发明提供一种如式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药，或其药物组合物在制备治疗和/或预防癌症药物中的用途。本发明所提供的化合物，可用于制备成治疗和/或预防癌症的药物，其中所述癌症包括但不限于努南综合症、豹综合症、青少年髓单核细包白血病、成神经细胞瘤、黑色素瘤、急性髓性白血病、乳腺癌、食道癌、肺癌、结肠癌、胃癌、间变性大细胞淋巴瘤、成胶质细胞瘤、非小细胞肺癌或头颈部肿瘤。
[0053]
本发明具有如下优点：
[0054]
1、本发明公开的嘧啶并五元氮杂环化合物是一类新型的变构抑制剂，能够通过与shp2非催化区域的结合并“锁”住shp2活性很弱的基础状态，从而达到抑制其活性的目的。本发明公开的嘧啶并五元氮杂环化合物克服了ptp催化区域抑制剂普遍的选择性和成药性差等缺点，表现了很好的生物活性及可成药性，具有很好的药物开发前景。
[0055]
2、在相同条件的shp2酶活性抑制实验、磷酸化蛋白激酶(p-erk)细胞实验、nci-h358细胞、mv-4-11细胞增殖抑制实验等评价体系中，本发明与已经公开结构的化合物
rmc4550及tno155相比，表现出了更优越的活性及pk性质。
[0056]
术语和定义
[0057]
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
[0058]
术语“烷基”指饱和的脂族烃基团，例如，包括1至20个碳原子的直链和支链基团，例如可以是1至18个碳原子、1至12个碳原子、1至8个碳原子、1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链基团。在本文中“烷基”可以是一价的、二价的或三价基团。非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、及其各种支链异构体等。非限制性实施例还包括亚甲基、次甲基、亚乙基、次乙基、亚丙基、次丙基、亚丁基、次丁基及其各种支链异构体。烷基可以是任选取代的或未取代的。
[0059]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，例如，其包括3至12个环原子，例如可以是3至12个、3至10个、或3至6个环原子，或者可以是3、4、5、6元环。单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。环基可以是任选取代的或未取代的。
[0060]
术语“螺环烷基”是指两个环共用一个环原子的环烷基。共用的环原子也被称作螺原子，最常被称作季碳(螺碳)。
[0061]
术语“杂烷基”是指由规定数量的碳原子和一个或多个选自由o、n和s组成的组中的杂原子组成的稳定直链或支链，并且其中氮和硫原子任选地经氧化，并且氮原子任选地经季铵化。实例包括但不限于-ch
2-ch
2-o-ch3、-ch
2-ch
2-nh-ch3、-ch
2-ch
2-n(ch3)-ch3、-ch
2-s-ch
2-ch3、-ch
2-ch
2-s(o)-ch3、-ch
2-ch
2-s(o)
2-ch3或-ch
2-ch＝n-och3。至多两个杂原子可以是连续的，例如-ch
2-nh-o-ch3。在某些实施例中，杂烷基任选地如本文其它地方所述经取代。
[0062]
术语“杂环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，例如，其包括3至20个环原子，例如可以是3至16个、3至12个、3至10个或3至6个环原子，其中一个或多个环原子选自氮、氧或s(o)m(其中m是0、1、或2)的杂原子，但不包括-o-o-、-o-s-或-s-s-的环部分，其余环原子为碳。在一些实施方案中，优选包括3至12个环原子，其中1-4个是杂原子，更优选杂环烷基环包含3至10个环原子，最优选5元环或6元环，其中1-4个是杂原子，更优选1-3个是杂原子，最优选1-2个是杂原子。单环杂环烷基的非限制性实例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环烷基的非限制性实例包括螺环、稠环、或桥环的杂环烷基。
[0063]
术语“烯基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个双键的不饱和脂肪族烃基。烯基的非限制性实例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、异丁烯基、1,3-丁二烯基等。
[0064]
术语“炔基”是指由碳原子和氢原子组成的直链或支链的具有至少一个三键的不饱和脂肪族烃基。炔基的非限制性实例包括但不限于乙炔基(-c≡ch)、1-丙炔基(-c≡c-ch3)、2-丙炔基(-ch
2-c≡ch)、1,3-丁二炔基(-c≡c-c≡ch)等。
[0065]
术语“烷氧基”指-o-烷基。
[0066]
术语“卤代烷氧基”表示烷氧基被一个或多个相同或不同的卤素原子所取代，例如三氟甲氧基等。
[0067]
术语“芳基”是指具有共轭的π电子体系的全碳单环或稠合多环的芳香环基团。例如，芳基可以具有6-20个碳原子，6-14个碳原子或6-12个碳原子。芳基的非限制性实例包括但不限于苯基、萘基、蒽基和1,2,3,4-四氢化萘等。
[0068]
术语“杂芳基”是指“杂芳环”分子去掉1个氢原子后余下的基团，杂芳基可以是非取代的或取代的，所述的取代基包括但不限于烷基、烷基氧基、芳基、芳烷基、氨基、卤素、羟基、氰基、硝基、羰基和杂脂环基。非取代的杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、三嗪基。
[0069]
术语“卤素”是指氟、氯、溴和碘，在一些实施方案中，优选氟、氯和溴。
[0070]
术语“氨基”指-nh2基团、-nh(烷基)和-n(烷基)2，氨基的具体实例包括但不限于-nh2、-nhch3、-nhch(ch3)2、-n(ch3)2、-nhc2h5、-n(ch3)c2h5等。
[0071]
术语“羟基”指-oh基团。
[0072]
术语“氰基”指-cn基团。
[0073]
术语“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或情形可以发生或不发生。例如：“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以存在也可以不存在，即包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
[0074]“取代的”指基团中的一个或多个氢原子被取代基所取代。例如，基团中最多5个，更优选为1-3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。
[0075]“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，由本发明发现的具有特定取代基的化合物与相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物中含有相对酸性的功能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的碱与这类化合物的中性形式接触的方式获得碱加成盐。药学上可接受的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐或类似的盐。当本发明的化合物中含有相对碱性的官能团时，可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶剂中用足够量的酸与这类化合物的中性形式接触的方式获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括无机酸盐，所述无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸氢根、氢碘酸、亚磷酸等；以及有机酸盐，所述有机酸包括如乙酸、丙酸、异丁酸、马来酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、反丁烯二酸、乳酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸和甲磺酸等类似的酸；还包括氨基酸(如精氨酸等)的盐，以及如葡糖醛酸等有机酸的盐(参见berge等人，“pharmaceutical salts”,journal of pharmaceutical science 66:1-19(1977))。本发明的某些特定的化合物含有碱性和酸性的官能团，从而可以被转换成任一碱或酸加成盐。优选地，以常规方式使盐与碱或酸接触，再分离母体化合物，由此再生化合物的中性形式。化合物的母体形式与其各种盐的形式的不同之处在于某些物理性质，例如在极性溶剂中的溶解度不同。根据本发明的实施例，优选本发明的式i所示的化合物在药学上可接受的盐是盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、或硫酸盐，最优选盐酸盐。
[0076]
术语“溶剂化物”表示本发明化合物与一种或多种溶剂分子的物理缔合。该物理缔合包括各种程度的离子和共价结合，包括氢键合。“溶剂化物”包括溶液相和可分离的溶剂
化物。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇化物、甲醇化物等。“水合物”是其中溶剂分子是h2o的溶剂化物。
[0077]“药物组合物”表示含有一种或多种化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体与其它化学组分的混合物，以及其它组分例如药学上可药用的辅料。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0078]
本文中给出的任意式或结构还旨在表示化合物的未标记的形式以及同位素标记的形式。除了一个或多个原子被具有选定的原子质量或质量数的原子替代以外，同位素标记的化合物具有由本文中给出的各式所示的结构。可以引入至本公开的化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，例如但不限于2h(氘，d)、3h(氚)、
11
c、
13
c、
14
c、
15
n、
18
f、
35
s、
36
cl和
125
i。本公开的各种同位素标记的化合物，例如引入如3h、
13
c和
14
c等放射性同位素的那些。此类同位素标记的化合物可以用于代谢研究、反应动力学研究、检测或显像技术，如包括药物或底物组织分布分析的正电子发射断层扫描术(pet)或单光子发射计算机断层扫描术(spect)，或者用于患者的放射性治疗。本公开的同位素标记的化合物及其前药通常可以通过进行在方案中或在以下所述的实例和制备中公开的过程、通过用容易获得的同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂来制备。
[0079]
本发明的化合物可以为前药化合物的形式。“前药化合物”意指通过在生物体中的生理条件下与酶或胃酸等的反应，例如通过氧化、还原或水解等转化为根据本发明的化合物的衍生物，所述反应中的每一种以酶促方式进行。前药的实例为如下化合物，其中将本发明的化合物中的氨基酰化、烷基化或磷酸化从而形成例如二十烷酰基氨基、丙氨酰基氨基、新戊酰基氧基甲基氨基，或者其中将羟基酰化、烷基化、磷酸化或转化为硼酸酯，例如乙酰基氧基、棕榈酰基氧基、新戊酰基氧基、琥珀酰基氧基、富马酰基氧基、丙氨酰基氧基，或者其中将羧基酯化或酰胺化。这些化合物可以根据公知的方法从本发明的化合物来生产。前药的其它实例为如下化合物，其中例如将本发明的化合物中的羧酸酯转化为烷基-、芳基-、胆碱-、氨基、酰氧基甲基酯、亚麻酰基酯。
[0080]
在会发生本发明的化合物或它们的前药的互变异构现象如例如，酮-烯醇互变异构现象的情况下，个体形式如例如，酮和烯醇形式以及它们的以任意比例的混合物各自在本发明的范围内。这同样适用于立体异构体，如例如对映异构体、顺式/反式异构体和构象异构体等。
[0081]
如果期望，则可以通过本领域公知的方法，例如通过液相色谱来分离异构体。通过使用例如手性固定相，这同样适用于对映异构体。此外，对映异构体可以通过如下来分离：将它们转化为非对映异构体，即与对映异构纯的辅助化合物偶联，随后分离所得非对映异构体并且裂解辅助残基。可选地，可以使用光学纯的起始物料从立体选择性合成获得本发明的化合物的任意对映异构体。
[0082]
术语“治疗”意为将本发明所述化合物或制剂进行给药以预防、改善或消除疾病或与所述疾病相关的一个或多个症状，且包括：
[0083]
(i)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中出现，特别是当这类哺乳动物易患有该疾病状态，但尚未被诊断为已患有该疾病状态时；
[0084]
(ii)抑制疾病或疾病状态，即遏制其发展；
[0085]
(iii)缓解疾病或疾病状态，即使该疾病或疾病状态消退。
[0086]
术语“有效剂量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本发明化合物的用量。构成“有效剂量”的本发明化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可以例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。
[0087]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
[0088][0089]
具体反应条件描述如下：
[0090]
化合物a和化合物b在例如碳酸钾、diea、碳酸铯、叔丁醇钠等碱性条件下，于dmf、dmso、nmp等溶剂中加热反应得到化合物c。化合物c和boc酸酐在二氯甲烷中，以dmap催化得到化合物d，化合物d和化合物e通过pd2(dba)3作催化剂，以xantphos等为配体，加入有机碱或无机碱，如diea、碳酸铯等，得到化合物f，化合物f用tfa或盐酸乙酸乙酯脱保护得到游离或盐酸盐形式的通式i所示的化合物。
具体实施方式
[0091]
本发明所述式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其互变异构体、或其水合物、或其溶剂化物、或其代谢产物、或其前药的制备，可通过以下实施例中所述的示例性方法以及本领域技术人员所用的相关公开文献操作完成，但这些实施例并非限制本发明的范围。
[0092]
本发明所述化合物的结构是通过核磁共振(nmr)或质谱(ms)来确定的。nmr的测定使用bruker avance-400或varian oxford-300核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso-d6)、氘代氯仿(cdc13)、氘代甲醇(cd3od)，内标为四甲基硅烷(tms)，化学位移是以10-6
(ppm)作为单位给出。
[0093]
ms的测定使用agilent sqd(esi)质谱仪(生产商：agilent，型号：6110)或shimadzu sqd(esi)质谱仪(生产商：shimadzu，型号：2020)。
[0094]
hplc的测定使用安捷伦1200dad高压液相色谱仪(sunfirc c18，150x4.6mm，5wn，色谱柱)和waters 2695-2996高压液相色谱仪(gimini c18，150x4.6mm，5ym色谱柱)。
[0095]
薄层层析硅胶板使用青岛海洋gf254硅胶板，薄层色谱法(tlc)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm-0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm硅胶板。
[0096]
柱层析一般使用青岛海洋200-300目硅胶为载体。
[0097]
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或者购自韶远化学科技(accela chembio inc)、北京耦合化学品等公司。
[0098]
实施例中如无特殊说明，反应均在氩气氛或氮气氛下进行。氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
[0099]
实施例中如无特殊说明，反应的温度为室温，温度范围是5℃-35℃。
[0100]
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(tlc)，反应所使用的展开剂的体系有a：二氯甲烷和甲醇体系；b：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
[0101]
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂的体系包括a：二氯甲烷和甲醇体系；b：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和酸性或碱性试剂等进行调节。
[0102]
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其它化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。下列合成方案描述了制备本发明公开化合物的步骤。除非另有说明外，各取代基具有如本发明所述的定义。
[0103]
中间体的合成：
[0104]
中间体q1的合成
[0105][0106]
第一步：合成q1-2
[0107]
将化合物q1-1(100g，495mmol)加入dme(1000ml)中，降温到-10℃后加入氯甲酸异丁酯(67.6g，495mmol)和4-甲基吗啉(50g,495mmol)，室温反应5小时，tlc反应结束后，过滤，用dme(250ml)过滤洗涤固体，然后将滤液加入到2l三口瓶中，加入硼氢化钠(37.6g，990mmol)处理滤液，室温下搅拌30min，再缓慢滴加甲醇(250ml)，继续室温反应3小时，tlc反应完成，将反应液旋干后，加入水(1500ml)，水相用dcm萃取(300ml*3)，合并有机相后，有机相依次用水和饱和氯化钠洗涤，再将有机相干燥，旋干得到化合物q1-2(86.5g，白色固体)，产率93％。直接用于下一步。
[0108]
第二步：合成q1-3
[0109]
将化合物q1-2(25g，133mmol))加入dcm(250ml)中，再加入tea(26.9g，266mmol)，冰浴下滴加mscl(18.3g，156mmol)，然后室温下反应1h。tlc显示反应结束后，将反应液用dcm稀释，依次水洗和饱和氯化钠洗涤，再将有机相干燥，浓缩旋干，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q1-3(33.6g，无色透明液体)，产率95％。
[0110]
ms m/z(esi):266[m 1]。
[0111]
第三步：合成q1-4
[0112]
将n-boc-4-氰基哌啶(28g，130mmol)加入thf(300ml)中，冷却到-78℃后，缓慢滴加2.0m的lda(75ml，150mmol)，滴加完后继续保持-78℃反应1.5h，然后滴加上一步得到的化合物q1-3(26.6，100mmol)的thf溶液(150ml)，滴加完成后，继续保持-78℃反应3h，tlc显示反应结束后，滴加饱和氯化铵溶液(50ml)淬灭反应，并加入饱和氯化钠水溶液(500ml)，分出有机相，水相再用乙酸乙酯萃取(150ml*3)，合并有机相，有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝10:1～1:1)得到化合物q1-4(25.7g，白色固体)，产率67.6％。
[0113]
ms m/z(esi):380[m 1]。
[0114]
第四步：合成q1-5
[0115]
将上一步得到的化合物q1-4(25g，65.8mmol)加入dma(200ml)和水(20ml)的混合溶剂中，再加入三乙胺(33.2g，329mmol)和催化剂二氯二叔丁基-(4-二甲基氨基苯基)磷钯
(ii)(4.6g，6.6mmol，cas:887919-35-9)，氮气保护下130℃反应4小时。tlc显示反应结束后，将反应液冷却，并加入水稀释(800ml)，水相用乙酸乙酯萃取(200ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(200ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q1-5(14.6g，白色固体)，产率73％。
[0116]
ms m/z(esi):303[m 1]。
[0117]
第五步：合成q1-6
[0118]
将上一步得到的化合物q1-5(10g，33mol)加入钛酸四乙酯(100ml)中，然后再加入(r)-( )-叔丁基亚磺酰胺(4.8g，40mml)，升温到90℃反应3小时，tlc显示反应完成后，冷却到室温，将反应液缓慢加入到冰水(500ml)中，得到的水相用二氯甲烷萃取(150ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(100ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q1-6(12g，黄色固体)，产率89.6％。
[0119]
ms m/z(esi):406[m 1]。
[0120]
第六步：合成q1-7
[0121]
将上一步得到的化合物q1-6(10g，24.6mmol)加入四氢呋喃(100ml)中，降温到-78℃后缓慢滴加dibal-h(30ml，30mmol，1m的甲苯溶液)，然后继续在-78℃反应0.5h，tlc显示反应完成后，在-50℃下加入饱和罗谢尔盐溶液(300ml)淬灭反应，室温搅拌30min，得到的水相用乙酸乙酯萃取(150ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(100ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q1-7(8.6g，白色固体)，产率85.3％。
[0122]
ms m/z(esi):408[m 1]。
[0123]
第七步：合成中间体q1
[0124]
将上一步得到的化合物q1-7(5g，12.2mmol)加入到乙酸乙酯中(50ml)中，再加入4m的hcl/乙酸乙酯溶液(25ml)，室温反应1h，tlc显示反应完成后，过滤，固体用乙酸乙酯洗涤，烘干得到化合物q1的盐酸盐(3.2g，白色固体)，产率94％。
[0125]
ms m/z(esi):204[m 1]。
[0126]
中间体q2的合成
[0127][0128]
第一步：合成q2-2
[0129]
将5-溴-2,4-二氯嘧啶(5.0g，21.94mmol)加入到乙醇(100ml)溶液中，然后加入三乙胺(3.7ml，26.33mmol)和2,2-二甲氧基乙胺(2.53ml，24.14mmol)，在室温下将反应混合物搅拌24小时。完成反应后，将反应混合物在减压下浓缩。加入200ml水，得到的水相用乙酸
乙酯萃取(100ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(70ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q2-2(5.4g，白色固体)，83％产率。
[0130]
ms m/z(esi):296[m 1]。
[0131]
第二步：合成q2-3
[0132]
将上一步得到的化合物q2-2(5.4g，18.2mmol)溶于浓硫酸(50ml)中，然后升温至75℃。反应2h后，tlc显示反应结束，冷却到室温后，将反应液缓慢倒入冰水中，然后用5m氢氧化钠水溶液缓慢碱化至ph6左右，有大量固体析出，过滤，滤饼用水洗涤后，将固体干燥，得到化合物q2-3(3.2g，灰色固体)，82.5％产率。
[0133]
ms m/z(esi):214[m 1]。
[0134]
第三步：合成中间体q2
[0135]
向化合物q2-3(3.2g，15mmol)中加入三氯氧磷(50ml)，然后加入diea(5.8g，45mmol)，并将混合物加热至115℃。反应3h后，tlc显示反应结束，将混合物真空浓缩，所得残余物用etoac稀释(100ml)，然后用饱和碳酸氢钠溶液缓慢调ph值到7。分出有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗涤(70ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过快速硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q2(2.7g，白色固体)，产率78％。
[0136]
ms m/z(esi):232[m 1]。
[0137]
中间体q3的合成
[0138][0139]
第一步：合成q3-2
[0140]
将5-碘-2,4-二氯嘧啶(16.3g，59.2mmol)和水合肼(8.8ml，181mmol)加入到无水乙醇(300ml)中，然后加热回流12小时。tlc显示反应结束后，冷却到0℃，有大量固体析出，过滤，滤饼用冰的乙醇(100ml)洗涤，干燥，得到q3-2(15.1g，黄色固体)，产率94.3％，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0141]
ms m/z(esi):271[m 1]。
[0142]
第二步：合成中间体q3
[0143]
将上一步得到的化合物q3-2(15g，55.3mmol)加入到原甲酸三甲酯中(100ml)，加热回流12小时，tlc显示反应结束，冷却到0℃，有大量固体析出，过滤，滤饼用冰的50％乙醇(50ml)洗涤，干燥，得到化合物q3(11.3g，黄色固体)，产率88％，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0144]
ms m/z(esi):281[m 1]。
[0145]
中间体q4的合成
[0146][0147]
第一步：合成化合物q4-2
[0148]
将化合物q4-1(40g，192mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(200ml)中，将温度升至120℃反应3小时。tlc显示反应完成后，减压除去大部分溶剂，然后加入水(200ml)，有大量固体析出，将固体过滤收集，滤饼用二氯甲烷洗涤，干燥得到化合物q4-2(42g，白色固体)，收率82％，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0149]
ms m/z(esi):263[m 1]。
[0150]
第二步：合成化合物q4-3
[0151]
将上一步得到的化合物q4-2(42g，160mmol)加入到甲醇(250ml)中，然后加入盐酸羟胺(13.4g，192mmol)。将反应液在室温搅拌3小时，tlc显示反应完成后，将反应液冷却到0℃，有大量固体析出来，过滤，并将滤饼用100ml冰的甲醇洗涤，固体干燥，得到化合物q4-3(33.6g，白色固体)，产率84％，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。
[0152]
ms m/z(esi):251[m 1]。
[0153]
第三步：合成化合物q4-4
[0154]
将上一步得到的化合物q4-3(7.5g，29.6mmol)加入到多聚磷酸(50ml)中，将反应温度升至120℃，反应搅拌5小时，tlc显示反应结束后，向反应体系中加入150ml冰水，用2n氢氧化钠水溶液调节ph至约8，然后将得到的水相用正丁醇萃取(150ml*3)，合并有机相，合并后的有机相用饱和食盐水洗涤(70ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到化合物q4-4(3.5g，淡黄色固体)，产率50％。
[0155]
ms m/z(esi):215[m 1]。
[0156]
第四步：合成中间体q4
[0157]
向化合物q4-4(3.2g，15mmol)中加入三氯氧磷(50ml)，然后加入diea(5.8g，45mmol)，并将混合物加热至115℃。反应3h后，tlc显示反应结束，将混合物真空浓缩，所得残余物用etoac稀释(100ml)，然后用饱和碳酸氢钠溶液缓慢调ph值到7。分出有机相，水相再用乙酸乙酯萃取，合并后的有机相用饱和食盐水洗涤(70ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过快速硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q4(2.5g，白色固体)，产率71.5％。
[0158]
ms m/z(esi):233[m 1]。
[0159]
中间体q5的合成
[0160][0161]
第一步：合成化合物q5-2
[0162]
将化合物q5-1(10g，88.4mmol)加入到thf溶液中(100ml)，然后依次加入2-羟甲基吡咯烷-1-羧酸丁酯(21.4g，106.1mmol，cas:170491-63-1)和三苯基磷(34,8g，132.6mmol)，再将反应液用冰水浴冷却到5℃以下，然后缓慢滴加dead(23.1g，132.6mmol)。滴加完成后在室温下搅拌16小时后，tlc显示反应结束，将反应混合物在减压下浓缩，旋干浓缩得到的残余物过快速硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物q5-2(25g，浅黄色油状物)，产率95.4％。
[0163]
ms m/z(esi):297[m 1]。
[0164]
第二步：合成化合物q5-3
[0165]
将上一步得到的化合物q5-2(5g，16.8mmol)加入到乙酸乙酯(50ml)中，再加入4m的hcl/乙酸乙酯溶液(25ml)，室温反应1h，tlc显示反应完成后，过滤，固体用乙酸乙酯洗涤，烘干得到化合物q5-3的盐酸盐(4.4g，白色固体)，产率96.8％。
[0166]
ms m/z(esi):197[m 1]。
[0167]
第三步：合成化合物q5-4
[0168]
将上一步得到的化合物q5-3的盐酸盐(2.20g，8.17mmol)加入到乙醇(50ml)中，然后加入碳酸钾(5.64g，40.87)，在室温下将其搅拌半小时后，升温到65℃下搅拌12h。tlc显示反应结束，然后将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩，旋干浓缩得到的残余物过快速硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得到化合物q5-4(1.22g，无色油状物)，产率84.7％。
[0169]
ms m/z(esi):177[m 1]。
[0170]
第四步：合成化合物q5-5
[0171]
将上一步得到的化合物q5-4(1.2g，6.8mmol)溶于thf(20ml)中，然后冷却到-78℃，在n2气氛保护下，缓慢滴加正丁基锂溶液(5.4ml，13.6mmol，2.5m的己烷溶液)，滴加完后自然升温至0℃并搅拌1.5h。然后再次将反应液冷却到-78℃，并向上述混合物中逐滴添加单质碘(2g，8.16mmol)的thf(10ml)溶液。滴加完后将反应液自然升温至室温，并在室温下搅拌2小时。tlc显示反应结束后，向反应液中加入饱和nh4cl水溶液(100ml)，得到的水相用乙酸乙酯萃取(100ml
×
3)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(70ml
×
2)，再将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q5-5(1.5g，黄色固体)，72.8％产率。
[0172]
ms m/z(esi):303[m 1]。
[0173]
第五步：合成化合物q5-6
[0174]
将上一步得到的化合物q5-5(303mg，1mmol)溶于二氧六环(5ml)中，然后加入3-巯基丙酸甲酯(180mg，1.5mmol)、pd2(dba)3(22.73mg，0.025mmol，0.05当量)和xantphos(14.36mg，0.025mmol)和diea(387mg，3mmol)。在氮气保护下升温到90℃下搅拌1小时后，将反应混合物在减压下浓缩。旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂石油醚：乙酸乙酯＝3:1～1:1)得到化合物q5-6(239mg，淡黄色固体)，81％产率。
[0175]
ms m/z(esi):295[m 1]。
[0176]
第六步：合成中间体q5
[0177]
将上一步得到的化合物q5-6(250mg，0.85mmol)溶于thf(2ml)中，然后冷却到0℃。再加入叔丁醇钠(96mg，1mmol)，在0℃下搅拌0.5小时后，tlc显示反应结束，将反应混合物用pe稀释，析出大量固体，通过过滤收集沉淀的固体，并用乙酸乙酯洗涤，得到中间体(164mg，浅黄色固体)，产率84％。
[0178]
ms m/z(esi):209[m 1]。
[0179]
参考中间体q5的合成，使用商业上可得的原料代替2-羟甲基吡咯烷-1-羧酸丁酯，可以合成得到以下中间体：
[0180][0181]
实施例1：式i-1所示化合物的制备
[0182][0183]
合成路线：
[0184][0185]
第一步：合成化合物1a
[0186]
将化合物q2(220mg，0.95mmol)、q1(267mg，0.95mmol)和n,n-二异丙基乙胺(0.47ml，2.84mmol)溶于5ml二甲基亚砜中，在90℃下反应1.5小时。反应结束后加入20ml乙酸乙酯和40ml水，用乙酸乙酯萃取(20ml*3)，合并有机相，用饱和氧化钠溶液洗涤(100ml)，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，残余物过硅胶层析柱(洗脱剂二氯甲烷：甲醇＝50:1～10:1)得到化合物1a(244mg，淡黄色固体)，64.3％产率。
[0187]
ms m/z(esi):399[m 1]。
[0188]
第二步：合成化合物1b
[0189]
将上一步得到的化合物1a(240mg，0.6mmol)加入到二氯甲烷(5ml)中，然后加入diea(154mg，1.2mmol)和(boc)2(262mg，1.2mmol)，室温下搅拌12小时，tlc显示反应结束，反应液用10ml二氯甲烷稀释，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，收集滤液，滤液减压浓缩，残余物过硅胶层析柱(洗脱剂二氯甲烷：甲醇＝50:1～10:1)得到化合物1b(266mg，淡黄色固体)，89％产率。
[0190]
ms m/z(esi):499[m 1]。
[0191]
第三步：合成化合物1c
[0192]
将上一步得到的化合物1b(250mg，0.5mmol)溶于二氧六环(5ml)中，加入中间体q5(230mg，1mmol)、pd2(dba)3(22.73mg，0.025mmol)和xantphos(14.36mg，0.025mmol)和diea(190mg，1.5mmol)。在氮气保护下升温到90℃下搅拌1小时后，将反应混合物在减压下浓缩。旋干浓缩得到的残余物过硅胶层析柱(洗脱剂二氯甲烷：甲醇＝50:1～10:1)得到化合物1c(241mg，淡黄色固体)，77％产率。
[0193]
ms m/z(esi):627[m 1]。
[0194]
第四步：合成化合物i-1
[0195]
将上一步得到的化合物1c(200mg，0.32mmol)加入到乙酸乙酯中(5ml)中，再加入4m的hcl/乙酸乙酯溶液(2ml)，室温反应1h，tlc显示反应完成后，过滤，固体用乙酸乙酯洗涤，烘干得到化合物i-1的盐酸盐(157mg，黄色固体)，产率87％。
[0196]
ms m/z(esi):527[m 1]。
[0197]
hnmr:(400mhz,dmso)8.55-8.54(m,1h),8.48(brs,2h),8.14(s,1h),8.03-7.94(m,1h),7.92(s,1h),7.84(s,1h),7.37-7.34(m,2h),5.92-5.90(m,1h),4.75-4.72(m,1h),4.54(brs,1h),4.04-3.93(m,2h),3.77-3.75(m,2h),3.66-3.57(m,5h).3.25-3.22(m,2h),3.16-3.11(m,1h),2.17-1.93(m,5h),1.74-1.52(m,3h)。
[0198]
实施例2：式i-2所示化合物的制备
[0199][0200]
实施例2的合成步骤参见实施例1，其中第三步以化合物q6替换化合物q5，合成得到化合物i-2。
[0201]
ms m/z(esi):527[m 1]。
[0202]
hnmr:(400mhz,dmso-d6)9.39(s,1h),8.56-8.55(m,1h),8.54(brs,2h),7.95(s,1h),7.93-7.91(m,1h),7.40-7.34(m,2h),5.92-5.90(m,1h),4.67-4.65(m,1h),4.64(brs,1h),4.52-4.10(m,2h),3.70-3.68(m,1h),3.61-3.43(m,6h),3.16-3.12(m,1h),2.15-2.12(m,1h),2.03-1.93(m,4h),1.71-1.53(m,3h)。
[0203]
实施例3：式i-3所示化合物的制备
[0204][0205]
实施例3的合成步骤参见实施例1，其中第三步以化合物q7替换化合物q5，合成得到化合物i-3。
[0206]
ms m/z(esi):527[m 1]。
[0207]
hnmr:(400mhz,dmso-d6)9.39(s,1h),8.56-8.55(m,1h),8.54(brs,2h),7.95(s,1h),7.93-7.91(m,1h),7.40-7.34(m,2h),5.92-5.90(m,1h),4.67-4.65(m,1h),4.64(brs,1h),4.52-4.10(m,2h),3.70-3.68(m,1h),3.61-3.43(m,6h),3.16-3.12(m,1h),2.15-2.12(m,1h),2.03-1.93(m,4h),1.71-1.53(m,3h)。
[0208]
实施例4：式i-4所示化合物的制备
[0209][0210]
实施例4的合成步骤参见实施例1，其中第一步以q3替换中间体化合物q2，第三步以化合物q7替换化合物q5，合成得到化合物i-4。
[0211]
ms m/z(esi):528[m 1]。
[0212]
hnmr:(400mhz,dmso)9.39(s,1h),8.56-8.55(m,1h),8.54(brs,2h),7.95(s,1h),7.93-7.91(m,1h),7.40-7.34(m,2h),5.92-5.90(m,1h),4.67-4.65(m,1h),4.64(brs,1h),4.52-4.10(m,2h),3.70-3.68(m,1h),3.61-3.43(m,6h),3.16-3.12(m,1h),2.15-2.12(m,1h),2.03-1.93(m,4h),1.71-1.53(m,3h)。
[0213]
实施例5：式i-5所示化合物的制备
[0214][0215]
实施例5的合成步骤参见实施例1，其中第三步以化合物q8替换化合物q5，合成得到化合物i-5。
[0216]
ms m/z(esi):528[m 1]。
[0217]
hnmr:(400mhz,dmso)8.57-8.56(m,1h),8.44(brs,3h),8.12(s,1h),7.96-7.94(m,1h),7.89-7.88(m,1h),7.69-7.68(m,1h),7.39-7.35(m,2h),6.05(d,j＝6.4mhz,1h),4.82-4.78(m,1h),4.55-4.54(m,1h),4.11-3.96(m,5h),3.78-3.73(m,3h),2.03-1.93(m,4h).1.77-1.72(m,2h),1.64(m,1h),0.77-0.76(m,2h),0.70-0.67(m,2h)。
[0218]
实施例6：式i-6所示化合物的制备
[0219][0220]
实施例6的合成步骤参见实施例1，其中第一步以q4替换中间体化合物q2，第三步以化合物q7替换化合物q5，合成得到化合物i-6。
[0221]
ms m/z(esi):528[m 1]。
[0222]
hnmr:(400mhz,dmso-d6)8.73(brs,3h),8.14(s,1h),8.56-8.55(m,2h),8.27(s,
1h),8,06-8.05(m,1h),7.40-7.38(m,1h),7.33-7.31(m,1h),6.21-6.20(m,1h),5.07-4.98(m,2h),4.85-4.83(m,1h),4.52(m,1h),3.73-3.49(m,7h),2.17(m,2h).2.03-1.99(m,4h),1.74-1.43(m,4h)。
[0223]
效果实施例1：抑制细胞增殖实验
[0224]
实验材料：
[0225]
rpmi-1640培养基，盘尼西林/链霉素抗生素购自维森特，胎牛血清购自biosera。3d celltiter-glo(细胞活力化学发光检测试剂)试剂购自promega。星孢菌素购自陶素生化。nci-h358细胞系或mv-4-11细胞系购自武汉普诺赛生命科技有限公司。nivo多标记分析仪(perkinelmer)。
[0226]
实验方法：
[0227]
将nci-h358细胞或mv-4-11细胞接种于96孔超低吸附u型板中，80μl细胞悬液每孔，其中包含2000个nci-h358细胞。细胞板置于二氧化碳培养箱中过夜培养。
[0228]
将待测化合物用排枪进行3倍稀释至第9个浓度，即从600μm稀释至100nm，设置双复孔实验。向中间板中加入78μl培养基，再按照对应位置，转移2μl每孔的梯度稀释化合物至中间板，混匀后转移20μl每孔到细胞板中。转移到细胞板中的化合物浓度范围是3μm至0.5nm。细胞板置于二氧化碳培养箱中培养5天。
[0229]
读数当天向细胞板中加入每孔100μl的细胞活力化学发光检测试剂，室温孵育10分钟使发光信号稳定。采用多标记分析仪读数。
[0230]
max孔：dmso溶剂孔
[0231]
min孔：星孢菌素处理孔
[0232]
数据分析：
[0233]
利用方程式(sample-min)/(max-min)*100％将原始数据换算成抑制率，ic
50
的值即可通过四参数进行曲线拟合得出(graphpad prism中“log(inhibitor)vs.response
--
variable slope”模式得出)。表1提供了本发明的化合物对nci-h358细胞或mv-4-11细胞增殖的抑制活性。
[0234]
表1：本发明实施例化合物的抑制细胞增殖活性数据(ic
50
)
[0235][0236]
从表1中的实验结果我们可以看出：本发明所示的实施例化合物在抑制nci-h358或mv-4-11细胞增殖方面具有良好的活性。部分化合物的活性远远超过对照品，显示出极其重要的抗肿瘤前景。
[0237]
效果实施例2：药物代谢实验
[0238]
1)使用以上实施例制备的本发明的化合物，口服药物配制成0.3mg/ml澄清溶液(2％dmso 30％peg300 2％tween 80 66％h2o)，静脉药物配制成0.2mg/ml澄清溶液(2％dmso 30％peg 300 2％tween 80 66％h2o)。
[0239]
2)雄性cd-1小鼠，每组各3只，体重27-28g，上海斯莱克实验动物责任有限公司提供。受试小鼠实验前给予2～4天的环境适应期，给药前禁食8-12h，给药2h后给水，4h后给食。
[0240]
3)小鼠禁食但可自由饮水12小时后，采取0时刻空白血浆；
[0241]
4)取步骤2)中的小鼠，口服(po)给予待测化合物3mg/kg；静脉(iv)给予待测化合物1mg/kg；
[0242]
5)于口服后5min，15min，30min，1h，2h，4h，8h，10h，24h，从眼底静脉丛连续取血置于分布有肝素的ep管中，8000rpm/min离心5min后取上层血浆，-20℃冻存，待lc-ms/ms分析；
[0243]
6)根据步骤5)所得的血药浓度-时间数据，采用winnonlin软件求算药代动力学参数，具体数据见表2。
[0244]
表2：本发明实施例化合物的药代动力学数据
[0245][0246]
药代动力学实验数据如表2中所示，结果表明口服或静脉给予小鼠本发明部分实旋例化合物后，在动物血浆中皆有非常高的暴露量和非常好的半衰期、组织分布、曲线下面积以及生物利用度，部分化合物优于对照品tno-155，具有良好的临床应用前景。
[0247]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0248]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。