一种炫彩合果芋组织培养方法与流程

1.本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及合果芋属植物组织培养。


背景技术：

2.合果芋是天南星科，合果芋属多年生常绿草本植物。叶片呈两型性，箭形或戟形；叶基裂片两侧常着生小型耳状叶片。炫彩合果芋，又名白富美，为天南星科合果芋属合果芋，拉丁学名是syngonium
‘
dazzle color’，原品种为霓虹，是申请人在组培过程中自主选育出来的变异品种。其叶片主要色调为白色，上面夹杂着红色斑点，如图1所示。炫彩合果芋在市面推广销售后，越来越受消费者青睐。组织培养是炫彩合果芋的主要生产方式，但是合果芋的常规组织培养方法并不适用于该品种的培养，不仅生根效率差强人意，也容易发生变异，影响产量，不能满足日益增长的市场需求。


技术实现要素：

3.本发明的目的在于提供一种炫彩合果芋组织培养方法，以解决炫彩合果芋生根效率低，易变异的问题。
4.为了达到上述目的本发明采用如下技术方案：
5.一种炫彩合果芋组织培养方法，步骤包括：
6.(1)外植体获取和消毒杀菌；
7.(2)外植体接种培养；
8.(3)启动诱导培养；
9.(4)把启动诱导培养得到的组织团块切割后进行增殖扩繁培养，增殖扩繁培养基成分为ms、ba 3mg/l、iaa 0.5～1mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
10.(5)把增殖扩繁得到的增殖团块切割后进行壮苗成苗培养，壮苗成苗培养基成分为ms、ac 0.2g/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
11.(6)把经过壮苗成苗培养得到的苗切割后进行生根诱导培养得到组培苗，生根诱导培养基成分为ms、ac 1g/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
12.进一步地，所述步骤(1)中外植体获取过程是：将炫彩合果芋母株晾干，使其基质变干至表层灰白；晴天用解剖刀把植株没长侧芽的上部茎段切下，为短缩茎，然后短截上部叶柄，保留短缩茎叶柄长度1cm，保留茎顶的小叶；
13.从叶柄基部环切茎干上残留的叶片或叶柄，避免切伤侧芽和茎段，从茎段基部茎节开始，一直处理到茎段顶端茎节，如果茎段表面有残留老叶或老皮或其他残渣污垢，需要用手术刀小心刮净，刮净处理中避免刮伤茎干表皮；将各茎段从顶端倒数第2节处切下，得到外植体，备用。
14.进一步地，所述步骤(1)中外植体消毒杀菌过程是：将处理好的外植体茎干切成单节段，节间很短的切成2-3个节的节段或者外植体茎干很短不用切段，先用75％酒精处理30-60s,再用升汞处理25-35min。
15.进一步地，所述步骤(2)中外植体接种培养的过程包括：切去外植体茎段两端切口厚2mm，夹住外植体茎段形态学上部插入到接种培养基中，插入接种培养基深度3mm，将该接种培养基置于22℃环境中，散光培养，3000-4500lx，16h光/8h暗，培养30天～40天，节上的腋芽萌发；
16.接种培养基成分包括：ms、ba 3.0mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
17.进一步地，所述步骤(3)中启动诱导培养的过程包括：把接种培养得到的芽切下，转接到新鲜的启动诱导培养基中，并置于26℃，3000lx的条件下培养30天～45天后，单芽长成丛芽，完成首次启动诱导培养，然后切割，转接到新鲜的启动诱导培养基中，每瓶接1～2团；如此，每次启动诱导培养40天～45天，就切割转接一次新鲜的启动诱导培养基，瓶中所接的团块数量根据转接次数逐渐增加，最多达10团。
18.进一步地，所述步骤(3)中，把接种培养得到的芽切下时的切割要求为：芽小的情况下，留一些母体的组织，去顶增殖；芽粗大的情况下，去顶剖成两半；
19.完成首次启动诱导培养后的切割要求：去顶、去根，芽小的团块切成2-3芽/团或切成1-2芽/团，方向性分割；芽粗大的情况下去顶后剖成两半,去顶时保留的茎干长度为0.8～1cm；去掉枯黄叶；
20.每转接一次新鲜的启动诱导培养基，切割要求参照完成首次启动诱导培养后的切割要求。
21.进一步地，所述启动诱导培养基：ms、ba 3mg/l、iaa 1mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
22.进一步地，所述步骤(4)中增殖扩繁培养的过程包括：启动诱导培养得到大量的团块数量后进行增殖扩繁培养，切割要求：去掉明显的黑头；去顶；去根；去枯黄苞叶、疏松变黑的愈伤；丛芽分成2-3芽/团，方向性分割；如有发现叶片全红的变异苗，及时剔除；把切割好的芽团接种到增殖扩繁培养基，并置于26℃，3000lx光条件下培养30d。
23.进一步地，所述步骤(5)中壮苗成苗的过程包括：增殖扩繁得到大量的增殖团块后，进行壮苗成苗培养；挑选生长旺盛、整齐度高的增殖团块，方向性分割，每团包含3个芽，接种到壮苗成苗培养基中；如有发现叶片全红的变异苗，及时剔除；把接种后的壮苗成苗培养基置于26℃，3000lx光培养26d。
24.进一步地，所述步骤(6)中生根诱导的过程包括：把壮苗成苗培养得到的苗进行切割，切割要求：株高≥2cm；叶宽≥1cm；叶≥1.5片；有1～2个节；去掉枯黄的叶片；根保留或去掉；如有发现叶片全红的变异苗，及时剔除；切割完成后接种到生根诱导培养基，置于26℃，3000lx光培养15d。
25.本发明的优点包括：增殖扩繁培养基、壮苗成苗培养基、生根诱导培养基成分恰当，能够大量增殖培养团块苗，高效壮苗，提高生根效率，以及降低变异率。
附图说明
26.此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本技术的一部分，并不构成对本发明的不当限定，在附图中：
27.图1是炫彩合果芋图片；
28.图2是母本预处理后的图片；
29.图3是外植体接种时的图片；
30.图4是增殖扩繁培养接种时的图片；
31.图5是增殖扩繁培养完成得到的增殖团块；
32.图6是壮苗成苗培养后得到的苗；
33.图7是生根诱导培养接种时的图片；
34.图8是ac含量为1g/l的生根诱导培养基培养得到的组培苗；
35.图9是符合出货标准的组培苗图片；
36.图10是增殖扩繁培养的相关试验中处理1接种时的实验图片；
37.图11是增殖扩繁培养的相关试验中处理2接种时的实验图片；
38.图12是增殖扩繁培养的相关试验中处理1、2培养期间状态图片；
39.图13是增殖扩繁培养的相关试验中处理1、2培养完成的图片；
40.图14是壮苗成苗培养的相关试验完成后处理1的实验图片；
41.图15是壮苗成苗培养的相关试验完成后处理2的实验图片；
42.图16是壮苗成苗培养的相关试验完成后处理3的实验图片；
43.图17是生根诱导培养的相关试验完成后处理1的实验图片。
具体实施方式
44.下面将结合附图以及具体实施例来详细说明本发明，在此以本发明的示意性实施例及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
45.一、炫彩合果芋组培各阶段所用的培养基：
46.接种培养基：ms、ba 3.0mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
47.启动诱导培养基：ms、ba 3mg/l、iaa 1mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
48.增殖扩繁培养基：ms、ba 3mg/l、iaa 0.5～1mg/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
49.壮苗成苗培养基：ms、ac 0.2g/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2；
50.生根诱导培养基：ms、ac 1g/l、蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
51.二、材料
52.母本要求：生长健壮、无病虫害、株高约15-25cm的遗传性状纯正的炫彩合果芋母株；
53.处理方法：放干燥通风处晾干，不浇水，防淋雨，使基质变干至表层灰白；选晴天，用解剖刀把植株没长侧芽的上部茎段切下，为短缩茎，然后短截上部叶柄，使短缩茎保留叶柄长度约1cm，茎顶的小叶可先保留，备用；从叶柄基部环切茎干上残留的叶片或叶柄，避免切伤侧芽和茎段，从茎段基部茎节开始，一直处理到茎段顶端茎节，如图2所示，如果茎段表面有残留老叶或老皮或其他残渣污垢，需要用手术刀小心刮净，刮净处理中避免刮伤茎干表皮。将各茎段从顶端倒数第2节处切下，得到外植体，备用。
54.消毒方法：
55.将处理好的外植体茎干切成单节段，节间很短的切成2-3个节的节段或者短缩茎很短不用切段，先用75％酒精处理30-60s,再用升汞处理25-35min。
56.三、培养
57.接种：切去外植体茎段两端切口厚约2mm，后夹住外植体茎段形态学上部插入到接种培养基中，插入接种培养基深度约3mm，如图3所示，将该接种培养基置于22℃环境中，散光培养，3000-4500lx，16h光/8h暗，培养30天～40天，节上的腋芽萌发。
58.启动诱导培养：把接种培养得到的芽切下，切割要求：如果芽较小，可留一些母体的组织，去顶增殖；芽较大较粗时，可以去顶剖成两半。切完后，转接到新鲜的启动诱导培养基中，并置于26℃，3000lx的条件下培养30天～45天后，单芽长成丛芽，完成首次启动诱导培养，然后切割：去顶、去根；芽比较小的团块切分成2-3芽/团，若芽比较大可切成1-2芽/团，方向性分割；较大的芽去顶后剖成两半，去顶时保留的茎干为0.8～1cm，否则容易长苗不长芽；去掉枯黄叶。切完后，转接到新鲜的启动诱导培养基中，每瓶接1～2团。如此，每次启动诱导培养40天～45天，就切割转接一次新鲜的启动诱导培养基，切割要求参照完成首次启动诱导培养后的切割要求，瓶中所接的团块数量根据转接次数逐渐增加，最多达10团。
59.增殖扩繁培养：启动诱导培养得到大量的团块数量后可以进行增殖扩繁培养，切割要求：去掉明显的黑头；去顶；去根；去枯黄苞叶、疏松变黑的愈伤；丛芽分成2-3芽/团，方向性分割。如有发现叶片全红的变异苗，应及时剔除。如图4所示，把切割好的芽团接种到增殖扩繁培养基，并置于26℃，3000lx光条件下培养30d。如图5所示是增殖扩繁培养完成得到的增殖团块。
60.壮苗成苗培养：增殖扩繁得到大量的增殖团块后，进行壮苗成苗培养。挑选生长旺盛、整齐度高的增殖团块，方向性分割，每团包含3个左右较大的芽，接种到壮苗成苗培养基中。如有发现叶片全红的变异苗，应及时剔除。把接种后的壮苗成苗培养基置于26℃，3000lx光培养26d.如图6所示是壮苗成苗培养后得到的苗。
61.生根诱导培养：壮苗成苗培养结束后，进行生根诱导，把壮苗成苗培养得到的苗进行切割，切割要求：株高≥2cm；叶宽≥1cm；叶≥1.5片；有1～2个节；去掉枯黄的叶片；根可以保留也可以去掉。一般，如果根较长会截去，方便夹进袋子或瓶子里。如有发现叶片全红的变异苗，应及时剔除。如图7所示切割完成后接种到生根诱导培养基，置于26℃，3000lx光培养15d.
62.ac含量为1g/l的生根诱导培养基得到的组培苗如图8所示，满足出货标准。
63.出货标准如图9所示。
64.增殖扩繁培养的相关试验如下表1所示：
65.表1
[0066][0067]
表中增殖扩繁培养基除了表中记载的成分外，均还包含蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
[0068]
如图10、11所示分别是处理1和处理2接种时的实验图片；如图12所示，培养时观察
可见处理2的叶片张开与处理1相比较多较大。增殖扩繁结束后得到图13所示的增殖苗。
[0069]
壮苗成苗培养的相关试验如下表2所示：
[0070][0071][0072]
表中壮苗成苗培养基除了表中记载的成分外，均还包含蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
[0073]
从表中可以得知，ms作为基础培养基更适合壮苗成苗培养。培养基加入适当的活性炭，有利于壮苗。
[0074]
生根诱导培养的相关试验如下表3所示：
[0075]
表3：
[0076][0077]
表中生根诱导培养基除了表中记载的成分外，均还包含蔗糖30g/l、卡拉胶5.8g/l，ph为6.2。
[0078]
处理1生根效果总体略优于处理2，但两者差别不大。
[0079]
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。