一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法与流程

技术特征：
1.一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，其先向生物样品加入同位素标记的色氨酸及代谢物作为内标，再通过液-液萃取法提取样品混合物中的色氨酸及其代谢物，使用高效液相将样本中的色氨酸及其代谢物分离后，采用内标标准曲线法进行串联质谱分析。2.根据权利要求1所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，使用到的稳定性同位素内标物有9种，分别是犬尿氨酸-d4、2-吡啶-d4-甲酸、5-羟基吲哚-3-乙酸-2,2-d2、3-羟基邻氨基苯甲酸-d3、色胺盐-d4、褪黑激素-d4、3-硫酸吲哚酚-d4-钾盐、盐酸血清素-d4和吲哚-d7。3.根据权利要求2所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，其包括以下详细步骤：步骤s1，配制系列浓度的标准品溶液和内标工作液；步骤s2，分别向待测样本和系列浓度的标准品溶液加4倍体积的甲醇乙腈溶液，再分别加入内标工作液，涡旋混合，冰浴中超声处理30min，超声波功率：600w，超声波频率40khz；步骤s3，取纯甲醇过hlb板，采用正压过滤，弃滤液；再取提取液过hlb板，采用正压过滤，弃滤液；步骤s4，取步骤s2中获得的各待测样本和标准品，经14000rcf 4℃离心15min，再过经步骤s3处理的hlb板，收集滤液并冷冻干燥，得冻干粉末备用；步骤s5，取步骤s4中获得的冻干粉末用含1％甲酸的40％甲醇溶液复溶，涡旋混匀，14000rcf 4℃离心15min，离心后取上清液上样进行lc-ms/ms分析。4.根据权利要求3所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，所述的步骤s2中的甲醇乙腈溶液的比例是甲醇：乙腈＝1：1；所述的步骤s3中的提取液是各组分体积比为水/甲醇/乙腈＝1:2:2的溶液。5.根据权利要求3所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，所述的步骤s4中，最后获得的冻干粉末采用-80℃保存。6.根据权利要求3所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，所述的液相色谱的条件如下：流动相：a相：20mm甲酸铵 0.2％fa水溶液(称取630mg甲酸铵溶于500ml纯水中)，加入0.2％甲酸溶液(约加入1ml甲酸)，室温保存，有效期5天；b相：0.2％fa甲醇溶液(量取500ml甲醇溶液，加入1ml甲酸)，室温保存，有效期30天。洗脱梯度(a相 b相＝100％)：0-2min，b相维持在15％；2-9min，b相从15％线性变化至98％；9-11min，b相维持在98％；11-11.5min，b相从98％线性变化至15％；11.5-14min，b相维持在15％；流速：400μl/min；柱温：40℃；进样量：5μl。7.根据权利要求6所述的一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，其特征在于，所述的质谱条件如下：esi源正负离子同时监测；离子源温度：450℃；离子源雾化气：45psi；离子源加热辅助
气：45psi；气帘气：40psi；喷雾毛细管电压：4500v(-4500v)；apci源正离子检测；离子源温度：550℃；离子源雾化气：50psi；离子源加热辅助气：0psi；气帘气：40psi；喷雾毛细管电压：4500v。

技术总结
本发明提供一种人血浆中色氨酸及其代谢产物检测方法，属于生物技术检测领域，其先向生物样品加入同位素标记的色氨酸及代谢物作为内标，再通过液-液萃取法提取样品混合物中的色氨酸及其代谢物，使用高效液相将样本中的色氨酸及其代谢物分离后，采用内标标准曲线法进行串联质谱分析，通过优化提取方法步骤，质谱上机检测参数等因素，解决目前对这类物质检测存在着的一些关键技术问题，具有灵敏度高、特异性强、准确且前处理方法简单的优点。准确且前处理方法简单的优点。准确且前处理方法简单的优点。


技术研发人员：陈薇 苗迎玉
受保护的技术使用者：中科新生命（浙江）生物科技有限公司
技术研发日：2021.10.28
技术公布日：2022/3/4